一種美國紅梣的提取方法

2023-05-23 08:18:21

專利名稱：一種美國紅梣的提取方法
技術領域：
本發明屬於中藥研發的技術領域，確切地說是涉及一種含活性成分藥材美 國紅柊的提取方法。 技術背景
傳統的抗生素主要是由一些微生物在其生活過程中產生的。由於傳統抗生 素的長期使用，微生物耐藥性增強的問題日益突出，尋找新的抗菌資源已成為
焦點[32]。抗菌肽因其具有抗菌活性強、抗菌譜廣、抗菌機理獨特、不易使微生 物產生耐藥性且基本不對真核細胞產生作用及其潛在的抗腫瘤活性和抗HIV活 性等特點而成為一類很有開發前景的抗菌藥物[43]。許多抗菌肽已進入了臨床實 驗階段，如來自微生物的抗菌肽Nisin和兩棲動物的Magainins已進入IIIII期臨 床實驗階段[68]。
體外抗菌實驗表明，許多抗菌肽對革蘭氏陰性、陽性細菌、真菌和包膜病 毒的有效殺菌濃度在微摩爾水平。螺旋結構的昆蟲抗菌肽cecropins對革蘭氏陰 性細菌如沙門氏傷寒桿菌、銅綠假單胞菌等的殺菌能力比四環素強，其它兩親 性a-螺旋結構的抗菌肽如IL-37的有效抗菌濃度也在微摩爾水平[69]。對另一 種爪蟾抗菌肽esculentin的研究顯示它不僅對革蘭氏陽性細菌如金黃色葡萄球 菌、革蘭氏陰性細菌如大腸桿菌(Escherichia coli)、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)有明顯的殺菌活性，且對白色念珠菌(Candidaalbicans)、釀酒酵母等 真菌也有很強的殺滅作用[70]。
在抗腫瘤方面，抗菌肽的作用不僅僅是接觸性抑殺癌瘤，還能調動機體的 免疫系統，對抗癌瘤的侵入。接觸性抑殺癌瘤主要是從細胞膜、細胞器(主要是 線粒體)、核膜、細胞核染色體DNA、溶酶體、細胞骨架等幾個方面來影響癌細
胞的生存，而調動機體的免疫系統來抑制癌瘤則主要是從體液方面來實現的。實驗研究表明25 — 100mg/L的人源抗菌肽作用6小時殺癌細胞效果良好， 即使用1 mg/L低濃度作用14小時也有明顯的殺瘤效應；鼠抗菌肽NP-l, NP-2 可殺傷轉化了的纖維瘤細胞，而正常的纖維母細胞在同等濃度下安然無恙。同 時發現許多核糖體失活蛋白還有抗愛滋病病毒活性的功能，例如，1989年 Mcgrath等報導天花粉蛋白(TCS)在極性感染的T淋巴細胞和慢性感染的巨噬細 胞中能強烈抑制愛滋病病毒(HIV-1)複製，這一發現引起了科學界的極大興趣 [72]。目前已發現來源於葫蘆科(Cucurbitaceae)及豆科(Leguminosae)的許多抗菌 肽同樣也具有抗HIV的活性[73]。
抗菌肽廣泛存在於植物界，尤其是植物的果實及種子中。目前人們已經在 多種植物中分離得到耐熱且不易被消化酶水解的抗菌肽，如T.B.Ng已從豆科植 物的種子中分離得到數十種抗菌肽[74]。但尚未見到從木犀科(Oleaceae)涔屬 (Fmxinus)中分離純化出抗菌肽的報導。
美國紅柊(FraxinuspennsylvanicaMarsh.)是一種落葉喬木，高10—20米；樹 皮灰色，粗糙，皺裂。頂芽圓錐形，尖頭，被褐色糠秕狀毛。小枝紅棕色，圓 柱形，被黃色柔毛或禿淨，老枝紅褐色，光滑無毛。羽狀複葉長18—40釐米。 葉柄長2 — 5釐米，基部幾不膨大；葉軸圓柱形，上面具較寬的淺溝，密被灰黃 色柔毛；小枝7—9枚，薄革質，長圓狀披針形、狹卵形或橢圓形，長4一13釐 米，寬2 — 8釐米，頂生小葉與側生小葉幾等大，先端漸尖或急尖，基部闊楔形， 葉緣具不明顯鈍鋸齒或近全緣，上面黃綠色，無毛，下面淡綠色，疏被絹毛，
脈上較密，中脈在上面凹入，側脈7—9對，與細脈在下面凸起；小葉無柄或下 方一對小葉具短柄。圓錐花序生於去年生枝上，長5—20釐米，花密集，雄花
與兩性花異株，與葉同時開放；花序梗短；花梗纖細，被短柔毛；雄花花萼小，
萼齒不規則深裂，花葯大，長圓形，花絲短；兩性花花萼較寬，萼齒淺裂，花 柱細，柱頭2裂。翅果狹倒披針形，長3 —5 (—7)釐米，寬0.4—0.7 ( — 1.2) 釐米，上中部最寬，先端鈍圓或具短尖頭，翅下延近堅果中部，堅果圓柱形， 長1.5—2釐米，寬約2毫米，脈稜明顯。花期4月，果期8 —10月[75]。
美國紅柊原產美國東海岸至落基山脈一帶，生於河湖邊岸溼潤地段，樹姿 美麗。我國引種已久，分布遍布全國各地，多見於庭院與行道樹。我省更是廣 泛種植，因其良好的耐鹽鹼性而成為東營、濱州等地區的主要綠化樹種。本論 文對美國紅柊果實水浸提液中的抗菌肽進行了分離純化及其部分性質的初步研 究，旨在分離純化一種新的抗菌肽，為抗菌肽的開發利用提供一個新的資源。 同時，也為耐鹽植物資源的開發利用提供一個新思路。

