抑制打鼾噪音所用的治療劑的製作方法

2023-05-15 13:38:11 1

專利名稱：抑制打鼾噪音所用的治療劑的製作方法
發明的背景夜晚打鼾不僅是一種社會和心理上的問題而己。這種紊亂代表了一種心血管系統疾病的危險因素例如高血壓(Kleitmann，1963；Lugaresiet al.，1983；Hoffstein et al.，1991)和心肌缺血(Waller and Bhopal，1989；Koskenvuo et al.，1985)及中央的局部缺血(Koskenvuo et al.，1987)。另外，患有收縮性呼吸道的病人特別容易產生睡眠窒息的危險，並伴隨著較高的死亡率(He et al.，1988；Hoch et al.，1986)。
軟顎是由橫紋肌、顎擴張肌(M.tensor veli palatini)、翼肌(M.pterygoideus)、頦舌肌(M.genioglossus)、頦舌骨肌(M.geniohyoideus)和胸骨舌骨肌(M.sternohyoideus)所構成。在吸入空氣時，這些肌肉中有一些會被激活；而且，激活程度決定於某些其它的、至今尚未詳細闡明的因素。肌肉交互作用的中斷可能引起打鼾。打鼾的原因之一是在深度睡眠期中顎擴張肌緊張度的增加。在REM期中，肌肉緊張度會降低，而打鼾即減少或停止(Lugaresi et al.，1994)。不過，當肌肉的緊張度增加時，會產生一發聲板(sounding board)，它會因為呼吸空氣的通過而振動。當振動頻率高於20-30Hz時，其即變成可以聽得到。振動頻率愈高，鼾聲的音調(pitch)愈高。該頻率決定於肌肉的緊張度愈強烈緊張的肌肉會比輕微緊張者的頻率振動更高；而鬆弛的肌肉則不會振動。鼾聲的音量與振動的幅度有關，它由通過的呼吸空氣的速度所決定。
當處於病學緊張下的橫紋肌以長效肌肉鬆弛劑予以麻痺時，在此種睡眠期中增加的肌肉緊張度會被抑制而不會發生打鼾。
A、B、C1、D、E、F和G等類型的肉毒毒素(BoNT/X)都是強烈有效的神經毒素，它們可誘導長達數星期之久的橫紋肌麻痺(Ahnert-Hilgerand Bigalke，1995)。麻痺的原因是從神經末端釋放出供給到肌肉的乙醯基膽鹼(acetylcholine)受到抑制。這類毒素都是蛋白質，且包括扇個不同大小的次單元(subunit)，它們彼此以共價鍵結合在一起，其總分子量為MR150,000。這些神經毒素中有一些是包埋在由血凝素(hemaglutinins)和無毒性蛋白質所構成的複合物(總分子量MR900,000)之內(Inoue et al.，1995)。神經毒素的存在是肌肉麻痺所絕對必需的，該神經毒素以其較大的鏈，亦即該毒素的C-端次單元，結合到只在神經細胞末端存在的受體(receptors)上。利用受體-誘導胞內吞噬作用(endocytosis)，毒素會被神經細胞所吞噬。在此，較輕的鏈，N-端次單元，會切斷細胞本身所具的蛋白質，其在含傳遞質囊泡與質膜的融合中具有關鍵性作用(Schiavo and Montecucco，1997)。由於該切斷的結果，融合會受到抑制，並使得傳遞質的釋放受到阻斷肌肉不再收縮。有數種細胞本身的蛋白質(融合蛋白質)，存在於分泌囊泡的膜中和/或質膜中者，會參與該分泌過程或釋放過程。它們也可能存在於細胞溶膠(Zytosol)之內。這些蛋白質分別包括SNAP 25、小突觸小泡蛋白(Synaptobrevin)(VAMP)和突觸融合蛋白(Syntaxin)及它們各自的異構體形式。這些蛋白質會形成所謂的融合複合物而將分泌囊泡固定在質膜的內側。這種固定作用以膜融合為前導，它由緊張度誘導的Ca++的注入(influx)所觸發。由於各融合蛋白質中只有一個被滅活，例如通過蛋白分解性切斷，因而阻止了融合複合物的形成。各融合蛋白質都是上文所提及的、含有輕鏈的神經毒素目標分子。舉例而言，BoNT/B、D、F、和G會切斷VAMP，而BoNT/A、C1和E會滅活SNAP 25，而Syntaxin會被BoNT/C1切斷。而且，VAMP會被破傷風毒素(TeNT)所滅活，該毒素也屬於梭菌神經毒素組中的一員(Ahnert-Hilger and Bigalke，1995)。
