內皮素受體三肽拮抗劑的製作方法
2023-05-07 04:37:06
專利名稱：內皮素受體三肽拮抗劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及具有內皮素受體拮抗活性的肽類和非肽類衍生物，其製備方法，含它們的藥物組合物及它們在預防或治療與內皮素及前列腺有關疾病的用途。
背景技術：
內皮素(Endothelin，簡稱ET)是由血管內皮分泌的，它們是一類迄今發現的收縮血管作用最強的生物因子之一。人類或其它哺乳動物基因組存在三種分別編碼內皮素的基因，形成的大內皮素在內皮素轉換酶的作用下，轉變為ET-1、ET-2、ET-3。它們均為二十一肽，含有兩個二硫橋鍵。ET-1不但表達於非血管細胞，而且是唯一存在於血管內皮細胞的內皮素。ET-2和ET-3主要在腦、腎和腎上腺及小腸中。ET與靶細胞中的特異受體結合，最終產生相應的生物學效應。迄今已發現三類ET受體，即ETA，ETB，和ETC。ETA主要分布於主動脈，心房，胎盤，肺、腦血管及腎臟血管的平滑肌中；ETB存在於中樞神經系統中的神經膠質細胞，脈落叢上皮細胞，肺、胎血、腎小球內皮，心室，腦中等，在血管平滑肌也有分布；ETC則主要分布於內皮細胞中。三種受體對各型ET的親和力不同。內皮素及受體在人體內具有廣泛的生理病理學反應。參與了如高血壓、充血性心衰、心肌缺血、腦窒息、休克、急性腎衰、肺源性高血壓、血管痙攣性疾病等過程。因此ET受體被認為是治療心腦血管疾病的切實可行的新靶點，其受體拮抗劑有助於預防/治療心血管疾病。
發明概述本發明的目的是尋找新的內皮素受體拮抗劑。
本發明人經研究，現已發現式(I)肽類和非肽類衍生物
R-CO-AA1-AA2-AA3-OH (I)或其立體異構體具有良好的內皮素受體拮抗活性，因此式(I)肽類和非肽類衍生物或其立體異構體可作為藥物用於預防或治療與內皮素及前列腺有關的疾病。
本發明第一方面涉及式(I)肽類和非肽類衍生物或其立體異構體，R-CO-AA1-AA2-AA3-OH式(I)其中，R為雙取代鏈烴亞胺基、六亞甲基亞胺基或以下基團 式中n1、n2、n3為0，1，2，3整數，n3≠0，0≤n1+n2≤4；X1為NH、O、S、CH2；X2為N、CH；當n1＝n2＝1，n3＝2，X1為CH2，X2為N原子時，R縮寫為ABO；m1、m2、m3和m4為0，1，2整數，0≤m1+m2≤4，0≤m3+m4≤4；y1、y2和y3為CH2、O、S和NH，當它們為NH或CH2時，可作為N端結構R，形式為N或CH；當m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y1、y2為O原子，y3為N原子時，R縮寫為DAD；當m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y3為CH2，y1為O原子，y2為N原子時，R縮寫為CSO；AA1為L或D型Ala，Ile，Leu，MeVal，PrO，Val或其它非天然脂肪族胺基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基異丁酸；AA2為非天然芳香性胺基酸、苯基甘氨酸或非胺基酸，其中芳香環中的苯基可在2、3、4或5位上被選自滷素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基單取代或二取代。當AA2為非胺基酸，特別是連接胺基酸殘基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代時，式(1)為非肽類衍生物或其立體異構體；AA3為非天然芳香性胺基酸、苯基甘氨酸或非胺基酸，其中芳香環中的苯基可在2、3、4或5位上被選自滷素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基單取代或二取代。當AA3為非胺基酸，特別是連接胺基酸殘基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代時，式(1)為非肽類衍生物或其立體異構體。
本發明還涉及到含至少一種式(I)肽類和非肽類衍生物或其立體異構體，R-CO-AA1-AA2-AA3-OH 式(I)其中，R為雙取代鏈烴亞胺基、六亞甲基亞胺基或以下基團 式中n1、n2、n3為0，1，2，3整數，n3≠0，0≤n1+n2≤4；X1為NH、O、S、CH2；X2為N、CH；當n1＝n2＝1，n3＝2，X1為CH2，X2為N原子時，R縮寫為ABO；m1、m2、m3和m4為0，1，2整數，0≤m1+m2≤4，0≤m3+m4≤4；y1、y2和y3為CH2、O、S和NH，當它們為NH或CH2時，可作為N端結構R，形式為N或CH；當m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y1、y2為O原子，y3為N原子時，R縮寫為DAD；當m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y3為CH2，y1為O原子，y2為N原子時，R縮寫為CSO。
AA1為L或D型Ala，Ile，Leu，MeVal，Pro，Val或其它非天然脂肪族胺基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基異丁酸；AA2為非天然芳香性胺基酸、苯基甘氨酸或非胺基酸，其中芳香環中的苯基可在2、3、4或5位上被選自滷素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基單取代或二取代。當AA2為非胺基酸，特別是連接胺基酸殘基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代時，式(1)為非肽類衍生物或其立體異構體；AA3為非天然芳香性胺基酸、苯基甘氨酸或非胺基酸，其中芳香環中的苯基可在2、3、4或5位上被選自滷素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基單取代或二取代。當AA3為非胺基酸，特別是連接胺基酸殘基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代時，式(1)為非肽類衍生物或其立體異構體；及藥用載體或賦形劑的藥物組合物。
本發明還涉及製備式(I)肽類衍生物或其立體異構體的方法，其包括1)將化合物RCO-A-OH與B-OP在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反應，生成RCO-A-B-OP，其中R，A，B，如權利要求1中定義，P為C1-4烷基。
2)將1)中所得產物在1M鹼/醇溶液中皂化，然後用酸酸化，生成RCO-A-B-OH，3)將2)中產物RCO-A-B-OH與C-OP在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反應，生成RCO-A-B-C-OP，其中P為C1-4烷基，所得產物如2)中所述進行皂化反應，生成式(I)RCO-A-B-C-OH，4)將2)中產物RCO-A-B-OH在THF、NMM中與氯甲酸異丁酯反應5-10分鐘，再加入C-ONa，生成RCO-A-B-C-ONa，然後用酸酸化，生成式(I)RCO-A-B-C-OH。
本發明還涉及式(I)非肽類衍生物或其立體異構體衍生物的製備方法，按本領域已知方法和改良Szelke文獻方法製備，詳細步驟參見實施例3。
本發明還涉及式(I)肽類和非肽類衍生物或其立體異構體在預防或治療與內皮素及前列腺有關疾病或症狀的藥物中用途。
