銀杏葉提取物的用途的製作方法
2023-05-07 11:16:46
專利名稱：銀杏葉提取物的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種銀杏葉提取物的新用途，特別是對視神經保護的用途。
背景技術：
視神經保護是針對那些還沒有受到損傷或僅僅受到部分損傷，本身處在毒性環境之中的神經元加以保護的方法。這些細胞如果不加以幹預，必然受到環境的毒害而逐漸消亡。對於損傷異常強烈的疾病，神經保護措施幾乎來不及發揮作用。因此，神經保護不適合於細胞迅速崩解的疾病，而是適合於細胞緩慢丟失的疾病，如Alzhiemer病和青光眼等。在神經系統病變中，原發性損傷(Primary injury)可能多種多樣，包括缺血、缺氧、外傷、變性、離子濃度改變、氧自由基、神經營養因子缺乏、免疫異常等，然而，神經元的繼發性丟失並不因為原發病變的不同而有所改變，它們都採取了細胞凋亡的方式。所以，作為神經保護藥物的一種，視神經保護藥物並不是針對特定的病因，而是針對基本上共同的損傷通路，即繼發性損害導致的視網膜節細胞凋亡，以及引起凋亡的各種因素。
青光眼是一種主要致盲性眼病，所造成的視功能損害不能逆轉。根據世界衛生組織調查，全球有青光眼患者6600多萬人，40歲以上人群的發病率為2％，根據這一比例進行推算，隨著人口老齡化的加劇，青光眼患者逐漸增多。這種疾病嚴重影響我國影響人民的健康水平，阻礙經濟的發展。
以往認為青光眼是一種眼壓增高的疾病，臨床上發展起來名目繁多的降眼壓藥物和手術治療方法，用以降低患者的眼壓，力求阻斷病情的發展。到目前為止，降眼壓治療是青光眼唯一的治療方法。然而，在青光眼患者中，即使眼壓降低到正常範圍，仍然有40％的患者視神經病變繼續進展，臨床上表現為視野的進一步損害，視功能的進一步下降，最終引起患者盲目或失明。這是因為青光眼即使做過手術或用其他方法控制了眼壓，眼底的一種神經細胞——節細胞也會緩慢進行丟失，這種細胞丟失的越多，視功能就越差，最終失明。因此，人們大有談青光眼而色變的感覺。如何保護節細胞是當前的一個重要課題。
經研究發現，青光眼是一種慢性進行性的視神經病變，視網膜節細胞的慢性進行性丟失是其最主要的病理生理學特徵。高眼壓、缺血等原發性損傷(Primary injury)首先引起一部分視網膜節細胞的丟失，丟失的節細胞產生出許多毒性物質，使其周圍節細胞的生存環境惡化，細胞膜離子通透性增加，線粒體膜遭受損害，致使細胞進入凋亡程序，導致細胞丟失，這樣的損傷被稱為繼發性損害(Secondarydegeneration)。繼發性損害一直持續下去，病變就一直進展。由此可見，繼發性損害是青光眼患者視神經病變進展的最重要原因。
目前治療青光眼美國有兩種化學合成藥物，美金剛和莫尼定，已經FDA同意做藥物的臨床實驗，還沒有得出最後的結果。世界各國多家實驗室研究過的化學合成物很多，最終都因副作用太大不能進入臨床實驗結果。
銀杏葉在中醫界實用已經有幾千年的歷史了，近幾十年人們發現了許多新用途。它含有黃酮和內酯成分，具有擴張血管、抗氧化-抗血小板凝聚、抗神經組織的作用，特別適用於帕金森綜合症、海默氏病等神經細胞凋亡的疾病，取得良好效果，該藥在歐美國家受到廣泛歡迎。特別是在德國，應用十分廣泛。目前在眼科疾病領域也有應用銀杏葉提取物進行治療的，但主要集中在視網膜動脈硬化、病變、改善視網膜血液循環，以及視疲勞、近視眼等方面的治療，對於視神經的保護方面還沒有更深入的研究。國內有一種藥物——燈盞細辛(即本發明動物實驗中選用的陽性對照藥物)對視神經的保護有一定作用，但該品屬非醫保範圍，且價格較高。
