唑類化合物的單賴氨酸鹽的製作方法

2023-05-06 12:23:21

專利名稱：唑類化合物的單賴氨酸鹽的製作方法
技術領域：
本發明涉及新穎的水溶性唑類化合物，其適用於治療如嚴重的全身性真菌感染並適於口服、局部和胃腸外給藥。更特別的，本發明涉及新穎的具有通式I的水溶性鹽前藥
在式I中，R和R1各自為氫或(C1-C6)烷基，和A是包含仲羥基或叔羥基的類型的三唑抗真菌化合物的非羥基部分。本發明還包括式I鹽化合物的藥學上可接受的溶劑化物，使用該物質的和製備該物質的方法。

背景技術：
三唑抗真菌化合物是本領域中已知的。在已知的幾種類別中，一類特別有效的類別包含叔羥基。例如，美國專利第5648372號公開了(2R，3R)-3-[4-(4-氰苯基)噻唑-2-基]-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-丁-2-醇化合物具有抗真菌活性。美國專利第5648372的化合物如下所示。

然而，該類化合物的效用受其低水溶性的限制。例如，上述三唑化合物在pH6.8的水中溶解度為0.0006mg/mL。這極大地阻礙了適宜的胃腸外劑型的開發。
歐洲專利申請第829478號公開了一種解決該問題的方法，其中通過在分子的唑部位上接一個連接的胺基酸來增加唑類抗真菌試劑的水溶性(如下所示)。

可選的，WO97/28169公開了可將磷酸酯部分直接接到抗真菌化合物的叔羥基部分，例如具有如下式的化合物。

另一方面，美國專利第5707977號和WO95/19983公開了具有如下通式的水溶性前藥。

在上面結構式中，X是OP(O)(OH)2或易水解的酯OC(O)RNR1R2。
相反的，WO95/17407公開了如下通式所示的水溶性唑類前藥。

在上面結構式中，X是P(O)(OH)2、C(O)-(CHR1)n-OP(O)(OH)2或C(O)-(CHR1)n-(OCHR1CHR1)mOR2。
已經提出了其它的唑類化合物。例如，WO96/38443公開了如下所示通式的水溶性唑類前藥。

美國專利5883097公開了水溶性胺基酸唑類前藥，如甘氨酸酯，如下所示。

公開了將膦醯氧基甲基部分引入包含羥基的藥物中，作為製備包含羥基的藥物的水溶性前藥的方法。
歐洲專利申請第604910號公開了如下所示通式的膦醯氧基甲基紫杉烷衍生物。

在上面結構式中，R1』、R2」、R3』、R6』或R7』中的至少一個是OCH2OP(O)(OH)2。
歐洲專利申請第639577號公開了式T-[OCH2(OCH2)mOP(O)(OH)2]n的膦醯氧基甲基紫杉烷衍生物，其中式中的T是在C13碳原子上接有一個取代的3-氨基-2-羥基丙醯氧基的紫杉烷部分，n是1，2或3，m是0或包含端值的1-6的整數。
WO99/38873公開了二芳基1，3，4-二唑酮鉀通道開放劑的O-膦醯氧基甲基醚前藥。
Golik，J.等人在Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters(1996)第6卷第1837-1842頁公開了新穎的紫杉醇水溶性前藥，例如如下所示的前藥。
美國專利第6362172號公開了具有如下所示通式的水溶性唑類前藥。

在上面結構式中，A是包含仲羥基或叔羥基的類型的三唑抗真菌化合物的非羥基部分，R和R1各自獨立地為氫或(C1-C6)烷基。
然而，美國專第6362172號的前藥不易用作口服給藥。


發明內容
現已發現包含仲羥基或叔羥基的三唑抗真菌磷酸酯化合物(包括((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯)的單賴氨酸鹽較之以前公開的化合物具有出人意料的優越性質。具體而言，本發明涉及式I化合物的單賴氨酸鹽，或其藥學上可接受的溶劑化物
在式I中，R和R1各自為氫原子或(C1-C6)烷基，優選其一或兩者均為氫。此外在式I中，A代表包含仲羥基或叔羥基的類型的三唑抗真菌鹽化合物的非羥基部分。
式I化合物中優選的是那些A代表包含叔羥基的類型的三唑抗真菌化合物的非羥基部分。
在上述類型鹽化合物的另一個實施方案中，A可以是式(i)
其中式(i)的R3代表被一個或多個(優選1-3個)滷素原子取代的苯基；R4代表氫原子或甲基(CH3)；R5代表氫原子，或與R4一起可代表＝CH2；R6代表5元或6元含氮環，其可任選地被一個或多個選自滷素、＝O、CH＝CH-(C6H4)-OCH2CF2CHF2、和被一個或多個選自CN和OCH2CF2CHF2的基團取代的苯基、或被一個或多個選自滷素和甲基吡唑基的基團取代的苯基的基團所取代。
當R6代表含氮雜環時，這樣的例子包括三唑基、嘧啶基和噻唑基，其中每個環任選地被一個或多個選自滷素、＝O、CH＝CH-(C6H4)-OCH2CF2CHF2、和被一個或多個選自CN和OCH2CF2CHF2的基團取代的苯基、或被一個或多個選自滷素和甲基吡唑基的基團取代的苯基的基團所取代。
A的例子包括但不限於以下



和
上述那些具體化合物中，以下是優選的實施方案

和
式I的單賴氨酸鹽化合物更優選的實施方案具有如下所示的結構
式I的鹽化合物的溶劑化物形式也是本發明進一步的實施方案。
除了本發明適用於包含叔醇的結構，還應該理解的是該發現可應用於包含仲醇的抗真菌成分。包含仲羥基的類型的三唑抗真菌鹽化合物的非羥基部分的一些例子包括，但不限於以下
或者
附圖概述

圖1顯示了(2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-[(二氫膦醯氧基)甲氧基]丁烷的雙賴氨酸乙醇溶劑化物的吸溼性。
圖2顯示了((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯的單賴氨酸乙醇溶劑化物的吸溼性。
圖3顯示了((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯的單賴氨酸異丙醇溶劑化物的吸溼性。
圖4顯示了單賴氨酸鹽較之雙賴氨酸鹽的吸溼性。
圖5是((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯的單賴氨酸乙醇溶劑化物獲得的粉末X射線衍射(PXRD)數據圖。
圖6A-6C是((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯的單賴氨酸乙醇溶劑化物的NMR數據圖。
圖7是((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基基)1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯的單賴氨酸乙醇溶劑化物的差示掃描量熱法(DSC)曲線。
圖8是((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯的單賴氨酸乙醇溶劑化物的熱重量分析(TGA)曲線。
圖9是((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基基)1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯的單賴氨酸異丙醇溶劑化物的PXRD數據圖。
圖10是((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯的單賴氨酸異丙醇溶劑化物的DSC曲線。
圖11是((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯的單賴氨酸異丙醇溶劑化物的TGA曲線。
圖12是((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯的單賴氨酸正丙醇溶劑化物的PXRD數據圖。
圖13是((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯的單賴氨酸正丙醇溶劑化物的DSC曲線。
圖14是((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯的單賴氨酸正丙醇溶劑化物的TGA曲線。
實施本發明的最佳方式 當通式I的單賴氨酸鹽化合物被施加到體內時，其作為「前藥」發揮作用，在鹼性磷酸酶的存在下轉化為具備生物活性的母體唑類。此外，通式I的單賴氨酸鹽化合物具有低的吸溼性從而具備出乎意料的改進的物理穩定性，這使其在製備過程中更易處理，同時保持合適的溶解度，使得該前藥適於口服、局部和胃腸外給藥。
本發明的單賴氨酸鹽化合物可以是水合物、溶劑化物或非溶劑化物。還可以是幾種異結構溶劑化物形式的晶體結構。例如，這樣的溶劑化物形式包括由水、乙醇、甲醇、異丙醇和正丙醇形成的溶劑化物形式。此外，還可以是本發明單賴氨酸鹽或其溶劑化物的晶體多晶型物。
優選的化合物溶劑化物中A為
或
這些化合物中的第一個是最優選的。
本發明的單賴氨酸鹽可以製成高純度且具備出乎意料的良好溶解度和低吸溼性的結晶固體，這較之相同化合物的雙賴氨酸鹽具備更好的可處理性。例如，本發明的單賴氨酸鹽可以是((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯的結晶鹽。
本文中所用的「(C1-C6)烷基」指具有1到6個碳原子的直鏈或支鏈飽和脂肪族基團，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基等。
本文中所用的術語「滷素」包括氯、溴、氟和碘，優選氯或氟，最優選氟。
如前所述，通式I中的R和R1各自可為氫原子或長度具有1到6個碳原子的烷基。例如，R和/或R1可以是甲基或乙基。優選的，通式I中的R和R1各自代表氫。
此外，式(i)中的R3-R6可以是若干種可能的取代基。在一個實施方案中，單賴氨酸鹽或其溶劑化物的R3為2，4-二氟苯基。在另一個實施方案中，當R5為氫原子時，單賴氨酸鹽或其溶劑化物的R4為甲基。在又一個實施方案中，式(i)的R6是4-(4-氰苯基)-噻唑-2-基。
本發明的又一個實施方案是((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯的單賴氨酸鹽，或其藥學上可接受的溶劑化物，如下所示。

