Bpy2ip1基因在抑制cre活化上的應用的製作方法

2023-05-23 09:02:31

專利名稱：Bpy2ip1基因在抑制cre活化上的應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於生物技術領域，涉及基因表達調控領域，具體地說，本發明涉及BPY2IP1基因對CRE活化的抑制作用。本發明還涉及該基因的表達載體及其編碼蛋白的抗體。本發明還涉及該基因，其編碼的蛋白質及蛋白質的抗體在製備預防和治療與CRE相關的疾病上的用途。
背景技術：
BPY2IP1基因是由Wong等運用酵母雙雜交篩選VCY2的結合蛋白時發現並命名的。BPY2IP1編碼的蛋白由903胺基酸組成，屬微管結合蛋白家族，與MAP1B和MAP1A的序列同源性分別為59.3％和41.9％(Biol Reprod.2004，70(3)775-84)。BPY2IP1在細胞質和細胞核都有表達，與β-tubulin共定位(Genomics.2002 Jan；79(1)124-36.)。BPY2IP1結合蛋白RASSFIC是細胞周期的負調節因子並有抑癌基因的作用(Dammann etal.，2000；Vos et al.，2000)。研究還發現BPY2IP1定位於中心體，募集RASSF1A從而抑制APC-Cdc20活性(APC(anaphase-promoting complex))。BPY2IP1的過表達導致有絲分裂停滯於前中期，運用RNAi技術幹擾BPY2IP1的表達使RASSF1A不能定位於紡錘體極並且不能與Cdc20結合，結果導致有絲分裂進程加速(J Biol Chem.2005 Feb4；280(5)3920-7)。
CRE(cyclic AMP response element)通路由細胞外信號(神經遞質、激素、膜的去極化、生長因子、神經營養因子)激活，通過蛋白激酶A(protein kinase A)、鈣調蛋白依賴的蛋白激酶(calmodulin-dependent protein kinase CaMKII)、AKT(即蛋白激酶B)、p44/42MAP激酶、p90RSK、p38MAP激酶或MSK1使CREB(CRE binding protein)磷酸化(Ser133)，即激活了CREB的轉錄因子活性，使之結合於CRE順式作用元件並表達下遊基因。受cAMP信號分子調控的基因的啟動子中一般都含有一個稱為CRE的順式作用元件，序列比較保守，通常為TGACGTCA和TGACG/CGTCA。而與其相互作用的反式因子屬於一個保守的蛋白家族，通過其含有的DNA結合結構域與CRE元件結合，從而調控基因的表達(Masquilier D et al.，1993)。CREB(cAMP-response element binding protein)和CREM(cAMP-response element modulator)分別是這個蛋白家族的兩個重要成員。CREB和CREM蛋白具有很高的序列保守性和同源性，一般均由2個富含穀氨酸的轉錄激活結構域(Q1，Q2)、激酶誘導結構域(kinase inducible domain，KID或者P box)、DNA結合結構域和亮氨酸拉鏈模體(bZIP)組成。其中轉錄激活結構域用於介導蛋白質-蛋白質之間的相互作用，比如介導CREB/CREM蛋白與CBP(CREB binding protein)蛋白的結合；P box結構域是蛋白激酶A(PKA)磷酸化的區域，，例如被PKA蛋白磷酸化的CREB蛋白的第113位絲氨酸或CREM蛋白的第117位絲氨酸就位於其中。研究發現維持CREM的活性需要至少一個富含穀氨酸的結構域和P box兩部分。已報導的CRE靶基因有八十種以上(Nat Rev Mol CellBiol.2001，2(8)599-609)，Zhang等運用生物信息學方法在人基因組中找到了4084個CREB靶基因，有癌基因、轉錄因子、細胞周期調節因子以及物質代謝相關分子(Proc NatlAcad Sci U S A.2005，102(12)4459-64)。
