一種他克莫司注射製劑的製作方法

2023-05-08 07:54:16

專利名稱：一種他克莫司注射製劑的製作方法
一種他克莫司注射製劑
技術領域：
本發明涉及一種注射製劑，特別涉及一種具有免疫抑制活性的他克莫司 (Tacrolimus)注射製劑。
背景技術：
一、他克莫司藥物製劑背景本發明所述他克莫司，英文名為tacrolimus，其化學名稱為[3S_[3R*[E(1S*， 3S*，4S*)]，4S*，5R*，8S*，9E，12R*，14R*，15S*，16R*，18S*，19S*，26aR*]]-5，6，8，11，12， 13，14，15，16，17，18，19，24，25，26a-六-癸氫-5，19- 二羥基-3-2_(4_ 羥 _3_ 甲氧環 已基)-1-甲基乙烯基-14，16- 二甲氧-4，10，12，18-四甲基_8-(2_丙烯基)_15，19-環 氧-3H-吡啶並2，1-c1，4氧雜氮雜環二十三碳烯-1，7，20，21 (4H，23H)-四酮，一水合 物。國外部分有關文獻及專利將他克莫司稱作Π(-506，現今我國食品藥品監督管理局批准 的通用名為他克莫司。他克莫司是由日本藤澤製藥公司於1982年提取的一種真菌代謝產物。其具有 免疫抑制活性，以他克莫司製成的注射液和膠囊劑是強效的免疫抑制劑，適用於防治器官 移植後的排斥反應。在分子水平，他克莫司的免疫抑制作用是由細胞質內與之結合的蛋白 FKBP12介導的。FKBP12使得他克莫司進入細胞內，並形成複合物，該複合物競爭性地與鈣 調素特異性地結合併抑制鈣調素，後者介導T細胞內-鈣依賴性抑制性信號傳遞系統，從而 阻止一系列淋巴因子基因轉錄。其抑制細胞毒淋巴細胞的形成，移植排斥反應主要是由後 者引起。抑制T細胞活化及TH細胞依賴性的B細胞增殖，以及淋巴因子的生成如白細胞介 素2，白細胞介素3及β-幹擾素，以及白細胞介素_2受體的表達。體內研究表明，他克莫 司注射液和膠囊劑對肝和腎移植均有效。目前市場上已有的以他克莫司為有效活性成份的藥物製劑有注射液、膠囊和軟膏 三種。他克莫司注射劑和他克莫司膠囊劑用於預防肝臟或腎臟移植術後的移植物排斥反應 及治療肝臟或腎臟移植術後應用其他免疫抑制藥物無法控制的移植物排斥反應。他克莫司 軟膏用於因潛在危險而不宜使用傳統療法、或對傳統療法反應不充分、或無法耐受傳統療 法的中到重度特應性皮炎患者，作為短期或間歇性長期治療。二、他克莫司注射劑研發背景在臨床上，他克莫司注射劑適用於不能接受口服給藥或需要在短期內達到較高血 藥濃度、迅速起效的患者。因此，他克莫司注射劑在臨床治療上仍然是口服製劑無法代替 的。但將他克莫司製成注射劑需要克服的問題是其不溶解性。由於他克莫司易溶於有機溶 劑(例如，甲醇、乙醇或丙酮)，而幾乎不溶於水，因此目前已有的他克莫司注射液配製都是 採用非水溶劑(例如，無水乙醇)。但即使採用了溶解性較好的無水乙醇作為溶解他克莫司 的溶劑，仍然達不到臨床治療所需要的規格濃度(每1毫升溶劑含5mg他克莫司)，參考臨 床上已採用的他克莫司注射液的給藥方法，該注射液在使用前還需用5%的葡萄糖注射液 或0. 9%氯化鈉注射液(亦稱生理鹽水)進行稀釋，並且稀釋液濃度控制在0. 004-0. Img/