通過近年來的實驗，初步認為銀杏葉提取物具備了視神經保護藥物的條件，首先，通過動物實驗能夠證實它對視網膜節細胞具有保護作用；第二，從目前的研究看，銀杏葉提取物的眾多成分中起主要作用的有兩類，銀杏黃酮和內酯成分，分別發揮抗氧化和擴張血管的作用。此外，它能夠抑制穀氨酸導致的NMDA受體毒性興奮，抑制PAF受體興奮導致的細胞損傷，抑制澱粉樣物質的前體(APP)向澱粉樣物質轉化，這些都從分子生物學水平上闡述了銀杏葉提取物做為視神經保護劑的可行性；第三，該藥物能夠達到靶細胞，經給動物口服銀杏葉提取物，發現在視網膜上有足夠的該藥物及其代謝產物，說明銀杏葉提取物能夠通過血眼屏障，達到視網膜節細胞而發揮保護作用。近年來的研究表明，銀杏葉提取物對實驗性糖尿病視網膜病變具有良好作用，這從另一個側面反應出它能夠在視網膜上發揮作用。
發明內容
本發明的目的在於提供一種用銀杏葉提取物製成的視神經保護藥物，能透過血眼屏障直接作用於視網膜，使視網膜血流增加，並能直接擴張眼底血管；還具有抗血小板凝聚、拮抗NMDA受體、抗氧化、對抗凋亡，在視網膜上達到有效的藥物濃度等作用，以達到修復和保護視網膜節細胞、進而治療青光眼等疾病的目的。
本發明是這樣實現的它是將銀杏葉提取物與輔料採取常規工藝製成製劑，用於視神經的保護。
所述的製劑可以是膠囊劑、片劑、注射劑、口服液、顆粒劑。
所述的視神經保護包括青光眼的治療。
所述的製劑中銀杏葉提取物與輔料的重量比例為20％-80％∶80％-20％。
所述的視神經保護是對視網膜節細胞的修復和保護。
本發明與現有技術相比，由於其來自於植物，含有60多種成分，其中30多種成分都是它在自然界中所特有的，具有毒副作用小，在神經系統疾病和心血管疾病有獨特的療效等優點。
下面對本發明對大鼠視神經夾傷模型節細胞保護及對大鼠急性高眼壓節細胞的保護實驗作詳細說明。
附圖1為本發明對大鼠視神經夾傷模型節細胞保護存活率的對照圖；附圖2為本發明對大鼠視神經夾傷模型節細胞保護藥物量效關係曲線圖；附圖3為本發明對大鼠視神經高眼壓節細胞保護存活率的對照圖；附圖4為本發明對大鼠視神經高眼壓節細胞保護藥物量效關係曲線圖。
一、對大鼠視神經夾傷模型節細胞保護作用的實驗(一)、實驗目的通過大鼠視神經夾傷模型，觀察銀杏葉提取物對視網膜節細胞的保護作用，為臨床應用提供實驗依據。
(二)、實驗材料實驗動物實驗用SD大鼠，SPF級，購自中國藥品生物製品鑑定所繁育場。
實驗藥品實驗用藥銀杏葉提取物浸膏(以下簡稱百路達)申請人提供陽性對照藥 燈盞細辛浸膏購自雲南省玉溪萬方天然藥物有限公司陰性對照藥 生理鹽水華北藥業有限公司逆行標記物 螢光金(FG) 購自美國螢光金公司(Fluorochrome LtD)麻醉藥品鹽酸氯胺酮注射液上海第一生化藥業有限公司地西潘注射液天津金耀胺基酸有限公司固定液 多聚甲醛購自北京化學試劑品有限公司(三)、實驗方法1、動物及分組實驗用SD大鼠90隻，雄性，體重200-240克，眼前部檢查、Mydrine散瞳眼底檢查無異常。用隨機數字表將大鼠隨機分為5組分別為陰性對照組、陽性對照組、低劑量用藥組、中劑量用藥組和高劑量用藥組，每組大鼠各18隻。各組大鼠右眼為損傷眼，左眼未做視神經夾持，作為正常對照。
2、夾傷模型及給藥方法大鼠腹腔注射鹽酸氯胺酮3ml/kg進行麻醉，剪開外眥，在手術顯微鏡下(OMS-85，拓撲康公司日本)剪開球結膜並做相應的分離，暴露視神經。用夾持力40g的微型視神經夾(TKF-2型美國)在球後2mm處夾持視神經60秒，恢復球結膜並縫合外眥傷口。夾持視神經時可見一過性眼底血管痙攣，夾傷後2分鐘內完全恢復。陰性對照組、陽性對照組、低劑量用藥組、中劑量用藥組和高劑量用藥組於視神經夾傷後2小時及此後每天腹腔分別注射生理鹽水5ml/kg、1％燈盞細辛5ml/kg、0.25％百路達5ml/kg、1％百路達5ml/kg和4％百路達5ml/kg，實驗時間為28天。
