用於核酸遞送系統的支化陽離子脂質的製作方法

2023-05-06 13:43:21 1

專利名稱：用於核酸遞送系統的支化陽離子脂質的製作方法
技術領域：
本發明涉及用於寡核苷酸遞送的陽離子脂質和含有該陽離子脂質的納米顆粒組合物，以及使用該納米顆粒組合物調控基因表達的方法。
背景技術：
在過去數年間已提出將使用核酸的療法作為治療各種疾病的努力嘗試。例如反義療法的療法是疾病治療中的有力手段，這是因為治療性基因可選擇性地調控與疾病有關的基因表達並且使得在使用其它治療方法時所發生的副作用最小。然而，使用核酸的療法由於基因的較差穩定性和無效遞送而受到限制。提出了若干基因遞送系統以克服所述障礙並且將治療性基因有效地引入靶區域，例如體外和體內的癌細胞或組織內。為改進遞送和增強治療性基因的細胞吸收的這類嘗試涉及利用脂質體。目前可用的脂質體未有效地將寡核苷酸遞送到體內，儘管在質粒的遞送方法已取得一些進展。在寡核苷酸的遞送中，期望的遞送系統應包含足以中和寡核苷酸的負電荷的正電荷。最近，Stuart, D. D 等在 Biochim.Biophys. Acta，2000，1463 :219-229 和 Semple， S. C.等在Biochim. Biophys. Acta, 2001，1510 152-166分別描述的塗覆陽離子脂質體 (CCL)和穩定的核酸-脂質顆粒(SNALP)配製劑，報導了提供具有小的尺寸、高的核酸包封率、良好的血清穩定性以及長的循環時間的納米顆粒。然而，與使用裸寡核苷酸相比，它們沒有顯示出顯著改善的體內活性(特別是在除肝臟外的器官中)。期望提供允許獲得寡核苷酸在細胞例如癌細胞中增強的細胞吸收度和提高的生物利用度的核酸遞送系統。如果核酸遞送系統貯存穩定且臨床使用安全，則這也是期望的。雖然具有所述嘗試和進展，但是仍需要提供改進的核酸遞送系統。本發明解決了這種需要。發明概述本發明提供了用於核酸遞送的陽離子脂質和含有其的納米顆粒組合物。多核酸例如寡核苷酸包封在納米顆粒複合物內，所述納米顆粒複合物含有陽離子脂質、促融合脂質和PEG脂質的混合物。根據本發明的該方面，所述用於核酸(即寡核苷酸)遞送的陽離子脂質具有式 ⑴
權利要求
1. 一種式(I)的陽離子脂質
2.權利要求1的化合物，其中Q1和Q2包括
3.權利要求1的化合物，其中Q'工和…2包括
4.權利要求1的化合物，其中Y1為0。
5.權利要求1的化合物，其中Y2為0；且Y5為0。
6.權利要求1的陽離子脂質，其中L1，當與(Y4)c-(CR2R3)d-C(= Υ5)ε部分組合時，獨立地選自「(CR21R22) tl-[C ( = Y6)] el- (Y4) c- (CR2R3) d-C ( = Y5) e-； 「(CR21R22) tlV (CR23R24) t2- (Y8) e2- [C ( = Y6)] el- (Y4) c- (CR2R3) d-C ( = Y5) e-， "(CR21R22CR23R24Y7) t3- [C ( = Y6)] el- (Y4) c- (CR2R3) d_C ( = Y5) e-， "(CR21R22CR23R24Y7) t3 (CR25R26) t4- (Y8) e2- [C ( = Y6)] el_ (Y4) c_ (CR2R3) d_C ( = Y5) e-， "(CR21R22CR23R24Y7) t3 (CR25R26) t4- (Y8) e2- [C ( = Y6)] el_ (CR27R28) tl-(Y4) c- (CR2R3) d_C ( = Y5)"[(CR21R22CR23R24) t5Y7] t6 (CR25R26) t4- (Y8) e2- [C ( = Y6)] el_ (Y4) c_ (CR2R3) d_C ( = Y5) e-，
7.權利要求1的陽離子脂質，其中l1,當與(y4)c-(cr2r3)d-c( = y5)e的部分組合時獨立地選自
8.權利要求1的陽離子脂質，其中ln_13和l』n_13獨立地選自 _(cr，21r，22)ql (y' 8)v』 [c( = y，9)]v(cr，23r，24)q2-,
9.權利要求1的陽離子脂質，其中ln_13和l』n_13獨立地選自以下 -(ch2)4-,-(ch2)3-, -o(ch2)2--c ( = 0)0 (ch2) 3", -c( = 0) nh (ch2) 3-,
10.權利要求1的化合物，其中X(Q1) (Q2) (Q3)部分是
11.權利要求1的陽離子脂質，該陽離子脂質具有式(Ia)
12.權利要求1的陽離子脂質，該陽離子脂質選自
13.一種包含權利要求1的式(I)的陽離子脂質的納米顆粒組合物。
14.權利要求13的納米顆粒組合物，其還包含促融合脂質和PEG脂質.