本發明所用術語「式(I)肽類和非肽類衍生物立體異構體」是指其相應的D-或L-立體構型。
根據該發明，式(I)肽類和非肽類衍生物或其立體異構體可選自下面的化合物1 ABO-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-OH2 ABO-CO-GABA-D-Trp-D-Trp-OH3 ABO-CO-NH-C(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-OH4 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH
5 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH6 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH7 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH8 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH9 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH10 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH11 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH12 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH13 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH14 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH15 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl2)-OH16 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl2)-OH17 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH18 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH19 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH20 ABO-CO-Leu-D-Phe(2-F)-D-Trp-OH21 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-F)-D-Trp-OH22 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F)-D-Trp-OH23 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-Br)-D-Trp-OH24 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-NO2)-D-Trp-OH25 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F-3-Cl)-D-Trp-OH26 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH27 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH28 ABO-CO-Leu-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-Trp-OH29 ABO-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH30 ABO-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH31 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Trp-OH32 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH33 HIM-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH
34 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH35 HIM-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH36 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH37 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH38 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH39 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH40 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3，4-Cl2)-OH41 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH42 ENP002根據本發明，式(I)肽類衍生物或其立體異構體可按本領域已知方法、文獻方法或下面所示的反應路線1製備反應路線1 在反應路線1中式R-CO-AA1-OH化合物(其中R，AA1如上定義)與AA2-OP(其中AA2如上定義，P為C1-4烷基，其可選自甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，叔丁基，優選甲基和乙基)在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反應，生成R-CO-AA1-AA2-OP化合物(其中R，AA1，AA2，P如上定義)。將R-CO-AA1-AA2-OP化合物在1M NaOH/甲醇溶液中皂化，然後用鹽酸酸化，生成R-CO-AA1-AA2-OH化合物(其中R，AA1，AA2如上定義)。將式R-CO-AA1-AA2-OH與AA3-OP(其中AA3，P如上定義)在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反應，生成式R-CO-AA1-AA2-AA3-OP(其中R，AA1，AA2，AA3，P如上定義)化合物。然後將所得R-CO-AA1-AA2-AA3-OP在1M NaOH/甲醇溶液中皂化，然後用鹽酸酸化，生成式(I)R-CO-AA1-AA2-AA3-OH。或者將化合物R-CO-AA1-AA2-OH在THF、NMM中與氯甲酸異丁酯反應，再與AA3-ONa生成R-CO-AA1-AA2-AA3-ONa，然後用鹽酸酸化，生成式(I)R-CO-AA1-AA2-AA3-OH三肽衍生物或其立體異構體。
根據該發明，式(I)肽類衍生物立體異構體是指其相應的D-或L-立體構型。