本發明的單賴氨酸鹽和溶劑化物可以是結晶形式，並以片劑、膠囊、粉末、溶液、懸浮液、乳劑、軟膏、洗液、乳膏或噴霧劑形式的藥物組合物使用。例如，前藥可包含單賴氨酸鹽化合物的乙醇溶劑化物晶體。
另外，式I化合物的單賴氨酸鹽或溶劑化物較之其雙賴氨酸鹽形式令人驚奇地保持了其水溶性，且由於低吸溼性具有出乎意料的改善的可處理性，這使其可用於口服以及胃腸外給藥。
此外，單賴氨酸鹽和其溶劑化物在製備和壓制(壓縮行為)中較之雙賴氨酸鹽顯示出改善的可處理性，從而適用於固體劑型(即片劑)。已經發現單賴氨酸鹽較之雙賴氨酸鹽形式具有更低的內聚指數，而具有與母體化合物(即立福康唑)相似的內聚指數。單賴氨酸鹽和其溶劑化物較之雙賴氨酸形式還顯示出更大的堆積密度和搖實密度。因此，單賴氨酸形式可用於壓制(成為片劑)，藥物負載量減少，並且較之雙賴氨酸形式具有對高溼度環境更低的敏感性(無論有無包衣)這些優點。此外，單賴氨酸鹽和其溶劑化物在溶液中穩定(無論以其藥物物質形式還是以製劑形式)，可以結晶形式分離並容易在體內轉化為原藥。
單賴氨酸鹽和其溶劑化物還表現出更好的固態穩定性。這裡的固態穩定性意指在環境和/或加速存儲條件下的API穩定性。例如，單賴氨酸鹽和其溶劑化物較之雙賴氨酸具有更低的吸溼(和吸溼度)，從而具有改善的、更好的可處理性。這些性質也導致更好的可處理性和長期穩定性(更低的含水量，更少的降解等)。
單賴氨酸鹽或其溶劑化物的吸溼行為與對應的雙賴氨酸鹽或其溶劑化物在更低的RH值下(例如0％直至50％RH)的吸溼行為相當，但在更高的高於50％RH的RH值下則令人驚奇地低很多(例如在60％RH下單賴氨酸單乙醇化物的重量變化為2-3％而雙賴氨酸單乙醇化物的重量變化為10％)。如圖1-4中所見，較之雙賴氨酸鹽化合物，單賴氨酸鹽化合物在相對溼度高和高溫條件下具有出乎意料的改善的可處理性和吸溼量。
圖1顯示了(2R，3R)-[4(4-氰苯基)噻唑-2-基]-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-[(二氫膦醯氧基)甲氧基]丁烷的雙賴氨酸乙醇溶劑化物的吸溼。給出了相比於相對溼度(x-軸)重量的變化(y-軸)，其中—○—所示為吸附，—●—為解吸附。
圖2顯示了((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯的單賴氨酸乙醇溶劑化物的吸溼，其中給出了相比於相對溼度(x-軸)的重量變化(y-軸)，其中—○—所示為吸附，—●—為解吸。
圖3顯示了((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯的單賴氨酸異丙醇溶劑化物的吸溼，其中給出了相比於相對溼度(x-軸)的重量變化(y-軸)，其中—○—所示為吸附，—●—為解吸。
圖4顯示了單賴氨酸鹽和雙賴氨酸形式(也稱為二賴氨酸)相比較的吸溼數據，其中給出了相比於相對溼度(x-軸)的重量變化(y-軸)，—◆—代表雙賴氨酸形式，—▲—代表單賴氨酸形式。
圖5顯示了((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯的單賴氨酸乙醇溶劑化物(實施例1)的PXRD重疊圖，其為單晶結構的模擬圖對比堆積樣品的實驗收集圖。
圖6A-6C涉及實施例1的核磁共振數據。圖6A涉及H-1NMR數據；圖6B涉及F-19NMR數據；圖6C涉及P-31NMR數據。
圖7是實施例1的DSC曲線，其中y-軸為熱流(W/g)，x-軸為溫度(℃)。
圖8是實施例1的TGA曲線(y-軸為重量(％)，x-軸為溫度(℃))。
圖9描繪了((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯的單賴氨酸異丙醇溶劑化物(實施例5)的PXRD重疊圖，其為單晶結構的模擬圖對比堆積樣品的實驗收集圖。
圖10是實施例5的DSC曲線，其中y-軸為熱流(W/g)，x-軸為溫度(℃)。
圖11是實施例5的TGA曲線(y-軸為重量(％)，x-軸為溫度(℃))。
圖12描繪了((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯的單賴氨酸正丙醇溶劑化物(實施例6)的PXRD重疊圖，其為單晶結構的模擬圖對比堆積樣品的實驗收集圖。
圖13是實施例6的DSC曲線，其中y-軸為熱流(W/g)，x-軸為溫度(℃)。
圖14是實施例6的TGA曲線(y-軸為重量(％)，x-軸為溫度(℃))。
本發明的單賴氨酸鹽和其溶劑化物可通過以下一般反應路線製備。在本方法中，A代表包含仲羥基或叔羥基的三唑抗真菌化合物的非羥基部分，Pr代表常規的羥基保護基例如叔丁基、苄基或烯丙基，R和R1各自獨立為氫或(C1-C6)烷基。最優選R和R1都為氫。

為了詳細說明本方法，目標抗真菌母體化合物II通過在合適的鹼存在下用氯化物中間體III進行O-烷基化，轉化為磷酸酯中間體IV(第一中間體)。所述合適的鹼可以是氫化鈉、氫化鉀、氨基鈉、叔丁醇鈉、叔丁醇鉀、二(三甲基甲矽烷基)氨基鈉、二(三甲基甲矽烷基)氨基鉀、或者其聯合，例如氫化鈉加二(三甲基甲矽烷基)氨基鈉。該反應步驟可以在惰性有機溶劑中進行，例如四氫呋喃、甲基四氫呋喃、甲基叔丁基醚、乙醚或者二甲基乙醯胺中，溫度為大約0℃到50℃，更優選大約20℃到40℃，最優選大約40℃。最優選的鹼是氫化鈉，最優選的溶劑是四氫呋喃。最優選的R是氫，而最優選的R1也是氫。
磷酸酯中間體IV隨後進行常規的脫保護步驟以脫去羥基保護基Pr，隨後形成式V的(第二)中間體(參見T.W.Greene等人，Protecting Groups in OrganicSynthesis，John Wiley & Son(1991)，在此引入作為參考)。該步驟所用的試劑取決於所用的具體羥基保護基，但這是本領域技術人員所熟知的。最優選的羥基保護基是叔丁基，其可用三氟乙酸、鹽酸或甲酸在適宜的惰性有機溶劑中除去。所述惰性有機溶劑可以是，例如二氯甲烷、二氯乙烷、甲苯或者三氟甲基苯。在二叔丁酯的優選脫保護步驟中，優選在大約0℃到40℃下用三氟乙酸在二氯甲烷中進行脫保護步驟，最優選的溫度為大約0-5℃。
中間產物V可隨後通過常規方法回收和純化，例如反相C18柱色譜法或溶劑萃取。當然，中間產物V也可通過常規方法轉化為如前所述的所需的藥學上可接受的鹽。中間產物V隨後與賴氨酸源混合得到本發明的單賴氨酸鹽。
特別的，中間產物V被溶於溶劑中(例如低級醇)以形成游離酸溶液。隨後，加熱該游離酸溶液(包含中間產物V)並用賴氨酸(即L-賴氨酸)水溶性溶液處理，其中pH調節到大約3.5到大約6.0之間，優選大約4.2到大約5.5之間，得到最終產物I。該狹小的pH範圍有益於得到純的式I的單賴氨酸鹽而不會汙染產生雙賴氨酸鹽雜質。

