一種治療乳癌的醫藥組成物的製作方法

2023-05-06 19:57:56 1

專利名稱：：一種治療乳癌的醫藥組成物的製作方法
技術領域：
：本發明是關於一種抗介白素-19抗體治療乳癌的用途。
背景技術：
：乳癌，如乳腺管癌(ductalcarcimona)及小葉性乳癌(lobularcarcinoma)係為女性最常見的癌症之一。其中，每八位女性中有一位女性會罹患乳癌。治療乳癌的方法包括化學療法、放射療法、及手術。早期乳癌的治療效果良好，但晚期乳癌患者的5年存活率卻低於50%。因此，目前仍需發展一種新穎的乳癌治療法，以期能於各期癌症中均可展現極高治療效果。
發明內容本發明發現對人類介白素-19(IL_19)具有專一性的單株抗體IBBl可有效抑制乳癌細胞增生及乳癌生長，並延長罹患乳癌老鼠的壽命。因此，本發明的一實施態樣提供一種以一有效劑量的抗介白素-19抗體治療乳癌的醫藥組成物，其中抗介白素-19抗體可單獨使用、或與抗介白素-20抗體或抗介白素-20R1抗體一同使用。於本發明中，「治療」一詞意指採用或投予包含一種或以上活性劑的組成物至主體，且該主體為一個患有乳癌、具乳癌病症、或具有罹患乳癌傾向的主體，以達到治療、治癒、減輕、舒緩、改變、補救、改善、改進或影響癌症、癌症病症、或癌症傾向的目的。於本發明中，「有效劑量」一詞意指投予個體所需的每種活性劑的劑量，不論是單獨使用或與其它一種或以上的活性劑共同使用，以達到治療的效果。有效劑量為本領域技術人員可依據投藥方式、使用的賦形劑(excipient)及合併使用(co-usage)其它活性劑的不同而改變有效劑量的多寡。本發明所使用的抗介白素-19抗體、抗介白素-20抗體、或抗介白素-20R1抗體可為能與介白素-19、介白素-20、或介白素-20R1的天然抗體(naturally-occurringantibody)(如單株抗體)、其抗原結合片段(antigen-bindingfragment)(如F(ab')2、Fab、或Fv)、或基因工程抗體(geneticallyengineeredantibody)(如嵌合抗體(chimericantibody)、人類化單株抗體(humanizedantibody)、或單鏈抗體(singlechainantibody))，其可與抗原結合且通過此抗體可阻斷訊息傳導路徑。抗介白素-19抗體可包含(1)一包含抗體IBBl的Vh中所有互補性決定區(complementarity-determiningregions,CDR)的重鏈變異區(Vh)(SEQIDNO2)；及(2)一包含抗體IBBl的\中所有互補性決定區的輕鏈變異區(\)(SEQIDNO6)。例如，抗介白素-19抗體包含與IBBl相同的Vh及Vl。抗介白素-20抗體可包含(1)一包含抗體7E的Vh中所有互補性決定區的重鏈變異區(Vh)(SEQIDNO12)；及(2)—包含抗體7E的\中所有互補性決定區的輕鏈變異區(Vl)(SEQIDN0:16)。例如，抗介白素-20抗體包含與抗體7E相同的Vh及八。當上述組成物含有兩種抗體時(即，抗介白素-19抗體與抗介白素-20抗體或抗介白素-20R1抗體)，此兩種抗體可形成一雙專一性複合物(bi-specificcomplex)。例如，此兩種抗體皆為Fab片段，而可形成雙專一性抗體。本發明亦提供(1)一治療乳癌的醫藥組成物，此組成物包含抗介白素-19抗體，且選擇性的包含抗介白素-20抗體或抗介白素-20R1抗體；以及(此組成物於製造治療乳癌藥物的用途。本發明的一個或多個實施例細節如以下所述，而其它本發明的特徵或優點則以下列附圖、多項實施例細節的描述、及申請專利範圍加以詳述。圖IA為以抗介白素-19抗體IBBl抑制乳癌細胞MCF-7增生效果圖，其中*代表與OBS控制組比較P<0.05，#代表與以介白素-19治療細胞組比較P<0.05。圖IB為以抗介白素-19抗體IBBl抑制乳癌細胞4T1增生效果圖，其中*代表與OBS控制組比較P<0.05，#代表與以介白素-19治療細胞組比較P^；iP^(intraarticular)、1內(intraarterial)、胃^夜內(intrasynovial)、月匈骨內(intrasternal)、腦脊髓膜內(intrathecal)、腦病灶內(intralesional)、及頭蓋骨內(intracarnial)的注射或注入方式。製備含上述抗體的無菌注射型醫療組成物，例如無菌注射型水溶性或脂溶性懸浮液，其調配方法可利用相關
技術領域：
