用於診斷心肌細胞損害的測定的製作方法

2023-05-01 22:42:41

專利名稱：用於診斷心肌細胞損害的測定的製作方法
技術領域：
本公開內容一般涉及用於診斷受試者中的心肌細胞損害的測定和試劑盒，並且特別涉及用於檢測測試樣品中多數心肌細胞抗原的存在的方法和試劑盒，其還避免來自測試樣品中存在的其他物質的幹擾的可能性。
背景技術：
免疫測定技術在過去數十年已經是已知的，且目前通常在醫學中用於廣泛多樣的診斷 目的，以檢測生物學樣品中的靶分析物。免疫測定採用抗體與其相應抗原的高度特異性結合，其中抗原是靶分析物。一般地，抗體或抗原的定量通過某些形式的標記例如放射性或螢光標記來達到。夾心免疫測定涉及結合樣品中靶分析物與抗體位點(其通常與固體載體結合)，結合標記的抗體與捕獲的分析物，且隨後測量結合的標記抗體的量，其中標記生成與靶分析物的濃度成比例的信號，因為除非分析物存在於樣品中，否則標記抗體不結合。在用於診斷臨床狀況的目前可用的測定中，評估危險或預測起因於心肌細胞損害的後果是測定下述濃度的那些心肌肌鈣蛋白-I、心肌肌鈣蛋白-T、肌酸磷酸激酶MB(CKMB)、肌紅蛋白、肌球蛋白重鏈、肌球蛋白輕鏈、B型利尿鈉肽(包括前BNP、N端前BNP和hBNP(1-32))、心臟脂肪酸結合蛋白(H-FABP)、胎盤生長因子(PLGF)和/或白細胞介素-6 (IL-6)。一般地，此類測定作為免疫測定組進行，所述免疫測定對來自患者的測試樣品連續執行，並且關於每個分析物的測試因而需要另外增加時間、樣品體積和關於每個測定結果的試劑。通常，關於分析物的完全組的測定在單一測定平臺上、來自單ー廠商、或甚至通過單ー檢測技術是不可獲得的，這增加評估患者的臨床狀態的複雜性。進ー步地，當分開且系列進行時，關於組中的任何単一分析物的結果可能是不可靠的，即可以是或可以不是錯誤的。個別測定結果中的任何是否是錯誤的可能是難以測定的或實際上無法測定的，從而導致潛在衝突的結果和相應衝突的診斷、危險評估或結果預測。2種相關抗原心肌肌鈣蛋白-T和心肌肌鈣蛋白-I的例子是舉例說明性的。心肌肌鈣蛋白-I測定是從多個廠商容易地商購可得的，但心肌肌鈣蛋白-T測定限於單ー廠商，Roche Diagnostics,這意味著無替代方案是可獲得的。另外,根據假陽性和假陰性結果的多個報導，這2種測定就準確度而言是有限的。(參見例如，P. R. Kenny等人，J. 32Rheumatol,1258-61，(2005) ；R. I. Knoblock等人,Archives of pathology & laboratorymedicine 2002 ; 126:606-9 ;和A. N. Makaryus等人，Clin Cardiol 2007 ;30:92-4)。此外，雖然心肌肌鈣蛋白-I和心肌肌鈣蛋白-T在理論上都與心肌細胞損害相關，但用於測定患者樣品中的心肌肌鈣蛋白-I和心肌肌鈣蛋白-T的免疫測定約10%時間未能關聯。這個不一致可能是由於抗體構造中的差異，其他生物化學差異或在不同測定中的分析。進ー步地，用於循環抗原的此類免疫測定已知對來自其他物質的幹擾是敏感的，所述其他物質可能存在於測試樣品中，例如異嗜性內源抗體和自身抗體。此類幹擾一般通過執行第二種測定得到解決，以鑑定有疑問的樣品，這是費時且昂貴的。解決自身抗體問題的另ー種方法是選擇分析物特異性抗體，其結合不同幹與自身抗體反應的分析物表位的特異性表位。