上述反應中純化的試劑III的使用導致中間體IV的收率相當低(大約10-35％的收率)，從而導致產物I的總收率較低。然而，當在上述反應的O-烷基化步驟中加入碘離子源時，中間體IV的收率出乎意料地增加到大約90％，因此也顯著增加了中間體產物V的收率。人們認為碘離子的加入可導致原位形成相應的碘化物中間體式IIIa
且該試劑的使用大幅度增加了中間體IV的收率。然而，試圖在上面反應的第一步中直接用中間體IIIa替代中間體III，卻因碘化物試劑IIIa較之氯化物中間體III極大降低的穩定性而未能成功。一種成功的可選方法包括在鹼例如NaH(其還可作為碘的還原劑起作用)存在下將碘和氯化物中間體III一起用於O-烷基化步驟中。人們認為碘被還原為碘離子，其隨後將氯化物中間體III原位轉化為碘化物中間體IIIa有助於該方法的這一步驟。下面的實施例顯示了利用碘元素的O-烷基化步驟，這是實施本反應得到中間體IV的優選方法。
通過加入碘離子源或通過碘和試劑III在強鹼下反應原位形成碘化物試劑IIIa，中間體IV收率的極大增加使得獲得中間產物V的收率加大增加。當然，這使得式I的單賴氨酸鹽及其溶劑化物的收率極大增加。
碘離子源優選碘化鈉，但也包括碘化鋰、碘化銫、碘化鎘、碘化鈷、碘化銅、碘化銣、碘化鋇、碘化鋅和碘化鈣。每當量母體化合物A-OH通常使用大約2-3當量的碘化物鹽。
當偶合步驟使用碘元素時，每當量母體化合物A-OH使用大約0.1到1.0當量的碘，優選0.5當量的碘。
使用碘或碘離子時所用的鹼和溶劑與上面所述的使用試劑III時所用的實質上相同。
可以理解的是上述反應中所用的取代基團包括一些反應敏感的官能團如氨基或羧酸酯基(其可能導致不希望的副反應)時，這些基團可通過本領域技術人員所熟知的常規保護基進行保護。適宜的保護基和其脫去方法，例如被闡述在Protective Groups in Organic Synthesis，Theodora W.Greene(John Wiley &Sons，1991)中。
可以理解的是式I範圍內的一些產物可能具有能導致光學異構體形成的取代基。本發明試圖在其範圍內包括所有這些光學異構體以及其差向異構體混合物，即R-或S-或外消旋形式。
本發明的藥學活性的鹽或其溶劑化物可以單獨使用或配製為醫學或藥物組合物，其除了包括活性三唑成分外還包含藥學上可接受的載體、輔料或稀釋劑。
藥物組合物可以是固體形式例如膠囊、片劑、粉末等，或液體形式，如溶液、懸浮液或乳劑。這樣的膠囊、片劑等，可包含控釋的製劑。這樣的固體形式，例如明膠膠囊或壓製片，可以任何常規方法製備。例如，活性化合物可引入包含藥學上可接受的載體的製劑，例如賦形劑(例如澱粉、乳糖)、粘合劑(例如明膠、纖維素、樹膠)、崩解劑(例如藻酸鹽、Primogel和玉米澱粉)、潤滑劑(例如硬脂酸鎂、二氧化矽)以及甜味劑或者調味劑(例如葡萄糖、蔗糖、糖精、水楊酸甲酯和薄荷)。還可製備不同的包衣用於膠囊和片劑以改變膠囊和片劑的香味、味道、顏色和形狀。另外，液體載體例如脂肪油、無菌水、聚乙二醇、非離子型表面活性劑以及食用油如玉米、花生和芝麻油，都是與活性成分的性質和所需要的特定給藥方式相適應的。通常用於製備藥物組合物的助劑可有益地包括，例如調味劑、著色劑、防腐劑和抗氧化劑如維生素E、抗壞血酸、BHT和BHA。組合物可以是即可使用的形式或用於在給藥的時候用適當的載體如無菌水重新配製的粉末形式。
例如，片劑可以通過任選與一種或多種助劑壓制或模塑製備。壓製片劑可通過在適當的設備中壓縮自由流動形式的活性成分，包括但不限於粉末或顆粒(任選地與藥學可接受的載體混合)來製備，後者可包含一種或多種潤滑劑、惰性稀釋劑、表面活性劑或者分散劑等等。模製片劑可通過在適當的設備中將用惰性液體稀釋劑溼化的粉末狀化合物的混合物模塑製備。組合物中發現的活性成分的含量可根據施加給病人的活性成分的量而變化。
此外，由於通式I的單賴氨酸鹽和/或其溶劑化物因其低吸溼性和良好的溶解性在加工過程中具有改善的可處理性，本發明的化合物可以凍幹製劑的形式給藥。另外，這些性質使得本發明化合物可以多種方式給藥。給藥在本文中意味著若干給藥方式。例如，給藥可以是口服、局部或胃腸外(包括靜脈內、血管內、腹腹內、皮下、肌內、胸骨內和輸注技術)，其中該給藥使用有效或治療抗真菌量的鹽化合物。哺乳動物受治療者(例如人、狗、貓、馬、豬等)在需要它時可接受這樣的口服、局部或胃腸外給藥。
適於注射用的藥物溶液包括無菌水溶液或分散體和用於臨時製備無菌注射溶液或分散體的無菌粉末。添加劑包括助溶劑(例如水楊酸鈉、乙酸鈉)、緩衝劑(例如檸檬酸鈉、甘油)、等滲化劑(例如葡萄糖)和穩定劑(例如聚乙二醇)。活性鹽或溶劑化物作為游離鹼的溶液或懸浮液可以在甘油、液體、聚乙二醇、其在油中的混合物，或一些其它的非毒性的胃腸外給藥可接受的稀釋劑或溶劑中製備，例如，在1，3-丁二醇中形成溶液。可以使用的可接受的載體和溶劑是水，林格溶液和等滲氯化鈉溶液。此外，無菌、不揮髮油類常用作溶劑或懸浮介質。在常規的儲藏和使用條件下，這些製劑包含防腐劑。另外，用於注射的組合物可以單位劑型製備裝入安瓿或多劑量容器中，並可包含如懸浮、穩定和分散劑等添加劑。在所有情況下，所述形式必須是無菌的並必須是流動的至容易注射的程度。其在製備和儲藏條件下必須穩定並必須保存抵抗微生物如細菌的汙染。所述載體可以是溶劑或分散介質，包括如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液體聚乙二醇)、其合適的混合物和植物油。
另外，給藥劑量可以變化。給藥劑量在很大程度上取決於所使用的特定化合物，所製備的特定組合物、給藥途徑、宿主的屬性和情況以及治療的特定部位和生物。然後讓特定優選劑量和應用途徑的選擇由醫生或獸醫決定並可通過常規方法確定。
另外，給藥次數可以變化。然而通常所述鹽或溶劑化物化合物可以大約5mg/天到大約1.0g/天的劑量以胃腸外或口服形式向哺乳動物宿主給藥。這些劑量是具有代表性的平均情況，可能存在需要更高或更低劑量的個別情況，這些劑量都屬於本發明的範圍內。另外，本發明化合物的給藥可以單次劑量或分次劑量進行。
當採用胃腸外或口服給藥時，本領域技術人員能夠確定所述鹽化合物的合適劑量和給藥次數。
當口服給藥時，所述鹽化合物的合適劑量為85mg到1020mg，大致每天一次到一天三次。
當胃腸外給藥時，所述鹽化合物的合適劑量為85mg到1020mg，大致每天一次到一天三次。
可選的，本發明的化合物可以栓劑或陰道栓劑的形式給藥，或者它們可以洗液、溶液或乳膏形式局部給藥。另外，可將其摻入(濃度直到10％)由白蠟或軟白石蠟基質以及需要的穩定劑和/或防腐劑組成的軟膏中。
對於局部給藥，所述組合物每天可用於被影響部位2到4次，或其一些其它變化形式。
