作為akt蛋白激酶抑制劑的羥基化嘧啶基環戊烷的製作方法

2023-05-15 11:23:06 2

專利名稱：作為akt蛋白激酶抑制劑的羥基化嘧啶基環戊烷的製作方法
作為AKT蛋白激酶抑制劑的羥基化嘧啶基環戊烷發明背景 發明領域本發明涉及絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(如AKT及相關激酶)的新型抑制劑、含有 所述抑制劑的藥物組合物以及製備這種抑制劑的方法。所述抑制劑可用於治療例如哺乳動 物的過度增生性疾病，例如癌症和炎症。
背景技術：
的說明蛋白質激酶(PK)是通過從ATP上傳送末端(Y)磷酸來催化蛋白質的酪氨酸、 絲氨酸和蘇氨酸殘基上的羥基發生磷酸化作用的酶。通過信號轉導途徑，這些酶調節細 胞生長、分化和增殖，即事實上細胞生命的所有方面無論如何都取決於PK活性(Hardie， G. ^P Hanks, S. (1995) The Protein KinaseFacts Book. I and II 蛋白激酶檔案I 和 II)， Academic Press, San Diego, CA) 0此外，在多種疾病中都涉及異常的PK活性，從相對不危 及生命的疾病比如銀屑病到極端惡性的疾病比如惡性膠質瘤(腦癌)。蛋白激酶是治療性 調節的一類重要靴(Cohen, P. (2002)Nature Rev. Drug Discovery 1 :309)。值得注意的是，非典型蛋白磷酸化和/或表達常常被報導是癌症中細胞異常增 殖、轉移和細胞存活的成因之一。其中包括Akt、VEGF, ILK、ROCK、p70S6K、Bel、PKA, PKC, Raf、Src, PDK1、ErbB2、MEK, IKK、Cdk, EGFR、BAD、CHK1、CHK2 禾口 GSK3 在內的各種激酶的異 常調節和/或表達也已與癌症特異性地相關聯。蛋白質激酶包括兩種類型蛋白質酪氨酸激酶(PTK)和絲氨酸-蘇氨酸激酶 (STK) 0蛋白激酶B/Akt酶是一組絲氨酸/蘇氨酸激酶，在多種人類腫瘤中過表達。表徵 最為充分的PI3K脂質產物靶之一是信號轉導途徑中PI3K下遊的57KD的絲氨酸/蘇氨 酸蛋白激酶 Akt (Hemmings，B. A. (1997) Science275 628 ；Hay N. (2005) Cancer Cell 8 179-183)。Akt是急性轉化性反轉錄病毒AKT8的原癌基因v_akt的人類同源物。由於其 與蛋白激酶A和C有高度序列同源性，Akt也被稱為蛋白激酶B (PKB)以及A和C相關物 (Related to Aand C，RAC)。已知存在Akt的三種同種型，S卩Aktl、Akt2和Akt3，它們有80% 的總體同源性(Staal，S. P. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. 84 5034 ；Nakatani，K. (1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 257 906 ；Li 等人(2002) Current Topics in Med. Chem. 2 939-971 ；WO 2005/113762)。Akt同種型有共同的結構域組織，由在N末端的普列克底物 蛋白同源性結構域、激酶催化結構域、和在C末端的短調節區組成。另外，Akt2和Akt3 二 者都表現出有剪接變體。Akt被PtdInd (3，4，5) P3募集到細胞膜時，同種型Aktl (PKBa)、 Akt2 (PKB β )和 Akt3 (ΡΚΒ γ )被 PDKl 分別於 Τ308、Τ309 和 Τ305 以及分別於 S473、S474 和 S472磷酸化(活化)。這種磷酸化由一種尚未知曉的激酶(推定名為PDK2)進行，雖然已 表明 PDKl(Balendran，Α.，(1999) Curr. Biol. 9 :393)、自磷酸化(Toker, A. (2000) J. Biol. Chem. 275:8271)和整聯蛋白相關激酶(ILK) (Delcommenne, M. (1998)Proc. Natl. Acad. Sci. USA,95 11211)牽涉在該過程中。Akt活化要求在C末端疏水基序中殘基Ser 473 上磷酸化(Brodbeck 等人(1999) J. Biol. Chem. 274 :9133_9136 ;Coffer 等人(1991)Eur.
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化活化了該激酶，但其最大激酶活性則需要二磷酸化。認為AKT通過抑制細胞凋亡並增強血管生成和增殖而發揮其對癌症的作用 (Toker等人(2006) Cancer Res. 66(8) 3963-3966)。AKT在許多形式的人類癌症中過 表達，這些癌症包括但不限於結腸癌(Zinda等人(2001)Clin. Cancer Res. 7 :2475)、 卵巢癌(Cheng 等人(1992)Proc. Natl. Acad. Sci. USA89 :9267)、腦癌(Haas Kogan 等人 (1998)Curr. Biol. 8 :1195)、肺癌(Brognard 等人(2001)Cancer Res. 61 :3986)、胰腺癌 (Bellacosa 等人(1995) Int. J. Cancer64 :280_285 ；Cheng 等人(1996)Proc. Natl. Acad. Sci. 93 3636-3641)、前列腺癌(Graff 等人(2000) J. Biol. Chem. 275 24500)和胃癌 (Staal 等人(1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84 :5034_5037)。為了靶向的小分子抑制劑治療，已經研究了 PI3K/Akt/哺乳動物雷帕黴素靶蛋白 (mammalian target of rapamycin,mT0R)途徑(Georgakis, G.禾口 Younes，A. (2006) Expert Rev. Anticancer Ther.6(1) 131-140 ；Granville φ 人(2006)Cl in. Cancer Res. 12(3) 679-689)。PI3K/Akt信號轉導的抑制引起凋亡並抑制具有升高的Akt水平的腫瘤細胞的 生長(Kim 等人(2005) CurrentOpinion in Investig. Drugs 6 (12) 1250-1258 ;Luo 等人 (2005)Molecular CancerTher. 4 (6) :977_986)。靶向異常調節並最終導致疾病的途徑的激酶抑制劑的開發，對於醫藥界具有巨大 的倫理和商業上的利益。作為獨立療法或與其它已接受方法聯合，抑制以下的化合物將成 為有價值的抗癌藥=(I)Akt募集到細胞膜，(2)由PDKl或PDK2活化，(3)底物磷酸化，或 (4) Akt下遊靶之一。美國專利申請公開第2005/0130954除了其它以外，公開了作為AKT抑制劑的多種 化合物。據說這些化合物可用於治療過度增生性疾病如癌症。發明概述本發明提供了抑制AKT蛋白激酶的新化合物。本發明化合物具有作為可通過抑制 AKT蛋白激酶來治療的疾病和疾患的治療劑的功用。更具體地，本發明包括具有式I的化合物
和其藥學上可接受的鹽。本發明還提供了包含式I化合物或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物。在又一個方面，本發明提供治療哺乳動物的AKT蛋白激酶介導的疾病或醫學狀況 的方法，包括向所述哺乳動物施用有效治療或預防所述疾病的量的式I化合物或其藥學上 可接受的鹽。可按照本發明方法治療的AKT蛋白激酶介導的疾病包括但不限於炎性、過度 增生性、心血管、神經變性、婦科或皮膚疾病和病症。在進一步的方面，本發明提供抑制哺乳動物中AKT蛋白激酶產生的方法，該方法 包括向所述哺乳動物施用有效抑制AKT蛋白激酶產生的量的式I化合物或其藥學上可接受 的鹽。在進一步的方面，本發明提供抑制AKT蛋白激酶活性的方法，包括使所述激酶與 式I化合物接觸。本發明化合物可以有利地與其它已知的治療劑聯合使用。因此，本發明還提供了 包含式I化合物或其藥學上可接受的鹽聯合第二治療劑的藥物組合物。本發明還提供了用作治療AKT蛋白激酶介導的疾患的藥物的式I化合物和其藥學 上可接受的鹽。本發明的另一方面是式I化合物或其藥學上可接受的鹽用於治療的用途。在一個 實施方案中，所述治療包括治療AKT蛋白激酶介導的疾患。本發明進一步提供了用於治療AKT蛋白激酶介導的疾病或病症的藥盒，所述藥盒 包含式I化合物或其藥學上可接受的鹽、容器、和任選地指示治療的包裝說明書或者標籤。 藥盒還可包含可用於治療所述疾病或病症的第二化合物或包含第二藥劑的製劑。本發明的另一方面提供式I化合物在治療過度增生性疾病中的用途。在本發明的 進一步方面，該過度增生性疾病是癌症。本發明還包括此發明化合物的製備方法、分離方法和純化方法。本發明的其它優點和新特徵部分地將在下文的描述中敘述，部分在本領域技術人 員檢查下文描述時是明顯的，或者可以通過實施本發明而獲悉。本發明的優點可以利用所 附權利要求書中具體指出的手段、組合、組合物和方法來實現和達到。發明詳述現在將參考本發明的某些實施方案進行詳述，其實施例圖解說明於隨後的結構和 結構式中。雖然本發明將結合例證實施方案進行描述，但是應當理解，並不意圖將本發明 限於那些實施方案。與此相反，本發明意圖涵蓋可以包括在如所附權利要求書所限定的本 發明範圍內的所有替換方案、變型和等價物。本領域熟練技術人員應當認識到，可以將與在 此所述類似或者等價的多種方法和材料用於本發明實踐中。本發明並不僅僅限於所述的方 法和材料。在包含的一篇或者多篇文獻和類似材料不同於本申請或者與本申請衝突的情形 中，包括但不限於定義的術語、術語應用、描述的方法等等，以本申請為準。^X本文所用的術語「一」是指一種或多種。本文所用的術語「此發明化合物」、「本發明化合物」和「式I化合物」包括式I化
合物和其藥學上可接受的鹽。短語「有效量」是指當施用於需要所述治療的哺乳動物時，足以實現以下的化合物的量⑴治療或者預防由一種或多種AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、其它絲氨酸/蘇氨酸激 酶、和/或雙特異性激酶的活性介導的具體疾病、疾患或者病症，(ii)減輕、改善或者消除 所述具體疾病、疾患或者病症的一種或者多種症狀，或者(iii)預防或者延遲在此所述的 具體疾病、疾患或者病症的一種或者多種症狀的發作。在癌症的情形中，有效量的藥物可以 降低癌細胞的數目；降低腫瘤大小；抑制(即，在一定程度上減緩和優選地終止)癌細胞浸 潤到外周器官中；抑制(即，在一定程度上減緩和優選地終止)腫瘤轉移；在一定程度上抑 制腫瘤生長；和/或在一定程度上緩解與癌症相關的一種或者多種症狀。在藥物可以阻止 生長和/或殺死已有癌細胞的程度上，它可以是抑制細胞的和/或細胞毒性的。對於癌症 治療，效力可以通過，例如評價疾病發展的時間(time to disease progression,TTP)和/ 或確定響應速率(response rate, RR)來測量。「治療」意欲至少指哺乳動物如人類的疾病狀況的減輕，所述疾病狀況至少部分 由於一種或多種AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、其它絲氨酸/蘇氨酸激酶、和/或雙特異性激 酶的活性而造成的。術語「治療(treat)」和「治療(treatment) 」涉及治療性治療和防患 性或者預防性措施，其中目的是預防或者延緩(減小)不期望的生理變化或者紊亂。對於 本發明的目的，有益或者期望的臨床結果包括但不限於症狀的減輕、疾病程度的降低、穩定 (即，未惡化)的疾病狀態、疾病發展的延遲或者減緩、疾病狀態的改善或者減輕和可檢測 或不可檢測的症狀緩解(無論部分還是總體)。「治療(treatment)」還可以表示同如果不 接受治療的預期存活相比，延長的存活期。需要治療的那些患者包括已經患有疾患或者病 症的那些，以及被發現傾向於患有疾病狀況但還未診斷為患有該疾病狀況的那些；調節和 /或抑制所述疾病狀況。術語「治療(treating)」、「治療(treat)」或「治療(treatment)」 包涵預防性即防患性治療和緩和性(palliative)治療二者。本文所用的術語「哺乳動物」是指患有本文所述疾病或處於發展本文所述疾病的 風險中的溫血動物，包括但不限於豚鼠、犬、貓、大鼠、小鼠、倉鼠和包括人類的靈長類。「化療劑」是可用於治療癌症而不論其作用機制的化學化合物。化療劑包括用於 「靶向治療」和常規化療的化合物。