研究發現CRE信號通路與一些特殊的生理功能和疾病密切相關，如長期記憶、亨廷頓病(Huntington’s disease，HD)、阿爾茨海默氏病(Alzheimer’s disease)、腎上腺皮質瘤、黑色素瘤等等。詳見下述1.記憶通過對雨虎屬(Aplysia)、果蠅、小鼠以及大鼠的研究表明，CREB家族轉錄因子對長期記憶(long-term memory，LTM)的形成十分重要，是將短期記憶(shaort-term memory，STM)轉換成長期記憶的關鍵分子。在對Aplysia的研究中，將含有CRE元件的寡核苷酸導入神經元以幹擾CREB的轉錄活性，結果STM未見異常，而LTM受阻。在果蠅體內，抑制CREB的表達也特異地阻斷了LTM，而CREB的激活則促進了LTM。在CREB基因敲除小鼠中，STM表現正常，LTM則受到破壞。
2.亨廷頓病亨廷頓病(Huntington’s disease，HD)是一種神經退行性病變，致病基因為Huntingtin(Htt)，Htt的外顯子1中的穀氨醯胺密碼子CAG重複次數超過一定限度(38)時導致亨廷頓病。研究發現Htt致病突變體顯著降低了A2A-R(A2A adenosine receptor)的轉錄水平，而CREB活性突變體可挽救由Htt引起的A2A-R轉錄下調。進一步研究發現A2A-R的核心啟動子區含CRE元件，CREB可與之結合併激活轉錄。Htt則阻礙CREB結合於A2A-R啟動子，從而抑制A2A-R的表達。
CBP(CREB-binding protein)是CREB的協同作用分子。在亨廷頓病、阿爾茨海默氏病和Rubinstein-Taybi綜合症中都發現CBP的功能喪失。體外實驗還顯示CBP可與Htt蛋白結合。在小鼠HD模型的神經元細胞核內包涵體中，CBP與Htt蛋白及泛素共存。
3.阿爾茨海默氏病在家族性阿爾茨海默氏病(familial Alzheimer’s disease，FAD)病例中，發現澱粉樣蛋白前體蛋白(amyloid precursor protein，APP695)642位胺基酸由纈氨酸突變為異亮氨酸或甘氨酸或苯丙氨酸。研究者發現三種FAD致病突變體(FAD-I642，FAD-G642，FAD-F642)的表達都明顯抑制CRE的轉錄活性，而且這一抑制作用不依賴於腺苷酸環化酶。
4.癌症 在腎上腺皮質瘤細胞系H295R和人惡性腎上腺皮質瘤組織中都發現CREB表達缺失以及CREMtau的代償性過表達。Jean等發現CREB在轉移的黑色素瘤中表達上調，顯性負突變形式的CREB使黑色素瘤細胞在裸鼠體內的致瘤性和轉移能力下降。
5.其他 對CBP缺陷小鼠的研究發現其胰島素敏感性增加，而且高脂飲食不能導致其體重的增加，這一發現有助於對糖尿病發生分子機制的理解。Rosenberg等發現CREB顯性負突變轉基因小鼠患有甲狀腺發育不全。

發明內容
針對現有技術及現有藥物或試劑的不足，本發明的目的是提供BPY2IP1基因在宿主細胞中外源表達具有抑制CRE活化的作用，且抑制CRE活化的作用明顯、穩定。
本發明的另一目的是提供含有BPY2IP1基因的載體，和BPY2IP1基因及其載體轉化或轉導的宿主細胞。
本發明的另一目的是提供BPY2IP1基因所編碼的多肽的抗體和用於檢測的核酸分子。
本發明的另一目的是提供生產BPY2IP1基因和其編碼的多肽的方法以及BPY2IP1基因及其編碼的多肽的用途。