根據這種一般方法，已集中努力探索2、3和甚至4種分析物特異性抗體的數千種不同組合的使用，以避免來自自身抗體的幹擾。然而，這種努力在很大程度上已經是不成功的。目前顯而易見的是針對複雜蛋白質分析物的自身抗體很可能在特定樣品內是多克隆的，並且在來自不同個體的樣品中可能是甚至更不同的。來自不同多克隆自身抗體的幹擾可以解釋少至25%或甚至更少的分析物蛋白質序列結合分析物特異性抗體的觀察，這又可以解釋使用這種方法的不成功。因此，至少由於上述原因，儘管MI的出現，心肌肌鈣蛋白-I或心肌肌鈣蛋白-T單獨和使用標準測定的起始測試也可能是陰性的，即可能提供假陰性結果。雖然關於心肌肌鈣蛋白-I或心肌肌鈣蛋白-T的可用測定已改善MI診斷的時間性，然而，具有MI症狀的許多患者直到呈現後數小時才得到陽性診斷。這導致具有潛在嚴重結果的延遲或延期治療。 本領域存在關於下述的需要改善心肌細胞損害的檢測包括此類檢測的時間性的新免疫測定方法，以及補償通過可能存在於測試樣品中的異嗜性內源抗體和自身抗體的幹擾的方法，和特別地，達到這些結果而無需重新設計分析物檢測或捕獲抗體的此類方法。發明概沭
在ー個方面，本公開內容提供了用於檢測來自測試樣品在受試者中的心肌細胞損害的免疫測定，所述免疫測定包括步驟
a)使來自懷疑具有心肌細胞損害的受試者的測試樣品接觸η個抗體(Α
It'')，其結合在ビ個心肌細胞抗原(a11')上的至少η個表位，以形成ビ(η-抗體抗原)個
免疫複合物(.0,)( ,,)- ( . ^)( 1), (A| )(A;)... (Ai1M (a2),…(AaW)(AF)...
Aa Aj1 Aa
(A$)(an')，其中η是I - 10的整數；並且ビ是2 - 10的整數。b)使包含ビ(η-抗體抗原)個免疫複合物的所述混合物接觸ビr個抗體(')，其結合在ビ個心肌細胞抗原(a11')上的η"個表位，以形成ビ((η + η")抗體抗原)個可測量組件(assemblies) (( ) ( )…(Αψ ))((β|0( Br ) - ( Bg 丨))(a1),
((At ) (Aj )... (Αψ )) ((Bi ) (Br )... (B^ )) (a2)，…((Aa^ ) (A^ )··· (A^ )) ((Baレ
)(Bど)…(B$'))(an')，其中n和獨立地是I - 10的整數，並且ビ是2 - 10的整
數，並且抗體A和B結合心肌細胞抗原的(η + η")個不同表位。c)測量可測量組件的光學、電或狀態變化信號；和
d)通過測定步驟(C)中的測量是否超過預定水平來檢測心肌細胞損害。心肌細胞抗原(a11')可以選自心肌肌鈣蛋白-1、心肌肌鈣蛋白-T、肌酸磷酸激酶MB (CKMB)、肌紅蛋白、肌球蛋白重鏈、肌球蛋白輕鏈、B型利尿鈉肽(包括前BNP、N端前BNP和hBNP(1-32))、心臟脂肪酸結合蛋白(H-FABP)、胎盤生長因子(PLGF)和白細胞介素-6(IL-6)。在免疫測定的一個示例性實施方案中，ビ=2並且心肌細胞抗原(a11')是例如心肌肌鈣蛋白-I (cTnl)和心肌肌鈣蛋白-T (cTnT))。抗體A ψ、抗體βぎ·、或抗體A ^
和Bぎ'可以包含人源化抗體。在上文免疫測定中，抗體.可以通過共價或非共價鍵結合可檢測標記，例如酶、