化療劑的實例包括埃羅替尼(TARCEVA ，GenenteCh/OSI Pharm.)、硼替佐 米(VELCADE , Millennium Pharm.)、氟維司群(FASLODEX , AstraZeneca)、 索坦(SUl 1248，Pfizer)、來曲唑(FEMARA ，Novartis)、伊馬替尼甲磺酸鹽 (GLEEVEC ，Novartis)、PTK787/ZK 222584 (Novartis)、奧沙禾Ij 鉬(Eloxatin , Sanofi)、5-FU (5_氟尿嘧啶)、亞葉酸、雷帕黴素(西羅莫司，RAPAMUNE , Wyeth)、 拉帕替尼(TYKERB ，GSK572016，Glaxo SmithKline)、洛那法尼(SCH 66336)、索 拉非尼(BAY43_9006，Bayer Labs)、伊立替康(CAMPTOSAR , Pfizer)和吉非 替尼(IRESSA ，AstraZeneca)、AG1478、AG1571 (SU 5271 ；Sugen)、比如硫替派和 CYTOXAN 環磷醯胺的烷基化劑；烷基磺酸酯類，比如白消安、英丙舒凡和派泊舒凡； 氮丙啶類(aziridines)，比如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌、美妥替派(meturedopa)和烏 瑞替派(uredopa)；乙基蜜胺類類(ethylenimines)和甲基蜜胺類(methylamelamines)， 包括六甲蜜胺、三亞乙基蜜胺、三亞乙基磷醯胺、三亞乙基硫代磷醯胺和三羥甲蜜胺；多聚 乙醯類(特別是布拉他辛和布拉他辛酮)；喜樹鹼(包括合成類似物託泊替康)；苔蘚抑 素；callystatin ；CC-1065 (包括它的阿多來新、卡折來新和比折來新合成類似物)；隱藻素類(特別是隱藻素1和隱藻素8)；多拉司他汀；倍癌黴素(duocarmycin)(包括合成類 似物，KW-2189 和 CB1-TM1)；軟珊瑚醇(eleutherobin)；水鬼蕉鹼(pancratistatin)；匍 枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海綿抑制素(spongistatin)；氮芥類，比如苯丁酸氮芥、萘氮 芥、chlorophosphamide、雌氮芥、異環磷醯胺、氮芥、氮芥氧化物鹽酸鹽(mechlorethamine oxide hydrochloride)、米爾法蘭(melphalan)、新恩比興(novembichin)、膽留醇對苯乙 酸氮芥(phenesterine)、松龍苯芥、氯乙環磷醯胺、尿嘧啶氮芥；硝基脲類(nitrosureas)， 比如亞硝脲氮芥(carmustine)、吡葡亞硝脲(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、 環己亞硝脲(Iomustine)、嘧啶亞硝脲(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素， 比如烯二炔抗生素(例如，卡奇黴素(calicheamicin)，特別是卡奇黴素Y II和卡奇黴素 ω Il (Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994)33 183-186)；達內黴素(dynemicin)，包括達內 黴素A ；二碳磷酸鹽化合物(bisphosphonate)，比如氯膦酸鹽(clodronate)；埃斯培拉黴 素(esperamicin)；以及新制癌菌素生色團和相關的色蛋白烯二炔抗生素生色團)、阿克拉 黴素類(aclacinomysins)、方文線菌素、氨茴黴素(authramycin)、重氮絲氨酸(azaserine)、 博來黴素、放線菌素C、卡柔比星(carabicin)、洋紅黴素、嗜癌黴素(carzinophilin)、 色黴素(chromomycini s)、放線菌素D、道諾紅菌素、地託比星、6-重氮-5-氧代-L-正 亮氨酸、ADRIAMYCIN (阿黴素)、嗎啉代-阿黴素、氰基嗎啉代-阿黴素、2-吡咯 烷基-阿黴素和去氧阿黴素)、表柔比星、依索比星、依達比星、麻西羅黴素、比如絲裂黴 素C的絲裂黴素、黴酚酸、諾加黴素、橄欖黴素、培洛黴素、泊非黴素、嘌呤黴素、三鐵阿黴 素、羅多比星、鏈黑菌素、鏈脲黴素、殺結核菌素、烏苯美司、新制癌菌素、佐柔比星；抗代謝 物，比如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，比如二甲葉酸、甲氨蝶呤、蝶羅呤 (pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤類似物，比如氟達拉濱、6-巰基嘌呤、硫咪 嘌呤、硫鳥嘌呤；嘧啶類似物，比如環胞苷、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、雙脫氧 尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷、依諾他濱、氟尿苷；雄激素，比如二甲睪酮、屈他雄酮 丙酸鹽、環硫雄醇、美雄烷、睪內酯；抗腎上腺類(anti-adrenals)，比如氨魯米特、米託坦、 曲洛司坦；葉酸補充劑，比如亞葉酸(frolinic acid)；醋葡醛內酯；醛磷醯胺苷；氨基乙 醯丙酸；恩尿嘧啶；安吖啶；bestrabucil ；比生群；依達曲沙(edatraxate) ；defofamine ； 地美可辛；地吖醌；依氟鳥氨酸(elfornithine)；依利醋銨；埃博黴素(印othilone)；乙環 氧啶；硝酸鎵；羥基脲；蘑菇多糖；氯尼達明(Ionidainine)；美登素類，比如美登素和美登 木素；丙脒腙；米託蒽醌；莫哌達醇(mopidanmol) ；nitraerine ；噴司他丁 ；蛋氨氮芥；卩比柔 比星；洛索蒽醌；鬼臼酸；2-乙胼；丙卡巴胼；PSK 多糖絡合物(JHS NaturalProducts, Eugene, OR)；雷佐生；根黴素；西佐喃；鍺螺胺；細交鏈孢菌酮酸；三亞乙基亞胺苯醌；2， 2』，2」_三氯三乙胺；單端孢黴烯族毒素類(特別是T-2毒素、黏液黴素AGerracurin Α)、杆孢菌素A和蛇形菌素)；尿烷；去乙醯長春醯胺；氮烯唑胺；甘露醇氮芥；二溴甘露 醇；二溴衛矛醇；哌泊溴烷；gacytosine ；阿糖胞苷(「Ara-C")；環磷醯胺；硫替派；紫杉 烷類，例如，TAXOL (紫杉醇；Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J·)、 ABRAXANE (Cremophor-free)、白蛋白-設計的納米顆粒紫杉醇製劑(albumin-engineered nanoparticle formulations of paclitaxel, AmericanPharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois)和 TAXOTERE (紫杉萜(doxetaxel) ； Rhone -Poulenc Rorer, Antony, France)；苯丁酸氮芥(chloranmbucil) ；GEMZAR (吉西他濱)；6_ 硫代鳥嘌呤；巰基嘌呤；甲氨蝶呤；鉬類似物，比如順氯氨鉬和卡鉬；長春花鹼；依託泊苷 (VP-16)；異環磷醯胺；米託蒽醌；長春新鹼；NAVELBINE (長春瑞濱)；諾安託潛尼 泊苷；依達曲沙；道諾黴素；氨基蝶呤；卡培他濱(XELODA );伊班膦酸鹽；CPT-Ii ；拓撲 異構酶抑制劑RFS 2000;二氟甲基鳥氨酸(DMFO)；類視黃醇(retinoids)，比如視黃酸；和 任何上述物質的藥學上可接受的鹽、酸和衍生物。還包括在「化療劑」定義中的有(i)用於調節或者抑制激素對腫瘤的作用的 抗激素劑，比如抗雌激素和選擇性雌激素受體調節劑(selectiveestrogen receptor modulator, SERM)，包括，例如他莫昔芬、(包括NOLVADEX ;枸櫞酸他莫昔芬)、 雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬、鹽酸雷洛昔芬、LY117018、奧那司酮 和FARESTON (枸櫞酸託瑞米芬)；(ii)抑制芳香酶的芳香酶抑制劑，芳香酶調 節腎上腺中雌激素的形成，比如，例如，4(5)-咪唑類、氨魯米特(aminoglutethimide), MEGASE (乙酸甲地孕酮)、AROMASIN (依西美坦；Pfizer)、福美司坦 (formestanie)、法倔唑、RIVISOR (伏氯唑)、FEMARA (來曲唑；Novartis) 和 ARIMIDEX (阿那曲唑(anastrozole) ；AstraZeneca) ； (iii)抗雄激素類，比 如氟他米特、尼魯米特、比卡魯胺、亮丙立得(leuprolide)和戈舍瑞林；以及曲沙他 濱(1，3_ 二氧戊環核苷胞嘧啶類似物)；(iv)蛋白激酶抑制劑；(ν)脂類激酶抑制劑； (vi)反義寡核苷酸，特別是抑制與異常細胞增殖相關的信號途徑中的基因的表達的那 些，所述基因比如，例如PKC-α、Ralf和H-Ras ； (vii)核酶，比如VEGF表達抑制劑(例 如，ANGIOZYME )和HER2表達抑制劑；(viii)疫苗，比如基因療法疫苗，例如 ALLOVECTIN 、LEUVECTIN 和VAXID ； PROLEUKIN rlL-2 ；拓撲異 構酶1抑制劑，比如:LURTOTECAN ; ABARELIX rmRH ； (ix)抗血管生成劑，比如 貝伐珠單抗(bevacizumab，AVASTIN ，Genentech)；和(χ)任何上述化療劑的藥學上可 接受的鹽、酸和衍生物。還包括在「化療劑」定義中的有治療性抗體，比如阿侖珠單抗(alemtuzumab， Campath)、貝伐珠單抗(AVASTIN ，Genentech)；西妥昔單抗(ERBITUX , Imclone)；帕木單抗(panitumumab，VECTIBIX , Amgen)、利妥昔單抗(RITUXAN , Genentech/Biogen Idee)、培妥珠單抗(pertuzumab, OMNITARG ,2C4,Genentech)、曲 妥單抗(HERCEPTIN ，Genentech)、託西莫單抗單抗(Bexxar，Corixia)和抗體藥物軛 合物奧吉妥珠單抗(gemtuzumab ozogamicin, MYLOTARG , ffyeth) 具有作為聯合本發明的PI3K抑制劑的化療劑的治療潛力的人源化單克隆抗體 包括阿侖珠單抗、阿泊珠單抗(apolizumab)、阿塞珠單抗(aselizumab)、atIizumab、 bapineuzumab、貝(bevacizumab)、貞比(bivatuzumab mertansine) > 莫坎妥珠單抗(cantuzumabmertansine)、西利珠單抗(cedelizumab)、賽妥珠單抗 (certolizumab pegol)、cidfusituzumab> cidtuzumab、達克_單 (daclizumab)、依庫 珠單抗(eculizumab)、依法珠單抗(efalizumab)、依帕珠單抗(印ratuzumab)、厄利珠單 抗(erlizumab)、泛維珠單抗(felvizumab)、芳妥珠單抗(fontolizumab)、奧吉妥珠單 抗、奧英妥珠單抗(inotuzumab ozogamicin)、ipilimumab、拉貝珠單抗(Iabetuzumab)、 林妥珠單抗(Iintuzumab)、馬妥珠單抗(matuzumab)、美泊珠單抗(mepolizumab)、 莫維珠單抗(motavizumab)、motovizumab、那他珠單抗(natalizumab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、nolovizumab、numavizumab、ocrelizumab、奧馬珠單抗(omalizumab)、中白 禾1J珠單抗(palivizumab) > 中白考珠單抗(pascolizumab) > pecfusituzumab、pectuzumab、 ) > in1 ) (pexelizumab) > ralivizumab> W ) (ranibizumab) > Jfnf
禾1J珠單抗(reslivizumab)、 卷禾[I珠單抗、resyvizumab、羅維珠單抗(roveIizumab)、盧 利珠單抗(ruplizumab)、西羅珠單抗(sibrotuzumab)、西利珠單抗(siplizumab)、索 i _ Ui (sontuzumab) > ftk(tacatuzumab tetraxetan)、tadocizumab> ftk ^1J ^
