鐵皮石斛自然光快繁育苗方法
2023-05-08 01:12:46 2
專利名稱：鐵皮石斛自然光快繁育苗方法
技術領域：
本發明屬於生物技術領域，尤其涉及一種珍稀瀕危中藥材鐵皮石斛自然光快繁育 苗的方法。
背景技術：
鐵皮石斛是《中國藥典》收載的主要品種之一，藥用價值高、保健功能強，主要成分 為多糖、石斛鹼、胺基酸和微量元素等，具有滋陰清熱、益胃生津、清嗓明目、增強人體免疫 力、抗衰老、抗腫瘤等功效。多年來，由於產區藥農毀滅性採挖，使野生鐵皮石斛資源瀕臨滅 絕，國家已將鐵皮石斛列為重點保護的珍稀瀕危物種，並鼓勵人工大面積栽培鐵皮石斛，變 野生為家種，以保障鐵皮石斛資源的可持續性利用和發展。本發明運用現代生物組培繁育技術，大膽突破傳統利用日光燈管提供光照培養 苗的方法，在國內首家採用自然光快繁育苗，通過合理配置遮陽系統，提供更為適宜的光 照度來培養苗，取得了良好成效。一顆鐵皮石斛蒴果通過5 6月的組培培養可快繁培 育出12萬株以上石斛組培苗，煉苗移栽成活率達到98%以上。而目前國內很多科研單 位和公司均採用日光燈管提供光照來培育苗，比如「一種鐵皮石斛快繁的組培方法」(申 請號2008101108704. 5)、「一種鐵皮石斛莖尖組培快速繁殖的育苗方法」(申請號 200710066480. 1)、「一種應用鐵皮石斛激素自養型莖尖培養生產藥材的方法」(申請號 02136925. 9)、「一種鐵皮石斛的培育方法」(申請號200410017380. 6)等，不但浪費消耗了 能源，增加了組培生產成本，而且培養出的苗，明顯光照不夠，植株較弱。本發明的目的在於利用現代生物技術，充分利用自然光來培養苗，提高了鐵皮石 斛種苗的擴繁速度和生產量，節約了能源，降低了組培生產成本，提高了組培苗的煉苗移栽 成活率，對瀕危緊缺藥用植物資源再生和持續利用具有十分積極的影響。
發明內容
為了實現這一目的，發明人經過試驗，成功完成了可用於鐵皮石斛種苗組培生產 中不同階段的自然光照度和培養基配方的控制使用，對自然光遮蔭度和培養基配方進行了 試驗和完善，特別是對不同階段組培苗的適宜光照控制進行了多次研究和試驗，獲得了獨 創的培養方法，取得了良好效果，解決了鐵皮石斛組培苗生產過程中能耗高、苗嫩弱的問 題，完成了鐵皮石斛自然光快繁育苗生產技術的發明研究。鐵皮石斛自然光快繁育苗方法分為三個階段1、將成熟的鐵皮蒴果或儲存的種子經過消毒處理程序，播入1/2MS基本培養基+ 土豆汁15% (V/V) +瓊脂5g/L的培養基裡，進行種子萌發培養，培養溫度22 25°C。通過 雙層遮陽控制系統，光照度控制在800 15001x，每日光照10 12小時，約15 20天種 胚膨大、萌發形成綠色的原球莖；2、將原球莖轉入MS基本培養基+BA (6-苄基腺嘌呤)0. 01 0. 5mg/L+NAA ( α -萘 乙酸)0. 01 0. 5mg/L+ 土豆汁20% (V/V) +瓊脂5g/L的培養基裡進行原球莖增殖、分化培
3養。通過雙層遮陽控制系統，光照度控制在1500 25001x，每日光照10 12小時，約1 1. 5月可觀察到瓶內原球莖重疊堆積在培養基中，並有葉原莖和小苗出現，小苗高度1 2cm。將小苗轉入同樣的培養基和同樣的光照條件，繼續培養1.5月，將小苗培養成中苗，苗 高3 4cm左右；3、將中苗轉入MS基本培養基+ΝΑΑ(α-萘乙酸)0.01 0. 5mg/L+香蕉汁15% (V/ V) +土豆汁10% (V/V)+瓊脂6g/L的壯苗培養基。通過雙層遮陽控制系統，光照度控制在 2000 40001x，每日光照10 12小時，約1.5個月可培養出5cm高以上的大苗，大苗可出 瓶煉苗、移栽。上述的鐵皮石斛自然光快繁育苗方法中，所提到的對於鐵皮石斛各生長過程光照 度控制和培養基的配方是⑴種胚誘導提供800 15001X的弱光和1/2MS基本培養基 + 土豆汁15% (V/V) +瓊脂5g/L的培養基(2)原球莖增殖與分化提供1500 25001x的 較強光和MS基本培養基+BA(6-苄基腺嘌呤)0. 01 0. 5mg/L+NAA(a -萘乙酸)0. 01