適於局部給藥的製劑包括液體或半液體的適於透過皮膚的製劑(例如塗沫劑、洗液、軟膏、乳膏劑或者糊劑)。這樣的局部給藥的製劑可包括一種或多種增稠劑、溼潤劑、和/或潤膚劑包括然而並非限於黃原膠、軟石蠟、蜂蠟、或者聚乙二醇、山梨糖醇、礦物油、羊毛脂、角鯊烯等等。例如，在洗液或乳膏劑中，本發明的鹽或溶劑化物懸浮或溶解在如一種或多種如下物質的混合物中礦物油、脫水山梨醇單硬脂酸酯、聚乙二醇、液體石蠟、聚山梨酯60、十六烷基酯蠟、十六十八醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。對於包含活性鹽或溶劑化物的軟膏製劑，活性成分懸浮或溶解在如一種或多種如下物質的混合物中礦物油、液體凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧化乙烯聚氧化丙烯化合物、乳化蠟和水。本發明的活性成分鹽或溶劑化物的合適的局部給藥劑量是0.1mg到150mg，每天1到4次，優選1到2次。對於局部給藥，活性成分可佔0.001％到10％w/w，例如1％到2％，基於製劑的重量，儘管可以包含多達製劑的10％w/w，但優選不超過5％w/w，更優選0.1％到1％。
本發明的鹽或其溶劑化物還可以鼻內或吸入方式給藥，並以乾燥粉末吸入器或由增壓容器、泵、噴霧器或霧化器藉助合適的推進劑，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、氫氟烷烴例如1，1，1，2-四氟乙烷(HFA 134A[商品名])或1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷(HFA 227EA[商品名])、二氧化碳或者其他的適當的氣體提供的氣溶膠噴射從而便利地給藥。在增壓氣霧劑的情況下，劑量單位可通過提供遞送定量的閥門來確定。增壓容器、泵、噴霧器或霧化器可包含活性鹽或溶劑化物的溶液或懸浮液，例如，利用乙醇和推進劑的混合物作為溶劑，其可額外包含潤滑劑，例如去水山梨糖醇三油酸酯。用於吸入器或吹藥器的膠囊和藥筒(如由明膠製備的)可以被配製以包含本發明化合物和適當的粉末基質例如乳糖或澱粉的粉末混合物。噴霧組合物例如包含式I的新穎鹽(或其溶劑化物)和上面提到的藥學上可接受的液體載體的溶液。噴霧也可用於局部給藥。吸入組合物也包含式I的新單賴氨酸鹽或其溶劑化物和上面提到的可接受的推進劑。
本發明的單賴氨酸鹽或其溶劑化物是有用的，因為其對動物具有藥理學活性，特別包括哺乳動物，最特別的是人類。特別的，本發明的鹽或溶劑化物可用於治療或預防局部的真菌感染，包括由念珠菌屬(Candida)、毛癬菌屬(Trichophyton)、小孢子菌屬(Microsporum)或者表皮癬菌屬(Epidermophyton)的物種引起的真菌感染。另外，其可用於治療或預防白色念珠菌(Candida albicans)引起的黏膜感染。其還可用於治療或預防由例如白色念珠菌、新型隱球菌(Cryptococcus neoformans)、黃麴黴(Aspergillus flavus)、煙麴黴(Aspergillus fumigatus)、球孢子菌屬(Coccidioides)、副球孢子菌屬(Paracoccidiodes)、組織胞漿菌屬(Histoplasma)或者芽生菌屬(Blastomyces)的物種引起的全身性真菌感染。
因此，根據本發明的另一個方面，提供治療真菌感染的方法，其包括對宿主施用藥學上或治療上有效量的所述化合物。該宿主特別是哺乳動物宿主，最特別是人類患者。
還提供本發明的鹽或其溶劑化物用作藥物的用途，以及本發明化合物在製備用於治療真菌感染的藥物中的用途。
本發明化合物的抗真菌活性的體外評估可通過測定最小抑制濃度(MIC)來進行。MIC是測試化合物抑制測試微生物生長的濃度。在測試中，一系列的瓊脂平板(各自摻入了特定濃度的測試化合物)被接種真菌株隨後各個平板在37℃下孵化48小時。檢查平板上真菌生長與否，並記錄相關濃度。可用於該試驗的微生物包括白色念珠菌、煙麴黴、毛癬菌屬物種、小孢子菌屬物種、絮狀表皮癬菌(Epidermophyton floccosum)、粗球孢子菌(Coccidioides immitis)和光滑球擬酵母(Torulopsos galbrata)。應該認識到，作為前藥，本發明的某些鹽或其溶劑化物在體外測試中可能不具備活性。
本發明的鹽或其溶劑化物的活體內評估可通過對接種了一種真菌株(如白色念珠菌)小鼠以一系列劑量水平腹膜內或靜脈內注射或口服來執行。活性通過比較在未處理組小鼠死亡後不同劑量水平的處理組小鼠的存活來測定。記錄測試鹽或溶劑化物提供50％的防感染致死效應的劑量水平。
本發明的單賴氨酸鹽或其溶劑化物由於低吸溼性同時保持了母體三唑抗真菌化合物的良好溶解性而出乎意料地增加了可處理性並且還釋放生物活性化合物(例如作為前藥發揮作用)。例如，如圖2所示，乙醇溶劑化物形式在60％RH下具有＜2.5％的吸附重量變化和＜5％的解吸重量變化。作為另一個例子，異丙醇溶劑化物在60％RH下具有＜0.5％的吸附重量變化和＜1％的解吸重量變化。
實施例 下面的實施例對本發明進行說明但並無意限制本發明。實施例中所用的縮寫為本領域技術人員所熟知的常規縮寫。所使用的一些縮寫如下 h＝小時 rt＝室溫 mmol＝毫摩爾 g＝克 THF＝四氫呋喃 mL＝毫升 L＝升 Et2O＝乙醚 EtOAc＝乙酸乙酯 TFA＝三氟乙酸 CH2Cl2＝二氯甲烷 CH3CN＝乙腈 在隨後的實施例中，給出的所有溫度都為攝氐度(℃)。熔點由電熱儀器測量且沒有校正。質子核核磁共振(1H NMR)光譜由Bruker-500、BrukerAM-300或Varian Gemini 300分光計記錄。除非另有指出，所有的光譜以CDCl3或D2O測量。化學位移以相對於四甲基矽烷(TMS)或參考溶劑峰的δ單位(ppm)報告，質子間偶合常數以赫茲(Hz)報告。分裂圖式如下所指示s，單峰；d，雙重峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；br，寬峰；dd，雙重峰的雙重峰；dt，三重峰的雙重峰；和app d，明顯的雙重蜂，等。質譜以利用直接化學電離(DCI，異丁烯)、快原子轟擊(FAB)或電子離子噴射(ESI)的Kratos MS-50或Finnegan 4500儀器來記錄。
分析型薄層色譜法(TLC)在預塗好的矽膠板(60F-254)上進行並利用紫外光、碘蒸汽和/或通過甲醇磷鉬酸加熱著色顯像。反相色譜法利用C18矽膠(Waters公司製備型C18 125A)在玻璃柱中以稍高於大氣壓的壓力進行。
實施例1 ((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯單賴氨酸鹽乙醇溶劑化物
步驟A 烘箱乾燥的1L圓底燒瓶裝有機械攪拌器、氮氣入口轉接器、裝備橡膠隔片的壓力平衡添加漏鬥和溫度探針，向其中加入氫化鈉(2.89g，0.069mol，60％)和THF(50mL)。將溶於30mL THF中的(2R，3R)-3-[4-(4-氰苯基)噻唑-2-基]-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-醇(式B)(10g，0.023mol)在室溫下用20分鐘滴加到該攪拌後的懸浮液中。攪拌45分鐘後，將溶於30mLTHF中的碘(2.99g，0.0115mol)溶液用10分鐘滴加加入，隨後用15分鐘滴加加入二叔丁基氯甲基磷酸酯(式III)(13.29g，0.035mol，～68％純度)。反應混合物在約41℃下攪拌4小時使反應完成。以過程中HPLC判斷反應是否完成。