單抗(talizumab)、特非珠單抗(tefiazumab)、託珠單抗(tocilizumab)、託利珠單抗 (toralizumab) > 曲司(trastuzumab) > tucotuzumab Hf 貞白 、tucusituzumab>
umavizumab>-Sj3^-^-Jji (urtoxazumab)禾口(visilizumab)。AKT抑制劑本發明的式I化合物可用於抑制AKT蛋白激酶。這類化合物具有用作可通過抑制 AKT蛋白激酶信號轉導途徑以及酪氨酸和絲氨酸/蘇氨酸激酶受體途徑而得以治療的疾病 的治療劑的功用。尤其是，發現在環戊二烯並[d]嘧啶上具有7-羥基的式I化合物對AKT相對於蛋 白激酶A (PKA)的選擇性是至少50倍。例如，對AKT相對於PKA的選擇性是至少100倍，作 為進一步的實例，是至少150倍。超出PKA的選擇性是期望的，因為PKA牽涉在對於許多細 胞類型的正常功能和生理學重要的許多細胞過程中。另外，不認為PKA的抑制有助於AKT 抑制的抗增殖和促凋亡作用。因此，PKA的抑制可導致與AKT抑制無關的不良事件而無助 於AKT抑制的疾病修正益處。式I化合物還可用作除了 AKT以外的酪氨酸激酶以及絲氨酸和蘇氨酸激酶的抑制 劑。總之，本發明的一方面包括式I化合物和藥學上可接受的鹽。 式I化合物包括該化合物的藥學上可接受的鹽。短語「藥學上可接受的」表示物質或者組合物與構成製劑的其它成分和/或其所 治療的哺乳動物化學性質和/或毒理學上相容。
另外，本發明化合物可以形成鹽。鹽的實例包括通過使本發明化合物與無機酸或 有機酸或無機鹼反應而製得的鹽，此類鹽包括但不限於硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫 酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、 碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙 炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、丁炔-1， 4-二酸鹽、己炔-1，6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯代苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、 羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、苯基乙酸鹽、苯基 丙酸鹽、苯基丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、y -羥基丁酸鹽、乙醇酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、丙 磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽和扁桃酸鹽。因為本發明的單個化合物可能包括多於 一個酸部分或鹼部分，本發明化合物可包括單個化合物的單鹽、二鹽或三鹽。在某些實施方案中，該鹽是「藥學上可接受的鹽」，除非另外指明，否則其包括保留 所指化合物的相應游離酸或鹼的生物效力，並且不是生物學或其它方面不期望的鹽。式I化合物還包括不必是藥學上可接受的鹽的其它鹽，其可用作用於製備和/或 純化式I化合物和/或用於分離式I化合物的中間產物。本發明還包括同位素標記的本發明化合物，除了一個或多個原子被具有與自然界 中通常發現的原子量或者質量數不同的原子量或者質量數的原子替換的事實以外，其等同 於在此所述的那些化合物。在本發明化合物和它們的用途的範圍內，預期所述的任何具 體原子或者元素的所有同位素。可以包含在本發明化合物中的例證性同位素包括氫、碳、 氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，比如 2η、3Η、"(:、13(:、14(:、13Ν、15Ν、15Ο、17Ο、18Ο、32Ρ、33Ρ、355、18Ρ、 36Cl、123I和125I。某些同位素標記的本發明化合物(例如，用3H和14C標記的那些)可以用 於化合物和/或底物組織分布測定中。由於易於製備和檢測，氚(3H)和碳_14(即14C)同 位素是有用的同位素。此外，由於具有更強的新陳代謝穩定性(例如，延長的體內半衰期或 者降低的劑量需要)，用重同位素(比如氘，即2H)取代可能會提供某些治療學優點，並且因 此可能在一些情形下是優選的。正電子發射同位素比如150、13N、"C和18F可以用於正電子 發射斷層成像(positron emission tomography, PET)研究中，從而檢測底物受體的佔用 率。同位素標記的本發明化合物通常可以通過與下文方案和/或實施例中公開的那些方法 類似的方法，通過用同位素標記的試劑替換非同位素標記的試劑進行製備。式I化合物的合成本發明化合物可以通過包括類似於化學領域熟知的那些方法的合成路線進行 合成，特別是根據在此包含的描述進行合成。原料通常由商業來源獲得，比如Aldrich Chemicals (Milwaukee, WI)，或者利用本領域熟練技術人員熟知的方法輕易地製備(例 如，通過 Louis F. Fieser 禾口 Mary Fieser, Reagentsfor Organic Synthesis (有機合成 的試劑)，第 1-19 卷，Wiley，N. Y. (1967-1999 編輯))或者 Beilsteins Handbuch der organischen Chemie,4, Aufl 編輯· Springer-Verlag, Berlin，包括其增刊，中普遍描述的 方法製備)。各個反應步驟的更詳細說明參見以下實施例部分。本領域熟練技術人員應當理 解，其它合成路線也可以用於合成本發明化合物。雖然在以下實施例表明了具體原料和試 劑並對其進行了討論，但是可以輕易替換成其它原料和試劑，從而提供多種衍生物和/或 反應條件。此外，通過如下所述的方法製備的多種化合物可以進一步根據本公開文本利用
10本領域熟練技術人員熟知的常規化學進行改性。在製備式I化合物時，可能需要保護中間體的間接官能團(例如，伯胺或者仲胺 等等)。對所述保護的需要將取決於間接官能團的本性和製備方法的條件的變化而變化。 適宜的氨基保護基(NH-Pg)包括乙醯基、三氟乙醯基、叔丁氧羰基(BOC)、苄氧羰基(CBz) 和9-芴基亞甲基氧基羰基(Fmoc)。本領域熟練技術人員可以輕易確定是否需要所述保 護。保護基的一般說明和它們的應用參見T.W.Greene，Protective Groups in Organic Synthesis (有機合成中的保護基團)，John Wiley & Sons，New York，1991。分離方法在用於製備式I化合物的任何合成方法中，可以有利地將反應產物彼此分離和/ 或與原料分離。通過本領域通用的工藝，將各個步驟或者系列步驟的期望產品分離和/或 純化(在下文中稱為分離)成期望的均勻度。所述分離一般涉及多相萃取、從溶劑或者溶劑 混合物中結晶、蒸餾、升華或者色譜法。色譜法可以涉及多種方法，包括，例如反相和正相； 尺寸排阻；離子交換；高、中和低壓液相色譜法和裝置；小規模分析；模擬移動床(「SMB」) 和製備薄層或者厚層色譜法，以及小規模薄層和快速色譜法工藝。另一類分離方法涉及用選擇的試劑處理反應混合物，從而結合期望的產品、未反 應原料、反應副產品等等或者使得期望的產品、未反應原料、反應副產品等等可分離。所述 試劑包括吸附劑或吸附劑，比如活性碳、分子篩、離子交換介質等等。另外地，所述試劑可以 是在鹼性材料的情形中，酸；在酸性材料的情形中，鹼；結合試劑比如抗體；結合蛋白質； 選擇性螯合劑比如冠醚；液體/液體離子提取試劑(「LIX」)等等。適當的分離方法的選擇取決於所涉及物質的性質。例如，在蒸餾和升華中的沸點 和分子量，在色譜法中極性官能團的存在與否，在多相萃取中酸性和鹼性介質中的材料穩 定性，等等。為了實現期望的分離，本領域熟練技術人員將應用最可能的工藝。非對映異構體混合物可以基於它們的物理化學差異，通過本領域熟練技術人員熟 知的方法分離成它們的單個非對映異構體，比如通過色譜法和/或分級結晶。對映異構體 可以通過以下方式得到分離，通過與適當的光學活性化合物(例如，手性輔助劑，比如手性 醇或者Mosher』 s醯基氯)反應將對映異構體混合物轉化為非對映異構體混合物，分離非對 映異構體和將單個非對映異構體轉化(例如，水解)為相應的純對映異構體。同時，一些本 發明化合物可以是阻轉異構體(例如，取代的聯芳基化合物)，這同樣認為是本發明的一部 分。對映異構體還可以通過利用手性HPLC柱進行分離。基本上不含它的立體異構體的單一立體異構體，例如對映異構體可以通過利用比 如使用光學活性拆分試劑形成非對映異構體的方法拆分外消旋混合物獲得(Eliel，Ε.和 ffilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds ( Wl/l^ ^iItl) "John Wiley & Sons，Inc.，New York, 1994 ；Lochmuller, C. H.，J. Chromatogr.，(1975) 113(3) 283-302)。本發明手性化合物的外消旋混合物可以通過任何適宜的方法進行分離和隔離， 包括(1)與手性化合物形成離子、非對映鹽和通過分級結晶或者其它方法進行分離，(2)與 手性衍生化試劑形成非對映化合物，分離非對映異構體和將其轉化成純立體異構體，和(3) 直接在手性條件下分離基本上純或者富集的立體異構體。參見^DrugStereochemistry， Analytical Methods and Pharmacology (藥物立體化學，分析方法禾口藥理學)，，Irving W. Wainer 編輯，Marcel Dekker, Inc.，New York (1993)。
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在方法(1)下，非對映的鹽通過使光學異構純的手性鹼比如番木鱉鹼、奎寧、麻黃 素、士的寧、α-甲基-β-苯乙胺(安非他明)及類似手性鹼與帶有酸性官能團比如羧酸 和磺酸的不對稱化合物反應而形成。通過分級結晶或者離子色譜法，非對映的鹽可以得到 誘導分離。為了分離氨基化合物的旋光異構體，加入手性羧酸或者磺酸比如樟腦磺酸、酒石 酸、扁桃酸或者乳酸可以導致非對映的鹽的形成。另外地，通過方法(2)，意欲進行拆分的底物與手性化合物的一種對映異構 體反應，從而形成非對映異構體對(Ε.和Wilen，S. "Stereochemistry ofOrganic Compounds (有機化合物的立體化學)」，John Wiley & Sons, Inc.，1994，第 322 頁)。非 對映化合物可以通過以下方法形成使不對稱化合物與光學異構純的手性衍生化試劑比 如薄荷基衍生物反應，隨後分離非對映異構體和進行水解，從而得到純的或者富集的對映 異構體。確定光學純度的方法包括在鹼存在下製備外消旋混合物的手性酯，比如薄荷酯， 例如(_)氯甲酸薄荷酯，或者Mosher酯，乙酸α -甲氧基-α -(三氟甲基)苯酯(Jacob III. J. Org. Chem.，(1982)47 :4165)，和分析1H NMR譜以確定兩種阻轉對映異構體或者非 對映異構體的存在。阻轉異構化合物的穩定非對映異構體可以通過正相和反相色譜法，按 照分離阻轉異構萘基-異喹啉的方法進行分離和隔離(W096/15111)。通過方法(3)，兩種 對映異構體的外消旋混合物可以使用手性固定相通過色譜法進行分離(「Chiral Liquid Chromatography (手相液體色譜法)，，(1989)W. J. Lough編輯，Chapman and Hall,New York ； Okamoto, J. ofChromatogr. , (1990)513:375-378)。富集或者純化的對映異構體可以通過 用於區分其它具有不對稱碳原子的手性分子的方法進行區分，比如旋光性和圓二色性。式I化合物的治療方法本發明化合物可用作用於治療由AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、其它絲氨酸/蘇氨酸 激酶、和/或雙特異性激酶的調節或調整而介導的疾病或病症的預防劑或治療劑。可按照 本發明方法治療的AKT蛋白激酶介導的疾病包括但不限於炎性、過度增生性、心血管、神經 變性、婦科和皮膚疾病和病症。