寡核苷酸、納米顆粒化學發光體、螢光團、螢光猝滅劑、化學發光猝滅劑或生物素。光學信號可以作為化學發光、螢光、磷光、電化學發光、紫外吸收、可見吸收、紅外吸收、折射、表面等離振子共振中的抗原(a11')濃度依賴性 變化進行測量。電信號可以作為電流、電阻、電勢、質荷比或離子計數中的抗原(a11')濃度依賴性變化進行測量。狀態變化信號可以作為大小、可溶性、質量或共振中的抗原(a11')濃度依賴性變化進行測量。在上文免疫測定中，抗體Bf卩可以包含與抗人IgG抗體複合的人源化抗體，所述
抗人IgG抗體綴合至可檢測標記，其中可檢測標記是酶、寡核苷酸、納米顆粒化學發光體、螢光團、螢光猝滅劑、化學發光猝滅劑或生物素。在上文免疫測定中，抗體可以固定在固相上。固相可以選自磁性顆粒、珠、試
管、微量滴定板、比色杯、膜、支架分子、石英晶體、薄膜、濾紙、盤和晶片。在另ー個方面，本公開內容提供了用於檢測來自測試樣品在受試者中的心肌細胞損害的免疫測定，所述免疫測定包括步驟
a)使來自懷疑具有心肌細胞損害的受試者的測試樣品接觸η個抗體(Αψ )，其結合
在ビ個心肌細胞抗原(a11')上的至少η個表位，以形成ビ(η-抗體抗原)個免疫複合物
(.I, ) ( -I.)…(4 111 ) (a1)，(A I2 ) (A I2 )... (A I2 ) (a2),... (A ) (Α|θ ... (A ^ ) (an ),
Aa ■ Ag1 Aa
其中n是I - 10的整數；並且ビ是2 - 10的整數。b)使包含ビ(η-抗體抗原)個免疫複合物的所述混合物接觸ビ'個抗體(')，其結合在ビ個心肌細胞抗原(a11')上的η"個表位，以形成ビ((η + η")抗體抗原)個可測量組件(assemblies) (( A| 丨)(A!丨)…(Ag1 )) (( β! ) ( B J )…(Bg1 )) (a1),
((A!2 ) (Α|2 )... (Α 皆))((Β|2 ) (B J )... (B )) (a2)，…((Aa^ ) (A^ )- (A ぎ))((Baレ)(B^ )…(B$"))(an')，其中η和獨立地是I - 10的整數，並且ビ是2 - 10的整
數，並且抗體Aぎ和_丨.·結合心肌細胞抗原的(η + O個不同表位，其中抗體由包含
至少ー種吖啶鐵化合物的可檢測標記進行標記。c)對步驟(b)的混合物生成或提供過氧化氫來源；
d)將鹼性溶液加入步驟(C)的混合物中，以生成光信號；e)測量步驟(d)中生成或發出的光信號；和
f)通過測定步驟(e)中的測量是否超過預定水平來檢測心肌細胞損害。在上文免疫測定中，心肌細胞抗原(a11')可以選自心肌肌鈣蛋白-I、心肌肌鈣蛋白-T、肌酸磷酸激酶MB(CKMB)、肌紅蛋白、肌球蛋白重鏈、肌球蛋白輕鏈、B型利尿鈉肽(包括前BNP、N端前BNP和hBNP (1-32))、心臟脂肪酸結合蛋白(H-FABP)、胎盤生長因子(PLGF)和白細胞介素-6(IL-6)。在免疫測定的一個示例性實施方案中，ビ=2並且心肌細胞抗原
(an')是心肌肌鈣蛋白-I (cTnl)和心肌肌鈣蛋白-T(cTnT)。抗體抗體,.#,. 、或抗體A 和可以包含人源化抗體。在上文免疫測定中，抗體可以通過共價或非共價鍵結合可檢測標記，例如酶、