BoNT/A是己在治療上用來治療各種不同形式的局部性、但時常為非常疼痛且會對患者帶來極大傷害的肌緊張，例如痙攣性斜頸(Torticollis spasmodicus)、臉痙攣(Blepharospasmus)、各種痙攣狀態及類似情況(Cardoso and Jankovic，1995)。毒素注射到各相應的肌肉內。數天之後，肌肉即麻痺。病人沒有疼痛，且可以再度地完成其每日的工作。不良的副作用很少發生，而且完全是可逆的，這同所需的功效一樣。
本發明的目的可由抑制打鼾噪音的治療劑予以實現，該治療劑的特徵在於其為梭菌毒素和/或該毒素的複合物，或者是含有該毒素或複合物。
因此，本發明是關於一種抑制打鼾噪音的治療劑，其特徵在於，它是一種高純度的梭菌毒素BoNT/A。
據此，可以將BoNT/A以最小的劑量注射到軟顎的相應肌肉內，例如注射到顎擴張肌之內。使用相同的注射技術亦可治療痙攣性發音障礙(spasmodic dysphonia)，它也是因某些軟顎肌肉緊張度增加所導致的結果(Schoenweiler et al.，1998)。
另外，本發明也涉及一種抑制打鼾噪音的治療劑，其特徵在於，它是一種高純度的梭菌毒素BoNT/B、BoNT/C1、BoNT/D、BoNT/E、BoNT/F和/或BoNT/G。
本發明還涉及一種抑制打鼾噪音的治療劑，其特徵在於，它是一種高純度的梭菌毒素TeNT。
本發明還涉及一種抑制打鼾噪音的治療劑，其特徵在於，其為(i)一種作為梭菌毒素的雜合蛋白質(hybrid protein)，其包括下列組中梭菌毒素的輕亞基及下列相同組中不同梭菌毒素的重亞基，所述組包括BoNT/A、BoNT/B、BoNT/C1、BoNT/D、BoNT/E、BoNT/F、BoNT/G和TeNT；或(ii)一種上述(i)中雜合蛋白質的混合物。
本發明還涉及一種治療劑，其特徵在於，它是一種複合物，包括(i)一種梭菌毒素或一種雜合蛋白質以及(ii)一種或多種治療耐受性良好的血凝素和/或一種或多種治療耐受性良好的無毒性蛋白質。
本發明還涉及一種治療劑，其特徵在於，它是一種野生型複合物。
本發明還涉及一種治療劑，其特徵在於，所述梭菌毒素是一種重組蛋白質。
本發明還涉及一種治療劑，其特徵在於，所述梭菌毒素為一種凍幹的蛋白質。
本發明還涉及一種治療劑，其特徵在於，它是水溶液形式，特別是注射水性溶液。
本發明還涉及一種治療劑，其特徵在於，所述該梭菌毒素或其複合物是一種生理食鹽水溶液的形式。
最後，本發明還涉及一種治療劑，其特徵在於，使用微脂粒(liposomes)作為所述梭菌毒素或其複合物的載體。
相對於複合物的注射，純神經毒素的投藥更為優選，這是因為只有神經毒素才提供活性。由於神經毒素具有的分子量比複合物小，其可通過擴散而更快速地分布在肌肉組織之內，結合到受體上，且在被神經末端吞入之後即可抑制乙醯基膽鹼的釋放。其它的身體外來性蛋白質針對肌肉麻痺而言本身沒有作用。不過，它們會促成免疫系統的刺激，因為它們可作為免疫佐劑並增強免疫反應。較強的免疫反應對於接種而言是合乎需要的。不過，對於醫治打鼾所用的治療劑而言，免疫反應可能導致不需要的抗體形成，而在補充劑量的情況中這些抗體可能在該毒素變成活性之前將其中和。