在一個實施方案中，所述藥物組合物是為了治療過度增殖性病症，包括以下類別 的癌症(1)心臟肉瘤(血管肉瘤、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤、脂肪肉瘤)、粘液瘤、橫紋肌瘤、 纖維瘤、脂肪瘤和畸胎瘤；(2)肺支氣管癌(鱗狀細胞、未分化的小細胞、未分化的大細 胞、腺癌)、肺泡(細支氣管)癌、支氣管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、軟骨錯構瘤(chondromatous hamartoma)、間皮瘤、非小細胞肺癌、小細胞肺癌；(3)腸胃食道(鱗狀細胞癌、腺癌、平滑 肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺(導管腺癌、胰島素瘤、胰高血糖素 瘤、胃泌素瘤、類癌瘤、舒血管腸肽瘤(vipoma))、小腸(腺癌、淋巴瘤、類癌瘤、卡波西肉瘤 (Karposi' s sarcoma)、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神經纖維瘤、纖維瘤)、大腸(腺癌、管 狀腺瘤、絨毛狀腺瘤、錯構瘤、平滑肌瘤)；(4)泌尿生殖道腎(腺癌、威爾姆斯瘤(Wilm' s tumor)[腎胚細胞瘤]、淋巴瘤、白血病)、膀胱和尿道(鱗狀細胞癌、移行細胞癌、腺癌)、 前列腺(腺癌、肉瘤)、睪丸(精原細胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎癌、絨毛膜癌、肉瘤、間 質細胞癌、纖維瘤、纖維腺瘤、腺瘤樣瘤、脂肪瘤)；(5)肝臟肝癌(肝細胞癌)、膽管癌、肝 母細胞瘤、血管肉瘤、肝細胞腺瘤、血管瘤；(6)骨成骨肉瘤(骨肉瘤)、纖維肉瘤、惡性纖 維組織細胞瘤、軟骨肉瘤、尤因肉瘤、惡性淋巴瘤(網狀細胞肉瘤)、多發性骨髓瘤、惡性巨 細胞瘤、脊索瘤、骨軟骨瘤(osteochronfroma)(骨軟骨性外生骨疣)、良性軟骨瘤、成軟骨細胞瘤、軟骨肌瘤樣纖維瘤、骨樣骨瘤和巨細胞瘤；(7)神經系統頭骨(骨瘤、血管瘤、肉 芽腫、黃色瘤、畸形性骨炎)、腦脊膜(腦脊膜瘤、腦脊膜肉瘤(meningiosarcoma)、神經膠 質過多)、腦(星形細胞瘤、成神經管細胞瘤、神經膠質瘤、室管膜瘤、生殖細胞瘤[松果體 瘤]、多形性成膠質細胞瘤(glioblastoma multiform)、少突神經膠質瘤、神經鞘瘤、視網 膜母細胞瘤、先天性腫瘤)、脊索神經纖維瘤、腦膜瘤、膠質瘤、肉瘤)；(8)婦科子宮(子 宮內膜癌)、宮頸(宮頸癌、腫瘤前宮頸非典型增生)、卵巢(卵巢癌[漿液性囊腺癌、粘液 性囊腺癌、未分類癌]、粒層泡膜細胞瘤(granulosa-thecal cell tumor)、塞-萊細胞瘤 (Sertoli-Leydig cell tumor)、無性細胞瘤、惡性畸胎瘤)、外陰(鱗狀細胞癌、上皮內癌、 腺癌、纖維肉瘤、黑素瘤)、陰道(透明細胞癌、鱗狀細胞癌、葡萄狀肉瘤(胚胎性橫紋肌肉 瘤)、輸卵管(癌)；(9)血液血液(髓細胞性白血病[急性和慢性]、急性成淋巴細胞性 白血病、慢性淋巴細胞性白血病、骨髓組織增生性疾病、多發性骨髓瘤、骨髓增生異常綜合 徵)、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤[惡性淋巴瘤]；(10)皮膚晚期黑素瘤、惡性黑素瘤、基底 細胞癌、鱗狀細胞癌、卡波西肉瘤、胎塊發育不良性痣(moles dysplastic nevi)、脂肪瘤、 血管瘤、皮膚纖維瘤、瘢痕瘤、銀屑病；(11)腎上腺成神經細胞瘤；(12)乳房轉移性乳 癌；乳腺癌；(13)結腸；(14) 口腔；(15)毛細胞性白血病；(16)頭和頸；(17)和包括難治的 轉移性疾病；卡波西肉瘤；Bannayan帶狀瘡疹症候群(Bannayan-Zonana syndrome)和考登 病或Lhermitte-Duclos病、以及其它類型的過度增殖性病症的其它疾病。本發明化合物和方法可用來治療疾病和病症，如類風溼性關節炎、骨關節炎、 克羅恩病(Chron』 s disease)、血管纖維瘤、眼病(如，視網膜血管形成、糖尿病性視網 膜病、與年齡相關的黃斑退行性改變(age-related macular degeneration)、黃斑變性 (macular degeneration)等等)、多發性硬化、肥胖症、阿爾茨海默病、再狹窄、自身免疫疾 病、過敏症、哮喘、子宮內膜異位症、動脈粥樣硬化、靜脈移植物狹窄、吻合周假體移植物狹 窄(peri-anastomaticprothetic graft stenosis)、前列腺增生、慢性阻塞性肺病、銀屑 病、組織修復所致神經損傷的抑制、瘢痕組織形成(且可有助於傷口癒合)、多發性硬化、炎 性腸病、感染尤其是細菌感染、病毒感染、反轉錄病毒感染或寄生物感染(通過增加細胞凋 亡)、肺病、腫瘤、帕金森病、移植排斥(作為免疫抑制藥)、膿毒性休克等等。因此，本發明的另一方面提供了治療哺乳動物中AKT蛋白激酶介導的疾病或醫學 狀況的方法，該方法包括向所述哺乳動物施用有效治療或預防所述疾病的量的式I化合物 或其藥學上可接受的鹽。將與這樣的量符合的式I化合物的量將取決於多個因素而變化，比如具體化合 物、疾病狀況和其嚴重度、需要治療的哺乳動物的特性(如體重)，但仍然可由本領域技術 人員常規地確定。本發明還提供了用於治療AKT蛋白激酶介導的疾患的式I化合物。本發明的另一方面是式I化合物在製備用於治療，如用於治療或預防AKT蛋白激 酶介導的疾患的藥物中的用途。聯合治療本發明化合物可以與例如下文所述的一種或多種另外的藥物聯合應用。第二藥物 的劑量可以根據臨床應用的劑量適當地選擇。本發明化合物和第二藥物的比率可以根據施 用主體、施用途徑、目標疾病、臨床病況、聯合用藥及其它因素來適當地確定。在施用主體是
13人類的情況下，例如，以每本發明化合物重量份計，第二藥物可以以0. 01至100重量份的量使用。優選藥物聯合製劑或者劑量給藥方案的第二化合物對本發明化合物具有補充活 性，從而使得它們不會不利地彼此影響。所述藥物適宜地以對預定目標有效的量組合存在。 相應地，本發明另一方面提供一種組合物，其包含本發明化合物並聯合第二藥物，例如本文 描述的。本發明化合物和另外的藥物活性劑可以在單一的藥物組合物中一起施用，或者分 別地施用，當分別施用時可以同時或以任何順序來順序施用。順序施用可以在時間上靠近 或者在時間上遠離。本發明化合物和第二藥物的量以及施用的相對時間將被選擇以便達到 希望的聯合治療效果。聯合治療可以提供「協同作用」和證實具有「協同性」，即當活性成分一起使用時 實現的作用大於分開使用所述化合物獲得的作用的和。當活性成分(1)被共同配製和在 聯合的、單位劑量製劑中同時施用或者遞送時；(2)作為分開的製劑交替或者平行遞送時； 或者(3)通過一些其它方案應用時，可以獲得協同作用。當在交替療法中遞送時，可以在化 合物順序施用或者遞送時，例如通過在分開的注射器中進行分別注射時，獲得協同作用。通 常，在交替治療期間，各種活性成分的有效劑量被順序施用，即系列施用，而在聯合治療中， 兩種或者更多種活性成分的有效劑量被一起施用。施用塗徑本發明化合物可以通過任何適於待治療的疾患的途徑進行施用。適宜的途徑包括 口服、腸胃外(包括皮下、肌內、靜脈內、動脈內、真皮內、鞘內和硬膜外)、經皮、直腸、鼻、局 部(包括口腔和舌下)、陰道、腹膜內、肺內和鼻內途徑。應當理解，優選的途徑可以隨著例 如受者的狀況的變化而變化。在化合物被口服施用時，可以與藥學上可接受的載體或者賦 形劑一起將其配製成丸劑、膠囊、片劑等等。當化合物被腸胃外施用時，其可以與藥學上可 接受的腸胃外媒介物(vehicle) —起配製和可以配製成可注射的單位劑量形式，如以下所 詳述。藥物製劑為了使用本發明化合物來治療性治療(包括預防性治療)包括人類在內的哺乳動 物，通常按照標準製藥實踐將其配製為藥物組合物。按照本發明這一方面，提供包含本發明 化合物的藥物組合物。在某些實施方案中，藥物組合物包含式I化合物以及藥學上可接受 的稀釋劑或載體。本發明的藥物組合物將以與良好的醫療實踐相一致的方式進行配製、給藥和施 用，即施用的量、濃度、日程、過程、媒介物和途徑。在該上下文中考慮的因素包括治療的具 體病症、進行治療的具體哺乳動物、個體患者的臨床狀況、病症病因、藥劑的遞送部位、施用 方法、施用日程和醫師已知的其它因素。意欲施用的化合物的治療有效量將受所述考慮的 支配，該量是預防、改善或者治療病症所需的最低量。一般將本發明化合物配製成藥物劑 型，從而提供易於控制的藥物劑量和使得患者順從處方方案。在本文使用的組合物優選是無菌的。特別是，用於體內施用的製劑必須是無菌的。 通過例如濾過無菌過濾膜，所述滅菌可以得到輕易實現。通常可以將化合物貯存為固體組 合物、凍幹製劑或者水溶液。
本發明化合物的藥物製劑可以製備用於多種施用途徑和類型。例如，具有期望純 度的本發明化合物可以以凍幹製劑、磨碎粉末或者水溶液的形式任選地與藥學上可接受的 稀釋劑、載體、賦形劑或者穩定劑混合(Remington，s Pharmaceutical Sciences(雷氏藥 學)(1980)第16版，0sol，A.編輯)。配製可以在環境溫度下，在適當的pH和期望的純度 下，通過與生理學可接受的載體即在使用的劑量和濃度下對受者無毒的載體混合來進行。 製劑的PH主要取決於具體應用和化合物的濃度，但是可以為約3至約8。在pH5的乙酸鹽 緩衝液中配製是適宜的實施方案。所述製劑可以利用常規的溶解和混合方法製備。例如， 在一種或者多種賦形劑存在下，將大量藥物(即，本發明化合物或者化合物的穩定形式(例 如，與環糊精衍生物或者其它已知的絡合劑的絡合物)溶於適宜的溶劑中。使用的具體載體、稀釋劑或者賦形劑將取決於本發明化合物意欲應用的方式和目 的。溶劑通常基於本領域技術人員認可的對施用哺乳動物安全(GRAS)的溶劑進行選擇。 通常，安全溶劑是無毒含水溶劑，比如水和其它可溶於水中或者與水混溶的無毒溶劑。適宜 的含水溶劑包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如，PEG 400、PEG 300)等等及其混合物。 可接受的稀釋劑、載體、賦形劑和穩定劑在使用的劑量和濃度下對受者無毒，並且包括緩衝 劑，比如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其它有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和蛋氨酸；防腐劑(比如 十八烷基二甲基苄基氯化銨；六甲氯化銨；苯扎氯銨、氯化苄乙氧銨；苯酚、丁醇或者苄醇； 對羥苯甲酸烷基酯，比如對羥苯甲酸甲酯或者對羥苯甲酸丙酯；鄰苯二酚；間苯二酚；環己 醇；3-戊醇；和間甲酚；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白質，比如血清白蛋白、明膠 或者免疫球蛋白；親水聚合物，比如聚乙烯吡咯烷酮；胺基酸，比如甘氨酸、穀氨醯胺、天冬 醯胺、組氨酸、精氨酸或者賴氨酸；單糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或者 糊精；螯合劑，比如EDTA ；糖類，比如蔗糖、甘露醇、海藻糖或者山梨醇；形成鹽的抗衡離子， 比如鈉；金屬絡合物(例如，Zn-蛋白質絡合物)；和/或非離子表面活性劑，比如TWEEN 、 PLUR0NICS 或者聚乙二醇(PEG)。所述製劑還可以包含一種或者多種穩定劑、表面活性劑、 潤溼劑、潤滑劑、乳化劑、助懸劑、防腐劑、抗氧化劑、遮光劑、助流劑、加工輔劑、著色劑、甜 味劑、香料、芳香劑和其它已知提供藥物(即，本發明化合物或者其藥物組合物)優雅外觀 或者有助於藥物產品(即，藥物)製造的添加劑。還可以將活性藥物成分截留在通過例如 凝聚工藝或者界面聚合製備的微膠囊分別例如羥甲基纖維素或者明膠-微膠囊和聚_(甲 基丙烯酸甲酯)微膠囊中、在膠質藥物遞送系統(例如，脂質體、白蛋白微球、微乳劑、納 米顆粒和納米膠囊)或者在大乳劑中。所述工藝公開在Remington，s Pharmaceutical Sciences (雷氏藥學)第16版，0sol，A.編輯(1980)。「脂質體」是可以用於向哺乳動物遞 送藥物(比如式I化合物和，任選地其它治療劑)的由多種脂類、磷脂和/或表面活性劑組 成的小囊泡。脂質體的組分通常構造成雙層形式，與生物膜的脂構造類似。可以製備本發明化合物的緩釋製品。緩釋製品的適宜實例包括含有式I化合物的 固體疏水聚合物的半滲透性基體，所述基體為成形製品例如薄膜或者微膠囊的形式。