將該反應混合物倒入冰水(100mL)中。分離水相併以乙酸乙酯萃取(3×50mL)，混合的有機萃取物以10％的硫代亞硫酸鈉(50mL)、水(50mL)、鹽水(50mL)洗滌，硫酸鎂乾燥並減壓濃縮，得到淺黃色油狀物(22.8g，過程中HPLC～97面積百分比)。粗產物(式IV)在步驟B中按原態使用。
步驟B 圓底燒瓶裝有磁性攪拌器、冷卻浴、pH探針和氮氣進出口，向其中加入溶於CH2Cl2(23mL)的上述步驟A的產物(式IV)(7.5g)並冷卻到0℃。向該攪拌的溶液中緩慢加入三氟乙酸(8.8mL)並攪拌3小時至完成反應。以過程中HPLC判斷反應是否完成。將該反應混合物倒入2N NaOH(64mL)的冷卻溶液中。反應混合物以乙酸叔丁酯萃取(2×65mL)去除所有的有機雜質。含有雙鈉鹽產物的水層以活性炭(10g)處理並以硅藻土層過濾。清濾液以1N HCl酸化到pH2.5。游離酸產物被萃取到乙酸乙酯(2×50mL)中。混合的有機層以水洗滌，MgSO4乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到3.39g粗產物V。可選地，在本發明的一個優選方面，步驟B可以連續過程進行，其細節可由本領域普通技術人員來確定。