根據該發明，式(I)肽類和非肽類衍生物及其立體異構體在動物抗ET1受體模型中顯示出優良效果，因此可作為心血管藥用於動物，優選用於哺乳動物，特別是人。
本發明因此還涉及含有作為活性成分的有效劑量的至少一種式(I)肽類和非肽類衍生物和/或其立體異構體以及常規藥物賦形劑或輔劑的藥物組合物。通常本發明藥物組合物含有0.1-90％的式(I)肽類和非肽類和/或其立體異構體。藥物組合物可根據本領域已知的方法製備。用於此目的時，如果需要，可將式(I)肽類和非肽類衍生物和/或其立體異構體與一種或多種固體或液體藥物賦形劑和/或輔劑結合，製成可作為人用的適當的施用形式或劑量形式。
本發明式(I)肽類和非肽類衍生物及其立體異構體或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔黏膜、皮膚、腹膜或直腸等。給藥劑型例如片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、脂質體、透皮劑、口含片、栓劑、凍乾粉針劑等。可以是普通製劑、緩釋製劑、控釋製劑及各種微粒給藥系統。為了將單位給藥劑型製成片劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關於載體的例子，如稀釋劑與吸收劑，如澱粉、糊精、乳糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、硫酸鈣、氯化鈉、尿素、碳酸鈣、白陶土、微晶纖維素、矽酸鋁等；溼潤劑與粘合劑，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、澱粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解劑，如乾燥澱粉、海藻酸鹽、瓊脂粉、褐藻澱粉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、碳酸鈣、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等；崩解抑制劑，如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氫化油等；吸收促進劑，如季銨鹽、十二烷基硫酸鈉等；潤滑劑，如滑石粉、二氧化矽、玉米澱粉、硬脂酸鹽、硼酸、液體石蠟、聚乙二醇等。還可以將片劑進一步製成包衣片，如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。為了將給藥單元製成丸劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關於載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如葡萄糖、乳糖、澱粉、可可脂、氫化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高嶺土、滑石粉等；粘合劑如阿拉伯膠、黃蓍膠、明膠、乙醇、蜂蜜、米糊或麵糊等；崩解劑，如瓊脂粉、乾燥澱粉、海藻酸鹽、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等。為了將給藥單元製成栓劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關於載體的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高級醇、高級醇的酯、明膠、半合成甘油酯等。為了將給藥單元製成膠囊，將有效成分式(I)肽類和非肽類衍生物或其立體異構體與上述的各種載體混合，並將由此得到的混合物置於硬膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分式(I)肽類和非肽類衍生物或其立體異構體製成微囊劑，混懸於水性介質中製成混懸劑，亦可裝入硬膠囊中或製成注射劑應用。為了將給藥單元製成注射用製劑，如溶液劑、乳劑、凍乾粉針劑和混懸劑，可以使用本領域常用的所有稀釋劑，如水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的異硬脂醇、多氧基化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，為了製備等滲注射液，可以向注射用製劑中添加適量的氯化鈉、葡萄糖或甘油，此外，還可以添加常規的助溶劑、緩衝劑、pH調節劑等。
此外，如需要，也可以向藥物製劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑或其它材料。
本發明式(I)肽類和非肽類衍生物或其立體異構體的給藥劑量取決於許多因素，例如所要預防或治療疾病的性質和嚴重程度，患者或動物的性別、年齡、體重及個體反應，所用的具體化合物，給藥途徑及給藥次數等。上述劑量可以單一劑量形式或分成幾個，例如二、在、四個劑量形式給藥。
具體實施例方式
在本發明中使用的縮寫具有下面的含義Ala-丙氨酸，Gly-甘氨酸，GABA-γ-氨基丁酸，Ile-異亮氨酸，Leu-亮氨酸，Mob-β-胡椒基丙氨酸Phe-苯丙氨酸，Phg-苯基甘氨酸，Pro-脯氨酸，Pya-β-吡啶基丙氨酸，Trp-色氨酸，Val-纈氨酸，MeVal-甲基纈氨酸HIM-六亞甲基亞胺，HMPA-六甲基膦醯胺NMM-N-甲基嗎啡啉，TEA-三乙胺，DCM-二氯甲烷，DMF-二甲基甲醯胺，DCC-二環己基碳二亞胺，HOBt-1-羥基苯並三唑，THF-四氫呋喃。
本發明中，所有胺基酸構型除註明為D-型外，均為L-型。
實施例下面的實例及生物活性實驗用來進一步說明本發明，但這並不意味著對本發明的任何限制。
實施例化合物熔點由RY-1型熔點儀測定，溫度未經校正；1H NMR圖譜由Bruker ARX 400型或US Varian Unity Inova 600型核磁儀測定；FAB質譜由Zabspect高分辨磁質譜儀測定；元素分析由Carlo Erba1106型元素分析儀測定；紫外光譜由UV-260紫外可見分光光度計測定；紅外光譜由Magna IRTM550紅外儀測定。實施例製備所用反應試劑均為商品化產品。
實施例1HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH的製備1.1胡椒醇(3，4-methylenedioxybenzyl alcohol)的製備15.0克(0.1mol)胡椒醛溶於20毫升甲醇中，加入12毫升37％的甲醛(0.12mol)，攪拌，混合物加熱至65℃，使其全部溶解。當其完全溶解後，立即停止加熱，水浴冷卻，迅速加入12克氫氧化鈉/12毫升水(0.3mol)的溶液，溫度急劇升高，加熱，保持內溫70℃攪拌反應40分鐘，然後升溫回流20分鐘。冷卻，加入30毫升水，用苯提取(15毫升×4)，合併提取液，水洗兩次，苯層以無水硫酸鈉乾燥。苯層濃縮，得油狀液體14.8克(97.4％)，Rf＝0.30(石油醚-乙酸乙酯＝1∶1)。
1.2胡椒基氯甲烷(3，4-methylenedioxybenzyl chloride)的製備將68.4克胡椒醇(0.45mol)與110毫升濃鹽酸(1.35mol)混合，激烈攪拌，固體溶解。待全部溶解後，用苯萃取，苯層以水、飽和碳酸氫鈉溶液、飽和氯化鈉溶液洗滌後，用無水硫酸鈉乾燥。濃縮苯層，得淡黃色油狀液體76.1克，油泵減壓蒸餾，收集100-120℃/5毫米汞柱的餾份，得66.2克(86.3％)。