緩釋 基體的實例包括聚酯、水凝膠(例如，聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸酯)或者聚(乙烯醇))、 聚交酯(美國專利第3，773，919號)、L-穀氨酸和Y -乙基-L-穀氨酸酯的共聚物、不可降 解的亞乙基-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-羥乙酸共聚物比如LUPRON DEPOT (由乳酸-羥 乙酸共聚物和乙酸亮丙立得組成的可注射微球)和聚-D-(-)-3-羥基丁酸。本發明化合物的藥物組合物可以為無菌可注射製品的形式，比如無菌的可注射含水或者含油混懸劑。所述混懸劑可以利用上述的適宜分散劑或者潤溼劑和助懸劑根據本領 域已知的方法進行配製。無菌可注射製品也可以是無毒腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的 無菌可注射溶液劑或混懸劑，如1，3_ 丁二醇中的溶液劑，或製備為凍乾粉末。在可接受的 溶媒和溶劑中，可以使用的為水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。此外，通常可以將無菌不 揮髮油類用作溶劑或者懸浮介質。基於上述目的，任何溫和的不揮髮油都可以使用，包括合 成單甘油酯或者二甘油酯。此外，比如油酸的脂肪酸同樣可以用於製備可注射劑。適於腸胃外施用的製劑包括含水和無水無菌注射溶液，其可以含有抗氧化劑、緩 衝液、殺菌劑和使得製劑與預期受者的血液等滲的溶質；和含水和無水無菌混懸劑，其可以 包括助懸劑和增稠劑。本發明的組合物可採用適於口服應用(如片劑、糖錠劑、硬膠囊劑或軟膠囊劑、水 性或油性混懸劑、乳劑、可分散粉劑或顆粒劑、糖漿劑或酏劑)、局部應用(如乳膏劑、軟膏 劑、凝膠劑、或水性或油性溶液劑或混懸劑)、吸入施用(如作為細微粉劑或液體氣霧劑)、 吹入施用(如作為細微粉劑)。片劑製劑用的適宜的藥學上可接受的賦形劑包括例如惰性稀釋劑，如乳糖、碳 酸鈉、磷酸鈣或碳酸鈣；制粒劑和崩解劑，如玉米澱粉或藻酸(algenic acid)；粘合劑，如 澱粉；潤滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石；防腐劑，如對羥基苯甲酸乙酯或丙酯；和抗氧化 劑，如抗壞血酸。片劑製劑可以是未包衣的，或包衣以改變其崩解作用和隨後活性成分在胃 腸道的吸收、或者改進其穩定性和/或外觀，在任何情況下，採用本領域熟知的常規包衣材 料和方法進行包衣。口服用組合物可採用硬明膠膠囊的形式，其中活性成分與惰性固體稀釋劑如碳酸 鈣、磷酸鈣或高嶺土混合，或者可作為軟明膠膠囊，其中活性成分與水或諸如花生油、液體 石蠟或橄欖油等的油混合。水性混懸劑一般含有細粉形式的活性成分與一種或多種下述物質助懸 劑，如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃 蓍膠和阿拉伯膠；分散劑或潤溼劑，如卵磷脂或烯化氧與脂肪酸的縮合產物(如聚 氧乙烯硬脂酸酯)、或環氧乙烷與長鏈脂族醇的縮合產物如十七碳乙烯氧基十六醇 (h印tadecaethyleneoxycetanol)、或環氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇衍生的偏酯的縮合產 物如聚氧乙烯山梨醇單油酸酯、或環氧乙烷與由脂肪酸和脫水己糖醇衍生的偏酯的縮合產 物(如聚乙烯脫水山梨醇單油酸酯)。水性混懸劑也可含有一種或多種防腐劑(如對羥基 苯甲酸乙酯或丙酯)、抗氧化劑(如抗壞血酸)、著色劑、芳香劑和/或甜味劑(如蔗糖、糖 精或阿司帕坦)。通過將活性成分懸浮於植物油(如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油)或礦物油 (如液體石蠟)中，可配製油性混懸劑。油性混懸劑也可含有增稠劑，如蜂蠟、固體石蠟或鯨 蠟醇。也可加入甜味劑如上述甜味劑和芳香劑，以提供適口的口服製品。這些組合物可通 過加入抗氧化劑如抗壞血酸來防腐。適用於通過加入水而製備水性混懸劑的可分散粉劑和顆粒劑一般含有活性成分 和分散劑或潤溼劑、助懸劑和一種或多種防腐劑。適宜的分散劑或潤溼劑和助懸劑的實例 為上文已經提及的分散劑、潤溼劑和助懸劑。其它賦形劑如甜味劑、芳香劑和著色劑也可存在。
本發明的藥物組合物也可採用水包油型乳劑。油相可以是植物油如橄欖油或花生 油或礦物油如液體石蠟或這些油中任何油的混合物。適宜的乳化劑可以是例如天然樹膠如 阿拉伯膠或黃蓍膠、天然磷脂如大豆卵磷脂、由脂肪酸和脫水己糖醇衍生的酯或偏酯(如 脫水山梨醇單油酸酯)以及所述偏酯與環氧乙烷的縮合產物如聚氧乙烯脫水山梨醇單油 酸酯。乳劑還可含有甜味劑、芳香劑和防腐劑。糖漿劑和酏劑可用甜味劑如甘油、丙二醇、山梨醇、阿司帕坦或蔗糖來配製，也可 含有緩和劑(demulcent agent)、防腐劑、芳香劑和/或著色劑。栓劑製劑可通過將活性成分與合適的無刺激賦形劑混合來配製，該賦形劑在常溫 下為固體，但在直腸溫度下為液體，因而在直腸中融化而釋放藥物。適宜的賦形劑包括例如 可可脂和聚乙二醇。適於陰道施用的製劑可以以陰道栓劑、棉塞、乳膏劑、凝膠劑、糊劑、泡 沫或者噴霧劑製劑的形式存在，所述製劑中除了活性成分之外，還含有本領域已知的適當 載體。諸如乳膏劑、軟膏劑、凝膠劑和水性或油性溶液劑或混懸劑的局部製劑一般可通 過採用本領域熟知的常規方法，將活性成分與常規局部可接受的溶媒或稀釋劑配製在一起 而製得。經皮施用的組合物可以是本領域技術人員公知的那些經皮貼片的形式。適於肺內或者經鼻施用的製劑的粒徑例如在0. 1至500微米的範圍內(包括以微 米遞增的在0. 1至500微米之間的粒徑，比如0. 5、1、30微米、35微米等等)，其通過迅速吸 入鼻通道或者通過吸入口腔從而達到肺泡小囊進行施用。適宜的製劑包括活性成分的水性 或油性溶液。適於氣霧劑或者乾粉施用的製劑可以根據常規方法製備，並且可以與其它治 療劑一起遞送，比如如下所述的迄今用於病症治療或者預防中的化合物。取決於用於施用藥物的方法，可以以多種方式對應用的藥物組合物(或者製劑) 進行包裝。例如，用於分配的製品可包括其中已經沉積有適當形式的藥物製劑的容器。適宜 的容器是本領域熟練技術人員熟知的，包括比如瓶(塑料和玻璃)、小袋、安瓿、塑膠袋、金 屬圓筒等等材料。所述容器還可以含有防幹擾組件，從而防止輕易接觸包裝中的物質。此 外，容器在其表面上放置有描述容器中內含物的標籤。該標籤還可以包括適當的警告。所 述製劑可以被包裝在單位劑量或者多劑量容器中，例如密封的安瓿和小瓶中，並且可以貯 存在凍幹(冷凍乾燥)條件下，使得在即時使用之前僅僅需要加入無菌液體載體例如，水以 用於注射。即時注射溶液和混懸劑可以由先前所述種類的無菌粉末、顆粒和片劑製備。優 選的單位劑量製劑是含有以上所述的每日劑量或者每日亞劑量單位的活性成分或者其適 當部分的製劑。本發明進一步提供了獸醫學組合物，其包含至少一種如上所定義的活性成分與由 此的獸醫學載體。獸醫學載體是可以用於施用組合物目的的材料，並且可以是惰性或者在 獸醫學領域可接受的並且與活性成分相容的固體、液體或者氣體材料。這些獸醫學組合物 可以腸胃外、口服或者通過任何其它期望的途徑施用。與一種或多種賦形劑組合產生單一劑型的本發明化合物的量，將根據所治療的受 治療者、病症或疾患的嚴重程度、施用速率、化合物的分布和處方醫師的判斷而必要地變 化。在一個實施方案中，向需要其的哺乳動物施用適當量的本發明化合物。在一個實施方案 中，施用以每天約0. OOlmg/kg體重至約60mg/kg體重的量發生。在另一個實施方案中，施
17用以每天約0. 5mg/kg體重至約40mg/kg體重的量發生。在一些情況中，低於前述範圍的下 限的劑量水平可能是足夠的，而在其它情況中，可能採用更大劑量而不造成任何有害的副 作用，只要這樣的更大劑量首先分成整天施用的若干小劑量。有關施用途徑和劑量方案的 進一步的信息，參見ComprehensiveMediciinal Chemistry (綜合藥物化學)第5卷第25. 3 章(Corwin Hansch ；編委會主席)，Pergamon Press 1990，其通過引用具體地併入本文。Mrn在本發明的另一實施方案中，提供了含有可以用於治療如上所述的病症的物質的 製品或者「藥盒」。在一種實施方案中，所述藥盒包括含有本發明化合物的容器。適宜的容 器包括，例如瓶、小瓶、注射器、泡罩包裝等等。所述容器可以由多種材料形成，比如玻璃或 者塑料。所述容器可以裝有有效治療疾患的本發明化合物或者其製劑，並且可以具有無菌 入口(例如，容器可以為帶有可被皮下注射針刺穿的塞子的靜脈內溶液袋或者小瓶)。所述藥盒還可以包括在容器上的或者容器附隨的標籤或者包裝說明書。術語「包 裝說明書」用於指通常包含在治療產品的商業包裝中的說明書，其包含關於適應症、應用、 劑量、施用、禁忌症和/或關於所述治療產品的應用警告的信息。在一個實施方案中，標籤 或者包裝說明書說明包含本發明化合物的組合物可用於治療例如由AKT激酶介導的病症。 標籤或者包裝說明書還可說明該組合物可用於治療其它病症。在某些實施方案中，藥盒適宜遞送本發明化合物的固體口服形式，比如片劑或者 膠囊。優選所述藥盒包括多個單位劑量。所述藥盒可以包括按它們預期的應用順序定向的 劑量的卡片。所述藥盒的實例為「泡罩包裝」。泡罩包裝在包裝工業中是公知的，並且廣泛 用於包裝藥物單位劑型。如果期望，可以提供記憶輔助工具，例如號碼、字母或者其它標記 的形式，或者可以提供有表明在治療時間表中可以施用劑量的日期的日曆插頁。根據另一種實施方案，藥盒可以包括(a)具有包含在其中的本發明化合物的第一 容器；和(b)具有包含在其中的第二藥物製劑的第二容器，其中所述第二藥物製劑包括可 用於治療AKT激酶介導的病症的第二化合物。替代或者另外地，藥盒還可以包括含有藥學 上可接受的緩衝液比如注射用抑菌水(bacteriostatic water for injection, BWFI)、磷 酸緩衝鹽水、林格氏溶液和葡萄糖溶液的第三容器。還可以包括從銷售和用戶立場而言需 要的其它物質，包括其它緩衝液、稀釋劑、過濾器、針頭和注射器。藥盒還可以包括施用本發明化合物和如果存在的第二藥物製劑的指導。例如，如 果藥盒包括含有本發明化合物的第一組合物和第二藥物製劑，藥盒還可以包括將第一藥物 組合物和第二藥物組合物同時、順序或者分別地施用於需要其的患者的說明。在其中藥盒包含本發明組合物和第二治療劑的某些其它實施方案中，藥盒可以包 括含有分別的組合物的容器比如分開的瓶或者分開的箔片包裹，然而，分別的組合物還可 以包含在單獨的、未分開的容器中。在某些實施方案中，藥盒包括施用分別的組分的說明。 當分別的組分優選以不同的劑型(例如，口服或者腸胃外)施用時，在不同的劑量時間間隔 施用時，或者當處方醫師期望組合的單一組分滴定時，藥盒形式是特別有利的。因此，本發明的進一步方面提供治療由Akt激酶介導的病症或疾病的藥盒，其中 所述藥盒包含a)包含本發明化合物或其藥學上可接受的鹽的第一藥物組合物；和b)使用 說明書。在某些實施方案中，藥盒還包含(C)第二藥物組合物，其中所述第二藥物組合物包含適於治療由Akt激酶介導的病症或疾病的第二化合物。在包含第二藥物組合物的某些 實施方案中，藥盒還包含向需要其的患者同時、順序或分別施用所述第一藥物組合物和第 二藥物組合物的說明。在某些實施方案中，所述第一藥物組合物和第二藥物組合物容納在 不同容器中。在其它實施方案中，所述第一藥物組合物和第二藥物組合物容納在同一容器 中。雖然式I化合物主要作為用於哺乳動物的治療劑是有價值的，但它也可用於需要 控制AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、其它絲氨酸/蘇氨酸激酶、和/或雙特異性激酶的任何情 況。因此，它可用作供開發新的生物測試和尋找新的藥理學藥劑用的藥理學標準物。可以在體外、體內或在細胞系內測試本發明化合物對AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、 其它絲氨酸/蘇氨酸激酶、和/或雙特異性激酶的活性。體外測定包括確定對激酶活性抑 製作用的測定。可選的體外測定定量確定抑制劑與激酶結合的能力，並且可以通過放射性 標記該抑制劑、然後結合、分離抑制劑/激酶複合物並確定結合的放射性標記的量來測量， 或者通過進行競爭實驗來測量，其中將新抑制劑與已知的放射性配體一起溫育。這些和其 它有用的體外和細胞培養物測定是本領域技術人員眾所周知的。雖然已描述了本發明，並且在某種程度上作出了具體闡述，但應理解，本發明所公 開的內容僅僅作為示例，本領域技術人員在不背離本發明的精神和不偏離本發明要求保護 的範圍的情況下，可以對各部分的組合和排列作出多種變化。生物學實施例AKT-I激酶測定本發明所述化合物的活性可採用下述激酶測定確定該測定採用市售IMAP試劑 盒，通過螢光極化測量全長人類重組活性AKT-I對螢光標記肽的磷酸化。