為實現上述目的，本發明採用以下技術方案在本發明的第一方面，提供BPY2IP1基因在抑制CRE活化上的應用，該基因具有SEQID NO1的多核苷酸序列，它在宿主細胞中外源表達會抑制信號傳導通路中的CRE的活化。
在本發明的第二方面，提供了含有SEQ ID NO1的多核苷酸序列或其片段的載體，還提供了BPY2IP1基因或該載體轉化或轉導的宿主細胞。
在本發明的第三方面，提供了與BPY2IP1基因所編碼的多肽特異性結合的抗體，還提供了用於檢測的核酸分子，它含有SEQ ID NO1的多核苷酸序列中的8-100連續的核苷酸。
在本發明的第四方面，提供了BPY2IP1基因或其編碼多肽在製備預防和/或治療與人體細胞凋亡有關的疾病的藥物中的用途。較佳地，在製備預防和/或治療亨廷頓病、阿爾茨海默氏病、腎上腺皮質瘤、黑色素瘤的藥物中的用途。
在本發明的第五方面，提供了一種神經性推行疾病或腫瘤的體外檢測方法，利用上述核酸片段或抗體來檢測宿主樣品中的多肽的存在或水平。
本發明的其他方面由於本文的技術的公開，對本領域技術人員而言是顯而易見的。
BPY2IP1基因編碼的蛋白質具有抑制CRE活化的作用，研究發現CRE信號通路與一些特殊的生理功能和疾病密切相關，如長期記憶、亨廷頓病(Huntington’s disease，HD)、阿爾茨海默氏病(Alzheimer’s disease)、腎上腺皮質瘤、黑色素瘤等等。
BPY2IP1基因所編碼的蛋白質BPY2IP1可以單獨或與合適的藥用載體組合使用。這種組合物可以包含治療有效量的多肽和藥學可接受的載體或賦型劑，這樣的載體包括但不限於鹽水，緩衝鹽水，葡萄糖，水，甘醇，乙醇，或混合物，這些製劑應適合給藥方式。
本發明的藥物組合物可以以適當的方式給藥，如通過局部、靜脈內、腹腔內、肌內、皮下等途徑給藥。給藥於患者的用量取決於許多因素，如給藥方式，治療者的身體條件和醫生的經驗。
蛋白質BPY2IP1也可以通過在活體表達這些多肽來使用。例如患者的細胞可以通過在體外用基因BPY2IP1進行基因工程操作，然後將工程細胞提供給患者，使工程細胞在體內高表達蛋白質BPY2IP1，從而達到治療的目的。
BPY2IP1基因的多核苷酸序列能用本領域已有的方法獲得。這些技術包括但不局限於(1)通過雜交技術分離DNA序列；(2)人工化學合成DNA序列；(3)PCR擴增技術。
第一種方法是先構建基因組文庫或者cDNA文庫，然後通過分子雜交等技術從基因組文庫或cDNA文庫中篩選出目的基因或序列。當生物基因組比較小時，此方法較易成功；當生物基因組很大時，構建其完整的基因組文庫較困難，再從龐大的文庫中去克隆目的基因的工程量也很大。
第二種方法是按設計好的序列一次合成100-200bp長的DNA片段，再用這些合成的片段組合連接成完整的基因。這種合成長的基因序列的方法的價格十分昂貴。此方法主要用於合成作為引物、接頭等的核酸片段。
第三種方法用PCR技術擴增DNA/RNA的方法(Saiki，et al.Science 1985；2301350-1354)。用於PCR的引物可根據本文所公開的本發明的序列信息適當地選擇，並可用常規方法合成。可用常規方法如通過凝膠電泳分離和純化擴增的DNA/RNA片段。
BPY2IP1基因所編碼的蛋白質可以通過常規的重組DNA技術，利用BPY2IP1基因的多核苷酸序列來表達或生產(Science，1984；2241431)。包括以下步驟(1)用BPY2IP1基因(或其變異體)，或用含有此基因的表達載體轉化或轉導合適的宿主細胞；(2)在合適的培養基中培養步驟(1)得到的宿主細胞；(3)從培養基或細胞中分離、純化所需的蛋白多肽。
本發明還涉及包含基因BPY2IP1的載體。基因BPY2IP1的核苷酸序列可以包括在用於表達多肽的眾多表達載體中的任意一種中。適宜的載體例如包括細菌質粒、噬菌體、酵母質粒、植物細胞病毒、哺乳動物細胞病毒，如腺病毒、腺相關病毒，或者其他載體。本發明中適用的表達載體可以是原核表達載體，也可以是真核表達載體。
