微生物多糖在抗腫瘤和降血糖血脂藥物中的應用的製作方法
2023-05-23 07:17:01 2
專利名稱：微生物多糖在抗腫瘤和降血糖血脂藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種抗腫瘤和降血糖血脂藥物的製備和應用，具體是微生物多糖在抗腫瘤和降血糖血脂藥物中的應用。
背景技術：
至今，幾百種天然多糖的發現，已給人類提供了豐富的生物多聚體的寶庫。多糖不但是動植物的主要結構支持物質(如甲殼動物中的幾丁質，植物中的纖維親)，而且也是生物體主要能量來源(如澱粉、糖原)。同時多糖也是工業上重要多聚體的原料來源。不但如此，多糖還具複雜的多方面的生物活性與功能，多糖的糖鏈能控制細胞的分裂與分化，調節細胞的生長與衰老。特別是多糖作為廣譜免疫調節劑在免疫疾病治療上的應用。多糖是一種非特異性免疫調節劑，不僅能治療機體免疫系統受到嚴重損傷的癌症和愛滋病，還能治療多種免疫缺損疾病和某些細菌、病毒引起的疾病。多糖的免疫療法已給近代腫瘤、愛滋病治療及其他疾病治療開闢了新方向。目前，癌症的治療主要有三種方法，即化學療法、放射療法和外科手術。免疫療法不同於化療及放療，它是通過宿主中介而起作用，所以沒有直接細胞毒，不影響正常細胞，毒副作用小，治療後白細胞不會下降，並使因化療或放療引起的白細胞下降維持到正常水平。它也不像手術療法具有不徹底性，因為免疫療法是整體的治療。
現在國際上多糖研究以日本、美國、德國和加拿大處於領先地位，我國多糖的研究雖然起步較晚，但自80年代以後各地的研究如雨後春筍般掀起。國內外研究的主要目標之一是進一步尋找活性更高，特別是對腫瘤、愛滋病更有效的多糖。
發明內容
本發明的目的在於提供一種微生物多糖在抗腫瘤和降血糖血脂藥物中的應用。以該種微生物多糖為成份製備的藥物或保健藥品對抗腫瘤和降血糖血脂有明顯效果。
本發明的技術方案是該種微生物多糖在抗腫瘤和降血糖血脂藥物中的應用，其特徵在於，微生物多糖分子量範圍在3000-100000D；分子式結構如下
該微生物多糖支鏈上的丙酮酸並不存在於所有的單元結構中，有的單元結構中並不存在丙酮酸。
如前所述的微生物多糖在抗腫瘤和降血糖血脂藥物中的應用，其特徵在於，微生物多糖的製備方法是(1)、以黃單胞桿菌(Xanthomonas campestris)為菌種，以葡萄糖或蔗糖或澱粉為主要原料發酵生產；(2)、在發酵中採用濾膜分離將發酵液中的產物及時分離，控制產物聚合度的增加，或者採用物理方法處理產品，控制其分子量。
使用的微生物菌種名稱本領域常見的黃單胞桿菌細胞形態該菌在蔗糖瓊脂斜面上培養24-48hr，細胞呈杆狀，單個，少數相連，細胞大小0.5×1.3-1.5μ。
普通肉汁瓊脂斜面中間劃線培養，生長較好，線狀，24hr呈淡黃色，隨培養時間延長，顏色逐漸加深，有非水溶性色素，邊緣整齊，溼潤，擴散生長。冰箱放置月餘，色素加深，菌落呈稀流狀，自行下流，轉接不易存活。
普通肉汁瓊脂平板培養48hr，菌落2-3mm，淡黃色；72hr菌落圓形，隆起，表面光滑溼潤，粘稠，邊緣整齊，產生非水溶性色素，用接種針挑起不粘連，從平板背面透光觀察，不透明，可見菌落中心有芯，隨培養時間的延長，菌落直徑可達1cm左右。如放置時間過長，淺黃色會變為桔黃色，呈稀狀，轉接不活。
生理生化特徵生長溫度最適25-28℃，34℃不生長，72℃脫脂牛奶熱處理10min致死。發酵液80℃熱處理15min可滅活。初始生長pH6.0-8.5均可生長，7.0-7.5生長良好，pH9.0以上生長延遲，pH5.3以下不生長。
培養基組成平板、斜面培養基蔗糖1％；蛋白腖0.5％；牛肉膏0.3％；NaCl0.2％；pH7.0種子培養基葡萄糖1％；蛋白腖0.3％；酵母膏0.5％；pH7.0發酵培養基蔗糖4％；蛋白腖0.4％；酵母膏0.1％；CaCO3O0.15％；pH7.0本發明所述在發酵中採用濾膜分離器是將發酵液中的產物及時分離，控制產物聚合度的增加可以是在發酵進行24hr後，將發酵液泵入微濾膜分離器，微濾膜孔徑以能截留黃單胞桿菌(Xanthomonas campestris)為準則，截留液返回發酵罐，透過液進入超濾膜分離器，超濾膜的截留分子量為3000-100000D，具體以所需的產品分子量為準則，透過液返回發酵罐繼續發酵，截留液補加無菌水繼續泵入超濾膜分離器。
本發明所述控制產品分子量的物理方法可以是超聲波技術、輻照技術等物理方法。此物理方法在本技術領域常見。
本發明微生物多糖在藥物中應用，可以製成水劑、粉劑、片劑或滴丸。
本發明的有益效果是本發明微生物多糖活性更高，在藥物中應用對抗腫瘤和降血糖血脂效果明顯。實驗情況如下(一)、該微生物多糖對糖尿病小白鼠降血糖血脂作用採用該微生物多糖(平均分子量70000D)對糖尿病小白鼠灌胃做降血糖血脂的實驗，實驗結果如表1、表2