步驟C 將上面得到的產物V溶於甲醇(75mL)中。將L-賴氨酸(1.8g)加入該游離酸溶液中並維持pH在4.2到5.5，混合物在60℃加熱4.5小時。熱反應物以硅藻土層過濾。濾液濃縮到大約5mL，與乙醇(100mL)混合併加熱到65℃以結晶出單賴氨酸鹽的溶劑化物。該溶劑化物收集到布氏漏鬥上並真空乾燥，得到3.71g呈結晶固體的標題溶劑化物化合物。

對於實施例1，收集粉末X射線衍射數據(PXRD)(見圖5)，單晶的X射線晶體學數據(表1-2)和核磁共振光譜數據(圖6A、6B、6C)，並獲得了差示掃描量熱曲線(圖7)和熱重量分析(TGA)曲線(圖8)。
表1實施例1的晶體數據和結構細化 表2原子坐標(×104)和等量同位素置換參數(×103).U(eq)定義為正交化Uij張量的痕量的三分之一。
實施例2 1-((2S，3S)-3-(4-(4-(4-(4(((3S)-5-((1H-1，2，4-三唑-1-基)甲基)-5-(2，4-二氟苯基)-四氫呋喃-3-基)甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-5-氧代-4，5-二氫-1，2，4-三唑-1-基)戊-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯單賴氨酸鹽 重複實施例1的步驟A，只是用下面化合物代替式B化合物
得到式IV』化合物的粗產物並原態用於步驟B
重複實施例1的步驟B，只是用式IV』化合物代替式IV化合物，得到粗產物V』
重複實施例1的步驟C，只是用式V』化合物代替式V化合物製備單賴氨酸鹽化合物
實施例3 ((2R，3R)-3-(3-((E)-4-(2，2，3，3-四氟丙氧基)苯乙烯基)-1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯單賴氨酸鹽 重複實施例1的步驟A，只是用下面化合物代替式B化合物
得到式IV」化合物的粗產物並原態用於步驟B
重複實施例1的步驟B，只是用式IV」化合物代替式IV化合物，得到粗產物V」
重複實施例1的步驟C，只是用式V」化合物代替式V化合物製備單賴氨酸鹽化合物
實施例4 1-(2S，3S)-3-(4-(4-(4-(4(((3S)-5-((1H-1，2，4-三唑-1-基)甲基)-5-(2，4-二氟苯基)-四氫呋喃-3-基)甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-5-氧代-4，5-二氫-1，2，4-三唑-1-基)戊-2-基氧基)丙基二氫磷酸酯單賴氨酸鹽 重複實施例1的步驟A，只是用下面化合物代替式B化合物
得到式IV化合物的粗產物，其中氯化物中間體III的R1是乙基且R是氫，並原態用於步驟B
重複實施例1的步驟B，只是用式IV化合物代替式IV化合物，得到粗產物V
重複實施例1的步驟C，只是用式V化合物代替式V化合物製備單賴氨酸鹽化合物
實施例5 ((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯單賴氨酸鹽異丙醇溶劑化物 重複實施例1的步驟A、B、C，只是將步驟C的濾液濃縮並與異丙醇(100mL)混合併加熱到65℃以使單賴氨酸鹽的溶劑化物結晶。將溶劑化物收集到布氏漏鬥上並真空乾燥，得到呈結晶固體的標題溶劑化物化合物。
對於實施例5，收集了粉末X射線衍射數據(PXRD)(見圖9)，單晶的X射線晶體學數據(表3-4)，並獲得了差示掃描量熱(DSC)曲線(圖10)和熱重量分析(TGA)曲線(圖11)。
表3實施例5的晶體數據和結構細化 表4原子坐標(×104)和等量同位素置換參數(×103).U(eq)定義為正交化Uij張量的痕量的三分之一。
實施例6 ((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯單賴氨酸鹽正丙醇溶劑化物 重複實施例1的步驟A、B、C，只是將步驟C的濾液濃縮並與正丙醇(100mL)混合併加熱到65℃以使單賴氨酸鹽的溶劑化物結晶。將溶劑化物收集到布氏漏鬥上並真空乾燥，得到呈結晶固體的標題溶劑化物化合物。
對於實施例6，收集了粉末X射線衍射數據(PXRD)(見圖12)，單晶的X射線晶體學數據(表5-6)，並獲得了差示掃描量熱曲線(圖13)和熱重量分析(TGA)曲線(圖14)。
表5實施例6的晶體數據和結構細化 表6原子坐標(×104)和等量同位素置換參數(×103).U(eq)定義為正交化Uij張量的痕量的三分之一。
對比實施例1 (2R，3R)-3-[4-(4-氰苯基)噻唑-2-基]-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-[(二氫膦醯氧基)甲氧基]丁烷的雙賴氨酸鹽 在步驟A和B之後將由實施例1得到的上述式V產物，溶於甲醇(75mL)。向其中加入L-賴氨酸(1.8g)，pH維持在7.0到9.0，混合物在60℃加熱4.5小時。熱反應物以硅藻土層過濾。濾液濃縮到大約5mL，與乙醇(100mL)混合併加熱到65℃以結晶出雙賴氨酸鹽。該鹽收集到布氏漏鬥上並真空乾燥，得到3.71g呈灰白色結晶固體的標題化合物。
對比實施例2 (2R，3R)-3-[4-(4-氰苯基)噻唑-2-基]-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-[(二氫膦醯氧基)甲氧基]丁烷的雙-三羥甲基氨基甲烷鹽 將對比實施例1(10g，11.3mmol)溶於水中。加入22.6mL1N HCl使pH為2.65，並加入70mL乙酸乙酯用於萃取。混合物用70mL水洗滌。乙酸乙酯層的游離酸被分離，其中水層以乙酸乙酯萃取(30mL×2)，乙酸乙酯層真空濃縮得到380mg透明固體。加入溶於3.6mL水(70-80℃)中的2.596g的三羥甲基氨基甲烷胺鹽。得到乳狀懸浮液。反應混合物加熱到50-55℃持續兩小時，冷卻到室溫並攪拌18小時。過濾並以乙酸乙酯漂洗。雙-三羥甲基氨基甲烷鹽收集到布氏漏鬥上並真空乾燥，得到7.92g呈灰白色結晶固體的化合物。
對比實施例3 (2R，3R)-3-[4-(4-氰苯基)噻唑-2-基]-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-[(二氫膦醯氧基)甲氧基]丁烷的叔丁胺鹽 在步驟A和B之後將由實施例1的產物IV的溶液，溶於50mL乙酸乙酯中並在氮氣氛中向其中加入叔丁胺(5.3mL)。反應混合物在40℃下攪拌約1小時使產物結晶。雙叔丁胺鹽收集到布氏漏鬥上並真空乾燥，得到2.21g呈灰白色結晶固體的化合物。
對比實施例4 (2R，3R)-3-[4-(4-氰苯基)噻唑-2-基]-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-[(二氫膦醯氧基)甲氧基]丁烷，鈉鹽
步驟A
向(2R，3R)-3-[4-(4-氰苯基)噻唑-2-基]-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-醇，2，(8.74g，20mmol)溶於THF(40mL)的溶液中在氮氣氛中和室溫下加入氫化鈉(0.80g，60％油溶液，20mmol)。所得混合物在室溫下攪拌0.25小時然後加入二叔丁基氯甲基磷酸酯，3，(10.3g，40mmol)。反應混合物在50℃加熱16小時。該反應混合物隨後冷卻到室溫並減壓濃縮。所得殘餘物溶於Et2O中並以水和鹽水洗滌。有機層以MgSO4乾燥並減壓濃縮得到17.0g膠狀物的粗化合物，4。小部分的該粗化合物通過C18反相色譜法純化。色譜柱依次以30％CH3CN/H2O，38％CH3CN/H2O，45％CH3CN/H2O和50％CH3CN/H2O洗脫。含產物的級分減壓濃縮以除去CH3CN。所得水層隨後以Et2O萃取。Et2O層以鹽水洗滌，乾燥並減壓濃縮得到純化的白色固體狀的化合物，4。光譜數據如下1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.35(s，1H)，7.98(d，2H，J＝9)，7.76(s，1H)，7.71(d，2H，J＝9)，7.63(s，1H)，7.36-7.27(m，1H)，6.86-6.78(m，2H)，5.53(dd，1H，J＝28，6)，5.53(dd，1H，J＝9，6)，5.17(d，1H，J＝15)，5.03(d，1H，J＝15)，4.01(q，1H，J＝7)，1.47(s，9H)，1.45(s，9H)，1.37(d，3H，J＝7)。MS[ESI+(M+H+]測定值660.2。
步驟B