3、逆行標記動物安死術前5天，採用雙上丘注射法逆行標記視網膜神經節細胞。6％水合氯醛0.5ml/100g腹腔注射使動物麻醉，將其固定在腦立體定位儀上(900型腦立體定位儀David Kopf儀器公司美國)，牙科鑽鑽開顱骨，用微量注射器吸取3％螢光金(溶於0.9％生理鹽水中)，每側上丘注射兩點(前囟後-5.9和-6.4，旁開1.4，深4.0)，每點注射1.5ul。
4、視網膜鋪片上方12點處球結膜以逢線標記，立即取出眼球固定於4％多聚甲醛磷酸緩衝液中2小時。沿角膜緣後0.5mm剪開眼球，去除角膜和晶狀體，分離視網膜並將其定向平鋪，空氣中自然乾燥。Vectashield H-100螢光增強劑及市售無色指甲油封片。螢光顯微鏡拍攝照片(AH-2奧林巴司公司 日本)，距離視乳頭中心2mm上下左右各拍攝照片一張，照片放大倍數125×。
5、圖像分析使用聯想Mustek掃描儀將照片以100dpi掃入計算機，使用顆粒分析軟體(CPAS)進行節細胞計數，將上下左右4張照片節細胞數量累加，並轉化成節細胞密度。右眼節細胞密度與左眼節細胞密度之比定義為節細胞存活率，即節細胞存活率＝右眼節細胞密度/左眼節細胞密度×100。
6、統計方法使用SPSS for Windows 10.0統計軟體包，採用單因素方差分析(ANOV)，兩兩比較採用均數t檢驗。以p＜0.05具有顯著性差異，以p＜0.01具有高度顯著性差異。
(四)、實驗結果實驗中由於麻醉及操作意外導致部分大鼠死亡，個別大鼠因節細胞標記不良而使標本不能使用，各實驗組實際可使用的大鼠數量見表1。實驗結果顯示，陰性對照組節細胞存活率介於41.27％與74.21％之間，平均存活率為60.59％，標準差為±8.78％。按節細胞存活率計算，陽性對照組、低劑量用藥組、中劑量用藥組和高劑量用藥組節細胞的存活率分別為73.80％、66.49％和71.60％和74.17。各組節細胞存活率及其平均值和標準差見表2。各組平均節細胞存活率及其標準差見圖1。
表1 實驗中各組最終的大鼠數量(只)陰性對照 陽性對照 低劑量組 中劑量組高劑量組動物數量18161518 16各組節細胞存活率的單因素方差分析表明，它們之間存在顯著性差異(p＜0.05)。兩兩比較顯示，陰性對照組與陽性對照組、低劑量用藥組、中劑量用藥組和高劑量用藥組之間存在顯著性差異(p＜0.05見表3)。說明陽性對照藥物燈盞細辛與三個劑量組的百路達都能有效地保護視網膜神經節細胞，各組間的兩兩比較見表3。
在用藥組之中，低劑量用藥組與陰性對照組之間存在顯著性差異(p＝0.032)，中劑量用藥組與低劑量用藥組之間存在顯著性差異(p＝0.038)，而高劑量用藥組與中劑量用藥組之間未見顯著性差異(p＝0.33)，但其節細胞存活率仍然有所提高，從71.60％提高到74.17％。三個劑量組的量效關係見圖2。從圖中可以看出，低劑量的百路達就可以保護節細胞，隨著劑量的增加，其保護作用逐漸增強，百路達的節細胞保護作用有比較好的量效關係。
陽性對照組與低劑量用藥組之間節細胞存活率存在顯著性差異(p＝0.023)，兩者的藥物劑量也相差了4倍。在劑量相同時，即中劑量組中，就與陽性對照組無顯著性差異(p＝0.48)。本研究還發現，陽性對照組與高劑量用藥組之間無顯著性差異(p＝0.92)。
表2.各組節細胞存活率、平均值及標準差陰性對照 陽性對照 低劑量組 中劑量組 高劑量組50.5957.2368.9859.3979.4261.5272.5166.4785.8874.1661.7876.1360.2762.9664.0468.9050.8 66.1172.3475.1765.5580.6177.1873.3680.8663.2875.7475.1573.6688.0053.6655.7 60.5376.7669.2453.9080.7571.6273.4577.3051.2580.2069.3280.9773.4041.2776.1258.5976.5678.3072.5474.8865.5677.2274.57