15.權利要求14的納米顆粒組合物，其中所述陽離子脂質選自
16.權利要求14的納米顆粒組合物，其中所述促融合脂質選自D0PE、D0GP、P0PC、DSPC、 EPC和它們的混合物。
17.權利要求14的納米顆粒組合物，其中所述PEG脂質選自PEG-DSPE、PEG-二棕櫚醯甘油醯胺、C16mPEG-神經醯胺和它們的混合物。
18.權利要求14的納米顆粒組合物，納米顆粒組合物還包含膽固醇。
19.權利要求14的納米顆粒組合物，該納米顆粒組合物選自以下的混合物式(I)的陽離子脂質、二醯基磷脂醯乙醇胺、綴合到磷脂醯乙醇胺(PEG-PE)的PEG、和膽固醇；式(I)的陽離子脂質、二醯基卵磷脂、綴合到磷脂醯乙醇胺(PEG-PE)的PEG、和膽固式(I)的陽離子脂質、二醯基磷脂醯乙醇胺、二醯基磷脂醯-膽鹼、綴合到磷脂醯乙醇胺(PEG-PE)的PEG、和膽固醇；式(I)的陽離子脂質、二醯基磷脂醯乙醇胺、綴合到神經醯胺(PEG-Cer)的PEG、和膽固醇；或式(I)的陽離子脂質、二醯基磷脂醯乙醇胺、綴合到磷脂醯乙醇胺(PEG-PE)的PEG、綴合到神經醯胺(PEG-Cer)的PEG、和膽固醇。
20.權利要求18的納米顆粒組合物，其中所述陽離子脂質與納米顆粒組合物中存在的總脂質的摩爾比為約10% -約99.9%。
21.權利要求18的納米顆粒組合物，其中所述陽離子脂質與納米顆粒組合物中存在的總脂質的摩爾比為約15% -約25%。
22.權利要求18的納米顆粒組合物，其中陽離子脂質、基於非膽固醇的促融合脂質、PEG脂質和膽固醇與納米顆粒組合物中存在的總脂質的摩爾比為約 15-25% 20-78% 0-50% 2-10%。
23.權利要求18的納米顆粒組合物，其中包括以納米顆粒組合物中存在的總脂質的約 17% 60% 20% 3%的摩爾比的所述陽離子脂質、DOPE、膽固醇和C16mPEG-神經醯胺， 其中所述陽離子脂質為
24.一種包含用權利要求18的納米顆粒組合物包封的核酸的納米顆粒。
25.權利要求24的納米顆粒，其中所述核酸是單鏈或雙鏈的寡核苷酸。
26.權利要求24的納米顆粒，其中所述核酸選自脫氧核苷、核糖核苷酸、鎖核酸(LNA)、 短幹擾RNA(siRNA)、微RNA(miRNA)、適體、肽核酸(PNA)、磷醯二胺嗎啉代寡核苷酸(PMO)、 三環-DNA、雙鏈寡核苷酸(誘捕0DN)、催化RNA (RNAi)、適體、鏡相異構物、CpG低聚物以及它們的組合。
27.權利要求25的納米顆粒，其中所述寡核苷酸為反義寡核苷酸。
28.權利要求25的納米顆粒，其中所述寡核苷酸具有硫代磷酸酯連接鍵。
29.權利要求25的納米顆粒，其中所述寡核苷酸包括LNA。
30.權利要求25的納米顆粒，其中所述寡核苷酸具有約8-約50個核苷酸。
31.權利要求25的納米顆粒，其中所述寡核苷酸抑制以下基因的表達致癌基因、促血管生成途徑基因、促細胞增殖途徑基因、病毒致病原基因和促炎途徑基因。
32.權利要求25的納米顆粒，其中所述寡核苷酸選自反義HIF-Iα寡核苷酸、反義存活蛋白寡核苷酸、反義ErbB3寡核苷酸、反義β -聯蛋白寡核苷酸和反義Bcl-2寡核苷酸。
33.權利要求25的化合物，其中所述寡核苷酸包含以SEQID NO :1，SEQ ID NOs 2和 3，SEQ ID NO :3,SEQ ID NO :4，SEQ ID N0:5，SEQ ID NO :5 JPSEQ ID NO :6 給出的 8 個或更多個連續的核苷酸。
34.權利要求24的納米顆粒，其中陽離子脂質和核酸的電荷比為約1 1-約20 1。
35.權利要求24的納米顆粒，其中所述納米顆粒具有約50nm-約150nm的大小。
36.一種治療哺乳動物的疾病的方法，該方法包括將權利要求24的納米顆粒組合物給藥到需要其的哺乳動物。
37.一種將寡核苷酸引入到細胞中的方法，該方法包括使所述細胞與權利要求24的納米顆粒接觸。
38.一種抑制人體細胞或組織的基因表達的方法，該方法包括 使所述人體細胞或組織與權利要求24的納米顆粒接觸。
39.權利要求38的方法，其中所述細胞或組織為癌細胞或組織。
40.一種下調哺乳動物的基因表達的方法，該方法包括 將有效量的權利要求24的納米顆粒給藥到需要其的哺乳動物。
41.一種抑制癌細胞生長或增殖的方法，該方法包括 使所述癌細胞與權利要求24的納米顆粒接觸。 權利要求40的方法，該方法還包括將化療劑進行給藥。
42.一種治療哺乳動物的癌症的方法，該方法包括將有效量的權利要求15的納米顆粒給藥到需要其的哺乳動物。
43.權利要求42的方法，其中所述癌症具有向肝臟的轉移性。
全文摘要
本發明涉及用於寡核苷酸遞送的陽離子脂質和使用納米顆粒組合物調控靶基因表達的方法。特別地，本發明涉及通過支化間隔基而具有多個帶正電荷的部分的膽固醇及其衍生物，以及包封在陽離子脂質、促融合脂質和PEG脂質的混合物中的寡核苷酸的納米顆粒組合物。
文檔編號C12N15/88GK102216462SQ200980145887
公開日2011年10月12日 申請日期2009年7月31日 優先權日2008年11月17日
發明者烏德春, 史連軍, 彥魏麗, 趙洪 申請人:安龍製藥公司