將粗製的(2R，3R)-3-[4-(4-氰苯基)噻唑-2-基]-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-[(二叔丁基膦醯氧基)甲氧基]丁烷，4，(17g)溶於CH2Cl2(100mL)中。向該溶液中加入TFA(50mL)並在室溫下攪拌反應混合物0.25小時。反應混合物隨後減壓濃縮。向殘留物中加入H2O(200mL)，Et2O(100mL)和EtOAc(100mL)。水層的pH通過加入固體Na2CO3調節到7.6，隨後分離有機層和水層。水層隨後用400g C-18的反相色譜法處理，以水到5％CH3CN/H2O洗脫。含產物的級分減壓濃縮，冷凍並凍幹得到1.5g白色固體狀的化合物，1.(1.5g，12％，兩步)。光譜數據如下1H NMR(500MHz，D2O)δ8.91(s，1H)，7.92(s，1H)，7.81(d，2H，J＝8)，7.80(s，1H)，7.77(d，2H，J＝8)，7.21(dd，1H，J＝15，9)，6.99(ddd，1H，J＝9，9，2)，6.91(ddd，1H，J＝9，9，2)，5.35(dd，1H，J＝6，6)，5.29(d，1H，J＝15)，5.21(dd，1H，J＝6，6)，5.19(d，1H，J＝15)，3.86(q，1H，J＝7)，和1.35(d，3H，J＝7)；MS[(ESI-(M-H)-546.1]；C23H18F2N5O5S1P1/Na2/3.5H2O的分析計算值C，42.21H，3.85N，10.70Na，7.03.測定值C，42.32H，3.83N，10.60Na，7.04。
二叔丁基氯甲基磷酸酯，3，可通過下列任意方法製備。
方法1 二叔丁基磷酸銀(6.34g，20mmol)，其通過混合二叔丁基磷酸酯(由二叔丁基亞磷酸酯通過Zwierzak和Kluba，Tetrahedron，第27卷，3163(1971)的方法製得)與1當量的碳酸銀在50％乙腈水溶液中混合併凍幹製得，與氯碘甲烷(35g，200mmol)在苯中混合併在室溫下攪拌18小時。過濾反應混合物並將濾液減壓濃縮。殘餘物經二氧化矽色譜法並以2∶1己烷-乙酸乙酯洗脫。適當的級分濃縮至幹得到副標題化合物3(3.7g，收率71％)1H NMR(CDCl3)δ5.63(d，2H，J＝17)，1.51(s，18H)；MS(MH+＝259)。
方法2 二叔丁基磷酸四丁銨通過將二叔丁磷酸酯(20g，94mmol(由二叔丁基亞磷酸酯通過Zwierzak和Kluba，Tetrahedron，第27卷，3163(1971)的方法製得))溶於甲醇氫氧化四丁銨(47mL的1M溶液，47mmol)得到。反應混合物溫度為23℃，且pH為4.33。用0.2小時加入甲醇氫氧化四丁銨(48mL的1M溶液，48mmol)調節反應混合物pH到6.5-7.0。反應混合物在大約26℃下攪拌0.5小時隨後在低於40℃的浴溫度下減壓濃縮。粗殘留物通過加入甲苯(3×100mL)共沸三次，隨後將混合物減壓濃縮。粗殘留物隨後在冷己烷(0℃)中研磨1小時，然後過濾收集固體，以最小量的冷己烷洗滌，乾燥得到第一批白色固體狀的二叔丁基磷酸四丁銨(24.0g)。母液減壓濃縮隨後在冷己烷(20mL)中研磨1小時。然後過濾收集固體，以最小量的冷己烷洗滌，乾燥得到第二批白色固體狀的二叔丁基磷酸四丁銨((8.5g，總共32.5g(77％))。將二叔丁基磷酸四丁銨(218g，480mmol)在苯(200mL)中的溶液在室溫下用1.5小時滴加到攪拌的氯碘甲烷(800g，4535mmol)中。反應混合物在室溫下再攪拌1.5小時隨後減壓濃縮。油狀殘留物溶於乙醚並過濾除去白色沉澱固體。有機層以飽和NaHCO3和H2O/鹽水(1/1)洗滌。有機層隨後以硫酸鎂乾燥，過濾並減壓濃縮得到紅棕色油狀物(320g)。該紅棕色油狀物經矽膠(800g)色譜法處理並以20％乙酸乙酯/己烷，25％乙酸乙酯/己烷，和30％乙酸乙酯/己烷洗脫。含產物的級分減壓濃縮得到金色油狀物。油狀物以CH2Cl2(30mL)稀釋，減壓濃縮並隨後真空乾燥，得到化合物3(61.3g，收率49％)。1H NMR(苯-d6)δ5.20(2H，d，J＝15)，1.22(18H，s)。
方法3 碘氯甲烷(974g，402mL，5.53mol)在25℃下以二叔丁基磷酸四丁銨(250g，0.553mol)處理。用10分鐘分次加入該磷酸酯。大約15分鐘後該非均勻混合物變成澄清的淡紅的溶液。混合物攪拌3小時，碘氯甲烷隨後通過低於30℃的浴溫度旋轉蒸發去除。殘留物置於1L叔丁基甲醚中並攪拌15分鐘以沉澱碘化四丁銨副產物。碘化四丁銨通過燒結玻璃漏鬥真空過濾去除。濾液通過旋轉蒸發濃縮得到油狀物，包含5∶1的3」和不期望的二聚物雜質的混合物
混合物可通過矽膠色譜法純化以獲得純淨的油狀化合物3，產率約60％。
晶體數據和理化性質 單賴氨酸鹽的溶劑化物的單晶通過結晶學分析，發現乙醇溶劑化物和正丙醇溶劑化物與異丙醇溶劑化物為同晶的。(表7)表7結晶數據 得到的((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯單賴氨酸鹽的溶劑化物按比例增加且充分表徵。物化性質包括溶解度、穩定性、吸溼性、緊密性等，都被評估並與對比實施例1的雙賴氨酸鹽比較。
單賴氨酸鹽或其溶劑化物證實了極大改善的吸溼性(圖1，2)，尤其在較高的RH值下(在90％RH下相對於對比實施例1的雙賴氨酸鹽50％的吸溼量)。例如，對比實施例1在60％RH具有大約10％的重量變化(圖1)，而實施例1在相同溼度水平下具有大約2-2.5％的重量變化(圖2)。平均起來，單賴氨酸鹽或其溶劑化物較之雙賴氨酸鹽形式具有更好的穩定性(圖4)。
異丙醇溶劑化物的吸溼數據顯示了更大的改善(圖3)。例如，在60％RH下具有少於1％的重量變化(圖3)。
另外，實施例1保特了高水溶性(＞200mg/mL)，與對比實施例1的雙賴氨酸鹽的相似。
單賴氨酸鹽或其溶劑化物的結晶很容易生長並顯示出更理想的形態。物化研究表明其較之雙賴氨酸鹽具有更優越的溶液和物理穩定性。基於物質存儲在受壓穩定性條件下收集到的兩周的穩定性數據，結晶乙醇溶劑化物顯示出相對較低溼度下良好的穩定性和高溫下(表8)在40℃/75％RH(打開和封閉)下最小量的降解。在任何其它存儲條件下沒有見到分解。
本發明的低吸溼性依次提供物理穩定性和原料可處理性，使得式I的單賴氨酸鹽及其溶劑化物適於作為口服固體以及靜脈內劑型(圖8)。除了其改善的物理穩定性，單賴氨酸鹽或其溶劑化物的另一個主要優點是減少了藥物負載量從而相應導致更好的加工性。
表8實施例1溶劑化物的物理穩定性 實施例7-9 實施例1-3用於製備如下實施例4-6的藥物組合物。
實施例7 2.5mg實施例1的化合物與澱粉、甘露糖醇、微晶纖維素和硬脂酸鎂混合，其中合適的組分和數量可由本領域的普通技術人員確定，然後壓制形成片劑。
實施例8 將2.5mg實施例2的化合物轉化為凍幹形式，與無菌水、植物油和聚乙二醇混合，其中合適的組分和數量可由本領域的普通技術人員確定，以製備藥物溶液。
實施例9 將2.5mg實施例3的化合物與礦物油、丙二醇、液體石蠟、乳化蠟和水混合(活性成分大約為製劑重量的大約0.01％w/w到1％)，其中合適的組分和數量可由本領域的普通技術人員確定，以製備蠟狀軟膏。
實施例10-12 實施例7-9如下給予受治療者。
實施例10 實施例7通過口服施用給全身感染白色念珠菌的第一組小鼠，每天給藥兩次持續兩周。另一組全身感染白色念珠菌的小鼠每天四次給藥持續兩周。每天觀察每組的感染，持續7天。
實施例11 實施例8通過靜脈內施用給全身感染新型隱球菌的小鼠每天兩次，持續一周。每天觀察感染，持續14天。
實施例12 實施例9的乳膏劑局部施用給感染毛癬菌屬物種的小鼠每天兩次，持續1周。每天觀察感染，持續7天。
不管是口服、胃腸外還是局部給藥，本發明的鹽及其溶劑化物都顯示出優秀的抗真菌活性。
工業實用性 根據本發明，提供一種式I唑類化合物的單賴氨酸鹽，或其藥學上可接受的溶劑化物
其中R和R1各自為氫原子或(C1-C6)烷基，且A代表包含仲羥基或叔羥基的類型的三唑抗真菌鹽化合物的非羥基部分。根據本發明的這些單賴氨酸鹽，或其藥學上可接受的溶劑化物適用於治療，例如嚴重的全身性真菌感染。
權利要求
1.式I化合物的單賴氨酸鹽，或其溶劑化物
其中R和R1各自為氫原子或(C1-C6)烷基，和
A選自如下基團
和式(i)
其中，在式(i)中
R3代表被一個或更多滷素原子取代的苯基；
R4代表氫或CH3；
R5代表氫，或與R4一起代表＝CH2；和
R6代表噻唑基、嘧啶基或三唑基，其中每個環任選被一個或多個選自滷素、＝O、CH＝CH-(C6H4)-OCH2CF2CHF2、和被一個或多個選自CN和OCH2CF2CHF2的基團取代的苯基、或被一個或多個選自滷素和甲基吡唑基的基團取代的苯基的基團所取代。
2.根據權利要求1的單賴氨酸鹽或其溶劑化物，其中A代表式(i)
其中
R3代表被一個或多個滷素原子取代的苯基；
R4代表氫或CH3；
R5代表氫，或與R4一起代表＝CH2；和