3ml。因此，要使本發明達到上述臨床使用要求，他克莫司注射劑配製的技術關鍵在於找到適 宜的表面活性劑以增加他克莫司在無水乙醇、5%葡萄糖注射液或生理鹽水中的溶解性。所述的表面活性劑是指具有固定親水、親油基團的化合物，由於兩親性基團集中 在固體藥物或液體藥物的表面，能降低兩種不相混合物的表面或界面張力的物質。表面活 性劑在18世紀初已開始應用於藥學中，最初在醫藥方面應用很少，進展緩慢，在工業方面 應用較廣。但在醫藥方面的應用近百年才有發展，特別近40年來隨著化學合成工業的興 起，有了較快的發展。表面活性劑的品種逐漸增多，19世紀80年代至90年代更有飛躍發展， 目前在藥學中已作為增溶劑、乳化劑、助懸劑、抗氧化劑、滲透劑、清潔去汙劑、消毒防腐劑、 減低表面張力劑等應用，在新劑型、藥物分析、藥物合成等藥學各專業學科中已廣泛應用。 然而，由於每種表面活性劑具有不同的物理值(physical value)，如親水親油平衡(HLB) 和臨界膠束濃度(CMC)，在應用領域中具有不同特點，因此認為選擇適當的表面活性劑以制 備他克莫司注射液十分困難。日本藤澤製藥公司研製生產並在中國、日本、美國等國上市的他克莫司注射液，其 採用的表面活性劑是聚氧乙烯60氫化蓖麻油(Polyoxyl 60Hydrogenated Castor Oil，以 下簡稱HC0-60)，每毫升他克莫司注射液中含200mg HC0-60，該配方信息已公開但未申請專 利。中國專利(申請號200580038459. X)公開了一種他克莫司注射液，該注射製品含
有他克莫司、聚乙二醇15-羥基硬脂酸酯和無水乙醇。。韓國專利No. 0177158公開了一種溶液製劑，該溶液製劑含有他克莫司或其藥學 上可接受的鹽、包括氫化蓖麻油聚氧乙烯醚的藥學上可接受的表面活性劑和藥學上可接受 的非水溶劑。韓國專利No. 0206722公開了一種溶液組合物，該組合物含有他克莫司或其藥學 上可接受的鹽；選自由蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂和氫化蓖麻油聚氧乙烯醚所組成的藥學上 可接受的乳化劑；和選自由大豆油和芝麻油所組成的液體炭氫化合物的藥學上可接受的 油。韓國特開No. 2001-0006070公開了一種藥用組合物，該藥用組合物含有水不溶性 藥物和兩種以上的表面活性劑，其特徵在於，至少一種表面活性劑能夠溶解其它水不溶性 表面活性劑和水不溶性藥物。以上公開的資料中，採用的表面活性劑為氫化蓖麻油聚氧乙烯醚，包括HC0-60，亦 或採用氫化蓖麻油聚氧乙烯醚與蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂等天然表面活性劑的組合物，或 採用聚乙二醇15-羥基硬脂酸酯，暫無資料表明其它表面活性劑可用於他克莫司注射液的 製備。藥劑學上，主張製劑配方中儘量減少與治療作用無關的組分或其含量，而達到相 似或更好的藥物質量和臨床療效。任何與治療作用無關的組分的增加或其加入量的增大都 會給臨床使用帶來安全性問題。從藥劑學角度分析，以上公開資料中採用多種表面活性劑 組合的發明均不是最佳的發明，其臨床應用的療效和安全性尚未有相關研究數據，其安全 性值得商榷。而日本藤澤製藥公司的他克莫司注射液和中國專利(申請號200580038459. X)公開的他克莫司注射液均採用一種表面活性劑，從藥學質量研究的角度，二者均能達到 較好的藥物質量。
