一種菊花多糖的提取方法
2023-05-23 15:04:06 3
專利名稱：一種菊花多糖的提取方法
技術領域：
本發明屬於中藥活性成份的提取方法，更具體地說它涉及一種菊花多糖的提取方法。
背景技術：
多糖是極性大分子化合物。一般從天然產物中(植物、微生物、海藻等)提取。到目前為止，已有近百種多糖類化合物被提取出來.許多實驗都證明多糖與感染、腫瘤、炎症及一些自身免疫性疾病有密切關係。因此對多糖的研究與開發已越來越引起人們的廣泛關注。多糖類藥物生物活性的研究是多糖類研究中最活躍亦是進展最快的領域。近年來糖類被發現在免疫系統中起十分關鍵的作用，在人體對病毒式細菌侵襲的防禦過程中尤其如此。現代醫學研究證菊花有顯著擴張冠狀動脈、增強冠狀動脈血流量的作用，能抑制肝臟中膽固醇的合成和加快膽固醇的分解代謝，有抗炎解熱的作用，常服可延年益壽。至今還未見有菊花多糖提取方法的相關報導。
發明內容
本發明的目的在於提出一種菊花多糖的提取方法。本發明以正交實驗法優化菊花中多糖採用醇析水提法，以菊花多糖提取產率和含量為指標，對提取過程中水浸提時間，浸提溫度，沉析用的乙醇濃度三個因素三個水平的提取效果進行深入分析，最後確定提取菊花多糖的最佳提取條件，為菊花多糖的開發利用提供試驗依據。
本發明的目的是通過如下措施來達到的菊花多糖的提取採用水提乙醇析出沉澱法，其原理是根據菊花多糖易溶於水，難溶於乙醇，石油醚，氯仿等溶劑的性質，可用水先將粗多糖從原草藥中提取出來，用氯仿、石油醚等除去脂溶性雜質，最後用乙醇將其從水提物中沉澱析出，從而分離出菊花多糖，經乾燥即得到固體的菊花多糖。
更具體地說它依次包括如下步驟①.取一定量的菊花加30倍水恆溫浸泡，浸提時間為1-3小時，浸提恆溫在80-100℃範圍內，過濾，得提取液；②.將浸泡過的菊花殘渣再加15-20倍水繼續恆溫浸泡30分鐘，過濾得提取液；第三次將浸泡過的菊花殘渣加15-20倍水繼續恆溫浸泡30分鐘，過濾得提取液；合併三次提取液；③.將提取液置於旋轉蒸發器濃縮至定量的菊花3倍量液體，離心收集上清液，用sevag試劑法除蛋白2次，用氯仿或乙酸乙酯2倍量萃取除去脂溶性雜質1-3次，取水層；④.在水層中加入乙醇，收集乙醇濃度範圍為70-90％析出的沉澱，沉澱用丙酮和乙醚分別洗滌2次，乾燥，即得固體菊花多糖。
在上述技術方案中，所述浸泡時間為2小時、浸提溫度為100℃、沉澱用乙醇濃度為80％。
在上述技術方案中，所述浸泡時間為3小時、浸提溫度為100℃、沉澱用乙醇濃度為80％。
本發明是一種提取菊花多糖的方法，填補了菊花多糖提取方法的空白，本方法提取菊花多糖具有快速、簡便、成本低、收率高的優點。有利於進一步研究菊花多糖在醫療上的應用。
圖1為本發明正交試驗影響菊花多糖產率的因素比較圖；圖2為本發明正交試驗影響菊花多糖含量的因素比較圖。
具體實施例方式
下面結合附圖詳細說明本發明的實施情況(注在圖1、圖2中橫坐標為影響因素，縱坐標為K值，同一因素MAX與MIN之差為極值R)
1、菊花多糖的提取方法①.取50g的菊花加30倍水1500ml恆溫浸泡，浸提時間為1-3小時，浸提恆溫在80-100℃範圍內，過濾，得提取液；②.將浸泡的菊花再加900ml水繼續恆溫浸泡30分鐘，過濾得提取液；再將浸泡的菊花加900ml水繼續恆溫浸泡30分鐘，過濾得提取液；合併三次提取液；③.將提取液置於旋轉蒸發器濃縮至150ml，離心收集上清液，用sevag試劑法除蛋白2次，用氯仿或乙酸乙酯100ml萃取除去脂溶性雜質1-3次，取水層；④.在水層中加入乙醇，收集乙醇濃度為70-90％析出的沉澱，沉澱用丙酮和乙醚分別洗滌2次，乾燥，即得固體菊花多糖。
2.菊花多糖含量的測定方法2.1測定方法用苯酚-硫酸法測定不同濃度葡萄糖的吸光度來制定濃度-吸光度標準曲線，再將菊花多糖樣品配成一定濃度的溶液按標準曲線項下操作測其吸光度，代入濃度-吸光度標準曲線方程經計算得到所得多糖含量。