測定材料從IMAP AKT測定散裝試劑盒(IMAP AKT Assay Bulk Kit)獲得，產品號 為R8059，得自Molecular Devices，Sunnyvale，CA。該試劑盒的材料包括IMAP反應緩衝液 (5X)。經稀釋的 IXIMAP 反應緩衝液含有 IOmMTris-HCl (pH7. 2) UOmM MgCl2、0· 1% BSA、 0. 05% NaN3。臨用前常規加入DDT至ImM的終濃度。也包括IMAP結合緩衝液(5Χ)和IMAP 結合試劑。結合溶液以IMAP結合試劑在IX IMAP結合緩衝液中的1 400稀釋液來製備。螢光素標記的AKT 底物(Crosstide)具有(Fl)-GRPRTSSFAEG 的序列。在 1 X IMAP 反應緩衝液中製備20 μ M的貯液。 所用的板包括Costar 3657 (382孔，由聚丙烯製成，具有白色ν形底)，該板用於化 合物稀釋和製備化合物-ATP混合物。測定板為PaCkardPrOXyPlateTM-384F。所用的AKT-I由用PDKl和MAP激酶2活化的全長人類重組AKT-I製備。為了進行測定，製備二甲亞碸(「DMS0」)中IOmM的化合物貯液。在DMSO中以 1 2連續稀釋貯液和對照化合物(10 μ L化合物+10 μ L DMS0) 9次，得到所需劑量範圍內 的50 X稀釋液系列。然後，將2. 1 μ L等份的化合物的DMSO溶液轉移至Costar 3657板 上，該板含有50 μ L含ImM DTT的1 X IMAP反應緩衝液中的10. 4 μ M ATP。在充分混合後， 將2. 5- μ L等份液體轉移至ProxyPlate -384F板上。通過加入含200nM螢光標記肽底物和4nM AKT-I的2. 5_μ L等份溶液起動該測定。 將板以IOOOg離心1分鐘，並於環境溫度下保溫60分鐘。然後加入15 μ L結合溶液猝滅反 應，再次離心，於環境溫度下再保溫30分鐘，然後在配置的Victor 1420 Multilabel HTS計數器上讀數，以測量螢光極化。在以上測定中檢驗實施例1的化合物，發現其具有小於500nM的IC5(I。製備實施例為了說明本發明而包括下述實施例。然而，應當理解，這一實施例並不限制本發 明，僅僅用來提出實施本發明的方法。本領域技術人員會認識到，可容易地改變所述的化學 反應為製備本發明化合物的替代方法，用於製備本發明化合物的替代方法視為落入本發明 範圍內。例如，本發明化合物的合成可採用對於本領域技術人員明顯的改進方法成功地進 行，例如通過適當保護幹擾基團，利用本領域已知的除本申請所述試劑之外的其它合適試 劑，和/或對反應條件進行常規改進。或者，本領域已知的其它反應也視為能用於製備本發 明化合物。以下實施例中，除非另有說明，否則所有溫度均以攝氏度記載。試劑購自商業供應 商，如 Aldrich Chemical Company、Lancaster、TCI 或 Maybridge，並且無需進一步純化而 使用，除非另有說明。四氫呋喃(「THF」)、二氯甲烷(「DCM」)、甲苯和二噁烷以安全密封 瓶購自Aldrich，按照收到時的狀態使用。以下敘述的反應一般在氮氣或氬氣正壓下、或者在無水溶劑中用乾燥管(除非另 有說明)進行，反應燒瓶通常配有橡膠隔片以供通過注射引入底物和試劑。玻璃器皿經烘 箱乾燥和/或加熱乾燥。1H NMR譜在以400MHz操作的Varian儀器上記錄。用四甲基矽烷(0. OOppm)或殘 餘溶劑(CDCl3 7. 25ppm ；CD3OD 3. 3Ippm ；D2O 4. 79ppm ；d6_DMS0 2. 50ppm)作為參比標準， 以CDC13、CD3OD, D2O或d6-DMS0溶液(以ppm報告)得到1H NMR譜。當報告峰多重性時， 使用以下縮寫s(單峰)、d(雙峰)、t(三重峰)、m(多重峰)、br(寬峰)、dd(雙雙峰)、 dt (雙三重峰)。當提供偶合常數時，以赫茲(Hz)報告。實施例1 (S)-2-(4-氯-3-氟苯基)-1-(4_((51710-7-羥基-5-甲基-6,7-二氫 _5H_ 環 戊,二烯並「dl P密啶-4-某)哌嗪-1-某)-3-((lr，4S)-4-甲氧,某環己某氨某)丙-1-酮 步驟1 使用乾冰-異丙醇浴將乙酸乙酷(「Et0Ac」;900mL)中的普累根酸乙酯 (Ethyl pulegenate) (130g, 662mmol)冷卻到_78°C。對該混合物進行臭氧分解直到反應的 顏色變成紫色。此時，臭氧的產生終止，將反應從乾冰浴移出。向反應混合物通氧，直到變 成黃色。真空下濃縮反應混合物，將所得的殘餘物溶解到冰乙酸(400mL)中。將溶液冷卻 到0°C，經30分鐘分批地加入Zn粉(65g，993mmol)。然後允許反應攪拌2小時，此時將反 應混合物濾過硅藻土墊以除去鋅粉。用NaOH和NaHCO3水溶液將乙酸中和到pH7，用乙醚 萃取(3X800mL)。用鹽水、MgSO4乾燥合併的有機物並濃縮以獲得作為液體的(2R)_2_甲 基-5-氧代環戊烷羧酸乙酯(107g，95%)。 步驟 2 將水(60mL)中的 KOH (8. 3g，147. 9mmol)力口到(2R) -2-甲基-5-氧代環戊 烷羧酸乙酯(20g，117. 5mmol)與硫脲(9. 2g，120. 9mmol)混合物的乙醇(IOOmL)溶液。將 混合物回流10小時。冷卻後，除去溶劑。用濃HCl(12mL)在0°C中和所得的殘餘物，然後 用DCM萃取(3X150mL)。除去溶劑，通過矽膠色譜純化所得的殘餘物，以己烷/乙酸乙酯 (2 1)洗脫獲得(R)-2-巰基-5-甲基-6，7-二氫-5H-環戊二烯並[d]嘧啶_4_醇(12g， 56% )。MS(APCI+) [M+H]+183o 步驟3 將阮內鎳(15g)和NH4OH (20mL)加到(R) -2-巰基-5-甲基_6，7- 二 氫-5H-環戊二烯並[d]嘧啶-4-醇(12g，65.8mm0l)在蒸餾水(IOOmL)中的懸液。將混 合物回流3小時然後過濾。濃縮濾液獲得(R)-5-甲基-6，7-二氫-5H-環戊二烯並[d]嘧 啶-4-醇(9. 89g,99% )。MS(APCI+) [M+H]+151。步驟4和5描述從(R)-2-甲基-5-氧代環戊烷羧酸乙酯開始，合成(R)-5-甲 基-6，7-二氫-5H-環戊二烯並[d]嘧啶-4-醇的替代方案。
步驟4:將乙酸鍵(240g，3114mmol)加到(R) _2_甲基_5_氧代環戊烷羧酸乙酯 (106. Og, 622. 8mmol)的MeOH(1. 2L)溶液中。在室溫在氮氣下攪拌反應混合物20小時，由 TLC和HPLC確定反應完全。濃縮反應混合物以除去MeOH。將所得的殘餘物溶解在DCM中，用 H20(2X)、鹽水(IX)洗滌，乾燥(Na2SO4),過濾並濃縮以獲得作為油的(R)_2_氨基-5-甲 步驟5 將甲醯胺(303. 5mL,7640mmol)中的含有(R)_2_氨基-5-甲基環戊烯 羧酸乙酯(161.6g,955mmol)和甲酸銨(90. 3g, 1433mmol)的溶液加熱到內部溫度為150°C 並攪拌17小時。冷卻反應混合物，轉移到2L單萃取燒瓶(single nextracted flask)。然後 通過高真空蒸餾除去過量甲脒。在甲脒停止餾出後，將蒸餾釜中剩餘的油溶解在DCM中並 用鹽水洗滌(3X200mL)。用DCM萃取合併的水相洗液。將合併的有機萃取物乾燥(Na2SO4)， 過濾並濃縮。將所得的油溶解在少量DCM中，使用分液漏鬥將該溶液加到乙醚的攪拌溶液 (相對於DCM溶液約5倍體積的乙醚)，導致形成一些沉澱。通過濾過中等砂心漏鬥(medium frit funnel)除去這些沉澱，用乙醚衝洗並丟棄。濃縮濾液，從乙醚研磨重複兩次。然後 在高真空管道中乾燥產物，獲得作為漿狀固體的(R)-5-甲基-6，7-二氫-5H-環戊二烯並 [d]嘧啶-4-醇(93. 23g，65. 0%產率)。LC/MS (APCI_)m/z 149. 2。 步驟6 通過滴液漏鬥將純POCl3 (463. 9mL，5067謹ol)緩慢地加到(R) _5_甲基_6， 7-二氫-5H-環戊二烯並[d]嘧啶-4-醇(152. 2g,1013mmol)在 DCE(1.2L)中的 0°C溶液。 完成加入後，將反應混合物升溫到室溫，然後在攪拌下加熱到回流70分鐘。通過HPLC確定 反應完成。將反應混合物冷卻到室溫，如下以4部分猝滅過量POCl3:將反應混合物轉移到 分液漏鬥並滴到含有冰和在冰浴中冷卻的飽和NaHCO3溶液的燒杯中。完成加入每一部分 的反應混合物後，攪拌猝滅的混合物30分鐘以確保在轉移到分液漏鬥之前完全破壞P0C13。 將混合物轉移到分液漏鬥並用DCM萃取(2X)。將合併的萃取液乾燥(Na2SO4)，過濾並濃 縮。在矽膠上如下純化粗產物將矽膠(Ikg)在9 1己燒乙酸乙酯中漿化在3L砂心漏 鬥上，真空下沉積矽土，蓋上沙。將粗產物用DCM/己烷混合物上樣，使用IL側臂燒瓶在真 空下洗脫化合物。首先洗脫高Rf的副產物，然後是作為油的(R)-4-氯-5-甲基-6，7-二 氫-5H-環戊二烯並[d]嘧啶(104. 4g，61.09%產率)。將三乙胺(93. 0mL,534mmol)和哌 嗪-I-羧酸叔丁酯(34. 8g，187mmol)加到(R) -4-氯-5-甲基-6，7- 二氫-5H-環戊二烯並 [d]嘧啶(30. 0g，178mmol)的n-Bu0H(250mL)溶液。在氮氣下將反應混合物加熱到回流並 攪拌過夜(17小時)，之後在旋轉蒸發器(rotavap)上濃縮。將所得的油溶解在DCM中，用 H2O洗滌，乾燥(Na2SO4),過濾並濃縮。在矽膠上純化所得的油，首先以2 1己烷乙酸乙 酯洗脫，直到清澈地洗脫產物，然後以1 1至1 5 DCM 乙酸乙酯的梯度洗脫獲得作為 粉末的(R)-4-(5-甲基-6，7-二氫-5H-環戊二烯並[d]嘧啶_4_基)哌嗪羧酸叔丁 酯(42. 0g，74. 產率)。LC/MS(APCI+)m/z 319. 1[M+H]+。
C 、 步驟7 將固傑77% max.間氯過苯甲酸(「m-CPBA」 ；23· 9g，107mmol)分批加 到(R)-4-(5-甲基-6，7-二氫-5H-環戊二烯並[d]嘧啶_4_基)哌嗪羧酸叔丁酯 (20. Og,62. 8mmol)在CHCl3(310mL)中的0°C溶液中。攪拌反應混合物5分鐘，然後升溫到 室溫並攪拌另外90分鐘。7. 5小時後HPLC看起來相似。將反應混合物冷卻到0°C，然後加 Λ NaHCO3(13. 2g，157mmol)和另外0. 5當量的m-CPBA0攪拌反應混合物過夜(14小時)。 將反應混合物冷卻到0°C，通過滴液漏鬥逐滴加入Na2S2O3 (29. 8g，188mmol)的H20(50mL) 溶液。隨後通過滴液漏鬥加入Na2C03(24. 6g，232mmOl) &H20(70mL)溶液(混合物變得同 質)。攪拌反應混合物30分鐘，然後用CHCl3萃取混合物(3 X 150mL)。將合併的萃取液幹 燥(Na2SO4),過濾並濃縮以獲得(R)-4-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪基)_5_甲基-6，7-二 氧-5H-環戊二烯並[d]嘧啶 1-氧化物(21. Og, 100% ) ο LC/MS (APCI+)m/z 335. 1[M+H]+。 步驟8 將 Ac20(77.0mL，816mmol)力卩到(R) ~4~(4~(叔丁氧基羰基)哌 嗪-1-基)-5_甲基-6，7-二氫-5H-環戊二烯並[d]嘧啶1-氧化物(21.0g，62. 8mmol) 中。在氮氣下在90°C沙浴中加熱反應混合物並攪拌100分鐘。將反應混合物冷卻到室 溫，通過旋轉蒸發除去過量乙酸酐。將所得的油溶解在DCM中，然後小心地將其倒入冰飽 ^P Na2CO30用DCM萃取混合物，將合併的萃取液乾燥(Na2SO4)，過濾並濃縮獲得作為泡沫的 (5R)-4-(7-乙醯氧基-5-甲基-6，7-二氫-5H-環戊二烯並[d]嘧啶_4_基)哌嗪-1-羧 酸叔丁酯(23. 6g, 100% ) ο LC/MS(APCI+)m/z 377·1[Μ+Η]+。 步驟 9 將 LiOH-H2O (6. 58g, 157mmol)加到(5R) -4- (7-乙醯氧基-5-甲基-6，7- 二 氧-5H-環戊二烯並[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(23. 6g，62. 69mmol)在2 1THF H20(320mL)中的0°C溶液。攪拌反應混合物10分鐘，然後升溫到室溫。LC/MS在3 小時和4. 5小時時看起來相同。將反應混合物冷卻到0°C，然後將飽和NH4C1加到混合物。 攪拌混合物5分鐘，通過旋轉蒸發除去大部分THF。用EtOAc萃取混合物(3X250mL)，將 合併的萃取液乾燥(Na2SO4),過濾並濃縮。將粗產物在Biotage 65M 4 1 DCM 乙酸乙 酯、然後梯度至1 1到1 4 DCM 乙酸乙酯上進行快速色譜。洗脫產物後，然後將乙 酸乙酯衝洗過柱。然後用30 1 DCM MeOH洗脫剩餘的產物(8. 83g)。將混合的級分用 Biotage 40M使用相同條件進行再次快速色譜以獲得另一部分(2. 99g)，這獲得作為泡沫 的(5R)-4-(7-羥基-5-甲基-6，7-二氫-5H-環戊二烯並[d]嘧啶_4_基)哌嗪羧酸 叔丁酯(11.82g，56. 38%產率)的組合產生。LC/MS(APCI+)m/z 335. 1[M+H]+。