1.3 N-乙醯-(2-胡椒基)丙二酸二乙酯的製備將鈉9.0(0.388mol)克在600毫升絕對無水乙醇中回流(98±3℃)，至鈉完全溶解。冷卻至室溫(為白色混濁液體)後，加入乙醯氨基丙二酸二乙酯84.29克(0.388mol)，攪拌溶解。加入上述製備的胡椒基氯甲烷66.2克(0.388mol)，反應液漸變渾濁，油浴回流(100℃±3)3小時。減壓蒸出乙醇，得淡黃色油狀物，慢慢固化，用苯溶解，苯層以10％的碳酸鈉、水各洗兩次後，用無水硫酸鈉乾燥。濃縮，冷卻，得無色片狀結晶107.95克(79.3％)，m.p.109-110℃。TLC檢測石油醚∶乙酸乙酯(1∶1)，Rf＝0.33。
1.4 N-乙醯-(2-胡椒基)丙二酸單乙酯的製備N-乙醯-(2-胡椒基)丙二酸二乙酯25.45克(0.0725mol)，用250毫升乙醇溶解，室溫滴加6N氫氧化鈉21.75毫升，TLC監測至初始反應物消失(2.5小時)。冰水浴條件下，滴加6N鹽酸(約21.75毫升)調至pH3左右，得白色混懸液。濃縮，加入180毫升水，抽濾，得白色粉狀固體，室溫乾燥。稱重得22.3克(95.2％)。
1.5 N-乙醯-(2-胡椒基)丙氨酸乙酯的製備N-乙醯-(2-胡椒基)丙二酸單乙酯22.3克(0.069mol)用210毫升二氧六環溶解，油浴回流(108℃±3)3.5小時。反應液濃縮，殘餘物用150毫升乙酸乙酯溶解，分別用飽和碳酸氫鈉、飽和氯化鈉洗兩次，乙酸乙酯層用無水硫酸鈉乾燥。濾除乾燥劑，濾液濃縮至約15毫升，加入乙醚，放置，有白色結晶析出。濾集結晶，石油醚洗兩次，室溫乾燥。稱重得14.6克(76.9％)，m.p.85-87℃。TLC檢測石油醚∶乙酸乙酯(1∶2)，Rf＝0.63。
1.6 N-乙醯-(2-胡椒基)丙氨酸乙酯的拆分稱量N-乙醯-(2-胡椒基)丙氨酸乙酯11.16克(40.0mmol)，於研缽中研成細粉，混懸於280毫升磷酸鹽緩衝溶液中，水浴(37℃±1)，溶液呈白色混懸狀。加入枯草桿菌蛋白酶A約2.0毫克，pH值迅速下降，用0.5N氫氧化鈉維持pH7.60左右。5.5小時後，pH值基本保持恆定，繼續攪拌1.0小時。反應液用乙酸乙酯萃取至紫外燈下(λ＝254nm)無吸收為止，乙酸乙酯層用飽和氯化鈉洗兩次，無水硫酸鈉乾燥。濾除乾燥劑，濾液濃縮，得無色塊狀結晶5.45克(97.7％)(D-N-乙醯-(2-胡椒基)丙氨酸乙酯)；水層於冰水浴中用濃鹽酸調對pH2左右，用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層用飽和氯化鈉洗兩次，無水硫酸鈉乾燥。濾除乾燥劑，濾液濃縮，得無色塊狀結晶4.70克(93.6％)(L-N-乙醯-(2-胡椒基)丙氨酸)。
1.7水解對上述所得(L)-N-乙醯-(2-胡椒基)丙氨酸、(D)-N-乙醯-(2-胡椒基)丙氨酸乙酯用10％鹽酸回流水解，得到(L)-(2-胡椒基)丙氨酸鹽酸鹽，m.p.235-237℃(分解)，[α]D20＝-13.4°(C＝1.45，1M HCl)(D)-(2-胡椒基)丙氨酸鹽酸鹽，m.p.235-237℃，[α]D20＝+13.1°(C＝1.47，1M HCl)。
IR3080-3020，2560，2480，2040(NH3+)，1600(NH3+，COO-)，1040(-O-CH2-O)；1HNMR(D2O)δ3.1-3.3(2H，-CH2Ar)，4.25(1H，-CHCOOH)，5.90(s，2H，-O-CH2-O)，7.27-6.8-6.9(m，3H，Ar-H)；1.8 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH的製備將D-色氨酸甲酯鹽酸鹽127毫克(0.5mmol)，溶於2毫升DMF中，加入N-甲基嗎啡啉55微升(0.5mmol)，使其溶解，加入六亞甲基胺甲醯亮氨酸128毫克(0.5mmol)，用2毫升DCM溶解。冰浴條件下加入HOBt 71毫克(0.525mmol)和DCC 108毫克(0.525mmol)。繼續保持冰浴0.5小時後，室溫反應6小時。濃縮，加入乙酸乙酯，水洗一次後，分別用10％檸檬酸、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉各洗三次，乙酸乙酯層用無水硫酸鈉乾燥5小時。濾除乾燥劑，濃縮濾液，得無色油狀物。將該油狀物用2毫升甲醇溶解，於冰水浴中加入1.25毫升1M氫氧化鈉，室溫下攪拌，TLC檢測，待反應完全後，用10％檸檬酸酸化至pH3.0左右，析出固體，乙酸乙酯提取，飽和氯化鈉溶液洗滌後，用無水硫酸鈉乾燥5小時。濾除乾燥劑，濃縮濾液，得無色油狀物。冰浴下加入石油醚，析出固體，濾集乾燥得180毫克固體。將該固體溶於2毫升THF中，冰鹽浴冷卻，加入55微升NMM和68毫升氯甲酸異丁酯，反應5分鐘後，加入預先配好的含122.75毫克D-胡椒基丙氨酸鹽酸鹽的10％的碳酸鈉溶液(1毫升)，冰鹽浴反應30分鐘後，室溫反應1.5小時，減壓濃縮，加入10毫升水，乙醚提取不溶物，水層用10％檸檬酸酸化至pH3.0左右，乙酸乙酯提取(3×15毫升)，合併提取液，以無水硫酸鈉乾燥5小時。濾除乾燥劑，濃縮濾液，得到白色固體290毫克(91.6％)。MS[M+H]+＝634.2，[M+Na]+＝656.4。
TLC檢測氯仿∶甲醇∶冰醋酸(16∶1∶0.5)，Rf＝0.68。
實施例2ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH的製備將D-色氨酸甲酯鹽酸鹽127毫克(0.5mmol)，溶於2毫升DMF中，加入N-甲基嗎啡啉55微升(0.5mmol)，使其溶解，加入ABO-CO-Leu-OH 134毫克(0.5mmol)，用2毫升DCM溶解。冰浴條件下加入HOBt 71毫克(0.525mmol)和DCC 108毫克(0.525mmol)。繼續保持冰浴0.5小時後，室溫反應6小時。濃縮，加入乙酸乙酯，水洗一次後，分別用10％檸檬酸、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉各洗三次，乙酸乙酯層用無水硫酸鈉乾燥5小時。濾除乾燥劑，濃縮濾液，得無色油狀物。將該油狀物用2毫升甲醇溶解，於冰水浴中加入1.25毫升1M氫氧化鈉，室溫下攪拌，TLC檢測，待反應完全後，用10％檸檬酸酸化至pH3.0左右，析出固體，乙酸乙酯提取，飽和氯化鈉溶液洗滌後，用無水硫酸鈉乾燥5小時。濾除乾燥劑，濃縮濾液，得無色油狀物。冰浴下加入石油醚，析出固體，濾集乾燥得226毫克固體(100％)。將該固體溶於2毫升DCM中，加入134毫克D-3-氯-4-氟苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽，用2毫升DMF溶解，再加入N-甲基嗎啡啉55微升(0.5mmol)。冰浴條件下加入HOBt 71毫克(0.525mmol)和DCC 108毫克(0.525mmol)。繼續保持冰浴0.5小時後，室溫反應6小時。濃縮，加入乙酸乙酯，水洗一次後，分別用10％檸檬酸、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉各洗三次，乙酸乙酯層用無水硫酸鈉乾燥5小時。濾除乾燥劑，濃縮濾液，得無色油狀物。將該油狀物用2毫升甲醇溶解，於冰水浴中加入1.25毫升1M氫氧化鈉，室溫下攪拌，TLC檢測，待反應完全後，用10％檸檬酸酸化至pH3.0左右，析出固體，乙酸乙酯提取，飽和氯化鈉溶液洗滌後，用無水硫酸鈉乾燥5小時。濾除乾燥劑，濃縮濾液，得無色油狀物。冰浴下加入石油醚，析出固體，濾集乾燥得310毫克固體(95.2％)。MS[M+H]+＝654.8。TLC檢測氯仿∶甲醇∶冰醋酸(16∶1∶0.5)，Rf＝0.52。