2.2標準曲線的製備 精密稱取乾燥至恆重的葡萄糖對照品10.2mg，置100ml量瓶中，加水溶解並稀釋至刻度，搖勻，即得葡萄糖對照品儲備液。準確量取上述對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分別置10ml量瓶中，再分別各取0.5ml加濃硫酸7.5ml和5％苯酚1.5ml，於40℃保溫30分鐘，在490nm波長處測定吸收度，得回歸方程C＝132.57A-20.67，r＝0.9971。結果表明，在10.2～51.0μg·ml-1的濃度範圍內具有良好的線性關係。
2.3正交試驗設計 按照上述試驗的提取工藝，經過多次單因子對比試驗，正交試驗設計的因素為水浸提時間、浸提溫度、沉澱的乙醇濃度等3個因素，每因素3水平(見表1)，以菊花多糖的產率和含量為考察指標，用L9(34)正交表安排試驗。
表1因素與水平表
(注試驗時其它條件完全相同)3.結果按正交實驗設計方法提取菊花多糖，收率和含量結果見表2。
表2菊花多糖提取正交試驗設計及結果
(注試驗時其它條件完全相同)3.1最佳提取菊花多糖產率的工藝條件的確定經過運算可得出每個因素各水平之和K1、K2、K3。由表2中產率的R值及圖1的峰值可以看出，影響提取產率的因素排序為B＞A＞C，B的影響最大，C則最小。綜合各因素K值和直觀比較，得出理論上最佳提取產率的工藝條件為A2B3C2。故確定其最佳提取產率工藝條件為浸提時間為2h，浸提溫度為100℃，沉析用乙醇濃度為80％。
3.2最佳提取菊花多糖含量的工藝條件的確定此外，由表2中含量的R值及圖2來分析，影響其含量的因素排序為A＞B＞C。A的影響較顯著。說明提取過程中，浸提時間對菊花多糖的含量影響是最大的，時間延長有利於提高菊花多糖的含量；乙醇濃度、浸提溫度對菊花多糖含量的影響也較大，由表中可看出沉澱用乙醇濃度為80％，浸提溫度為100℃時含量較高。從其含量的K1、K2、K3看到，所得菊花多糖含量最佳的工藝條件為A3B3C2。綜上述提取菊花多糖的最佳工藝條件宜為浸提時間為3h，浸提溫度為100℃，沉析用的乙醇濃度為80％。
3.3驗證實驗為驗證最佳工藝，稱取菊花50g，按照優化後所得最佳提取工藝即加入30倍量水提取3次，浸提時間為3h，浸提溫度為100℃，沉析用的乙醇濃度為80％進行提取，並對所得多糖稱重並進行含量測定。結果表明，多糖得率為6.25％，菊花多糖相對百分含量為78.30％，可知與正交表中的最優水平一致，說明本發明所確定的工藝合理。
需要說明的是對於所屬領域的技術人員來說，在不改變本發明原理的前提下還可以對本發明做出若干的改變或變形，這同樣屬於本發明的保護範圍。
權利要求
1.一種菊花多糖的提取方法，其特徵在於它依次包括如下步驟①.取一定量的菊花加30倍水恆溫浸泡，浸提時間為1-3小時，浸提恆溫在80-100℃範圍內，過濾，得提取液；②.將浸泡過的菊花殘渣再加15-20倍水繼續恆溫浸泡30分鐘，過濾得提取液；第三次將浸泡過的菊花殘渣加15-20倍水繼續恆溫浸泡30分鐘，過濾得提取液；合併三次提取液；③.將提取液置於旋轉蒸發器濃縮至定量的菊花3倍量液體，離心收集上清液，用sevag試劑法除蛋白2次，用氯仿或乙酸乙酯2倍量萃取除去脂溶性雜質1-3次，取水層；④.在水層中加入乙醇，收集乙醇濃度範圍為70-90％析出的沉澱，沉澱用丙酮和乙醚分別洗滌2次，乾燥，即得固體菊花多糖。
2.根據權利要求1所述的一種菊花多糖的提取方法，其特徵在於所述浸泡時間為2小時、浸提溫度為100℃、沉澱乙醇濃度為80％。
3.根據權利要求1所述的從金銀花中提取金銀花多糖的方法，其特徵在於所述浸泡時間為3小時、浸提溫度為100℃、沉澱乙醇濃度為80％。
全文摘要
一種菊花多糖的提取方法，它是用水先將粗多糖從原草藥中提取出來，用氯仿、石油醚等除去脂溶性雜質，最後用乙醇將其從水提物中沉澱析出，從而分離出菊花多糖，經乾燥即得到固體的菊花多糖。本發明填補了菊花多糖提取方法的空白，具有快速、簡便、成本低、收率高的優點，並有利於進一步研究菊花多糖在醫療上的應用。
文檔編號C08B37/00GK1810841SQ20051001940
公開日2006年8月2日 申請日期2005年9月8日 優先權日2005年9月8日
發明者馬力, 張玉, 陳東生, 陳華庭, 陳文 申請人:華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院