本發明還涉及用上述載體或BPY2IP1基因經基因工程產生的宿主細胞。本發明的載體和BPY2IP1基因可以用於轉化適當的宿主細胞，以使其能夠表達具有抑制CRE活化功能的蛋白質。宿主細胞可以是原核細胞，如細菌細胞；或是低等真核細胞，如酵母細胞；或是高等真核細胞，如哺乳動物細胞。代表性例子有大腸桿菌；植物細胞；果蠅S2或Sf9的昆蟲細胞；CHO、COS或Bowes黑素瘤細胞的動物細胞；T293、hela細胞等。
本發明的多肽，或保守變異多肽或片段，或表達它們的細胞可以作為抗原用來產生抗體，可用於BPY2IP1抑制CRE活化的分子機制的研究。所述抗體可以是單克隆抗體，或多克隆抗體，還包括嵌和、單鏈和人源化的抗體以及Fab片段，或Fab表達文庫的產物。本發明多肽的抗體可通過將該多肽直接注射給動物來獲得。製備單克隆和多克隆抗體的方法在本領域中是公知的，並且描述在眾多文獻中。該抗體可以用於檢測BPY2IP1蛋白質的存在或水平，或用於檢測BPY2IP1基因。在炎症或腫瘤疾病中，通過檢測BPY2IP1蛋白質的水平或存在，可以用於診斷與CRE活性相關的疾病。
本發明首次發現BPY2IP1基因轉染具有抑制CRE活化的作用，並且高效、穩定，表明該基因在細胞內有較高的親和力和效力。基於上述優點，本發明為進一步研究BPY2IP1基因與CRE之間的調控關係，以及研究相關疾病的發生機制，為疾病的治療和藥物開發提供靶向位點奠定必要的基礎。


圖1真核表達載體pCMV-Tag5C-BPY2IP1的構建示意圖。
圖2pX-luc螢光素酶基因報告質粒的結構圖(X為CRE、NFAT、AP-1、NF-κB、STAT1其中之一)。
圖3BPY2IP1外源表達抑制PMA對CRE的活化。
具體實施方案以下對本發明的實施方案進一步詳細說明。
1、真核表達載體BPY2IP1-pCMV-Tag5C的構建為了檢測BPY2IP1基因對CRE活化的抑制功能，首先構建含有BPY2IP1 cDNA的真核表達載體pCMV-Tag5C-BPY2IP1。本發明中的BPY2IP1 cDNA克隆AK027623購自東京大學(Institute of Medical Science，University of Tokyo)。採用真核表達載體pCMV-Tag5C(Stratagene，#211175)與BPY2IP1 cDNA序列重組構建真核表達載體。pCMV-Tag5C是設計用於重組蛋白在哺乳類動物細胞系中高效表達的載體，它含有人巨細胞病毒CMV啟動子，可在哺乳類動物細胞系中實現高效表達。以XhoI酶切AK027623和pGADT7(BDBiosciences Clontech，#K1612-1)，再連接構建成pGADT7-BPY2IP1。然後以BamHI分別酶切pGADT7-BPY2IP1和pCMV-Tag5C，再連接構建成pCMV-Tag5C-2399-BPY2IP1。BPY2IP1的C末端2342bp-2712bp片段由PCR引入HindIII酶切位點，以BamHI和HindIII分別雙酶切pCMV-Tag5C-2399-BPY2IP1和2342bp-2712bp片段，再連接構建成pCMV-Tag5C-BPY2IP1。圖1為該真核表達載體構建的示意圖。
2、檢測BPY2IP1基因抑制CRE活化的功能的方法用BPY2IP1-pCMV-Tag5C，報告質粒(Stratagane，219077)，和內對照報告質粒pRL-TK(Promega，E2231)共轉染人胚胎腎293T細胞(ATCC NumberCRL-11268)，採用雙螢光素酶報告基因法，測定BPY2IP1-pCMV-Tag5C在293T細胞中的表達產物在不同刺激物所誘導的不同信號傳導通路中的作用。報告質粒包括pCRE-luc，pAP1-luc，pNF-κB-luc，pNF-AT-luc，pSTAT1-luc。刺激物包括TNFα，PMA(Sigma)+離子黴素(Calbiochem)和毛猴素(Forskolin)等等。不同的信號傳導通路包括CRE信號傳導通路，AP1信號傳導通路，NF-AT信號傳導通路，NF-κB信號傳導通路，STAT1信號傳導通路。