64.4383.4262.86 62.670.2550.2184.1262.35 77.28 84.2467.0373.2470.84 68.76 73.6868.3886.2861.45 66.61 61.9374.2173.0876.39 62.0961.87 58.8960.33 65.79平均值60.5973.8066.49 71.60 74.17標準差8.78 10.485.627.578.39表3.各組節細胞存活率的兩兩比較(p值)陽性對照 低劑量組 中劑量組 高劑量組陰性對照0.0004 0.032 0.0003 0.00003陽性對照 0.023 0.48 0.92低劑量組 0.038 0.003中劑量組0.33(五)、討論1、視神經夾傷模型視神經夾傷模型常用於視神經保護藥物的研究，本研究採用了常見的夾傷方法，即在顳側做球結膜切口，於球後2mm夾持視神經。這種方法不需過度牽拉視神經，暴露清楚操作容易，所造成的視神經損傷基本一致。我們使用40g微型視神經夾夾傷視神經60秒，導致節細胞平均丟失39.41％±8.78％，模型節細胞的丟失比較穩定。夾傷時僅造成視網膜血管短時痙攣，不造成血管永久閉塞，視網膜血管均在2分鐘內恢復，實驗中沒有一隻大鼠因視網膜永久性缺血而被排除在實驗之外。
2、燈盞細辛的作用 燈盞細辛能明顯地保護視網膜神經節細胞，與陰性對照組比較有顯著性差異(p＜0.05)，此結果與以往的研究相一致，這從另一個方面也說明了該模型的穩定性和可靠性。1％燈盞細辛組與0.25％百路達組相比有顯著性差異(p＜0.05)，很可能是燈盞細辛的有效劑量高於0.25％百路達的4倍，藥物劑量的差異導致了對節細胞保護作用的不同。當燈盞細辛與百路達在同等劑量下，濃度同為1％時，兩者的節細胞保護作用無顯著性差異(p＞0.05)。
3、百路達的作用 實驗結果表明低、中、高劑量組的百路達均具有節細胞保護作用。低劑量組節細胞存活率比陰性對照組提高了5.9％，中劑量組節細胞存活率比低劑量組提高5.11％。高劑量組節細胞存活率比中劑量組提高2.57％。不同劑量的百路達表現出很好的量效關係，隨著藥物濃度的提高，節細胞的保護作用不斷增強，並且中劑量組與低劑量組之間還存在著顯著性差異(p＜0.05)。雖然中劑量組與高劑量組之間無顯著性差異(p＞0.05)，但高劑量組節細胞存活率比中劑量組仍然有所提高。
4、百路達的作用的機制 首先百路達能夠到達視網膜，採用放射性同位素標記的方法，給大鼠口服百路達，結果表明百路達及其代謝產物能夠在視網膜上達到一定的藥物濃度。其次，百路達發揮了擴血管作用，研究表明，正常志願者口服百路達後彩色都卜勒顯示眼動脈血流量增加了24％。目前認為，百路達具有多種作用，包括對抗脂質過氧化，抑制NMDA受體毒性興奮，阻斷穀氨酸毒性作用，抑制血小板凝集，對抗凋亡等。它對缺血/缺氧、機械損傷導致的神經元損傷有保護作用。近來研究顯示，視網膜上廣泛存著血小板活化因子(PAF)受體，它的異常興奮導致了節細胞的丟失，使視神經損害不斷加重。百路達能抑制PAF受體的興奮，從而達到保護節細胞目的。
總之，百路達能有效地保護大鼠視神經夾傷模型的視網膜神經節細胞，在低劑量時就表現出明顯的保護作用，隨著劑量的提高節細胞保護作用更加明顯，有很好的量效關係。百路達屬於植物藥範疇，毒副作用小，使用安全。
二、對大鼠急性高眼壓模型節細胞保護作用的實驗(一)、實驗目的通過大鼠急性高眼壓視網膜缺血再灌注模型，觀察百路達對視網膜節細胞的保護作用，為臨床應用提供實驗依據。