寡核苷酸、納米顆粒化學發光體、螢光團、螢光猝滅劑、化學發光猝滅劑或生物素。光學信號可以作為化學發光、螢光、磷光、電化學發光、紫外吸收、可見吸收、紅外吸收、折射、表面等離振子共振中的抗原(a11')濃度依賴性變化進行測量。電信號可以作為電流、電阻、電勢、質荷比或離子計數中的抗原(a11')濃度依賴性變化進行測量。狀態變化信號可以作為大小、可溶性、質量或共振中的抗原(a11')濃度依賴性變化進行測量。在上文免疫測定中，抗體Bfン可以包含與抗人IgG抗體複合的人源化抗體，所述
抗人IgG抗體綴合至可檢測標記，其中可檢測標記是酶、寡核苷酸、納米顆粒化學發光體、螢光團、螢光猝滅劑、化學發光猝滅劑或生物素。在上文免疫測定中，抗體Aぎ可以固定在固相上。固相可以選自磁性顆粒、珠、試
管、微量滴定板、比色杯、膜、支架分子、石英晶體、薄膜、濾紙、盤和晶片。在上文免疫測定中，吖啶鐵化合物可以是具有根據式I的結構的吖啶鐵-9-甲醯胺
權利要求
1.一種用於檢測來自測試樣品的在受試者中的心肌細胞損害的免疫測定法，所述免疫測定法包括步驟 a)使來自懷疑具有心肌細胞損害的受試者的測試樣品接觸η個抗體(ΑIhr )，所述抗體結合在ビ個心肌細胞抗原(a11)上的至少η個表位，以形成ηΛ (η-抗體抗原)個免疫複合物(a |l )(,ぐ:)...(Atll ) (a1)，(A I2 ) (A I2 )... (A I2 ) (a2)，... (A ^ )(八,)...(4|0^)，其中11是1 - 10的整數；並且ビ是2 - 10的整數， b)使包含ビ(η-抗體抗原)個免疫複合物的所述混合物接觸ビ'個抗體(Bi",)，所述抗體結合在ビ個心肌細胞抗原(a11)上的η"個表位，以形成ビ((n + n r)抗體抗原)個可測量組件((A|,)(分)…(Α|ι))((β|,)( Ji2l )... ( Bgl )) (a1), ((A)(A J )…(Αψ )) ((Bi ) (B^ )... (B|a )) (a2), ... ((Ajf ) (A^ )... (Αψ )) ((Ba^ ) (B ゼ)…(Bf ))(an')，其中η和η"獨立地是I - 10的整數，並且ビ是2 - 10的整數，並且抗體A和B結合心肌細胞抗原的(η + η")個不同表位， c)測量所述可測量組件的光學、電或狀態變化信號；和 d)通過測定步驟(C)中的所述測量是否超過預定水平來檢測心肌細胞損害。
2.權利要求I的免疫測定法，其中所述心肌細胞抗原a11'選自心肌肌鈣蛋白-I、心肌肌鈣蛋白-T、肌酸磷酸激酶MB(CKMB)、肌紅蛋白、肌球蛋白重鏈、肌球蛋白輕鏈、B型利尿鈉肽(包括前BNP、N端前BNP和hBNP(l-32))、心臟脂肪酸結合蛋白(H-FABP)、胎盤生長因子(PLGF)和白細胞介素-6(IL-6)。
3.權利要求I的免疫測定法，其中ビ=2並且所述心肌細胞抗原a11'是心肌肌鈣蛋白-I (cTnl)和心肌肌鈣蛋白-T(cTnT)。
4.權利要求I或2的免疫測定法,其中所述抗體Aψ、抗體疇;'、或抗體A1J和睹;'包含人源化抗體。
5.權利要求I或2的免疫測定法，其中所述抗體包含抗人IgG抗體。
6.權利要求I或2的免疫測定法，其中所述抗體結合可檢測標記，其中所述可檢測標記是酶、寡核苷酸、納米顆粒化學發光體、螢光團、螢光猝滅劑、化學發光猝滅劑或生物素。
7.權利要求I或2的免疫測定法，其中所述光學信號作為化學發光、螢光、磷光、電化學發光、紫外吸收、可見吸收、紅外吸收、折射、表面等離振子共振中的心肌細胞抗原a11'濃度依賴性變化進行測量。