中國專利(申請號200580038459. X)公開說明書中提供對比數據顯示，採用Iml 無水乙醇含300mg的聚乙二醇15-羥基硬脂酸酯的他克莫司注射液與採用Iml無水乙醇含 200mg HC0-60的他克莫司注射液相比，二者在室溫下放置超過7天，以及用生理鹽水溶液 稀釋100倍後在室溫下放置超過7天，均未觀察到沉澱，表明採用上述兩種表面活性劑均能 使製成的他克莫司注射液具有較好的穩定性。上述日本藤澤製藥公司和中國專利(申請號200580038459. X)公開的數據顯示， 他克莫司注射液的最佳溶液配比為，Iml無水乙醇中溶解5mg的他克莫司，表面活性劑採用 200mg的HC0-60或300mg的聚乙二醇15-羥基硬脂酸酯。為了發現更優異的表面活性劑， 使得以加入更少量的表面活性劑達到相似或更優的他克莫司注射液質量，本發明的發明人 進行了大量的研究。本發明提供了一種以他克莫司為有效活性成份的注射製劑，通過使用 蓖麻油聚烴氧酯(35)來解決該技術難題。

發明內容本發明要解決的技術問題在於提供一種他克莫司注射製劑，該製劑使用了蓖麻油 聚烴氧酯(35)作為表面活性劑，使得水不溶性的他克莫司能夠充分溶解於非水溶劑中並 達到上述使用要求，並且表面活性劑的加入量顯著減少，從而減小非有效活性組分帶來的 臨床使用安全問題。本發明是這樣實現的一種他克莫司注射製劑，其中，該注射製劑含有他克莫司、 蓖麻油聚烴氧酯(35)和非水溶劑。上述技術方案可進一步具體為所述非水溶劑是無水乙醇。所述注射製劑中所述 的蓖麻油聚烴氧酯(35)與他克莫司的重量比為10 20 1。本發明所述的蓖麻油聚烴氧酯(35)，英文名為Polyoxylethylene CastorOil Ether (35)，為蓖麻油和環氧乙烷按摩爾比1 35反應製成的物質，主要成份為甘油聚乙烯 二醇蓖麻油醇酸酯，該物質在26°C以上為淡黃色油狀液體，在二氯甲烷中極易溶解，在水或 乙醇中易溶，在乙酸乙酯中溶解。亦有相關資料將其稱為聚氧乙烯蓖麻油酸酯(35)、聚氧乙 烯35蓖麻油(Polyoxyl35 Castor Oil)或聚氧乙烯醚蓖麻油(35)或簡稱EL-35。由於水 不溶性的他克莫司需用非水溶劑進行溶解，故本發明中可以使用臨床上及藥學上可接受劑 量的任何種類的非水溶劑來溶解他克莫司和蓖麻油聚烴氧酯(35)，所述非水溶劑經生理鹽 水或葡萄糖溶液稀釋後適用於人體靜脈注射。所述非水溶劑優選為無水乙醇。如認為必要， 本發明所述的他克莫司注射溶液還可根據需要，在本發明所述成份的基礎上添加其他藥學 上可接受的添加劑，包括已公開的其他可用的表面活性劑。本發明具有以下優點與現有技術相比，本發明的他克莫司注射製劑，只需使用一 種表面活性劑，且表面活性劑加入的量比已經公開的其他他克莫司注射溶液使用的表面活 性劑的加入量顯著減少。因此本發明提供的是一種添加劑最少的他克莫司注射溶液，能夠 顯著降低使用大量添加劑帶來的臨床安全風險。另外，所述注射製劑中所述的蓖麻油聚烴 氧酯(35)與他克莫司的重量比為10 20 1，以此比例製得的他克莫司注射溶液經葡萄 糖注射液和生理鹽水稀釋時不產生沉澱，具有良好的穩定性。
具體實施方式
現通過結合以下實施例對本發明進行描述。但是並不應理解為實施例用於限制本 發明權利要求所詳細定義的範圍。對比例1使用聚氧乙烯60氫化蓖麻油的他克莫司注射液在Iml無水乙醇中溶解5mg的他克莫司和200mg的聚氧乙烯60氫化蓖麻油，隨後 用0. 22 μ m的過濾器進行過濾，製成可用於注射的形式。實施例1使用蓖麻油聚烴氧酯(35)的他克莫司注射液在Iml無水乙醇中溶解5mg的他克莫司和50mg的蓖麻油聚烴氧酯(35) (Cremophor EL Castor Oil, BASF公司)，隨後用0. 