所有的體孔(body orifices)，也包括鼻-咽喉部位，都富含淋巴組織；淋巴組織可保護進入通道以對抗傷害性物質。在發生傷害和體外物質穿透進入這些部位時，會吸引來巨噬細胞，將這些外來物質吞噬掉，將其消化，並將該外來物質的片段排出，同時細胞自身的蛋白質在其細胞表面上。在脾臟和其它的淋巴組織中，淋巴細胞會檢測出這些片段，並形成免疫球蛋白，與自由地存在於該組織內的外來物質結合，並將其中和。
除其它因素外，巨噬細胞的吸引程度還取決於外來物質的濃度及巨噬細胞的有效性。巨噬細胞的有效性不受影響，而且顎部位富含此類細胞。為了將免疫反應的概率保持到最小，外來蛋白質亦即神經毒素和血凝素的質量必須維持儘可能地低，這是因為被非活性外來物質(免疫佐劑)吸引來的大量巨噬細胞當然也會將組織內所含的神經毒素吞噬。神經毒素的質量可以由具有高度生物活性的BoNT予以減低，使其達到僅具有活性劑量之程度。因為伴隨的蛋白質不會對所需的功效有所幫助，所以根據本發明它們可以予以脫除。
實施例13個健康男人在挺直坐著的情況下用視頻喉鏡檢查並進行間接注射。在毒素注射前30分鐘，由皮下投藥硫酸阿拖品(0.5毫克)以抑制唾液分泌。用加入鹽酸腎上腺素(1.2毫克)的鹽酸丁卡因(tetracainehydrochloride)(1％)將口咽、咽中部(mesopharynx)和喉予以表面麻醉以產生局部脈管收縮。將凍幹、純化的BoNT/A(亦即沒有體外伴隨蛋白質，BioteCon，Berlin)溶解在生理食鹽水溶液p.i.中(300微微克/毫升)。注射是用彎曲的插管在視頻控制下進行。在用插管穿刺的過程中，要求每個人正常地呼吸。在顎擴張肌的3個部位分別對第一個試驗者注射100微升、對第二個試驗者注射200微升及對第三個試驗者注射300微升。因而毒素的劑量為50-150微微克/顎，相當於8～25U。顎肌肉在3～5天內鬆弛。毒素的效用持續3～4個月。在這段時間之後，打鼾噪音再度發生，開始時柔和，然後鼾聲逐漸地響亮。
通過主觀(訪談參與者)以及客觀測量，來測定出鼾聲的減低。顎肌肉的鬆弛程度是由鼾聲噪音的頻率分析而測定的。與毒素的劑量有關，鼾聲噪音的頻率可以降低。另外，鼾聲噪音的大小也因上呼吸道截面的擴張而減低。由於擴張的結果，呼吸空氣的流速減低，因而軟顎的振動幅度隨之減小。在此期間沒有發生吞咽或語言上的損傷。
通過主觀(訪談參與者)以及客觀測量，來測定出鼾聲的減低。顎肌肉的鬆弛程度是按實施例1中所述的方法進行客觀地測定。在注射此種毒素亞型之後，沒有發生吞咽或語言上的損傷。
通過主觀(訪談參與者)以及客觀測量，來測定出鼾聲的減低。顎肌肉的鬆弛程度是按實施例1中所述的方法進行客觀地測定。在注射此種毒素亞型之後，沒有發生吞咽或語言上的損傷。
參考文獻Ahnert-Hilger，G.Bigalke，H.破傷風和肉毒桿菌神經毒素中毒的分子學研究，Progress Neurobiol.4683-96，1995.Cardoso，F.，Jankovic，J.肉毒桿菌神經毒素的臨床應用，TopMicrobiol.Immunol.195123-141.1995.Goeschel，H.，Wohlfahrt，K.，Frevert，J.et al.肉毒桿菌A毒素的療法中和抗體和非中和抗體——治療效果，ExperimentalNeurology1496-102.1997.He J.，Kryger，M.H.，Zorich，F.J.，et al.梗阻性睡眠呼吸暫停的死亡率和呼吸暫停指數，Chest 949-14，1988.Hoch，C.C.，Reynolds，C.F.III，Kupfer，D.J.，et al.在正常老化和病理老化中睡眠的呼吸紊亂，J.Clin.Psychol.47499-503，1986.Hoffstein，V.，Mateika，J.H.，Mateika，S.