本發明採用雙螢光素酶報告基因法檢測BPY2IP1基因對CRE活化的抑制功能，該方法採用的是體內信號轉導途徑順式報導系統，其中所用的報告質粒載有螢火蟲螢光素酶基因，該基因的表達由合成的啟動子所調控，其中包含基本的啟動子元件(TATA box)，以及轉錄因子的結合位點，報告質粒的結構圖如圖4所示。當細胞內的轉錄因子通過某種信號轉導途徑而被活化時，轉錄因子便會結合於報告質粒的增強子元件，從而啟動報告基因螢火蟲螢光素酶基因的轉錄，進一步胞內翻譯成螢光素酶，導致細胞內螢光素酶數量增加，活性增強；相反，當細胞內的轉錄因子活化受到抑制的時候，螢光素酶的表達量及活性就低。所以，通過檢測螢光素酶的活性，便可以反映不同刺激物以及共轉染的目的基因對細胞內轉錄因子是否具有活化或者抑制活化的功能。pRL-TK報告質粒載有水母螢光素酶基因，該基因的表達由猿猴病毒40(SV40)增強子/啟動子所調控，轉染哺乳動物細胞後可以產生較強的基本水平的水母螢光素酶的表達，且表達的活性不受CRE活化與否的調節，所以在實驗中用作內對照報告基因。
下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。這些實施例僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，如《分子克隆實驗指南》(2002年第三版[美]薩姆布魯克等箸，科學出版社)中所述的條件，或按照製造廠商所建議的條件。
實施例1、真核表達載體BPY2IP1-pCMV-Tag5C的構建BPY2IP1 cDNA克隆AK027623購自Institute of Medical Science，University ofTokyo。首先以XhoI酶切AK027623和pGADT7，再連接構建成BPY2IP1-pGADT7。然後以BamHI分別酶切BPY2IP1-pGADT7和pCMV-Tag5C，再連接構建成BPY2IP1-2399-pCMV-Tag5C。BPY2IP1的C末端2342bp-2712bp片段由PCR引入HindIII酶切位點，最後以BamHI和HindIII分別雙酶切BPY2IP1-2399-pCMV-Tag5C和2342bp-2712bp片段，再連接構建成BPY2IP1-pCMV-Tag5C。
實施例2、雙螢光素酶報告基因法測定BPY2IP1對毛猴素(Forskolin)誘導CRE活化的抑制作用。
用目的基因BPY2IP1-pCMV-Tag5C和報告基因pCRE-luc，pRL-TK共轉染人胚胎腎293T細胞，通過分別檢測兩種螢光素酶活性來測定CRE的活性。共轉染的方法為陽離子非脂性轉染法，採用vigofect(威格拉斯生物技術(北京)有限公司)，按產品說明書所述進行。
轉染操作步驟如下(1)細胞培養將293T細胞(ATCC NumberCRL-11268)(2.0×104)用含10％胎牛血清的DMEM(Dulbecco’s modified Eagle’s medium)培養基(Hyclone，SH0022.02)鋪在96孔細胞培養板(Costar，3599)上，接種密度1.2萬/孔，培養基體積100ul/孔，在5％CO2，37℃的培養箱中培養18-24小時。