(二)、實驗材料實驗動物實驗用SD大鼠，SPF級，購自中國藥品生物製品鑑定所繁育場。
實驗藥品實驗用藥 百路達浸膏 申請人提供陽性對照藥 燈盞細辛浸膏 購自雲南省玉溪萬方天然藥物有限公司陰性對照藥 生理鹽水 華北藥業有限公司逆行標記物 螢光金(FG) 購自美國螢光金公司(Fluorochrome LtD)麻醉藥品 鹽酸氯胺酮注射液 上海第一生化藥業有限公司地西潘注射液 天津金耀胺基酸有限公司固定液 多聚甲醛 購自北京化學試劑品有限公司(三)、實驗方法實驗動物及分組實驗用SD大鼠90隻，雄性，體重200-240克，眼前部檢查、Mydrine散瞳眼底檢查無異常。用隨機數字表將大鼠隨機分為5組分別為陰性對照組、陽性對照組、低劑量用藥組、中劑量用藥組和高劑量用藥組，每組大鼠各18隻。各組大鼠右眼為損傷眼，左眼未做急性高眼壓模型，作為正常對照。
實驗方法1、缺血再灌注模型及給藥方法大鼠腹腔注射鹽酸氯胺酮3ml/kg進行麻醉，右眼用Mydrin-P散瞳劑散瞳，瞳孔開大後，在手術顯微鏡下(OMS-85，拓撲康公司 日本)將連接生理鹽水瓶輸液管的7號小兒頭皮針刺入大鼠前房，避免損傷虹膜及晶體，鹽水瓶至與實驗眼垂直距離150cm處，此高度可在眼內形成110mmHg(15.96Kpa)的眼壓，此時肉眼可見球結膜蒼白，眼底鏡可見視網膜缺血，維持60分鐘。而後降低鹽水瓶達動物水平，撥出針頭，可見眼結膜充血，視網膜血液重新再灌注。陰性對照組、陽性對照組、低劑量用藥組、中劑量用藥組和高劑量用藥組於急性高眼壓損傷後2小時及此後每天灌胃生理鹽水5ml/kg、1％燈盞細辛5ml/kg(購自雲南省)、0.25％百路達5ml/kg、1％百路達5ml/kg和4％百路達5ml/kg。實驗時間為28天。
2、逆行標記動物安死術前5天，採用雙上丘注射法逆行標記視網膜神經節細胞。6％水合氯醛0.5ml/100g腹腔注射使動物麻醉，將其固定在腦立體定位儀上(900型腦立體定位儀David Kopf儀器公司 美國)，牙科鑽鑽開顱骨，用微量注射器吸取3％螢光金(溶於0.9％生理鹽水中)，每側上丘注射兩點(前囟後-5.9和-6.4，旁開1.4，深4.0)，每點注射1.5ul。
3、視網膜鋪片在上方球結膜以碳素標記，立即取出眼球固定於4％多聚甲醛磷酸緩衝液中2小時。沿角膜緣後0.5mm剪開眼球，去除角膜和晶狀體，分離視網膜並將其定向平鋪，空氣中自然乾燥。Vectashield H-100螢光增強劑及市售無色指甲油封片。螢光顯微鏡拍攝照片(AH-2奧林巴司公司 日本)，距離視乳頭中心2mm上下左右各拍攝照片一張，照片放大倍數125×。
剔除標準1)前房穿刺致眼內出血及眼內炎，嚴重損傷虹膜及晶狀體。2)RGCs螢光標記不良，部分區域標記不上。
圖像分析及統計方法使用聯想Mustek掃描儀將照片以100dpi掃入計算機，使用顆粒分析軟體(CPAS)進行節細胞計數，將上下左右4張照片節細胞數量累加，並轉化成節細胞密度。右眼節細胞密度與左眼節細胞密度之比定義為節細胞存活率，即節細胞存活率＝右眼節細胞密度/左眼節細胞密度*100。使用SPSS for Windows 10.0統計軟體包，採用單因素方差分析(ANOV)，兩兩比較採用均數t檢驗。以p＜0.05具有顯著性差異，以p＜0.01具有高度顯著性差異。
(四)、實驗結果實驗中由於麻醉及操作意外導致部分大鼠死亡，個別大鼠因節細胞標記不良而使標本不能使用。各實驗組實際可使用的大鼠數量見表4。陰性對照組節細胞存活率介於53.97％與76.59％之間，平均存活率為67.54％，標準差為±7.50％。按節細胞存活率計算，陽性對照組、低劑量用藥組、中劑量用藥組和高劑量用藥組節細胞的存活率分別為74.25％、73.47％、78.85％和81.14％。各組節細胞存活率及其平均值見表5。各組平均節細胞存活率及其標準差見圖3。