8.權利要求I或2的免疫測定法，其中所述電信號作為電流、電阻、電勢、質荷比或離子計數中的心肌細胞抗原a11'濃度依賴性變化進行測量。
9.權利要求I或2的免疫測定法，其中所述狀態變化信號作為大小、可溶性、質量或共振中的心肌細胞抗原a11'濃度依賴性變化進行測量。
10.權利要求I或2的免疫測定法，其中所述抗體A￥固定在固相上。
11.權利要求10的免疫測定法，其中所述固相選自磁性顆粒、珠、試管、微量滴定板、t匕色杯、膜、支架分子、石英晶體、薄膜、濾紙、盤和晶片。
12.權利要求I或2的免疫測定法，其中所述測試樣品是全血、血清或血漿。
13.一種用於檢測來自測試樣品的在受試者中的心肌細胞損害的免疫測定法，所述免疫測定法包括步驟 a)使來自懷疑具有心肌細胞損害的受試者的測試樣品接觸η個抗體(Α￥)，所述抗體結合在ビ個心肌細胞抗原(a11')上的至少η個表位，以形成ビ(η-抗體抗原)個免疫複合物(Λ 11 ) ( 4，丨)…(4 in ) (al)，(A|2 ) (A J )... (Α ψ ) (a2)， ... (A J*1' ) (A^ )... (A 14 Aa aS AS)^)，其中11是1 - 10的整數；並且ビ是2 - 10的整數， b)使包含ηΛ(η-抗體抗原)個免疫複合物的所述混合物接觸ηΛ'個抗體(Bfjh )，所述抗體結合在ビ個心肌細胞抗原(a11)上的η"個表位，以形成ビ((n + n r)抗體抗原)個可測量組件((Ap ) ( A|,)…(A§l ))(( β|! )(B|,)…(Bgl )) (a1)，((A を)(Al)... (Aga )) ((B 12 ) (B J )…(ゆ))(a2), ... ((AaW ) (A^ )... (A^ )) ((B ト")(B^ )...(Bf ))(an')，其中n和η"獨立地是I - 10的整數，並且ビ是2 - 10的整數，並且抗體A和B結合心肌細胞抗原的(η + η^)個不同表位，其中抗體B由包含至少ー種吖啶鐵化合物的可檢測標記進行標記， c)對步驟(b)的所述混合物生成或提供過氧化氫來源； d)將鹼性溶液加入步驟(c)的所述混合物中，以生成光信號； e)測量步驟(d)中生成或發出的所述光信號；和 f)通過測定步驟(e)中的所述測量是否超過預定水平來檢測心肌細胞損害。
14.權利要求13的免疫測定法，其中所述心肌細胞抗原a11'選自心肌肌鈣蛋白-I、心肌肌鈣蛋白-T、肌酸磷酸激酶MB(CKMB)、肌紅蛋白、肌球蛋白重鏈、肌球蛋白輕鏈、B型利尿鈉肽(包括前BNP、N端前BNP和hBNP(l-32))、心臟脂肪酸結合蛋白(H-FABP)、胎盤生長因子(PLGF)和白細胞介素-6(IL-6)。
15.權利要求13的免疫測定法，其中ビ=2並且所述心肌細胞抗原a11'是心肌肌鈣蛋白-I (cTnl)和心肌肌鈣蛋白-T(cTnT)。
16.權利要求13或14的免疫測定法，其中所述抗體Ag、抗體βηι·'、或抗體和βΛ;包含人源化抗體。
17.權利要求13或14的免疫測定法，其中所述抗體包含抗人IgG抗體。
18.權利要求13或14的免疫測定法，其中所述抗體A固定在固相上。
19.權利要求18的免疫測定法，其中所述固相選自磁性顆粒、珠、試管、微量滴定板、t匕色杯、膜、支架分子、石英晶體、薄膜、濾紙、盤和晶片。