R6代表噻唑基、嘧啶基或三唑基，其中每個環任選被一個或多個選自滷素、＝O、CH＝CH-(C6H4)-OCH2CF2CHF2、和被一個或多個選自CN和OCH2CF2CHF2的基團取代的苯基、或被一個或多個選自滷素和甲基吡唑基的基團取代的苯基的基團所取代。
3.根據權利要求1或2的單賴氨酸鹽或其溶劑化物，其中式(i)的R3是2，4-二氟苯基。
4.根據權利要求1-3中任一項的單賴氨酸鹽或其溶劑化物，其中式(i)的R4是甲基和R5是氫。
5.根據權利要求1-4任一項的單賴氨酸鹽或其溶劑化物，其中式(i)的R6是4-(4-氰苯基)-噻唑-2-基。
6.根據權利要求1-5任一項的單賴氨酸鹽或其溶劑化物，其中式I的R和R1各自為氫。
7.根據權利要求1或2的單賴氨酸鹽或其溶劑化物，其中A為
或
8.根據權利要求1的單賴氨酸鹽或其溶劑化物，其中A選自
9.根據權利要求1的單賴氨酸鹽或其溶劑化物，其中A選自
和
10.根據權利要求1-9任一項的單賴氨酸鹽的溶劑化物，其中所述其溶劑化物是乙醇溶劑化物。
11.根據權利要求1-9任一項的單賴氨酸鹽的溶劑化物，其中所述其溶劑化物是異丙醇溶劑化物。
12.根據權利要求1-9任一項的單賴氨酸鹽的溶劑化物，其中所述其溶劑化物是正丙醇溶劑化物。
13.一種藥物組合物，其包含
根據權利要求1-9任一項的單賴氨酸鹽，或其藥學上可接受的溶劑化物；和
藥學上可接受的輔料、稀釋劑、或載體。
14.一種治療真菌感染的方法，所述方法包括
對需要該治療的哺乳動物宿主施用有效抗真菌量的根據權利要求1-9任一項的單賴氨酸鹽，或其藥學上可接受的溶劑化物。
15.一種製備水溶性的式I的單賴氨酸鹽的方法
其中R和R1各自為氫或(C1-C6)烷基，和
A選自如下基團
和式(i)
其中，在式(i)中，
R3代表被一個或多個滷素原子取代的苯基；
R4代表氫或CH3；
R5代表氫，或與R4一起代表＝CH2；和
R6代表噻唑基、嘧啶基或三唑基，其中每個環任選被一個或多個選自滷素、＝O、CH＝CH-(C6H4)-OCH2CF2CHF2、和被一個或多個選自CN和OCH2CF2CHF2的基團取代的苯基、或被一個或多個選自滷素和甲基吡唑基的基團取代的苯基的基團所取代；
所述方法包括
(a)將式A-OH化合物，其中A如上述式I中所定義，與式III化合物反應
其中式III中的R和R1各自獨立地為氫或(C1-C6)烷基，Pr代表羥基保護基；所述反應在惰性有機溶劑中，在鹼存在下和大約25℃到50℃的溫度下進行，形成式IV第一中間體
式IV中的R和R1各自獨立為氫或(C1-C6)烷基，Pr代表羥基保護基，A如式I中定義；
(b)用有機溶劑除去式IV的羥基保護基Pr以形成式V第二中間體
式V中的R和R1各自獨立為氫或(C1-C6)烷基，A如式I中定義；和
(c)將所述式V第二中間體與賴氨酸在pH為4.2-5.5的溶劑中反應以製備所述式I的單賴氨酸鹽。
16.根據權利要求15的方法，其中Pr保護基是叔丁基。
17.根據權利要求15或16的方法，其中步驟(a)的溶劑是四氫呋喃。
18.根據權利要求15-17任一項的方法，其中步驟(a)中使用的鹼是氫化鈉。
19.一種製備水溶性單賴氨酸鹽的方法，所述單賴氨酸鹽具有式I
其中R和R1各自為氫或(C1-C6)烷基，和
A選自如下基團
和式(i)
其中，在式(i)中，
R3代表被一個或多個滷素原子取代的苯基；
R4代表氫或CH3；
R5代表氫，或與R4一起代表＝CH2；和
R6代表噻唑基、嘧啶基或三唑基，其中每個環任選被一個或多個選自滷素、＝O、CH＝CH-(C6H4)-OCH2CF2CHF2、和被一個或多個選自CN和OCH2CF2CHF2的基團取代的苯基、或被一個或多個選自滷素和甲基吡唑基的基團取代的苯基的基團所取代；
所述方法包括
(a)將式A-OH化合物，其中A如上述式I中所定義，與式III化合物反應
其中式III中的R和R1各自獨立為氫或(C1-C6)烷基，Pr代表羥基保護基；所述反應在惰性有機溶劑中，在鹼存在下和大約25℃到50℃的溫度下進行，形成式IV第一中間體
式IV中的R和R1各自獨立為氫或(C1-C6)烷基，Pr代表羥基保護基，A如式I中定義；
(b)用有機溶劑除去式IV的羥基保護基Pr以形成式V第二中間體
式V中的R和R1各自獨立為氫或(C1-C6)烷基，A如式I中定義；
(c)將所述式V第二中間體與賴氨酸在pH為4.2-5.5的溶劑中反應以製備所述式I的單賴氨酸鹽；和
(d)將所述單賴氨酸鹽在溶劑中結晶以製備所述單賴氨酸鹽的溶劑化物。
20.根據權利要求19的方法，其中步驟(d)中的溶劑是含水乙醇。
21.根據權利要求19或20的方法，其中步驟(d)中的溶劑是含水異丙醇。
22.根據權利要求19-21任一項的方法，其中步驟(d)中的溶劑是含水正丙醇。
23.根據權利要求15-22任一項的方法，其中原料A-OH的A是式(i)
24.具有如下結構的((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氫磷酸酯的單賴氨酸鹽
或其藥學上可接受的溶劑化物。
25.根據權利要求23的單賴氨酸鹽或其溶劑化物，所述鹽或其溶劑化物是晶體形式。
26.根據權利要求24的單賴氨酸鹽的溶劑化物，其中所述其溶劑化物是乙醇溶劑化物。
27.根據權利要求24的單賴氨酸鹽的溶劑化物，其中所述其溶劑化物是異丙醇溶劑化物。
28.根據權利要求24的單賴氨酸鹽的溶劑化物，其中所述其溶劑化物是正丙醇溶劑化物。
29.一種藥物組合物，其包含
有效量的根據權利要求24的單賴氨酸鹽或其藥學上可接受的溶劑化物，和
藥學上可接受的輔料、稀釋劑、或載體。
30.根據權利要求29的藥物組合物，其中所述組合物為片劑、膠囊、粉末、溶液、懸浮液、乳液、軟膏、洗液、乳膏劑或噴霧劑。
31.一種治療真菌感染的方法，所述方法包括
對需要該治療的哺乳動物宿主施用有效抗真菌量的根據權利要求24的單賴氨酸鹽，或其藥學上可接受的溶劑化物。
32.一種治療真菌感染的方法，所述方法包括
對需要該治療的哺乳動物宿主口服施用有效抗真菌量的根據權利要求24的單賴氨酸鹽，或其藥學上可接受的溶劑化物。
33.一種治療真菌感染的方法，所述方法包括
對需要該治療的哺乳動物宿主胃腸外給藥施用有效抗真菌量的根據權利要求24的單賴氨酸鹽，或其藥學上可接受的溶劑化物。
34.一種製備具有如下結構的水溶性單賴氨酸鹽的方法，
所述方法包括
(a)將式B化合物
與式III』化合物反應
其中式III』的Pr代表羥基保護基；
所述反應在惰性有機溶劑中，在鹼存在下和大約25℃到50℃的溫度下進行，形成式IV』第一中間體
其中式IV』的Pr代表羥基保護基；
(b)用有機溶劑除去式IV』的羥基保護基Pr以形成式V』第二中間體
和
(c)將所述式V』第二中間體與賴氨酸在pH為4.2-5.5的溶劑中反應以製備所述單賴氨酸鹽。
35.根據權利要求34的方法，其中Pr保護基是叔丁基。
36.根據權利要求34或35的方法，其中步驟(a)的溶劑是四氫呋喃。
37.根據權利要求34-36任一項的方法，其中步驟(a)中使用的鹼是氫化鈉。
38.一種製備水溶性單賴氨酸鹽的溶劑化物的方法，該單賴氨酸鹽具有下式
所述方法包括
(a)將式B化合物
與式III』化合物反應
其中式III』的Pr代表羥基保護基；所述反應在惰性有機溶劑中，在鹼存在下和大約25℃到50℃的溫度下進行，形成式IV』第一中間體
其中式IV』的Pr代表羥基保護基；
(b)用有機溶劑除去式IV』的羥基保護基Pr以形成式V』第二中間體
(c)將所述式V』第二中間體與賴氨酸在pH為4.2-5.5的溶劑中反應以製備所述單賴氨酸鹽，和
(d)將所述單賴氨酸鹽在溶劑中結晶以製備所述單賴氨酸鹽的溶劑化物。
39.根據權利要求38的方法，其中步驟(d)中的溶劑是含水乙醇。
40.根據權利要求38或39的方法，其中步驟(d)中的溶劑是含水異丙醇。
41.根據權利要求38-40任一項的方法，其中步驟(d)中的溶劑是含水正丙醇。
42.根據權利要求1-9任一項的單賴氨酸鹽在製備用於治療真菌感染的藥劑中的應用。
43.根據權利要求24的單賴氨酸鹽在製備用於治療真菌感染的藥劑中的應用。
全文摘要
提供具有仲羥基或叔羥基的三唑化合物的單賴氨酸鹽。更特別的，提供了新的水溶性的三唑抗真菌單賴氨酸鹽化合物，或其溶劑化物，其具有通式I其中通式I中的A代表包含仲羥基或叔羥基的類型的三唑抗真菌化合物的非羥基部分。通式I中的R和R1可各自為氫原子或具有1到6個碳原子的烷基。該新穎的水溶性唑類化合物被可於治療真菌感染並可口服、局部和胃腸外給藥。
文檔編號C07D405/14GK101213193SQ200680015029
公開日2008年7月2日 申請日期2006年5月1日 優先權日2005年5月3日
發明者琦 高, C-P·H·陳, M·G·法克斯, Y·R·彭德裡, S·基亞烏, B·瓦卡拉加達 申請人:衛材R&D管理有限公司