一種從響鈴草中提取的天然抗菌組合物及其提取方法
2023-05-23 13:28:51
專利名稱：一種從響鈴草中提取的天然抗菌組合物及其提取方法
技術領域：
本發明涉及抗菌組合物，具體來說涉及一種從響鈴草中提取的天然抗菌組合物，同時還涉及其提取方法。
背景技術：
抗菌藥物是臨床應用最廣的一類藥物，但是目前這類藥物的應用存在著許多問題，如耐藥性、毒副反應、抗菌藥物造成的菌群失調、二重感染和院內感染以及變態反應等，尤其是細菌耐藥性的迅速上升。使得對這類菌所致的嚴重感染沒有有效的藥物可供選用，對人類健康造成極大威脅。因此，目前人們從天然資源中發展新的抗菌藥物作為抗菌藥物研究的一個重點。
響鈴草為豆科狗屎豆屬植物假地藍Crotalaria ferruginea Grah的全草或帶根全草。響鈴草為多年生草本，花期6～10月，生於山坡、荒地。在貴州，雲南較為常見，為貴州侗族常用藥之一。響鈴草味苦、微酸.性寒。具有斂肺氣.補脾腎.利小便.消腫毒.養肝滋腎.調經的功效。在貴州民間用於久咳痰血.耳鳴耳聾.頭暈日眩.夢遺，慢性腎炎，膀炎，腎結石，扁桃體炎，淋巴腺炎，療毒惡瘡月經不調等。
發明內容
本發明的目的克服上述缺點而提供的一種對金黃色葡萄球菌(staphylococcus aureus)、大腸桿菌(Escherichia coli)、糞鏈球菌(Staphylococcus faecalis)、黃麴黴(Aspergillus flavus)、綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)、藤黃微球菌(Micrococcus luteus)有抑制作用的從響鈴草中提取的天然抗菌組合物。
本發明的另一目的是提供從響鈴草中提取的天然抗菌組合物的提取方法。
本發明的從響鈴草中提取的天然抗菌組合物，其特徵在於將乾燥的響鈴草粉碎過40-200目篩，按1-5g/10ml的比例加入溶劑，浸泡1-5次後，每次12-24h，置於溫度為30-40℃、轉速為180-250r/min的恆溫搖床上震蕩12-24h，抽濾得到提取液；回收溶劑後乾燥，即得。
其中溶劑為水、酒精或乙酸乙酯。
從響鈴草中提取的天然抗菌組合物的提取方法，其特徵在於將乾燥的響鈴草粉碎過40-200目篩，按1-5g/10ml的比例加入溶劑，浸泡1-5次後，每次12-24h，置於溫度為30-40℃、轉速為180-250r/min的恆溫搖床上震蕩12-24h，抽濾得到提取液；回收溶劑後乾燥，即得。
上述的從響鈴草中提取的天然抗菌組合物的提取方法，其中回收溶劑後乾燥的方法為溶劑為水時，-80℃冷凍12-24h用真空冷凍乾燥機乾燥；溶劑為酒精時，酒精提取液40℃減壓旋轉濃縮除去酒精，-80℃冷凍12-24h用真空冷凍乾燥機乾燥；溶劑為乙酸乙酯時，乙酸乙酯提取液45℃減壓濃縮除去乙酸乙酯。
本發明與現有技術技術相比，經過實驗證明，水溶劑浸提物的總體抑菌活性較強，對藤黃微球菌，黃黴菌均有較好的效果，最低抑菌濃度均為12.5mg/ml；對金黃色葡萄球菌，大腸桿菌，綠膿桿菌的最低抑菌濃度均為50mg/ml。乙醇溶劑浸提物的總體抑菌活性稍弱，對黃黴菌和綠膿桿菌的抑制作用較好，最低抑菌濃度均為25mg/ml；對其它的供試菌的抑制效果較差，對金黃色葡萄球菌，大腸桿菌，藤黃微球菌的最低抑菌濃度均為50mg/ml。乙酸乙酯溶劑浸提物的抑菌活性顯著，對金黃色葡萄球菌，大腸桿菌和綠膿桿菌均有較好的效果，最低抑菌濃度均為12.5mg/ml；對其它的供試菌的抑制效果稍弱，對藤黃微球菌和黃黴菌的最低抑菌濃度均為25mg/ml。說明響鈴草的不同溶劑提取物都具有抑制細菌生長的活性。為響鈴草的進一步開發利用和尋找新的天然抗菌藥物提供了基礎。
具體實施例方式
以下通過抑菌活性實驗來進一步證明本發明的有益效果實施例1將乾燥的響鈴草粉碎過40目篩，稱取150g，加入1000ml的水，浸泡2次後，每次12h，置於溫度為37℃、轉速為200r/min的恆溫搖床上震蕩12h，抽濾得到提取液，-80℃冷凍12h後用真空冷凍乾燥機乾燥24h，得到乾燥品。
取響鈴草水提取物的乾燥品0.3g，分別溶於3mL DMF中作為原液，過細菌過濾器，分別以LB液體培養基倍比稀釋成1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，1∶256各8個濃度，即含原液濃度分別為50，25，2.5，6.25，3.1，1.5，0.75，0.375mg/mL，每管300ul。每個濃度設三個平行管，並分別設不含萃取液的LB液體培養基為對照管。然後在各管中加入事先製備好的菌懸液(600nm處OD值約為1.0)30uL，混勻後放於37℃的培養箱中培養24h。分別從每一試管取0.1ml液體塗布營養瓊脂平板，每梯度塗布三個平板，整個過程重複兩次，24h後確定是否有細菌生長。以藥物抑制待測菌生長的最低濃度為最小抑菌濃度(MIC)。實驗結果如下