表4 實驗中各組最終的大鼠數量(只)陰性對照 陽性對照 低劑量組 中劑量組 高劑量組動物數量15 1312 13 14各組節細胞存活率的單因素方差分析表明，它們之間存在顯著性差異(p＜0.05)。兩兩比較顯示，陰性對照組與陽性對照組、低劑量用藥組、中劑量用藥組和高劑量用藥組之間存在顯著性差異(p＜0.05all groups)。說明陽性對照藥物燈盞細辛與三個劑量組的銀杏葉提取物都能有效地保護視網膜神經節細胞。高劑量銀杏葉提取物保護作用好於1％燈盞細辛組。各組間的兩兩比較見表6。
在用藥組之中，低劑量用藥組與陰性對照組之間存在顯著性差異(p＝0.0040)，高劑量用藥組與低劑量用藥組之間存在顯著性差異(p＝0.0178)，而高劑量用藥組與中劑量用藥組之間未見顯著性差異(p＝0.0540)，但其節細胞存活率仍然有所提高，從79％提高到81％。三個劑量組的量效關係見圖4。從圖中可以看出，百路達浸膏低劑量就可以保護節細胞，隨著劑量的增加，其保護作用增強。百路達浸膏的節細胞保護作用有比較好的量效關係。
陽性對照組與高劑量用藥組之間存在顯著性差異，陽性對照組與低中劑量用藥組之間均未見顯著性差異。陽性對照組的藥物濃度與中劑量用藥組的藥物濃度相當，比低劑量用藥組藥物濃度高4倍。
表5.各組節細胞存活率(％)陰性對照 陽性對照 低劑量組 中劑量組 高劑量組74.8682.1067.7577.9671.8667.1662.9164.1478.0785.2967.8270.5373.5290.4279.0066.4264.5078.6965.4382.8482.2671.1573.8474.6887.6968.4583.4875.3276.3384.9160.1277.1482.4782.3077.4859.2366.0073.7873.0878.7166.6080.8171.8383.6068.3853.9777.4675.9980.4982.9471.3474.1776.4380.5782.2374.3976.9667.9483.0787.5261.2878.04 79.1181.5762.67 85.5776.59
平均值 67.54 74.25 73.47 78.85 81.14標準差 7.506.74 5.05 5.99 5.65表6.各組節細胞存活率的的比較(p值)陽性對照 低劑量組 中劑量組 高劑量組陰性對照0.02 0.03 0.0002 0.00008陽性對照 0.75 0.08 0.008低劑量組 0.02 0.001中劑量組 0.32(五)、討論1、關於急性高眼壓模型研究節細胞損傷特點及視神經保護藥物，利用大鼠急性高眼壓模型模型比較成熟。在我們的實驗中，採用前房穿刺的方法升高眼壓，並維持110mmHg，持續60分鐘。這個壓力使大鼠視網膜完全缺血，這一點可以通過觀察眼底血管得以證明。此動物模型的優點是實驗眼的條件一致，如相同的壓力和相同的持續時間，操作簡單，易控制，費用低，這為進一步的視網膜神經細胞的保護研究及篩選神經保護藥物奠定了基礎。本實驗中我們選擇了缺血60分鐘，陰性對照組中節細胞平均存活率為67.54±7.50％，該模型節細胞丟失比例較穩定。Selles-Navarro I等研究發現應用螢光金行上丘逆行標記RGCs後，胞漿內螢光金的存在不超過3周。隨時間進展可能螢光金丟失螢光或被代謝。本研究於動物處死前5天行螢光金逆行標記上丘，標記的RGCs呈金黃色強螢光，各象限均勻。通過螢光金上丘逆行標記RGCs，便於RGCs的定量、定性研究。