20.權利要求13或14的免疫測定法，其中所述測試樣品是全血、血清或血漿。
21.權利要求13或14的免疫測定法，其中所述吖啶搖化合物是具有根據式I的結構的吖啶f翁-9-甲醯胺
22.權利要求13或14的免疫測定法，其中所述吖啶f翁化合物是具有根據式II的結構的吖啶鐵-9-羧酸根芳基酷
23.權利要求13或14的免疫測定法，其中所述抗體A1i*選自多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、人抗體和親和カ成熟的抗體。
24.權利要求13或14的免疫測定法，其中所述抗體B|1;/選自多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、人抗體和親和カ成熟的抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、人抗體和親和カ成熟的抗體。
25.權利要求13或14的免疫測定法，其中所述過氧化氫通過加入緩衝液或含有過氧化氫的溶液來提供。
26.權利要求13或14的免疫測定法，其中所述過氧化氫通過將過氧化氫生成酶加入所述測試樣品而生成。
27.權利要求26的免疫測定法，其中所述過氧化氫生成酶選自(R)-6-羥基菸鹼氧化酶、(S)-2-羥酸氧化酶、(S)-6-羥基菸鹼氧化酶、3-酸式-硝基丙酸氧化酶、3-羥基鄰氨基苯甲酸氧化酶、4-羥基扁桃酸氧化酶、6-羥基煙酸脫氫酶、脫落醛氧化酶、醯基-CoA氧化酶、醇氧化酶、醛氧化酶、胺氧化酶、胺氧化酶(含銅的)、胺氧化酶(含黃素的)、芳基-醇氧化酶、芳基-醛氧化酶、兒茶酚氧化酶、膽固醇氧化酶、膽鹼氧化酶、非洲防己鹼氧化酶、環己胺氧化酶、細胞色素c氧化酶、D-胺基酸氧化酶、D-阿拉伯糖-1，4-內酯氧化酶、D-阿拉伯糖-1，4-內酯氧化酶、D-天冬氨酸氧化酶、D-穀氨酸氧化酶、D-穀氨酸(D-天冬氨酸)氧化酶、ニ氫苯並菲啶氧化酶、ニ氫乳清酸氧化酶、ニ氫尿嘧啶氧化酶、ニ甲基甘氨酸氧化酶、D-甘露醇氧化酶、蛻皮素氧化酶、こ醇胺氧化酶、半乳糖氧化酶、葡萄糖氧化酶、穀胱甘肽氧化酶、甘油-3_磷酸氧化酶、甘氨酸氧化酶、こ醛酸氧化酶、己糖氧化酶、羥基植烷酸氧化酶、吲哚-3-こ醛氧化酶、乳酸氧化酶、L-胺基酸氧化酶、L-天冬氨酸氧化酶、L-半乳糖酸內酯氧化酶、し-穀氨酸氧化酶、し-古洛糖酸內酯氧化酶、L-賴氨酸6-氧化酶、L-賴氨酸氧化酶、長鏈醇氧化酶、L-甲基哌啶氧化酶、L-山梨糖氧化酶、蘋果酸氧化酶、甲硫醇氧化酶、單胺基酸氧化酶、N6-甲基-賴氨酸氧化酶、N-醯基己糖胺氧化酶、NAD (P) H氧化酶、硝基烷氧化酶、N-甲基-L-胺基酸氧化酶、核苷氧化酶、草酸氧化酶、多胺氧化酶、多酚氧化酶、聚こ烯醇氧化酶、異戊烯半胱氨酸氧化酶、蛋白質-賴氨酸6-氧化酶、丁ニ胺氧化酶、批喃糖氧化酶、5』 -磷酸吡哆醛合酶、吡哆醇4-氧化酶、吡咯喹啉-醌合酶、丙酮酸氧化酶、丙酮酸氧化酶(CoA-こ醯化)、網脈番荔枝鹼氧化酶、視黃醛氧化酶、利福黴素-B氧化酶、肌氨酸氧化酶、仲醇氧化酶、亞硫酸氧化酶、超氧化物歧化酶、超氧化物還原酶、四氫小檗鹼氧化酶、硫胺素氧化酶、色氨酸α, β-氧化酶、尿酸氧化酶(尿酸酶、尿酸氧化酶)、香草醇氧化酶、黃嘌呤氧化酶、木糖醇氧化酶及其組合。
28.權利要求13或14的免疫測定法，其中所述鹼性溶液是具有至少約10的pH的溶液。