表1 對糖尿病小白鼠血糖的影響
從表1中數據可以看出720mg/Kg劑量時，該微生物多糖可明顯糖尿病小白鼠的血糖濃度。
表2 對糖尿病小白鼠血脂的影響
從表2中數據可以看出720mg/Kg劑量時，該微生物多糖可明顯降低糖尿病小白鼠的血液中的TG濃度。
(二)、該微生物多糖對小白鼠的抗腫瘤作用，見表3。
表3 微生物多糖(平均分子量6000D)抑制小白鼠S-180腫瘤的實驗
供試的微生物多糖樣品經腹腔給藥，從表中數據可以看出樣品對S-180腹水癌細胞表現出較強的抑制作用，25mg/kg劑量時，表現出抑制腫瘤的作用較強，抑制率達40.94％。
具體實施例方式
該微生物多糖的製備菌種名稱黃單胞桿菌三角瓶種子培養基葡萄糖1％；蛋白腖0.3％；酵母膏0.5％；PH7.0；瓶裝量200ml；滅菌1kg/cm225min茄瓶斜面接種入瓶2～3鏟搖瓶時間200rpm，18hr左右，發黃，稍稠厚。
一級種子罐培養基葡萄糖1％；蛋白腖0.3％；酵母膏0.5％；PH7.0消泡劑0.5‰運行參數定容100L轉數250rpm風量27m3/hr罐壓1kg/cm2罐溫29±1℃泡敵750ml NaOH330-350g發酵培養基蔗糖4％；蛋白腖0.4％；酵母膏0.1％；CaCO3O0.15％；參數及控制轉數120-150rpm，變頻可調，0-12hr 120rpm，13hr後150rpm，發酵罐定容1m3，罐溫28-29℃，罐壓0.1Mpa風量0-12hr(1∶0.2)；13hr後(1∶0.23)；發酵進行24hr後，將發酵液泵入微濾膜分離器，微濾膜孔徑0.1微米，截留液返回發酵罐，透過液進入超濾膜分離器，超濾膜的截留分子量為50000D，透過液返回發酵罐繼續發酵，截留液補加無菌水繼續泵入超濾膜分離器；72hr後停止發酵，對超濾截留液進行超濾濃縮，除蛋白，噴霧乾燥得到樣品12Kg。
權利要求
1.一種微生物多糖在抗腫瘤和降血糖血脂藥物中的應用，其特徵在於，微生物多糖分子量範圍在3000-100000D；分子式結構如下 該微生物多糖支鏈上的丙酮酸並不存在於所有的單元結構中，有的單元結構中並不存在丙酮酸。
2.根據權利要求1所述的微生物多糖在抗腫瘤和降血糖血脂藥物中的應用，其特徵在於，微生物多糖的製備方法是包括(1)、以黃單胞桿菌(Xanthomonas campestris)為菌種，以葡萄糖或蔗糖或澱粉為主要原料發酵生產；(2)、在發酵中採用濾膜分離器將發酵液產物及時分離，控制產物聚合度的增加。
3.根據權利要求1所述的微生物多糖在抗腫瘤和降血糖血脂藥物中的應用，其特徵在於，微生物多糖的製備方法是包括(1)、以黃單胞桿菌(Xanthomonas campestris)為菌種，以葡萄糖或蔗糖或澱粉為主要原料發酵生產；(2)、採用物理方法處理產品，控制其分子量。
4.根據權利要求2或3所述的微生物多糖在抗腫瘤和降血糖血脂藥物中的應用，其特徵在於培養基組成平板、斜面培養基蔗糖1％；蛋白腖0.5％；牛肉膏0.3％；NaCl0.2％；PH7.0種子培養基葡萄糖1％；蛋白腖0.3％；酵母膏0.5％；pH7.0發酵培養基蔗糖4％；蛋白腖0.4％；酵母膏0.1％；CaCO30.15％；pH7.0發酵溫度為25-30℃。
5.根據權利要求2所述的微生物多糖在抗腫瘤和降血糖血脂藥物中的應用，其特徵在於，在發酵進行24hr後，將發酵液泵入微濾膜分離器，微濾膜孔徑以能截留黃單胞桿菌(Xanthomonas campestris)為準則，截留液返回發酵罐，透過液進入超濾膜分離器，超濾膜的截留分子量為3000-100000D，具體以所需的產品分子量為準則，透過液返回發酵罐繼續發酵，截留液補加無菌水繼續泵入超濾膜分離器。
6.根據權利要求3所述的微生物多糖在抗腫瘤和降血糖血脂藥物中的應用，其特徵在於，所述控制產品分子量的物理方法可以是超聲波技術或輻照技術。
全文摘要
微生物多糖在抗腫瘤和降血糖血脂藥物中的應用，是關於利用黃單胞桿菌(Xanthomonas campestris)生產一種具有明顯保健作用的微生物多糖工藝方法，使用黃單胞桿菌(Xanthomonas campestris)作為菌種發酵，以及多糖發酵液的膜濾分離、除蛋白、分子量分級、脫色、脫鹽和濃縮，得到微生物多糖分子量範圍在3000－100000D內。本發明微生物多糖在藥物中應用，可以製成水劑、粉劑、片劑或滴丸，具有明顯抗腫瘤和降血糖血脂功能。
文檔編號A61P3/00GK1679617SQ200510042019
公開日2005年10月12日 申請日期2005年1月11日 優先權日2005年1月11日
發明者蘇理, 蘭文忠 申請人:蘇理, 蘭文忠