22 μ m的過濾器進行過濾，製成可 用於注射的形式。實施例2使用蓖麻油聚烴氧酯(35)的他克莫司注射液在Iml無水乙醇中溶解5mg的他克莫司和75mg的蓖麻油聚烴氧酯(35) (Cremophor EL Castor Oil, BASF公司)，隨後用0. 22 μ m的過濾器進行過濾，製成可 用於注射的形式。實施例3使用蓖麻油聚烴氧酯(35)的他克莫司注射液在Iml無水乙醇中溶解5mg的他克莫司和IOOmg的蓖麻油聚烴氧酯(35) (Cremophor EL Castor Oil, BASF公司)，隨後用0. 22 μ m的過濾器進行過濾，製成可 用於注射的形式。實驗一及其結果將對比例1和實施例1-3製備得到的他克莫司溶液製劑分別用5%葡萄糖注射液 和0. 9%氯化鈉注射液進行配伍實驗，用葡萄糖注射液和氯化鈉注射液稀釋後的溶液在室 溫下放置24小時，觀察配伍溶液的穩定性及含量變化，結果如表1所示。表1他克莫司溶液的標示含量變化
6 從表1可以看出對比例1和實施例1-3製備得到的他克莫司溶液製劑分別用葡萄 糖注射液和生理鹽水稀釋50倍後在室溫下放置超過24小時，他克莫司藥物含量均較穩定， 且沒有觀察到結晶。此外，用5%葡萄糖注射液和生理鹽水溶液將對比例1製備的他克莫司溶液製劑 50倍稀釋的測試中，可以看出稀釋後的溶液在室溫下放置15小時，含量略有下降，相比之 下，實施例1-3均未見下降。故本發明提供的他克莫司注射溶液具有更好的穩定性。實驗二及其結果實施例3製備得到的他克莫司溶液用0. 9%氯化鈉注射液稀釋成濃度為0. lmg/ml 的受試液後進行動物刺激性、過敏性和溶血性實驗，觀察該溶液用於靜脈注射給藥的血管 刺激性、過敏性以及溶血性。1、動物血管刺激性實驗
取體重2. 5-3. Okg健康大耳白家兔8隻，隨機分兩組，每組4隻。給藥組分別耳緣 緩慢靜脈注射實施例3製備得到的他克莫司溶液的稀釋液lmL/kg，濃度為0. lmg/mL。保持 藥液在給藥血管內流經或滯留約3分鐘。對照組等速等量注射0.9%氯化鈉注射液。每天 給藥一次，連續5天。給藥期間每天肉眼觀察給藥局部血管有無血栓形成，周圍組織有無紅 腫瘀血等炎症反應。於末次給藥24小時後處死動物，迅速取其耳組織(從給藥局部向心方 向3cm取下)，10%福馬林固定，石蠟包埋，常規製片，HE染色，光鏡下觀察血管及周圍組 織形態學改變。結果給藥期間肉眼觀察，各組兔耳緣靜脈注射局部未見明顯紅、腫、瘀血等症狀。 給藥組與對照組比較未見明顯差別。結果見表1。表1血管刺激性實驗肉眼觀察記錄 注無血栓(-)小血栓l-4mm(+)中血栓5_14mm(++)大血栓15mm以上(+++)無炎 症變化(_)輕度炎症3cm範圍(+)中度炎症範圍1/3耳殼(++)強度炎症範圍1/2耳殼-全 耳(+++)組織學觀察給藥組兔耳緣靜脈血管壁完整，光滑。未見內皮損傷，無血栓形成及 周圍組織水腫、炎細胞浸潤、炎症、壞死等病理變化。給藥組與對照組比較無明顯差別。2、動物過敏性試驗取體重250_350g健康豚鼠18隻，隨機分為3組(供試品組、陰性對照組、陽性對 照組)每組6隻。連續3次，隔日腹腔注射濃度為0. lmg/mL的實施例3製備得到的他克莫 司溶液稀釋液(供試品組)0. 5mL/只、0. 9%氯化鈉注射液(陰性對照)0. 5mL/只和10% 卵白蛋白溶液(陽性對照)0. 5mL/只進行致敏。