中適宜使用的分散劑(dipersingagent)或潤溼劑(wettingagent)(例如Tween80)以及懸浮劑(suspendingagent)。無菌注射型製劑亦可為以無毒性可腸胃外接受的稀釋劑或溶劑所製成的無菌注射型溶液或懸浮液，其中，無毒性可腸胃外接受的稀釋劑或溶劑的例子可為1，3-丁二醇(l，3-bUtanediol)。其它能運用的可接受醫藥載體及溶劑可包括甘露醇(mannitol)、水、林格式劑(Ringer’ssolution),及等滲透壓氯化鈉溶液(isotonicsodiumchloridesolution)。此外，亦可使用無菌或不揮發性(fixed)油類等(例如合成的單或雙酸甘油脂(mono-ordiglyceride))，作為溶劑或懸浮用介質。若系考慮天然油類，其它如油酸(oleicacid)及其甘油脂衍生物，亦可以用於注射型製劑的製備，而這類脂肪酸製成的製劑其組成相似於天然的醫藥用可接受性油類，如橄欖油或蓖麻油(castoroil)，特別是此二油類的多氧乙基化(polyoxyethylated)型態。於此，可接受的油類溶液或懸浮液中亦可加入一長鏈的乙醇稀釋劑或懸浮劑，又或加入羧甲基纖維素(carboxymethylcellulose)或其相似的懸浮劑。至於製劑調配過程亦可添加常用的界面劑，如Tweens、Spans或其相似的乳化劑(emulsifyingagent),又或是普遍使用在藥物生產上可接受性固體、液體或其它劑型的生物可利用強化劑(bioavailabilityenhancer)。此外，上述的醫藥組成物尚可通過注射型藥劑(inectabled印ot)的途徑投予受試者，如投予一、三或六個月的注射型或生物可分解性質的材料及方法。本發明所屬領域技術人員在不需詳述下即能通過上述說明實施本發明，以下實施例僅需以說明內容即能推斷，不限於任何形式的揭示。所有本發明引用的出版物皆併入參考文獻。實施例1抗介白素-19抗體IBBl抑制乳癌細胞增生人類MCF-7及小鼠4T1乳癌細胞系在含有胎牛血清的培養基中培養16小時。接著，將2X105個MCF-7或4T1細胞種殖並培養於一含有2%FBS的培養基中M小時，其中此培養基含有PBS、人類介白素-19(用於MCF-7細胞，含量為200或400μg/mL)、小鼠介白素-19(用於4T1細胞，含量為200或400μg/mL)、抗體IBBl(8μg/mL)、或介白素-19及抗體IBBl的混合物(110)。而後，將細胞置於一含有3-，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑氮溴化物(3-，5-Dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltetrazolium13bromide,MTT)(lmg/ml；Sigma-AIdrich)中培養3小時。將二甲基亞碸(dimethylsulfoxide,DMS0)添加至培養機中，並在500nm下測量吸收值。在此，是以FBS(10%)(Sigma-Aldrich)作為正控制組。如圖1所示，人類介白素-19及小鼠介白素-10會分別誘導MCF-7細胞及4T1細胞增生，且呈現劑量依賴性。此外，抗介白素-19抗體IBBl則可成功抑制乳癌細胞增生。實施例2以抗體IBBl治療乳癌抗介白素-19抗體IBBl對於帶有乳癌的小鼠存活效果研究如下所述。將小鼠乳癌細胞4T1於適當條件下培養、收集、並於PBS再懸浮，得到最終濃度為2X105/100μL。先將6周大雌鼠BALB/c給予戊巴比妥(pentobarbital)進行普通麻醉(以小鼠體重的50mg/kg比率給予)，再將4T1細胞(2Χ105/100μL)以注射器(29gauge,BDUltra-Fine；BectonDickinson)，直接注射於6周大雌鼠BALB/c的左心室(leftventricle)。將每隻小鼠隨機分為三組(n=6/組)，每一組是以每周三次注射載體(PBS)、控制小鼠抗體(mIgG，10mg/kg)、或抗體lBBl(10mg/kg)。未注射有4T1細胞的小鼠是作為健康控制組。每天測量三組及健康控制組的存活率直到實驗終了。本實施例所得到的結果顯示，以抗體IBBl處理的第三組小鼠存活率遠高於分別以PBS或mlgG處理的第一組或第二組小數，如圖2所示。此外，亦觀察抗體IBBl治療乳癌腫瘤生長的效果。小鼠癌細胞4T1OXIO6細胞)是注射於小鼠的乳腺脂肪護墊(mammaryfatpads)，以使腫瘤生長。而後，通過皮下注射，將PBS(控制組)、抗體IBBl(15mg/kg)、或小鼠控制組抗體mlgG(15mg/kg)以每周三次注射至小鼠。於腫瘤細胞注射三十天後，犧牲小鼠且收集並測量腫瘤的重量。如圖3所示，以IBBl處理的小鼠其腫瘤重量遠低於以PBS處理或以mlgG處理小鼠的腫瘤重量(P<0.05)。其它實施例本說明書中揭示的所有特徵可以任何組合方式合併，且本說明書中所揭示的特徵可被相同、相當、或類似目的的另一種特徵所取代。