29.權利要求13或14的免疫測定法，其中通過測定步驟(e)中的所述測量是否超過預定水平來檢測心肌細胞損害的步驟f)包括關聯步驟(e)中光信號的量與所述測試樣品中心抗原a和b的量，其通過使用關於每個心抗原a的標準曲線或通過與關於每個心抗原a的參考標準的比較實施。
30.權利要求29的免疫測定法，其包括與關於每個心抗原a11'的參考標準的比較，每個參考標準包含抗獨特型抗體。
31.權利要求29的免疫測定法，其包括與關於每個心抗原an'的參考標準的比較，每個參考標準包含衍生的心肌細胞抗原。
32.權利要求31的免疫測定法，其中所述衍生的心肌細胞抗原包含由聚こニ醇衍生的所述心肌細胞抗原。
33.權利要求13或14的免疫測定法，其中所述免疫測定法適合於在自動化系統或半自動化系統中使用。
34.一種用於檢測來自測試樣品的心肌細胞損害的試劑盒，所述試劑盒包含 a)結合在ビ個心肌細胞抗原(a11)上的至少η個表位的η個抗體(λψ),以形成η, (η-抗體:抗原)個免疫複合物... ( A|3 ) (a1)，(A 妒)(A 爰)…(Α ψ )(a2),…(A如')(Al)…(ΑΛ )(an')，其中η是I - 10的整數；並且ビ是2 - 10的整數； b)結合在η個心肌細胞抗原(a11)上的η,'個表位的η'個抗體(B^' )，以形成ビ((η + η」)抗體:抗原)個可測量組件((A· ) Uを)…(Ag1 ))((B|')( Bl1 )...(ggi )) (a1)，( (A 玉)(A a )... (A f1 )) ((B 玉)(B I2 )... (B チ))(a2)，... ((A Jp- ) (A ぎ)...(A^))((Bl )(B|0"*(BF))(an')，其中n和獨立地是I - 10的整數，並且ビ是2 - 10的整數，並且抗體A和B結合心肌細胞抗原的(η + η")個不同表位；和 c)用於測定所述測試樣品中心肌細胞抗原(a11')的總量是否超過預定水平的說明書。
35.權利要求34的試劑盒，其中所述心肌細胞抗原a11'選自心肌肌鈣蛋白-I、心肌肌鈣蛋白-T、肌酸磷酸激酶MB(CKMB)、肌紅蛋白、肌球蛋白重鏈、肌球蛋白輕鏈、B型利尿鈉肽，其中所述第一個心特異性抗原和所述第二個心特異性抗原是不同抗原。
36.權利要求34的試劑盒，其中ビ=2並且所述心肌細胞抗原a11'是心肌肌鈣蛋白-I(cTnl)和心肌肌鈣蛋白-T CTnT0
37.權利要求34或35的試劑盒，其進ー步包含固相，其中所述抗體Aぎ結合所述固相。
38.權利要求37的試劑盒，其中所述固相選自磁性顆粒、珠、試管、微量滴定板、比色杯、膜、支架分子、石英晶體、薄膜、濾紙、盤和晶片。
39.權利要求34或35的試劑盒，其進ー步包含結合所述抗體Bf「的可檢測標記。
40.權利要求39的試劑盒，其中所述可檢測標記是酶、寡核苷酸、納米顆粒化學發光體、螢光團、螢光猝滅劑、化學發光猝滅劑或生物素。
41.權利要求40的試劑盒，其中所述可檢測標記是吖啶鐵化合物。
42.權利要求41的試劑盒，其中所述吖啶f翁化合物是具有根據式I的結構的吖啶銷I-9-甲醯胺
43.權利要求41的試劑盒，其中所述吖啶f翁化合物是具有根據式II的結構的吖啶參翁-9-羧酸根芳基酯
44.權利要求42或43的試劑盒，其進ー步包含鹼性溶液。
45.權利要求44的試劑盒，其中所述鹼性溶液是具有至少約10的pH的溶液。