發明內容
本發明的一個目的基於上述開發的目的，獨創用索氏提取器如圖l，水溶液 提取美國紅柊的活性成分。利用溶劑回流及虹吸原理，使固體物質連續不斷地 被純溶劑萃取，既節約溶利萃取效率又高。 具體是實施方式
本發明美國紅柊提取方法步驟如下
(1) 實驗儀器沙氏提取器500ml，濾紙桶17. 5cm*9.5cm (由山東省 三批醫療器械有限公司提供)；KDM型可調控溫電熱套(山東鄄城華魯電熱儀器 有限公司)，旋轉蒸發儀(上海申生科技)。FW100高速萬能粉碎機。
(2) 藥材美國紅柊(Fraxinus pennsylvanica Marsh.)果實當年生，
採於東營鹽生植物園及油田西五區宿舍。
(3) 提取溶液蒸餾水
(4) 提取方法及步驟 將美國紅柊高速萬能粉碎機粉碎，稱取50g，置於濾紙桶內，濾紙桶上端覆
蓋脫脂棉以防藥材粉末溢出濾紙桶，將盛有藥材的濾紙桶放入提取筒中.將500
mL圓底燒瓶安裝於電熱套上，放入2粒沸石，量取400ml蒸餾水，從提取筒中倒入
燒瓶，安裝好索氏提取裝置，打開電源，加熱。回流4小時。斷電，待提取液冷
卻後，將提取液倒入旋轉蒸發瓶內，濃縮，待柱分離。


圖1索氏提取器
A-冷凝管 B-索氏提取器 C-圓底燒瓶
D-閥門。
權利要求
1、一種美國紅梣的提取方法，其特徵在於提取方法包括以下步驟(1)實驗儀器沙氏提取器500ml，濾紙桶17.5cm*9.5cm(由山東省三批醫療器械有限公司提供)；KDM型可調控溫電熱套(山東鄄城華魯電熱儀器有限公司)，旋轉蒸發儀(上海申生科技)。FW100高速萬能粉碎機。(2)藥材美國紅梣(Fraxinus pennsylvanica Marsh.)果實當年生，採於東營鹽生植物園及油田西五區宿舍。(3)提取溶液蒸餾水(4)提取方法及步驟將美國紅梣高速萬能粉碎機粉碎，稱取50g，置於濾紙桶內，濾紙桶上端覆蓋脫脂棉以防藥材粉末溢出濾紙桶，將盛有藥材的濾紙桶放入提取筒中.將500mL圓底燒瓶安裝於電熱套上，放入2粒沸石，量取400ml蒸餾水，從提取筒中倒入燒瓶，安裝好索氏提取裝置，打開電源，加熱。回流4小時。斷電，待提取液冷卻後，將提取液倒入旋轉蒸發瓶內，濃縮，待用。
2、 根據權利要求l所述的美國紅柊的提取方法，其特徵在於，其中(1) 利用溶劑回流及虹吸原理，使固體物質連續不斷地被純溶劑萃取，既節約溶利 萃取效率又高。萃取前先將固體物質研碎，以增加固液接觸的面積。然後將固 體物質放在濾紙套l內，置於提取器2中，提取器的下端勺盛有溶劑的圓底燒 瓶相連，上面接回流冷凝管。加熱園底燒瓶，使溶劑沸騰，蒸氣通過提取器.的 支管上升，被冷凝後滴入提取器中，溶劑和固體接觸進行萃取，當溶劑面超過 虹吸管的最高處時，含有萃取物的溶劑虹吸回燒瓶，因而萃取出一部分物質， 如此重複，使固體物質不斷為純的溶劑所蘋取、將萃取出的物質富集在燒瓶中。
3、 根據權利要求1所述的濃縮方法，其特徵在於，通過電子控制，使燒 瓶在最適合速度下，恆速旋轉以增大蒸發麵積。通過真空泵使蒸發燒瓶處於負壓狀態。蒸發燒瓶在旋轉同時置於水浴鍋中恆溫加熱，瓶內溶液在負壓下在旋轉 燒瓶內進行加熱擴散蒸發。蒸發效率較一般蒸發器成倍提高，又能防止溶液瀑
全文摘要
本發明提供了一種美國紅梣的提取方法。本發明將美國紅梣高速萬能粉碎機粉碎，稱取50g，置於濾紙桶內，濾紙桶上端覆蓋脫脂棉以防藥材粉末溢出濾紙桶，將盛有藥材的濾紙桶放入提取筒中。將500ml圓底燒瓶安裝於電熱套上，放入2粒沸石，量取400ml蒸餾水，從提取筒中倒入燒瓶，安裝好索氏提取裝置，打開電源，加熱。回流4小時。斷電，將提取液倒入旋轉蒸發瓶內，濃縮，待用。
文檔編號A61K36/185GK101181316SQ20071011293
公開日2008年5月21日 申請日期2007年9月14日 優先權日2007年9月14日
發明者張岱州, 朱春花, 梁大連, 陳彤彤, 河 馬 申請人:山東省醫藥工業研究所