2、燈盞細辛的節細胞保護作用我們的結果與以往的研究相一致，以節細胞存活率為指標，燈盞細辛有明顯的保護視網膜神經節細胞的作用，與陰性對照組比較有顯著性差異(P＜0.05)。1％燈盞細辛組的節細胞保護作用與4％百路達組有顯著性差異(P＜0.05)，而與0.25％及1％百路達組沒有顯著性差異(P＞0.05)，表明1％燈盞細辛與0.25％及1％百路達保護神經節細胞作用相當，4％百路達比1％的燈盞細辛的節細胞保護作用強。
3、百路達的節細胞保護作用我們通過大鼠急性高眼壓模型，以節細胞存活率為指標，結果表明，低、中、高劑量組的百路達均具有節細胞保護作用。低劑量組節細胞存活率比陰性對照組提高了5.93％，中劑量組比低劑量組提高了5.38％，高劑量組比中劑量組提高了2.29％。不同劑量的百路達表現出很好的量效關係。隨著藥物濃度的提高，節細胞保護作用不斷增強，雖然中劑量組與高劑量組之間無顯著性差異，但高劑量組節細胞存活率有所提高。
4、百路達節細胞保護作用的機制銀杏葉提取液主要含有24％的黃酮醇苷、6％的內脂和7％花青素前體，還有一些未定性的化合物。其保護視神經的機理可能是1.具有拮抗血小板活化因子的作用，銀杏內脂目前被認為是最有臨床應用前景的天然血小板活化因子受體拮抗劑，2.清除自由基，銀杏葉提取物中的還原性羥基功能團，可直接發揮抗氧化作用，清除氧自由基，減輕或阻滯脂質發生過氧化引起的視網膜功能與形態學的損傷。3.對血液循環的影響，研究發現，銀杏提取液能夠增加腦血管及周圍血管的血流量，使眼動脈血流增加24％。4.對缺血損傷的保護作用，發現銀杏內脂可改善缺血-再灌注損傷對心肌和肝的損害，提高肝缺血大鼠的存活率，顯著降低肝缺血損傷。同時，它還能夠減少穀氨酸誘導的細胞內鈣離子的過載。
總之，百路達與燈盞細心都能保護大鼠視神經夾傷模型的視網膜神經節細胞，百路達是銀杏葉提取物，屬於植物藥範疇，毒副作用小，使用安全。它的作用很可能是多側面、多靶點的。
具體實施例方式
具體實施例方式以製取銀杏葉浸膏40毫克規格的膠囊為例參照中華人民共和國衛生部部頒標準處方 以10萬粒計單位kg銀杏葉幹浸膏 4.00乳糖 14.82硬脂酸鎂 0.29微粉矽膠 0.39工藝取銀杏葉浸膏加乳糖混合打粉，制粒，硬脂酸鎂、微粉矽膠過篩後與之混合，然後整粒，裝膠囊。每粒含銀杏葉浸膏40mg，含總黃酮醇苷9.6mg。
根據銀杏葉提取物在青光眼節細胞保護方面的動物實驗結果，建議成人服用劑量為1～2粒/天。
本發明還可用常規工藝製成注射劑、片劑、口服液、顆粒劑。
權利要求
1.一種銀杏葉提取物的用途，其特徵在於它是將銀杏葉提取物與輔料採取常規工藝製成製劑，用於視神經的保護。
2.按照權利要求1所述的銀杏葉提取物的用途，其特徵在於所述的製劑可以是膠囊劑、片劑、注射劑、口服液、顆粒劑。
3.按照權利要求1所述的銀杏葉提取物的用途，其特徵在於所述的視神經保護包括青光眼的治療。
4.按照權利要求1或2所述的銀杏葉提取物的用途，其特徵在於所述的製劑中銀杏葉提取物與輔料的重量比例為20％-80％∶80％-20％。
5.按照權利要求1或3所述的銀杏葉提取物的用途，其特徵在於所述的視神經保護是對視網膜節細胞的修復和保護。
全文摘要
本發明公開了一種銀杏葉提取物的用途，它是將銀杏葉提取物與輔料採取常規工藝製成製劑，用於視神經的保護。本發明由於來自於植物，含有60多種成分，其中30多種成分都是它在自然界中所特有的，具有毒副作用小，在神經系統疾病和心血管疾病有獨特的療效等優點，是一種視神經節細胞保護的理想藥物。
文檔編號A61K9/16GK1546091SQ20031010944
公開日2004年11月17日 申請日期2003年12月16日 優先權日2003年12月16日
發明者徐亮, 馬科, 胡林森, 謝躍進, 徐 亮 申請人:上海信誼百路達藥業有限公司