Boc步驟10 將DMS0(5. 45mL, 76. 8mmol)的DCM(50mL)溶液通過滴液漏鬥逐滴加到 草醯氯(3. 35mL，38.4mmol)在DCM(150mL)中的_78°C溶液。攪拌反應混合物35分鐘，然 後通過滴液漏鬥緩慢加入(5R)-4-(7-羥基-5-甲基-6，7-二氫-5H-環戊二烯並[d]啼 啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(9. 17g,27. 4mmol)的DCM(80mL)溶液。在_78°C將反應混 合物攪拌另外1小時，然後將純三乙胺(18. OmL, 129mmol)加到混合物。然後允許反應混合 物升溫到室溫，然後攪拌30分鐘。加入H20。用DCM萃取混合物(3X200mL)，將合併的萃取 液乾燥(Na2SO4),過濾並在真空濃縮。在矽膠(Biotage 65M)上純化粗產物用大約SOOmL 的4 1 DCM EtOAc、然後梯度至1 1 DCM 乙酸乙酯衝洗柱直到產物洗脫，然後用 1 4 DCM EtOAc洗脫產物獲得作為泡沫的(R)-4-(5-甲基-7-氧代-6，7-二氫-5H-環 戊二烯並[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(7.58，82.3%產率)。從DCM/己烷濃縮 (3X)泡沫，這也獲得泡沫。HPLC >95%面積。LC/MS(APCI+)m/z 333[M+H]+。
步驟11 將三乙胺(4. 33mL，31. Immol ；使用前用氮氣脫氣30分鐘)和甲酸
(1.36mL，36. Immol ；使用前用氮氣脫氣30分鐘)加到(R) _4_(5-甲基-7-氧代-6，7-二 氧-5H-環戊二烯並[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(9. 75g，29. 3mmol)的DCM(210mL ； 使用前用氮氣脫氣30分鐘)溶液中。攪拌混合物5分鐘，然後加入Ru催化劑(0. 0933g, 0. 147mmol)。在正氮壓下攪拌反應過夜(18小時)。將反應混合物濃縮至乾燥並在高真空幹
BN N
Γν
Oc
BN N
24燥。將不純的材料在上樣有1 1 DCM 乙酸乙酯500mL衝洗、然後1 4 DCM 乙酸乙酯 直到產物出現(第2個點)、然後梯度至純乙酸乙酯的Biotage 65M上進行快速色譜，然後 用25 1 DCM MeOH洗脫剩餘產物。合併各級分並在旋轉蒸發器上濃縮。再次從DCM/己 燒濃縮剩餘物，獲得作為泡沫的4- ((5R，7R) -7-羥基-5-甲基-6，7- 二氫-5H-環戊二烯並 [d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(大量)和4-((5R，7S)-7-羥基-5-甲基-6，7- 二 氧-5H-環戊二烯並[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(少量)(9. 35g，95. 3%產率) 的混合物。LC/MS(APCI+)m/z 335[M+H]+。1H NMR(CDCl3)顯示併入次甲基甲醇(carbinol methine)的88%的非對映立體選擇性。
步驟12 將 4-硝基苯甲醯氯(4. 27g,23. Ommol)加到 4_ ((5R，7R)-7-羥基 _5_ 甲 基-6，7-二氫-5H-環戊二烯並[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(7. Og, 20. 9mmol)和 三乙胺(4. 38mL，31.4mm0l)在DCM(IlOmL)中的0°C溶液。在室溫攪拌反應混合物過夜，然 後加入飽和NaHC03。攪拌混合物10分鐘，然後用DCM萃取。將合併的萃取液乾燥(Na2SO4), 過濾並濃縮。將粗產物在Biotage 65M上進行快速色譜(用3 1己烷乙酸乙酯上樣粗 產物，然後2 1己烷乙酸乙酯洗脫4-((5R，7R)-5-甲基-7-(4-硝基苯甲醯氧基)-6， 7- 二氫-5H-環戊二烯並[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯和一些混合的級分)。然 後使用1 2己烷乙酸乙酯洗脫4-((5R，7S)-5-甲基-7-(4-硝基苯甲醯氧基)-6，7-二 氧-5H-環戊二烯並[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。通過旋轉蒸發濃縮帶有產物 的級分，獲得作為泡沫的4- ((5R，7R) -5-甲基-7- (4-硝基苯甲醯氧基)_6，7- 二氫-5H-環 戊二烯並[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(8. 55g，84. 5%產率)。LC/MS (APCI+)m/z 484[M+H]+。1H NMR(⑶Cl3)顯示單種非對映體)。通過旋轉蒸發濃縮帶有其它非對映體的 級分，獲得作為泡沫的4- ((5R，7S) -5-甲基-7- (4-硝基苯甲醯氧基)_6，7- 二氫-5H-環戊 二烯並[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0. 356g，3. 52%產率)。LC/MS (APCI+)m/z 484[M+H]+。步驟13描述從(5R)-4_(7-羥基-5-甲基-6，7_ 二氫-5H-環戊二烯並[d]啼 啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(步驟9)製備4-((5R，7S)-5-甲基_7_ (4-硝基苯甲醯氧 基)-6，7_ 二氫-5H-環戊二烯並[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯和4-((5R，7R)-5-甲 基-7-(4-硝基苯甲醯氧基)-6，7-二氫-5H-環戊二烯並[d]嘧啶-4-基)哌嗪羧酸
叔丁酯的替代方案。 步驟13 將4-硝基苯甲醯氯(15. 78g,85. 03mmol)加到(R)-4-(7-羥基-5-甲 基-6，7-二氫-5H-環戊二烯並[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(25. 85g，77. 30mmol) 和NEt3(ll. 73g, 16. 16mL, 115. 9mmol)在DCM(400mL)中的0°C溶液。攪拌反應混合物5分鐘。 然後將混合物升溫到室溫並攪拌過夜(17小時)，然後加入飽和NaHC03。攪拌反應混合物10 分鐘並轉移到分液漏鬥。收集有機層，用DCM洗滌水相萃取物(2X)。將合併的有機萃取物 乾燥(Na2SO4),過濾並濃縮。將粗產物在上樣有7 1己烷乙酸乙酯的矽土上進行快速色 譜(梯度5 1己烷乙酸乙酯至2 1己燒乙酸乙酯至1 1己燒乙酸乙酯)。分 離了 一些透明的4- ((5R，7R) -5-甲基-7- (4-硝基苯甲醯氧基)_6，7- 二氫-5H-環戊二烯並 [d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯級分、一些透明的4- ((5R，7S) -5-甲基-7- (4-硝基 苯甲醯氧基)-6，7_ 二氫-5H-環戊二烯並[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯級分和一 些混合的級分。將混合的級分再次過柱，並與此前分離的材料合併，獲得4-((5R，7R)-5-甲 基-7- (4-硝基苯甲醯氧基)_6，7- 二氫-5H-環戊二烯並[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔 丁酯(14. 27g,38% )和 4-((5R，7S)-5-甲基 _7_(4-硝基苯甲醯氧基)-6，7-二氫-5H-環 戊二烯並[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(12.58g，34%)。已顯示，使用4-溴苯甲
醯氯提供略微更好的異構體分離。 步驟 14 將 LiOH-H2O (0. 499g, 11. 9mmol)力口至Ij 4-((5R，7R)-5-甲基-7_(4_ 硝基 苯甲醯氧基)-6，7_ 二氫-5H-環戊二烯並[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2. 30g, 4. 76mmol)在2 1 THF H20(40mL)中的0°C溶液。將反應混合物升溫到室溫並攪拌1小 時。通過旋轉蒸發除去THF。然後加入飽和NaHCO3，用乙酸乙酯萃取混合物。用飽和NaHCO3 洗滌(IX)合併的萃取液，乾燥(Na2SO4),過濾並濃縮，獲得作為泡沫的4-((5R，7R)-7-輕 基-5-甲基-6，7- 二氫-5H-環戊二烯並[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1. 59g， 100. 0%產率)。流程正產物(workup just product)的HPLC獲得大於98%面積的純。LC/MS (APCI+)m/z 335[M+H]+。
步驟15 將 4M HCl/二噁烷(11. 2mL，44. 9mmol)加到 4-((5R，7R)-7-羥基-5-甲 基-6，7- 二氫-5H-環戊二烯並[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0. 600g, 1. 79mmol) 的二噁烷(15mL)溶液中。在室溫在氮氣下攪拌反應混合物過夜(20小時)。將混合物濃縮 至乾燥並在高真空管道中乾燥。將粗產物懸浮在乙醚中，超聲處理，並攪拌5分鐘。通過在 氮壓力下濾過中等砂心漏鬥而分離固體，用乙醚衝洗，在氮氣壓下乾燥，並進一步在高真空 管道乾燥，獲得作為粉末的(5R，7R) -5-甲基-4-(哌嗪-1-基)-6，7- 二氫-5H-環戊二烯 並[d]嘧啶-7-醇二鹽酸化物(0. 440g，79. 8%產率)。LC/MS(APCI+)m/z 235。 步驟16 在0°C將三甲基乙醯氯(1. 68g，13. 9mmol)加到2_(4_氯_3_氟苯基) 乙酸(2. 50g, 13. 3mmol)和 TEA (d. 0. 726 ；2. OOmL, 14. 3mmol)的無水 THF(IOOmL)溶液並在 室溫攪拌。在另一燒瓶中，在_78°C將n-BuLi (6. 424mL, 14. 58mmol)加到無水THF(IOOmL) 中的(R)-4-苄基噁唑烷-2-酮(2. 47g，13. 9mmol)。在-78 °C攪拌反應20分鐘，然後 向0°C混合的酸酐溶液逐滴加入該(R)-4-苄基噁唑烷-2-酮溶液。允許反應在室溫攪 拌過夜。用水(IOOmL)猝滅反應，用乙酸乙酯(IOOmL)稀釋。分離各層，用鹽水洗滌有 機物，乾燥(MgSO4)並濃縮為殘餘物。通過快速色譜純化所得的殘餘物，獲得(R)_4-節 基-3-(2-(4-氯-3-氟苯基)乙醯基)噁唑烷-2-酮(2.798，8.02讓01，60.5%產率)。1H NMR(400MHz,CDCl3) 7. 37 (t, J = 8. 2Hz, 1H)，7· 33-7. 26 (m，3Η)，7· 18-7. 12(m，3H)，7· 07 (d, J =8. 2Hz, 1H)，4. 73-4. 65 (m, 1H)，4. 33-4. 18(m，4H)，3. 27 (dd, Jl = 3. 5Hz, J2 = 13. 3Hz,， 1H)，2. 77 (dd, Jl = 9. 4Hz, J2 = 13. 7Hz, 1H)。