實施例3ENP002的製備 的製備將10.24克(0.04mol)HIM-CO-Leu-OH，溶於150毫升乙醚中，加入TEA5.55毫升(0.04mol)，使其溶解，通氮氣保護。冰鹽浴條件下加入5.71毫升氯甲酸異丁酯，反應15分鐘。在該溫度下慢慢加入含3克重氮甲烷的乙醚溶液200毫升，反應3小時。濃縮，加入乙酸乙酯，水洗一次後，用飽和碳酸氫鈉溶液洗兩次，乙酸乙酯層用無水硫酸鎂乾燥5小時。濾除乾燥劑，濃縮濾液，得固體產物A 5.03克(90％)。MS[M+H]+＝281.4。TLC檢測Rf＝0.70(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2)。1HNMR(CDCl3)δ0.93(t，6H，-CH(CH3)2)，1.42-1.80(t，11H，HIM環上8H和亮氨酸側鏈上3H)，3.20(4H，HIM環上4H)，4.20(brq，1H，-CHN2)，4.95(brd，1H，α-H)，5.48(s，1H，-NH)。 的製備將4.2克(0.015mol)上述產物A溶於45毫升THF中，冰鹽浴冷卻，慢慢滴加含1.34克溴化氫的二氧六環溶液20毫升，反應3小時。減壓濃縮，以50毫升乙酸乙酯溶解，用飽和碳酸氫鈉溶液洗兩次，乙酸乙酯層用無水硫酸鎂乾燥5小時。濾除乾燥劑，濃縮濾液，得白色固體產物B 4.6克(92.2％)。MS[M+H]+＝334.5。TLC檢測Rf＝0.65(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶5)。1HNMR(CDCl3)δ0.93(t，6H，-CH(CH3)2)，1.32-1.80(t，11H，HIM環上8H和亮氨酸側鏈上3H)，3.15(4H，HIM環上4H)，4.07(s，2H，-CH2Br)，4.55(brd，1H，α-H)，5.08(s，1H，-NH)。 的製備將預處理過的氫化鈉0.29克(60％)懸浮於5.0毫升DMF中，加入7.2毫升HMPA，通氮氣保護，慢慢滴加含2.08克(7.2mmol)3-吲哚亞甲基取代丙二酸二乙酯的DMF溶液4毫升，室溫攪拌反應40分鐘，形成一混合液。在另一三口瓶中，加入2.0克(6.0mmol)上述產物B，以6毫升DMF溶解，加入1毫升HMPA，慢慢滴加上述形成的混和液，室溫攪拌3小時，將反應混和液倒入400毫升冰水中，以乙酸乙酯提取，乙酸乙酯層用水洗三次，無水硫酸鎂乾燥。濾除乾燥劑，濃縮濾液，產物經皂化、脫羧後，得粗品2.9克，經柱分離，得純品C 0.85克(31.8％)。MS[M+H]+＝442.6。TLC檢測Rf＝0.59(氯仿∶甲醇＝6∶1)。
3.4 ENP002的製備將221毫克(0.5mmol)上述產物C溶於2毫升DCM中，加入117毫克(0.5mmol)D-4-氟苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽，用2毫升DMF溶解，再加入N-甲基嗎啡啉55微升(0.5mmol)。冰浴條件下加入HOBt71毫克(0.525mmol)和DCC 108毫克(0.525mmol)。繼續保持冰浴0.5小時後，室溫反應6小時。濃縮，加入乙酸乙酯，水洗一次後，分別用10％檸檬酸、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉各洗三次，乙酸乙酯層用無水硫酸鈉乾燥5小時。濾除乾燥劑，濃縮濾液，得無色油狀物。將該油狀物用2毫升甲醇溶解，於冰水浴中加入1.25毫升1M氫氧化鈉，室溫下攪拌，TLC檢測，待反應完全後，用10％檸檬酸酸化至pH3.0左右，析出固體，乙酸乙酯提取，飽和氯化鈉溶液洗滌後，用無水硫酸鈉乾燥5小時。濾除乾燥劑，濃縮濾液，得無色油狀物。冰浴下加入石油醚，析出固體，濾集乾燥得280毫克固體(92.4％)。MS[M+H]+＝607.5。TLC檢測Rf＝0.80(氯仿∶甲醇∶冰醋酸＝16∶1∶0.5)。
按照實施例2和實施例3的方法合成了以下化合物序號 一級結構分子量 純度(％)1 ABO-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-OH 598922 ABO-CO-GABA-D-Trp-D-Trp-OH 612903 ABO-CO-NH-C(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-OH 612964 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH 619955 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH 619956 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH 619937 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH635.5 878 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH635.5 919 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH635.5 9810ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH6809011ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH 6469512ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH 6458213ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH 6458514ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH653.5 9215ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl2)-OH6709416ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl2)-OH 6709417ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Pbe(2-CH3-3-Cl)-OH 649.5 9718ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH 6459019ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH 6059220ABO-CO-Leu-D-Phe(2-F)-D-Trp-OH 6199721ABO-CO-Leu-D-Phe(3-F)-D-Trp-OH 6199522ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F)-D-Trp-OH 6199623ABO-CO-Leu-D-Phe(4-Br)-D-Trp-OH6809024ABO-CO-Leu-D-Phe(3-NO2)-D-Trp-OH 6469725ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F-3-Cl)-D-Trp-OH653.5 8926ABO-CO-Leu-D-Phe(3-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH 8318227ABO-CO-Leu-D-Phe(4-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH 8318028ABO-CO-Leu-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-Trp-OH 649.5 97