46.權利要求45的試劑盒，其進ー步包含過氧化氫來源。
47.權利要求46的試劑盒，其中所述過氧化氫來源包含緩衝液或含有過氧化氫的溶液。
48.權利要求47的試劑盒，其中所述過氧化氫來源包含過氧化氫生成酶。
49.權利要求48的試劑盒，其中所述過氧化氫生成酶選自(R)-6-羥基菸鹼氧化酶、(S)-2-羥酸氧化酶、(S)-6-羥基菸鹼氧化酶、3-酸式-硝基丙酸氧化酶、3-羥基鄰氨基苯甲酸氧化酶、4-羥基扁桃酸氧化酶、6-羥基煙酸脫氫酶、脫落醛氧化酶、醯基-CoA氧化酶、醇氧化酶、醛氧化酶、胺氧化酶、胺氧化酶(含銅的)、胺氧化酶(含黃素的)、芳基-醇氧化酶、芳基-醛氧化酶、兒茶酚氧化酶、膽固醇氧化酶、膽鹼氧化酶、非洲防己鹼氧化酶、環己胺氧化酶、細胞色素c氧化酶、D-胺基酸氧化酶、D-阿拉伯糖-1，4-內酯氧化酶、D-阿拉伯糖-1，4-內酯氧化酶、D-天冬氨酸氧化酶、D-穀氨酸氧化酶、D-穀氨酸(D-天冬氨酸)氧化酶、ニ氫苯並菲啶氧化酶、ニ氫乳清酸氧化酶、ニ氫尿嘧啶氧化酶、ニ甲基甘氨酸氧化酶、D-甘露醇氧化酶、蛻皮素氧化酶、こ醇胺氧化酶、半乳糖氧化酶、葡萄糖氧化酶、穀胱甘肽氧化酶、甘油-3_磷酸氧化酶、甘氨酸氧化酶、こ醛酸氧化酶、己糖氧化酶、羥基植烷酸氧化酶、吲哚-3-こ醛氧化酶、乳酸氧化酶、L-胺基酸氧化酶、L-天冬氨酸氧化酶、L-半乳糖酸內酯氧化酶、L-穀氨酸氧化酶、L-古洛糖酸內酯氧化酶、L-賴氨酸6-氧化酶、L-賴氨酸氧化酶、長鏈醇氧化酶、L-甲基哌啶氧化酶、L-山梨糖氧化酶、蘋果酸氧化酶、甲硫醇氧化酶、單胺基酸氧化酶、N6-甲基-賴氨酸氧化酶、N-醯基己糖胺氧化酶、NAD(P)H氧化酶、硝基烷氧化酶、N-甲基-L-胺基酸氧化酶、核苷氧化酶、草酸氧化酶、多胺氧化酶、多酚氧化酶、聚こ烯醇氧化酶、異戊烯半胱氨酸氧化酶、蛋白質-賴氨酸6-氧化酶、丁ニ胺氧化酶、吡喃糖氧化酶、5』 -磷酸吡哆醛合酶、吡哆醇4-氧化酶、吡咯喹啉-醌合酶、丙酮酸氧化酶、丙酮酸氧化酶(CoA-こ醯化)、網脈番荔枝鹼氧化酶、視黃醛氧化酶、利福黴素-B氧化酶、肌氨酸氧化酶、仲醇氧化酶、亞硫酸氧化酶、超氧化物歧化酶、超氧化物還原酶、四氫小檗鹼氧化酶、硫胺素氧化酶、色氨酸α，β -氧化酶、尿酸氧化酶(尿酸酶、尿酸氧化酶)、香草醇氧化酶、黃嘌呤氧化酶、木糖醇氧化酶及其組合。
50.權利要求34或35的試劑盒，其中所述檢測抗體包含抗人IgG抗體。
51.權利要求34或35的試劑盒，其進ー步包含至少ー個心肌細胞抗原參考標準。
52.權利要求51的試劑盒，其中所述至少ー個心肌細胞抗原參考標準包含抗獨特型抗體。
53.權利要求51的試劑盒，其中所述至少ー個心肌細胞抗原參考標準包含衍生的心肌細胞抗原。
54.權利要求53的試劑盒，其中所述衍生的心肌細胞抗原包含由聚こニ醇衍生的所述心肌細胞抗原。
全文摘要
公開了用於診斷臨床狀況、評估危險或預測由於心肌細胞損害的後果的測定。通過測定測試樣品中多數心肌細胞抗原的存在、且在單一測定結果中組合多重測定，免疫測定方法和試劑盒提供了心肌細胞損害的評估。
文檔編號G01N33/53GK102725633SQ201080063154
公開日2012年10月10日 申請日期2010年11月17日 優先權日2009年12月3日
發明者J.R.布拉希爾, M.亞當茨克, P.G.馬廷利 申請人:雅培製藥有限公司