0.5mg/L+ 土豆汁20% (V/V) +瓊脂5g/L的培養基(3)壯苗生根提供2000 40001x的強 光和MS基本培養基+NAA(a-萘乙酸)0.01 0. 5mg/L+香蕉汁15% (V/V) +土豆汁10% (V/V)+瓊脂6g/L的培養基。採用本發明所提供的鐵皮石斛自然光快繁育苗方法，可有效解決鐵皮石斛種苗組 培生產中高能耗、高成本和苗弱的問題。通過自然光培養的陽光苗，植株強壯、細胞質密度 高，葉片厚實，植株移栽後不脫水、不黃葉，極大提高了組培苗的移栽成活率；另外由於光照 加強，極大刺激了植株酶的活性和光合作用，組培苗生長速度也較傳統的日光燈管培養法 有所提高。採用本發明方法，從鐵皮石斛種子到培養成大苗，只需5 6個月，大大縮短了 種苗組培時間和成本，與傳統種苗擴繁相比，種苗的擴繁速度和生產量都有了較大的提高。本發明研究結果對解決鐵皮石斛種苗組培生產中存在的高能耗、高成本、種苗嫩 弱等問題，起到了關鍵性的作用，對推動鐵皮石斛產業化、規模化發展，提供了科學依據和 有力保證。本發明具有良好的社會效益、經濟效益和生態效益。
具體實施例方式實施例1 鐵皮石斛自然光快繁育苗方法將收集的鐵皮石斛種源在每年4 5月開花時進行異花授粉，在當年的10月底蒴 果成熟後進行採收，放在乾淨的培養皿裡，放於冰箱內保存。a、將成熟的鐵皮蒴果或儲存的種子經過消毒處理程序，播入1/2MS基本培養基+ 土豆汁15% (V/V) +瓊脂5g/L的培養基裡，進行種子萌發培養，培養溫度22 25°C。通過 雙層遮陽控制系統，光照度控制在800 15001x，每日光照10 12小時，約25 30天種 胚膨大、萌發形成綠色的原球莖；b、將原球莖轉入MS基本培養基+BA (6-苄基腺嘌呤)0. 01 0. 5mg/L+NAA ( α -萘 乙酸)0. 01 0. 5mg/L+ 土豆汁20% (V/V) +瓊脂5g/L的培養基裡進行原球莖增殖、分化培 養。通過雙層遮陽控制系統，光照度控制在1500 25001x，每日光照10 12小時，約1
1.5月可觀察到瓶內原球莖重疊堆積在培養基中，並有葉原莖和小苗出現，小苗高度1 2cm。將小苗轉入同樣的培養基和同樣的光照條件，繼續培養1.5月，將小苗培養成中苗，苗 高3 4cm左右；
C、將中苗轉入MS基本培養基+ΝΑΑ(α-萘乙酸)0.01 0. 5mg/L+香蕉汁15% (V/ V) +土豆汁10% (V/V)+瓊脂6g/L的壯苗培養基。通過雙層遮陽控制系統，光照度控制在 2000 40001x，每日光照10 12小時，約1.5個月可培養出5cm高以上的大苗，大苗可出 瓶煉苗、移栽。
權利要求
1. 一種鐵皮石斛自然光快繁育苗方法，其特徵在於該方法降低能耗、降低組培成本，可 大量快速培育出合格的鐵皮石斛試管苗，包括下列步驟完成(1)將成熟的鐵皮蒴果或儲存的種子經過消毒處理程序，播入1/2MS基本培養基+土豆 汁15% (V/V) +瓊脂5g/L的培養基裡，進行種子萌發培養，培養溫度22 25°C。通過雙層 遮陽控制系統，光照度控制在800 15001x，每日光照10 12小時，約15 20天種胚膨 大、萌發形成綠色的原球莖；(2)將原球莖轉入MS基本培養基+BA(6-苄基腺嘌呤)0.01 0. 5mg/L+NAA( α -萘乙 酸)0. 01 0. 5mg/L+ 土豆汁20% (V/V)+瓊脂5g/L的培養基裡進行原球莖增殖、分化培 養。通過雙層遮陽控制系統，光照度控制在1500 25001x，每日光照10 12小時，約1 1. 5月可觀察到瓶內原球莖重疊堆積在培養基中，並有葉原莖和小苗出現，小苗高度1 2cm。將小苗轉入同樣的培養基和同樣的光照條件，繼續培養1.5月，將小苗培養成中苗，苗 高3 4cm左右；(3)將中苗轉入MS基本培養基+NAA(α-萘乙酸)0.01 0.5mg/L+香蕉汁15%(V/ V) +土豆汁10% (V/V)+瓊脂6g/L的壯苗培養基。通過雙層遮陽控制系統，光照度控制在 2000 40001x，每日光照10 12小時，約1.5個月可培養出5cm高以上的大苗，大苗可出 瓶煉苗、移栽。
全文摘要
本發明屬於生物技術領域，尤其涉及一種珍稀瀕危中藥材鐵皮石斛自然光快繁育苗方法。本發明的目的在於利用現代生物技術，大膽突破傳統利用日光燈管提供光照培養苗的方法，在國內首家採用自然光快繁育苗，通過合理配置遮陽系統，提供更為適宜的光照度來培養苗，取得了良好成效，一顆鐵皮石斛蒴果通過5～6月的組培培養可快繁培育出12萬株以上石斛組培苗。本發明方法提高了鐵皮石斛種苗的擴繁速度和生產量，節約了能源，降低了組培生產成本，提高了組培苗的煉苗移栽成活率，對瀕危緊缺藥用植物資源再生和持續利用具有十分積極的影響。
文檔編號A01H4/00GK102119655SQ20101024233
公開日2011年7月13日 申請日期2010年7月29日 優先權日2010年7月29日
發明者張世定, 邊雲哲 申請人:雲南紅土生源藥用生物科技開發有限公司