29ABO-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH 645 9830ABO-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH 605 9731ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Trp-OH 640 9532HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH 633 9233HIM-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH 633 9334HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH 593 9335HIM-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH 593 9836DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH 651 9437DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH 685.59238DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH 677 9539CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH 649 8540CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3，4-Cl2)-OH700 8741CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH 675 8442ENP002 606 85其餘化合物也可按照實施例2和實施例3的方法和途徑合成。
生物活性實驗材料Wistar大鼠 軍事醫學科學院實驗動物中心臺式自動平衡記錄儀 上海大華儀器廠ET-1American peptide company10％碳酸鉀自配改良Kreb’s-Ringer緩衝液自配實驗方法樣品溶液的配製定量稱取樣品(實施例1-35的化合物)2×10-6摩爾，加入120微升10％鹼金屬碳酸鹽和80微升DMSO溶解，用改良Kreb，s-Ringer緩衝液定量稀釋為5.0毫升，作為貯備液冰箱中保存。用緩衝液稀釋為10-6、10-7、10-8和10-9摩爾四個濃度。
體外血管實驗將大鼠斷頭處死，迅速開胸，摘取主動脈，置於盛有血管營養液的培養皿中，清除血汙，仔細分離血管周圍組織，剪成長約3毫米的動脈環，分別將兩根直徑為0.1毫米的不鏽鋼鋼絲小心穿入，做成三角環狀。隨後置於盛有10毫升血管營養液的37℃恆溫浴槽中，下端固定，上端通遷張力換能器連於臺式自動平衡記錄儀，持續通入95％氧氣和5％二氧化碳混合氣。動脈環負荷0.5克，穩定之後開始給藥。
拮抗實驗先用10nM量的ET-1誘發血管環收縮，約10分鐘左右，達到平臺後，給予10-9M樣品，觀察拮抗收縮效應。當低濃度沒效時，逐漸升高濃度至10-6M。
結果按照上述方法，活性測定結果見下表藥理活性結果序號 一級結構 拮抗活性(M)10-810-94 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH++15ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl2)-OH ++18ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH ++31ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Trp-OH +32HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH ++36DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH++37DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH ++38DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH ++39CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH ++42ENP002++++拮抗活性很強 +拮抗活性中等 -不表現拮抗活性
權利要求
1.式(I)肽類和非肽類衍生物或其立體異構體R-CO-AA1-AA2-AA3-OH 式(I)其中，R為雙取代鏈烴亞胺基、六亞甲基亞胺基或以下基團 式中n1、n2、n3為0，1，2，3整數，n3≠0，0≤n1+n2≤4；X1為NH、O、S、CH2；X2為N、CH；當n1＝n2＝1，n3＝2，X1為CH2，X2為N原子時，R縮寫為ABO；m1、m2、m3和m4為0，1，2整數，0≤m1+m2≤4，0≤m3+m4≤4；y1、y2和y3為CH2、O、S和NH，當它們為NH或CH2時，可作為N端結構R，形式為N或CH；當m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y1、y2為O原子，y3為N原子時，R縮寫為DAD；當m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y3為CH2，y1為O原子，y2為N原子時，R縮寫為CSO；AA1為L或D型Ala，Ile，Leu，MeVal，Pro，Val或其它非天然脂肪族胺基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基異丁酸；AA2為非天然芳香性胺基酸、苯基甘氨酸或非胺基酸，其中芳香環中的苯基可在2、3、4或5位上被選自滷素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基單取代或二取代，當AA2為非胺基酸，特別是連接胺基酸殘基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代時，式(1)為非肽類衍生物或其立體異構體；AA3為非天然芳香性胺基酸、苯基甘氨酸或非胺基酸，其中芳香環中的苯基可在2、3、4或5位上被選自滷素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基單取代或二取代。當AA3為非胺基酸，特別是連接胺基酸殘基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代時，式(1)為非肽類衍生物或其立體異構體。