實施例2將乾燥的響鈴草粉碎過120目篩，稱取150g，加入1000ml，95％的酒精，浸泡3次後，每次18h，置於溫度為30℃、轉速為250r/min的恆溫搖床上震蕩18h，抽濾得到提取液，40℃減壓旋轉濃縮除去酒精，-80℃冷凍12h用真空冷凍乾燥機乾燥24h，得到乾燥品。
取響鈴草95％酒精的提取物乾燥品0.3g，分別溶於3mL DMF中作為原液，過細菌過濾器，分別以LB液體培養基倍比稀釋成1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，1∶256各8個濃度，即含原液濃度分別為50，25，12.5，6.25，3.1，1.5，0.75，0.375mg/mL，每管300ul。每個濃度設三個平行管，並分別設不含萃取液的LB液體培養基為對照管。然後在各管中加入事先製備好的菌懸液(600nm處OD值約為1.0)30uL，混勻後放於37℃的培養箱中培養24h。分別從每一試管取0.1ml液體塗布營養瓊脂平板，每梯度塗布三個平板，整個過程重複兩次，24h後確定是否有細菌生長。以藥物抑制待測菌生長的最低濃度為最小抑菌濃度(MIC)。實驗結果如下
實施例3將乾燥的響鈴草粉碎過200目篩，稱取150g，加入1000ml的乙酸乙脂，浸泡5次後，每次24h，置於溫度為40℃、轉速為180r/min的恆溫搖床上震蕩24h，抽濾得到提取液，45℃減壓濃縮除去乙酸乙酯，得到乾燥品。
取響鈴草乙酸乙酯提取物的乾燥品0.3g，分別溶於3mL DMF中作為原液，過細菌過濾器，分別以LB液體培養基倍比稀釋成1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，1∶256各8個濃度，即含原液濃度分別為50，25，2.5，6.25，3.1，1.5，0.75，0.375mg/mL，每管300ul。每個濃度設三個平行管，並分別設不含萃取液的LB液體培養基為對照管。然後在各管中加入事先製備好的菌懸液(600nm處OD值約為1.0)30uL，混勻後放於37℃的培養箱中培養24h。分別從每一試管取0.1ml液體塗布營養瓊脂平板，每梯度塗布三個平板，整個過程重複兩次，24h後確定是否有細菌生長。以藥物抑制待測菌生長的最低濃度為最小抑菌濃度(MIC)。實驗結果如下
權利要求
1.一種從響鈴草中提取的天然抗菌組合物，其特徵在於將乾燥的響鈴草粉碎過40-200目篩，按1-5g/10ml的比例加入溶劑，浸泡1-5次後，每次12-24h，置於溫度為30-40℃、轉速為180-250r/min的恆溫搖床上震蕩12-24h，抽濾得到提取液；回收溶劑後乾燥，即得。
2.如權利要求1所述的從響鈴草中提取的天然抗菌組合物，其特徵在於溶劑為水、酒精或乙酸乙酯。
3.一種從響鈴草中提取的天然抗菌組合物的提取方法，其特徵在於將乾燥的響鈴草粉碎過40-200目篩，按1-5g/10ml的比例加入溶劑，浸泡1-5次後，每次12-24h，置於溫度為30-40℃、轉速為180-250r/min的恆溫搖床上震蕩12-24h，抽濾得到提取液；回收溶劑後乾燥，即得。
4.如權利要求3所述的從響鈴草中提取的天然抗菌組合物的提取方法，其特徵在於溶劑為水時，回收溶劑後乾燥的方法為-80℃冷凍12-24h用真空冷凍乾燥機乾燥。
5.如權利要求3所述的從響鈴草中提取的天然抗菌組合物的提取方法，其特徵在於溶劑為酒精時，回收溶劑後乾燥的方法為酒精提取液40℃減壓旋轉濃縮除去酒精，-80℃冷凍12-24h用真空冷凍乾燥機乾燥。
6.如權利要求3所述的從響鈴草中提取的天然抗菌組合物的提取方法，其特徵在於溶劑為乙酸乙酯時，回收溶劑後乾燥的方法為乙酸乙酯提取液45℃減壓濃縮除去乙酸乙酯。
全文摘要
本發明公開了一種從響鈴草中提取的天然抗菌組合物及其提取方法，將乾燥的響鈴草粉碎過40－200目篩，按1－5g/10ml的比例加入溶劑，浸泡1－5次後，每次12－24h，置於溫度為30－40℃、轉速為180－250r/min的恆溫搖床上震蕩12－24h，抽濾得到提取液；回收溶劑後乾燥，即得。其中溶劑為水、95％的酒精或乙酸乙酯。本發明製得的產品對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、糞鏈球菌、黃麴黴、綠膿桿菌、藤黃微球菌均有抑制作用。
文檔編號A61P31/00GK101019918SQ20071007767
公開日2007年8月22日 申請日期2007年3月8日 優先權日2007年3月8日
發明者周英, 段震 申請人:貴州大學