(2)製備轉染複合物取2.5ul生理鹽水稀釋40ng報告基因pCRE-luc，4ng pRL-TK和50ng目的質粒BPY2IP1-pCMV-Tag5C，緩慢混合均勻；同樣用2.5μl生理鹽水稀釋適當量的vigofect(一般為0.04ul/孔)，緩慢混合均勻，在室溫下放置5分鐘，與稀釋的DNA緩慢混合，室溫放置15分鐘，以形成轉染複合物。
(3)轉染將轉染複合物緩慢滴入細胞培養板(5μl/孔)，輕微搖勻。5％CO2，37℃的培養箱中培養18-24小時。
轉染18-24小時後用毛猴素刺激細胞，37℃孵箱培養。6-8小時後棄去培養液，加入Passive Lysis Buffer(Promega，E1960)，放入-80℃冰箱。檢測時，取出細胞板，室溫下自然解凍，使細胞完全裂解，10μl細胞裂解液移至白色螢光板，加入Dual-luciferase雙報告系統檢測底物，通過tecan微孔板酶標儀(Genios Pro，Tecan)檢測螢光素酶活性。
實施例3、雙螢光素酶報告基因法測定BPY2IP1對PMA+離子黴素誘導NFAT活化的抑制作用。
報告基因為pNFAT-luc，刺激物為PMA(十四酸佛波酯，Calbiochem，524400，終濃度50ng/ml)+離子黴素(Calbiochem，407950，終濃度1uM)，其餘與實施例2相同。
實施例4、雙螢光素酶報告基因法測定BPY2IP1對PMA+離子黴素誘導AP-1活化的抑制作用。
報告基因為pAP-1-luc，其餘與實施例3相同。
實施例5、雙螢光素酶報告基因法測定BPY2IP1對PMA+離子黴素誘導NF-κB活化的抑制作用。
報告基因為pNF-κB-luc，其餘與實施例3相同。
實施例6、雙螢光素酶報告基因法測定BPY2IP1對γ-幹擾素誘導STAT1活化的抑制作用。
報告基因為pSTAT1-luc，刺激物為γ-幹擾素，其餘與實施例2相同。
設定轉染pCMV-Tag5C空載體、不加刺激物時細胞內的螢光素酶活性比值(螢火蟲螢光素酶螢光強度/水母螢光素酶螢光強度表示)為1，其他條件下細胞內的螢光素酶活性比值以此為標準，用相對值表示。
結果參照圖3，用BPY2IP1-pCMV-Tag5C和報告質粒共轉染293T細胞，未用刺激物時，在各個信號通路中293T細胞中螢光素酶的活性均有所下降；經過不同刺激物刺激後，CRE信號傳導通路中的293T細胞中螢光素酶的活性明顯地下降，而在其他信號傳導通路中看不到螢光素酶的活性明顯下降，表明BPY2IP1基因在293T細胞中的表達產物對PMA+離子黴素誘導CRE活化有強的抑制作用。因此，本發明可以用於闡明BPY2IP1基因的生物學功能及其在腫瘤發生中的作用，從而明確相關疾病的發生機制，為疾病的治療和藥物開發提供靶向位點。
實施例7、抗體製備抗原選用原核細胞或真核細胞表達的BPY2IP1蛋白全長或部分肽段，也可以合成多肽作為抗原。
多克隆抗體的製備免疫動物選用成年雄性紐西蘭兔或BALb/c小鼠，初次免疫用200ug(紐西蘭兔)或20ug(BALb/c小鼠)抗原與等體積弗氏完全佐劑(FCA)充分乳化後，於背部皮下多點注射。初次免疫後21、42、63天，用弗氏不完全佐劑(FIA)完全乳化的抗原蛋白，各加強免疫1次，用量同前。每次免疫後7~10天，ELISA方法檢測血清效價，達到1×10-4時，放血分離血清.Western blot鑑定抗體特異性。
單克隆抗體製備免疫BALb/c小鼠同前，取脾臟製成B細胞懸液，與對數生長期的骨髓瘤細胞SP2/0融合，通過HAT(H，次黃嘌呤；A，氨基喋呤；T，胸腺嘧啶核苷)選擇性培養，獲得雜交細胞系，再通過ELISA方法檢測抗體效價，篩選出特定的雜交瘤細胞系，並得到單克隆抗體。
序列表110中國醫學科學院基礎醫學研究所北京諾賽基因組研究中心有限公司120BPY2IP1基因在抑制CRE活化上的應用130
1602170PatentIn version 3.321012113278212DNA213人220