2.權利要求1的肽類和非肽類衍生物或其立體異構體，其選自下面化合物1 ABO-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-OH2 ABO-CO-GABA-D-Trp-D-Trp-OH3 ABO-CO-NH-C(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-OH4 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH5 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH6 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH7 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH8 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH9 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH10 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH11 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH12 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH13 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH14 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH15 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl2)-OH16 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl2)-OH17 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH18 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH19 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH20 ABO-CO-Leu-D-Phe(2-F)-D-Trp-OH21 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-F)-D-Trp-OH22 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F)-D-Trp-OH23 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-Br)-D-Trp-OH24 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-NO2)-D-Trp-OH25 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F-3-Cl)-D-Trp-OH26 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH27 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH28 ABO-CO-Leu-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-Trp-OH29 ABO-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH30 ABO-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH31 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Trp-OH32 HIM-C O-Leu-D-Trp-D-Mob-OH33 HIM-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH34 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH35 HIM-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH36 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH37 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH38 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH39 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH40 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3，4-Cl2)-OH41 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH42 ENP002
3.權利要求1的肽類和非肽類衍生物或其立體異構體，其中所述非肽類化合物為ENP002代表的下式化合物
4.藥物組合物，其包括至少一種式(I)肽類和非肽類衍生物或其立體異構體及藥用載體或賦形劑R-CO-AA1-AA2-AA3-OH 式(I)其中，R為雙取代鏈烴亞胺基、六亞甲基亞胺基或以下基團 式中n1、n2、n3為0，1，2，3整數，n3≠0，0≤n1+n2≤4；X1為NH、O、S、CH2；X2為N、CH；當n1＝n2＝1，n3＝2，X1為CH2，X2為N原子時，R縮寫為ABO。m1、m2、m3和m4為0，1，2整數，0≤m1+m2≤4，0≤m3+m4≤4；y1、y2和y3為CH2、O、S和NH，當它們為NH或CH2時，可作為N端結構R，形式為N或CH；當m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y1、y2為O原子，y3為N原子時，R縮寫為DAD；當m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y3為CH2，y1為O原子，y2為N原子時，R縮寫為CSO。AA1為L或D型Ala，Ile，Leu，MeVal，Pro，Val或其它非天然脂肪族胺基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基異丁酸；AA2為非天然芳香性胺基酸、苯基甘氨酸或非胺基酸，其中芳香環中的苯基可在2、3、4或5位上被選自滷素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基單取代或二取代。當AA2為非胺基酸，特別是連接胺基酸殘基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代時，式(1)為非肽類衍生物或其立體異構體；AA3為非天然芳香性胺基酸、苯基甘氨酸或非胺基酸，其中芳香環中的苯基可在2、3、4或5位上被選自滷素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基單取代或二取代。當AA3為非胺基酸，特別是連接胺基酸殘基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代時，式(1)為非肽類衍生物或其立體異構體。