因此，除非有其它特別的敘述，否則所揭示的各個特徵僅為一般的相當或類似特徵的實例。上述實施例僅為了方便說明而舉例而已，本發明所主張的權利範圍自應以申請的權利要求範圍所述為準，而非僅限於上述實施例。權利要求1.一種治療乳癌的醫藥組成物，包括一有效劑量的抗-介白素19抗體。2.如權利要求1所述的醫藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體為一人類化抗體、一嵌合抗體、一天然抗體或其抗原結合片段。3.如權利要求2所述的醫藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體包括一重鏈變異區及一輕鏈變異區，其中該重鏈變異區包含SEQIDNO:2序列中所有互補性決定區，而該輕鏈變異區包含SEQIDNO6序列中所有互補性決定區。4.如權利要求3所述的醫藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體包括一包含SEQIDNO2序列的重鏈變異區、以及一包含SEQIDNO6序列的輕鏈變異區。5.如權利要求4所述的醫藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體為一嵌合抗體或一單鏈抗體。6.如權利要求4所述的醫藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體為一單株抗體IBBl或其抗原結合片段。7.如權利要求2所述的醫藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體為衍伸自單株抗體IBBl的人類化抗體、嵌合抗體或單鏈抗體。8.如權利要求1所述的醫藥組成物，其中，該醫藥組成為一治療乳癌轉移的醫藥組成物。9.如權利要求8所述的醫藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體為一人類化抗體、一嵌合抗體、一單鏈抗體、一天然抗體或其抗原結合片段。10.如權利要求8所述的醫藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體包括一重鏈變異區、及一輕鏈變異區，其中該重鏈變異區包含SEQIDNO:2序列中所有互補性決定區，而該輕鏈變異區包含SEQIDNO:6序列中所有互補性決定區。11.如權利要求10所述的醫藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體包括一包含SEQIDNO2序列的重鏈變異區、以及一包含SEQIDNO6序列的輕鏈變異區。12.如權利要求11所述的醫藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體為一嵌合抗體或一單鏈抗體。13.如權利要求11所述的醫藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體為一單株抗體IBBl或其抗原結合片段。14.如權利要求9所述的醫藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體為衍伸自單株抗體IBBl的人類化抗體、嵌合抗體或單鏈抗體。15.如權利要求1所述的醫藥組成物，其中，包括一有效劑量的抗-介白素20抗體。16.如權利要求15所述的醫藥組成物，其中，該抗-介白素20抗體為一單株抗體7E、其抗原結合片段或一衍伸自單株抗體7E的基因工程抗體。17.如權利要求15所述的醫藥組成物，其中，該抗-介白素20抗體與該抗-介白素19抗體形成一雙專一性複合物。18.如權利要求17所述的醫藥組成物，其中，該抗-介白素20抗體及該抗-介白素19抗體為Fab片段。19.如權利要求1所述的醫藥組成物，其中，包括一有效劑量的抗-介白素20R1抗體。20.如權利要求19所述的醫藥組成物，其中，該抗-介白素20R1抗體為一單株抗體、其抗原結合片段或一衍伸自單株抗體的基因工程抗體。21.如權利要求19所述的醫藥組成物，其中，該抗-介白素20R1抗體與該抗-介白素19抗體形成一雙專一性複合物。22.如權利要求21所述的醫藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體及該抗-介白素20R1抗體為Fab片段。全文摘要本發明是有關於一種利用抗介白素-19抗體治療乳癌的醫藥組成物，其可單獨使用、或與抗介白素-20抗體及/或抗介白素-20R1抗體合併使用。文檔編號A61P35/00GK102343089SQ201110221199公開日2012年2月8日申請日期2011年8月3日優先權日2010年8月3日發明者張明熙申請人:張明熙