打鼾和睡眠的機制，Am.Rev.Respir.Dis.14392-96，1991.Kleitman，N.睡眠和失眠，Chicago，The University of Chicago Press，1963.Koskenvuo，M.，Kaprio，J.，Partinen，M.，et al.打鼾是高血壓和心絞痛的危險因素，Lancet i893-896，1985.Koskenvuo，M.，Kaprio，J.，Telakivi，T.，et al.打鼾是人類局部缺血心臟病和中風的危險因素，Br.Med.J.29416-19，1987.Lugaresi，E.，Cirignotta，F.，Montagna，P.，et al.打鼾病理、臨床和醫治，In Abnormal sleep.621-629，1994.Lugaresi，E.，Mondini，S.，Zucconi，M.，et al.重鼾者疾病的發病階段，A proposal.Bull.Eur.Physiopathol.Respir.19590-594，1983.Schiavo，G.，Montecucco，C.肉毒桿菌毒素和破傷風毒素的結構和作用方式，ClostridiaMol.Biol.Pathog.，295-321，1997.Schoenweiler，R.，Wohlfahrt，K.，Dengler，R.，Ptok，M.在內源和外源功能亢進的收肌型痙攣性發音困難者的聲門上注射肉毒桿菌A型毒素，Laryngoscope10855-63，1998.Waller，P.C.，Bhopal，R.S.打鼾是脈管病的原因嗎？流行病回顧，Lancet i143-146.1989.
權利要求
1.一種抑制打鼾噪音的治療劑，其特徵在於，它是一種高純度的梭菌毒素BoNT/A。
2.一種抑制打鼾噪音的治療劑，其特徵在於，它是一種高純度的梭菌毒素BoNT/B、BoNT/C1、BoNT/D、BoNT/E、BoNT/F和/或BoNT/G。
3.一種抑制打鼾噪音的治療劑，其特徵在於，它是一種高純度的梭菌毒素TeNT。
4.一種抑制打鼾噪音的治療劑，其特徵在於，它是(i)一種作為梭菌毒素的雜合蛋白質，其包括下列組中梭菌毒素的輕亞基及下列相同組中不同梭菌毒素的重亞基，所說的組包括BoNT/A、BoNT/B、BoNT/C1、BoNT/D、BoNT/E、BoNT/F、BoNT/G和TeNT；或(ii)一種上述(i)中雜合蛋白質的混合物。
5.如前述任一權利要求的治療劑，它是一種複合物，包括(i)一種如權利要求1～3中任一項所述的梭菌毒素，或者一種如權利要求4所述的雜合蛋白質；以及(ii)一種或多種治療耐受性良好的血凝素和/或一種或多種治療耐受性良好的無毒性蛋白質。
6.如權利要求5的治療劑，其特徵在於，它是一種野生型複合物。
7.如前述任一權利要求的治療劑，其特徵在於，所述梭菌毒素為一種重組蛋白質。
8.如前述任一權利要求的治療劑，其特徵在於，所述梭菌毒素為一種凍幹的產品。
9.如權利要求1～7中之一的治療劑，其特徵在於，它是水溶液的形式，特別是一種水性注射溶液。
10.如權利要求9的治療劑，其特徵在於，所述梭菌毒素或其複合物為生理食鹽水溶液的形式。
11.如權利要求1～7中之一的治療劑，其特徵在於，用微脂粒作為所述梭菌毒素或其複合物的載體。
全文摘要
本發明涉及一種抑制打鼾噪音所用的治療劑。它由梭菌毒素(Clostridium toxin)或該毒素的複合物組成,或含有該毒素或其複合物。
文檔編號A61P11/02GK1329501SQ99813950
公開日2002年1月2日 申請日期1999年12月10日 優先權日1998年12月10日
發明者漢斯·比加爾克, 于爾根·弗雷弗特 申請人:拜歐特康生化科技開發與諮詢有限公司