用檀香樹種子胚離體快速育苗的方法
2023-05-08 18:30:51 2
專利名稱：：用檀香樹種子胚離體快速育苗的方法
技術領域：
：本發明涉及植物再生的方法，具體是用檀香樹種子胚離體培養快速苗育的方法。
背景技術：
：檀香樹(53/^W，《3乃，L.)是檀香科常綠喬木，原產於印度、印度尼西亞及馬來西亞，有很高的藥用價值和經濟價值。其樹幹心材含有豐富的揮髮油，是名貴的中藥材，主要有溫中和胃、止痛止血的功效，心材所含的揮髮油在醫藥工業上用途非常廣泛。此外，檀香還是日用化妝品生產中的貴重原料。檀香是常綠植物，也作為亞熱帶地區的綠化樹種，因此，大力推廣檀香種植對於解決國內檀香資源緊缺具有重大意義。推廣種植檀香樹需要解決的是種苗的來源，目前檀香樹苗主要靠種子繁殖，由於檀香種子成熟後有一定的休眠期，播種前需要半年至一年的沙藏，從播種到萌發成苗，一般需23個月，且種子發芽率低，出苗不整齊，是檀香種苗繁育的一大障礙。文獻"檀香體細胞胚胎的發生及植株再生的研究"(食品與藥品，200S,10(1):35-37)報導了應用現代生物技術研究開發檀香樹種苗的生產，其方法是用檀香樹的葉片在附加1.1pmol/LTDZ(thidiazuron,N-苯基-N'-l,2，3-噻二唑-5-脲)的MS培養基(Murashige和Skoog，1962)上誘導體細胞胚胎的發生，再將生成的體細胞胚轉移到附加1.4pmol/L的赤黴素的MS培養基上培養，使之發育成苗。該方法培養的周期長，從體細胞胚誘導培養開始到無菌苗生成需要34個月的時間；生成的無菌苗沒有根，所得的檀香苗成不了種苗，不能推廣應用。CN101213936A公開了一種檀香的組織培養快繁種苗的方法，但它是需要用十年以上的檀香樹的嫩芽進行體外培養，其方法需四個步驟一是誘導長出不定芽的培養；二是叢芽繁殖培養；三是生根培養；四是移栽。步驟繁瑣，成苗時間長，成本高而且在實際應用中，成功率很低，僅處在理論研究階段，方法上有待進一步改進。因此，尋求一種實用技術快速培養檀香樹苗對於檀香種植業具有重要的實際意義。
發明內容本發明的目的是提供了一種能實際應用於批量生產的，檀香樹種苗快速繁育的方法。為達到本發明的目的，所採用的技術方案是用檀香樹種子胚離體快速育苗的方法，它是取檀香種胚置於人工培養基上，在25士2'C，無菌黑暗培養IO天，第11天增加光照16小時，黑暗8小時，光照強度為2000lx，培養10天，再將萌發的苗移栽至沙土，在溫度26士2'C、相對溼度75±5%、光照強度為150020001x、光照12小時條件下培養30天以上即成種苗，種苗可長成1520公分高，根系發達的樹苗，即可移栽至大田。所說的人工培養基為1L的MS培養基中添加26mg的赤黴素或1L的MS培養基中添加1.0~2.0mg6-苄基氨基嘌呤。為了提高種胚的發芽率和成活率，將用作離體培養的檀香樹的成熟果實去除肉質的果皮，洗淨後，用重量百分濃度為0.1%的HgCl2溶液浸泡815分鐘，或510°/。的次氯酸鈉水溶液浸泡1520分鐘，或用0.51.0%高錳酸鉀溶液浸泡2060分鐘，浸泡後取出種子用無菌水衝洗，去除水分後備用。本發明的有益效果1.縮短了育苗時間從用種胚開始培養至長成1520公分高，可移栽大田的苗，僅需5060天；2.成苗率高，成苗率可達到87%;3.種苗發芽整齊，便於大規模生產操作；4.成本比組織培養低。下面通過實施例進一步闡述本發明的技術方案具體實施例方式實施例1檀香樹種子胚離體育苗1.材料與方法l.l種子採集在10月12月間，採集樹齡約為IO年的檀香樹成熟(紫黑色)果實，去除外層紫黑色肉質果皮後，用清水洗淨，晾乾備用。人工培養基的酉己制按文獻NarayanaswamiS,NorstogK.Plantembryoculture.BotRev[J]，1964,30:587-628配製MS培養基，高壓滅菌(O.lMPa，121°C,15分鐘)後冷卻至5(TC，按，每lL的MS培養基添加4.8mg赤黴素。1.2種胚離體培養將上述檀香種子剝除紅色骨質中果皮，取出種子，用重量百分濃度為10%的次氯酸鈉水溶液浸泡15分鐘後，用無菌水衝洗5次，吸乾表面過多水分，在無菌條件下接種於人工培養基上(每瓶接種3個胚)，在25土rc，黑暗培養。