221CDS222(10)..(3189)4001ggcccgaag atg gcg gcg gtg gct gga tct ggg gct gcc gcg gct ccg agc 51Met Ala Ala Val Ala Gly Ser Gly Ala Ala Ala Ala Pro Ser1 5 10tca ctg ctc ctc gtg gtg ggc agc gag ttc ggg agc ccg ggg ctc ctc 99Ser Leu Leu Leu Val Val Gly Ser Glu Phe Gly Ser Pro Gly Leu Leu15 20 25 30acc tac gtc ctg gag gag ctc gaa aga ggc atc cgg tct tgg gat gtc147Thr Tyr Val Leu Glu Glu Leu Glu Arg Gly Ile Arg Ser Trp Asp Val35 40 45gat cct ggc gtc tgc aac ctt gat gaa cag ctc aag gtc ttt gtg tcc195Asp Pro Gly Val Cys Asn Leu Asp Glu Gln Leu Lys Val Phe Val Ser50 55 60cga cac tct gcc acc ttc tcc agc att gtg aaa ggc cag cgg agc ctg243Arg His Ser Ala Thr Phe Ser Ser Ile Val Lys Gly Gln Arg Ser Leu65 70 75cac cac cgt gga gac aac ctg gag acc ctg gtc ctc ctg aac cca tca291
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1.BPY2IP1基因在抑制CRE活化上的應用，所述基因具有SEQ ID NO1的多核苷酸序列，其特徵在於，所述基因在宿主細胞中外源表達會抑制信號傳導通路中的CRE的活化。
2.一種載體，其特徵在於，所述載體含有SEQ ID NO1的多核苷酸序列或其片段。
3.一種遺傳工程宿主細胞，其特徵在於，所述宿主細胞選自(a)用權利要求2所述的載體轉化或轉導的宿主細胞；(b)用SEQ ID NO1的多核苷酸或其片段轉化或轉導的宿主細胞。
4.一種核酸片段，其特徵在於，所述核酸片段含有SEQ ID NO1的多核苷酸中8-100個連續的核苷酸。
5.一種抗體，其特徵在於，所述抗體是能與具有SEQ ID NO2的胺基酸序列的多肽或其保守性變異多肽、或其活性片段、或其活性衍生物特異性結合的抗體。
6.BPY2IP1基因或其編碼多肽在製備預防和/或治療神經性退行疾病或腫瘤的疾病的藥物中的用途。
7.根據權利要求6所述的用途，其中所述疾病選自亨廷頓病、阿爾茨海默氏病、腎上腺皮質瘤、黑色素瘤。
8.一種神經性退行疾病或腫瘤的體外檢測方法，其特徵在於，利用權利要求4所述核酸片段或權利要求5所述的抗體來檢測宿主樣品中的多肽的存在或水平。
全文摘要
本發明公開了BPY2IP1基因對CRE活化的抑制作用。本發明還公開了該基因的表達載體及其編碼蛋白的抗體。本發明還公開了該基因，其編碼的蛋白質及蛋白質的抗體在製備預防和治療與CRE相關的疾病上的用途。
文檔編號C12Q1/68GK1952127SQ20051011297
公開日2007年4月25日 申請日期2005年10月18日 優先權日2005年10月18日
發明者于敏, 高霞, 鄧唯唯, 石太平, 張學, 馬大龍 申請人:中國醫學科學院基礎醫學研究所, 北京諾賽基因組研究中心有限公司