步驟17 將(Ir，4r)-4-氨基環己醇鹽酸化物(6. 67g,44mmol)懸浮在DCM(IOOmL) 中。然後加入Himing氏鹼(15mL)，隨後加入催化性4-二甲基氨基吡啶(「DMAP」)。攪拌 反應5分鐘，然後經10分鐘分批加入Boc2O(10. 2g,47mmol)。然後允許反應在室溫攪拌過夜。通過加入IN HCl猝滅反應並允許攪拌10分鐘。分離有機層，用DCM洗滌水層(2X)。 然後用鹽水和MgSO4乾燥合併的有機物並濃縮。將所得的殘餘物懸浮在己烷(除去任何過 量的Boc2O)中並過濾。作為固體獲得期望的產物(lr，4r)-4-羥基環己基氨基甲酸叔丁酯 (5. lg，54%產率)。1H NMR(400MHz, CDCl3) 4. 35 (br s，1H)，3. 65-3. 52 (m，1H)，3. 43 (br s, 1H)，1. 99 (明顯的三重峰，Jl = 17. 2Hz, J2 = 12. 1Ηζ，4Η)，1. 49-1. 30 (m, 12H)，1. 4-1. 08 (m, 2H)。
步驟18 在室溫將 NEt3 (d. 0. 726 ；4. 95mL, 35. 5mmol)加到(Ir，4r)-4-羥基環己 基氨基甲酸叔丁酯(5. Ig, 23. 7mmol)的DCM(IOOmL)溶液並攪拌為懸液。攪拌反應10分 鍾，隨後加入二甲基甲矽烷基三氟甲烷磺酸叔丁酯(6. 52mL，26. lmmol)，此時反應變成同 質溶液並攪拌2小時。用水(50mL)稀釋反應，分離各層。用IN HCl(2X50mL)洗滌有機 物，乾燥(MgSO4),濃縮為固體。通過快速色譜(5%乙酸乙酯/己烷)純化固體，獲得(Ir， 4r)-4-(叔丁基二甲基甲矽氧基)環己基氨基甲酸叔丁酯(6. 54g，19.8mmol，83.8%產 率)。1H NMR(400MHz,CDCl3) 4. 34 (br s, 1H)，3. 61-3. 50 (m, 1H) ,3. 4(br s, 1H)，1. 97(d, J = 12. 9Hz，2H)，1. 82 (d, J = 13. 7Hz，2H)，1. 44(s，9H)，1. 43-1. 30 (m, 2H)，1. 21-1. 05 (m, 2H)， 0. 87(s，9H)，0. 04(s，6H)。 步驟19:將(lr，4r)-4_(叔丁基二甲基甲矽氧基)環己基氨基甲酸叔丁酯 (1. OOg, 3. 03mmol)的無水 THF (50mL)溶液冷卻到-78 °C。然後加入 n-BuLi (1. 27mL, 3.19mmol)。攪拌反應20分鐘，伴隨加熱至_40°C。隨後快速逐滴加入氯甲基甲醚(d = 1. 060 ；0. 254mL, 3. 34mmol)。除去冷浴，在氮氣下伴隨加熱攪拌反應。用水猝滅反應，萃取 流程(work-up)並通過快速色譜(5%乙酸乙酯/己烷)純化，提供(lr，4r)-4-(叔丁基二 甲基甲矽氧基)環己基(甲氧基甲基)氨基甲酸叔丁酯(0. 957g，2. 36mmol，84%產率)。1H NMR (400MHz, CDCl3) 4. 69 (br s，1H)，3· 85-3. 47 (m，1H)，3· 27 (s，3H)，1· 90 (d，J = 10. 5Hz, 2H)，1. 79 (d, J = 12. 9Hz，2H)，1. 67-1. 50 (m, 2H)，1. 47(s，9H)，1. 46-1. 30(m，4H)，0· 88 (s, 9Η)，0· 04(s，6H)。
步驟20 將四丁基氟化銨(8. 94mL，8. 94mmol)加到(Ir，4r)-4-(叔丁基二甲基甲 矽氧基)環己基氨基甲酸叔丁酯(1. 97g，5. 96mmol)的THF(50mL)溶液並加熱到40°C過夜。 用水(IOOmL)和乙酸乙酯(IOOmL)稀釋反應。然後分離各層，乾燥(MgSO4)有機物並濃縮 為油。通過快速色譜(25%乙酸乙酯/己烷)純化油，獲得(Ir，4r)-4-羥基環己基(甲氧 基甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.32g，5. 09讓01，85%產率)。步驟 21 將 NaH(油中 60%:0. 563g, 14. 07mmol)加到(Ir，4r) _4_ 羥基環己基(甲 氧基甲基)氨基甲酸叔丁酯(3. 65g, 14. 07mmol)的THF(50mL)溶液並加熱到40°C。將甲基 碘(0. 878mL, 14. 07mmol)加到熱的攪拌溶液並加熱到60°C過夜。用水(IOOmL)猝滅反應 並用乙酸乙酯(IOOmL)稀釋。然後分離各層。將有機物乾燥(MgSO4)和濃縮。通過快速色 譜(10%乙酸乙酯/己烷)純化所得的殘餘物，獲得(lr，4r)-4-甲氧基環己基(甲氧基甲 基)氨基甲酸叔丁酯(3. 51g，12. 8讓01，91%產率)。步驟 22 將 TiCl4(0.207g，1.09mmol)力卩到冷卻至-78 V 的(R)_4_ 苄 基-3- (2- (4-氯-3-氟苯基)乙醯基)噁唑烷-2-酮(0. 362g，1. 04mmol)和(Ir，4r) -4-甲 氧基環己基(甲氧基甲基)氨基甲酸酯(0. 55g，2.01mmol)的無水DCM(20mL)溶液。將二 異丙基乙胺(「DIEA」 ；d 0. 742 ；0. 199mL, 1. 15mmol)加到這一冷的攪拌溶液。在_78°C攪 拌反應15分鐘，然後升溫到-10°C並攪拌3小時。用NH4Cl猝滅反應。用DCM(50mL)和水 (50mL)稀釋反應。然後分離各層。用DCM(25mL)萃取水層，乾燥(MgSO4)並濃縮為油。通 過柱色譜(10 % Et2O/己烷至30 % Et2O/己烷)純化該油，獲得(S) -3- ((R) -4-苄基-2-氧 代噁唑烷-3-基)-2-(4_氯-3-氟苯基)-3_氧代丙基((lr，4S)-4-甲氧基環己基)氨 基甲酸叔丁酯(0. 610g，1. 04mmol，99. 5 % 產率)。1H NMR(400MHz，CDCl3) 7. 38-7. 28 (m， 4H)，7. 25-7. 15 (m, 3H)，7. 10 (d, J = 8. 6Hz, 1H)，4. 65-4. 56 (m, 1H)，4. 15-4. 03 (m, 2H)，
3. 60-3. 36 (m, 2H)，3. 31 (s，3H)，3. 15-2. 95 (m, 1H)，2. 12-1. 97 (m, 3H)，1. 69-1. 57 (m, 2H)， 1. 47 (s，9H)，1. 46-1. 37 (m, 3H)，1. 37-1. 07 (m, 4H)。
步驟 23 將 H2O2 (0. 294mL，3. 06mmol)加到 LiOH-H2O (0. 0855g，2. 04mmol)的 THF/ 水(2 l，83mL)溶液。在室溫攪拌該溶液10分鐘。將溶液冷卻到0°C並用(S)-3-((R)-4-苄 基-2-氧代噁唑烷-3-基)-2- (4-氯-3-氟苯基)-3-氧代丙基((Ir，4S) -4-甲氧基環己 基)氨基甲酸叔丁酯(0.600g，1.019mmOl)的THF(IOmL)溶液處理。在0°C攪拌反應2小 時，然後允許升溫到室溫並攪拌過夜。將反應冷卻到0°C並用IM Na2SO3(IOmL)處理，攪拌 10分鐘。然後將反應升溫到室溫並攪拌10分鐘。濃縮反應並用乙酸乙酯(2X20mL)萃取。 用HSO4(s)酸化水相部分至pH為約1至約2，然後用DCM(2X20mL)萃取。合併有機物，幹 燥(MgSO4)並濃縮。所得的殘餘物提供(S)-3-(叔丁氧基羰基((lr，4S)-4-甲氧基環己基) 氨基)-2-(4-氯-3-氟苯基)丙酸(0. 312g，0. 726mmol，71%產率)。LC/MS > 95%純度， r. t. = 3. 25 分鐘，(APCI+)m/z = 430 [M+H]+。 步驟24 將(5R，7R)-5-甲基_4-(哌嗪-1-基)-6，7_ 二氫-5H-環戊二烯並[d]嘧 啶-7-醇二鹽酸化物(0. 236g，0. 768讓01)、0-(7-氮雜苯並三唑-1-基)-隊隊^，^-四甲 基六氟磷酸脲(「HATU」;0. 265g，0. 698mmol)和可力丁(0. 369mL, 2. 79mmol)加到(S)_3_(叔 丁氧基羰基((lr，4S)-4-甲氧基環己基)氨基)-2-(4_氯-3-氟苯基)丙酸(0. 300g, 0. 698mmol)的DCM/DMF (15mL，2 1)溶液，在室溫攪拌反應過夜。將反應在水(20mL)和 DCM(50mL)之間分層，分離各層。用水(2X10mL)洗滌有機層。用DCM(25mL)回萃水層，幹 燥(MgSO4)並濃縮為油。通過柱色譜(5%Me0H/DCM)純化油，獲得(S)-2-(4-氯-3-氟苯 基)-3-(4-((5札710-7-羥基-5-甲基-6，7-二氫-5!1-環戊二烯並[d]嘧啶_4_基)哌 嗪-I-基)-3-氧代丙基((Ir，4S)-4-甲氧基環己基)氨基甲酸叔丁酯(0. 394g，0. 610mmol,
87. 4%產率)。LC/MS > 95% 純度，r. t. = 3. 83 分鐘，(APCI+)m/z = 646。 步驟25 將 二 噁烷(4mL，16mmol)中的 4N HCl 加到(S)-2-(4-氯 _3_ 氟苯 基)-3-(4-((5R，7R)-7-羥基-5-甲基-6，7-二氫-5H-環戊二烯並[d]嘧啶_4_基)哌 嗪-1-基)-3-氧代丙基((lr，4S)-4-甲氧基環己基)氨基甲酸叔丁酯(0. 370g，0. 573mmol) 的DCM(IOmL)溶液中，在室溫攪拌反應3小時。將反應內含物逐滴加入劇烈攪拌的Et2O/己 烷混合物(75mL，3 1)，獲得為細顆粒的固體。過濾顆粒並乾燥，獲得(S)-2-(4-氯-3-氟 苯基)-1-(4-((5札710-7-羥基-5-甲基-6，7-二氫-5!1-環戊二烯並[d]嘧啶_4_基)哌 嗪-1-基)-3-((Ir，4S)-4-甲氧基環己基氨基)丙酮二鹽酸化物(0. 325g，0. 525mmol, 91. 7%產率)。LC/MS > 95%純度，r. t. = 2. 52 分鐘，(APCI+)m/z = 546。上述說明被認為僅僅是本發明原理的例證說明。此外，多種變型和變體對於本領 域熟練技術人員都是明顯的，因此並不希望將本發明限於如上所述的確切結構和方法。據 此，應當認為所有的適宜變型和等價體都落入以下權利要求書所限定的本發明範圍內。詞語「包含」(comprise)、「包含」(comprising)、「包括」(include)、「包 括」(including)和「包括」(includes)當用於本說明書和所附權利要求書中時，旨在具體 限定存在所述的特徵、整數、組分或步驟，但不排除存在或加入一個或多個其它特徵、整數、 組分、步驟或組別。
權利要求
一種式I的化合物FPA00001182113700011.tif
2.(S) -2- (4-氯-3-氟苯基)-1-(4- ((5R，7R) -7-羥基-5-甲基-6，7- 二氫-5H-環戊 二烯並[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-((11~，4幻-4-甲氧基環己基氨基)丙-1-酮。
3.一種藥物組合物，包含權利要求1或2所述的化合物。
4.一種治療哺乳動物中AKT介導的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述哺乳動物 施用治療有效量的權利要求1或2所述的化合物。
5.根據權利要求4所述的方法，其中所述疾病或病症是炎性、過度增生性、心血管、神 經變性、婦科或皮膚疾病或病症。
6.一種抑制哺乳動物中AKT蛋白激酶產生的方法，該方法包括向所述哺乳動物施用有 效量的權利要求1或2所述的化合物。
7.一種抑制哺乳動物中AKT蛋白激酶活性的方法，該方法包括使所述激酶與權利要求 1或2所述的化合物接觸。
8.權利要求1或2所述的化合物，其用作治療AKT蛋白激酶介導的疾患的藥物。
9.權利要求1或2所述的化合物在製備用於治療的藥物中的用途。
10.權利要求1或2所述的化合物在治療過度增生性疾病中的用途。
11.權利要求1或2所述的化合物在治療癌症中的用途。
12.一種用於治療AKT蛋白激酶介導的疾患的藥盒，其中所述藥盒包含a)包含權利要求1或2所述的化合物的第一藥物組合物；和b)任選地，使用說明書。
全文摘要
本發明提供了包括式I的化合物和其藥學上可接受的鹽，還提供了使用本發明化合物作為AKT蛋白激酶抑制劑的方法和治療過度增生性疾病如癌症的方法。
文檔編號A61K31/517GK101932565SQ200980101902
公開日2010年12月29日 申請日期2009年1月9日 優先權日2008年1月9日
發明者伊恩·S·米切爾, 克裡斯廷·沙博, 史蒂文·多, 基思·L·斯潘塞, 尼古拉斯·C·卡蘭, 布賴恩·薩菲納, 張碧榮, 徐睿, 校登明, 梁軍, 約瑟夫·本西克, 詹姆斯·F·布拉克 申請人:陣列生物製藥公司;健泰科生物技術公司