每5天觀察一次，記錄萌發情況；第ll天轉入光照培養(每天16小時光照，8小時黑暗，光照強度為2000k)，培養10天後大部分種胚都己萌發，或長成帶12對葉的小苗，即可取出移栽至沙土，在26士2'C溫度，相對溼度7080%，多少光照度光照12小時的條件下培養30天，檀香苗生長健壯，根系發達，苗高達1520公分，即可成為栽培生產用苗，同時統計成苗數量，計算成苗率。結果見表l。試驗結果表1檀香種胚體外培養成苗情況tableseeoriginaldocumentpage5萌發率計算萌發率=萌發的胚數量/接種的胚數量X100%成苗率計算成苗率二成苗的數量/接種的胚數量X100%實施例2檀香樹種子胚胎用不同激素濃度的培養基離體育苗l.材料與方法l.l種子採集同實施例l培養基的配製與實施例1相同方法配製MS培養基並滅菌後，按每1L的MS培養基添加2.0mg或6.0mg赤黴素配製，分別為試驗組1、2。1.2種胚離體培養方法同實施例l。剝去皮的種子用O.1%的升汞(HgCl2)溶液浸泡10分鐘。種子消毒後的處理方法同實施例1結果見表2表2檀香種胚體外培養成苗情況試驗組試驗批次檀香種胚總萌發數平均萌發總成苗數平均成苗率接種數量(粒)率(％)(顆)(%)(粒)1958387.48084.212998787.88585.93998989.98686.91907886.76572.222907583.37077.83908088.96875.5實施例3檀香樹種子胚胎用其它激素培養基離體育苗l.材料與方法l.l種子採集同實施例l培養基的配製與實施例1相同方法配製MS培養基，按2.0mg/L的用量添加6-苄基氨基嘌呤(6-BA)後，再高壓滅菌(O.lMPa，121°C，15分鐘)。1.2種胚離體培養方法同實施例1。結果見表3表3檀香種胚在含6-BA的人工培養基上培養的成苗情況試驗批次6-BA濃檀香種胚總萌發數平均萌發總成苗數平均成苗率度(mg/L)接種數量(粒)率a)(顆)(%)(粒)11.0995353.53131.321.5904145.52829.532.0954244.22425.2實施例4，種子用不同消毒方法的育苗試驗比較材料與方法l.l種子採集同實施例l培養基的配製方法同實施例l1.2種胚離體培養方法同實施例l。剝去硬皮的種子胚的分別用下列不同的消毒劑進行消毒A次氯酸鈉溶液；B升汞溶液；C高錳酸鉀溶液；種胚消毒後的處理方法及培養條件同實施例l。試驗結果見表4tableseeoriginaldocumentpage7權利要求1.一種用檀香樹種子胚離體快速育苗的方法，其特徵在於取檀香種胚置於人工培養基上，在25±2℃，無菌黑暗培養10天，第11天增加光照16小時，黑暗8小時，光照強度為2000lx，培養10天，再將萌發的苗移栽至沙土，在溫度26±2℃、相對溼度75±5％、光照強度為1500～2000lx、光照12小時條件下培養30天以上即成種苗，所說的人工培養基為1L的MS培養基中添加赤黴素2～6mg或6-苄基氨基嘌呤1.0～2.0mg。2.根據權利要求1所說的用檀香樹種子胚離體快速育苗的方法，其特徵在於在取檀香樹的種子胚之前將檀香樹的種子用重量百分濃度為0.1%的HgCl2水溶液浸泡515分鐘，或用重量百分濃度為515%的次氯酸鈉水溶液浸泡520分鐘，或用重量百分濃度為0.51.0%高錳酸鉀溶液浸泡2060分鐘，浸泡後取出種子用無菌水衝洗，去除水分後備用。全文摘要用檀香樹種子胚離體快速育苗的方法，涉及植物再生的方法，具體是用檀香樹種子胚離體培養快速育苗的方法。它是取檀香種胚置於人工培養基上，在25±2℃，無菌黑暗培養10天，第11天增加光照16小時，黑暗8小時，光照強度為2000lx，培養10天，再將萌發的苗移栽至沙土，在溫度26±2℃、相對溼度75±5％、光照強度為1500～2000lx、光照12小時條件下培養30天以上即成種苗，所說的人工培養基為1L的MS培養基中添加2～6mg的赤黴素或1L的MS培養基中添加2.0mg6-苄基氨基嘌呤。本發明的有益效果縮短了育苗時間；成苗率高，成苗率可達87％；種苗發芽整齊，便於大規模生產操作；成本低。文檔編號A01C1/00GK101595824SQ200910040708公開日2009年12月9日申請日期2009年7月1日優先權日2009年7月1日發明者振嚴,曾慶錢,莫小路,蔡嶽文,亮袁,邱蔚芬申請人:廣東省中藥研究所