然後將供試品組、陰性對照組和陽性對照 組分別分成兩組，每組3隻，分別在第一次注射後第14日及21日靜脈注射供試品ImL/只、 0. 9%氯化鈉注射液ImL/只和10%卵白蛋白溶液ImL/只進行激發，在注射後15分鐘內，觀察注射藥液的豚鼠是否出現過敏反應。如有豎毛、呼吸困難或咳嗽3聲等現象中的兩種或 兩種以上者，或有抽搐、虛脫或死亡等現象之一者，則判為陽性。陰性對照組不得出現過敏 反應。而注射10%卵白蛋白溶液的豚鼠應全部出現過敏反應，而且6隻豚鼠中應有4隻以 上出現死亡。結果，陰性對照液及實施例3製備得到的他克莫司溶液的稀釋液兩次靜脈給藥後 15分鐘內每組各6隻豚鼠均未出現過敏反應，陽性對照液兩次靜脈給藥後1分鐘內6隻豚 鼠全部出現咳嗽、呼吸抑制、抽搐直至死亡。見表3。表3過敏試驗結果(η = 6) 結果表明在本試驗條件下實施例3製備得到的他克莫司溶液的稀釋液過敏試驗 未出現全身過敏反應。3、動物溶血性試驗2%紅血球混懸液的製備取兔血數毫升，放入盛有玻璃珠的三角瓶中振搖10分鐘，除去纖維蛋白原、使成 脫纖血液，加約10倍量的生理鹽水，搖勻、離心，除去上清液，沉澱的紅血球再用生理鹽水 如法洗滌2-3次，至上清液不呈紅色為止。將所得紅血球用生理鹽水稀釋成2%的混懸液， 實驗當天使用，用時搖勻。試驗操作取試管7隻，按表4配比量依次加入2%紅血球混懸液和生理鹽水，混勻後，於 37°C恆溫箱放置半小時，然後分別加入不同體積濃度為0. lmg/mL的稀釋液(第6管為陰性 對照管)，搖勻後，置37士0.5°C恆溫箱中。開始每隔15分鐘觀察一次，1小時後，每隔1小 時觀察一次，連續觀察4小時，如溶液呈透明紅色，即表示溶血。如溶液中有棕紅色或紅棕 色絮狀沉澱，表示有紅細胞凝集作用。表4他克莫司注射液溶血試驗配比量 試驗結果7號管在加入了蒸餾水後不久溶液即出現溶血現象，而加入藥液的各實驗管(1-5 管)和6號生理鹽水管溶液在規定的時間內均未呈透明紅色，也未有棕紅色或紅棕色絮狀 沉澱出現，表明實施例3製備得到的他克莫司溶液的稀釋液未出現溶血與凝集作用。結果 見表5。表5溶血試驗結果 注+++完全溶血；++部分溶血；+凝集；-不溶血，也不發生凝集從表5中可見實施例3製備得到的他克莫司溶液的稀釋液在4小時內未引起溶 血或凝集反應。
權利要求
一種他克莫司注射製劑，其特徵在於該注射製劑含有他克莫司、蓖麻油聚烴氧酯(35)和非水溶劑。
2.根據權利要求1所述的一種他克莫司注射製劑，其特徵在於所述非水溶劑是無水乙醇。
3.根據權利要求1或2所述的一種他克莫司注射製劑，其特徵在於該注射製劑中所 述的蓖麻油聚烴氧酯(35)與他克莫司的重量比為10 20 1。
全文摘要
本發明提供了一種他克莫司注射製劑，含有他克莫司、蓖麻油聚烴氧酯(35)和非水溶劑。該注射製劑中所述的蓖麻油聚烴氧酯(35)與他克莫司的重量比為10～20∶1時效果較佳。本發明提供的是一種添加劑種類及加入量均為最少的他克莫司注射溶液，能夠顯著降低使用大量添加劑帶來的臨床安全風險。另外，所述注射製劑中所述的蓖麻油聚烴氧酯(35)與他克莫司的重量比為10～20∶1，以此比例製得的他克莫司注射溶液經葡萄糖注射液和生理鹽水稀釋時不產生沉澱，具有良好的穩定性。
文檔編號A61P37/06GK101869547SQ20091011155
公開日2010年10月27日 申請日期2009年4月24日 優先權日2009年4月24日
發明者張娜 申請人:張娜;福州華為醫藥技術開發有限公司