5.權利要求4的藥物組合物，其中式(I)肽類和非肽類衍生物或其立體異構體選自1 ABO-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-OH2 ABO-CO-GABA-D-Trp-D-Trp-OH3 ABO-CO-NH-C(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-OH4 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH5 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH6 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH7 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH8 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH9 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH10 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH11 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH12 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH13 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH14 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH15 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl2)-OH16 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl2)-OH17 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH18 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH19 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH20 ABO-CO-Leu-D-Phe(2-F)-D-Trp-OH21 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-F)-D-Trp-OH22 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F)-D-Trp-OH23 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-Br)-D-Trp-OH24 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-NO2)-D-Trp-OH25 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F-3-Cl)-D-Trp-OH26 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH27 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH28 ABO-CO-Leu-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-Trp-OH29 ABO-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH30 ABO-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH31 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Trp-OH32 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH33 HIM-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH34 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH35 HIM-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH36 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH37 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH38 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH39 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH40 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3，4-Cl2)-OH41 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH42 ENP002。
6.權利要求1-3任一要求的肽類和非肽法生物或其立體異構體在製備用於預防或治療與內皮素及前列腺有關疾病的藥物中用途。
7.式(I)肽類衍生物或其立體異構體衍生物的製備方法，其包括1)將化合物R-CO-AA1-OH與AA2-OP在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反應，生成R-CO-AA1-AA2-OP，其中R，AA1，AA2，如權利要求1中定義，P為C1-4烷基；2)將1)中所得產物在1MNaOH/甲醇溶液中皂化，然後用鹽酸酸化，生成R-CO-AA1-AA2-OH；3)將2)中產物R-CO-AA1-AA2-OH與AA3-OP在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反應，生成R-CO-AA1-AA2-AA3-OP，其中P為C1-4烷基。所得產物在1MNaOH/甲醇溶液中皂化，然後用鹽酸酸化，生成式(I)R-CO-AA1-AA2-AA3-OH；4)將2)中產物R-CO-AA1-AA2-OH在THF、NMM中與氯甲酸異丁酯反應5-10分鐘，再加入AA3-ONa，生成R-CO-AA1-AA2-AA3-ONa，然後用鹽酸酸化，生成式(I)R-CO-AA1-AA2-AA3-OH。
8.式(I)非肽類衍生物或其立體異構體衍生物的製備方法，按本領域已知方法和改良的Szelke文獻方法製備，詳細步驟參見實施例3。
全文摘要
本發明涉及具有內皮素受體拮抗活性的肽類和非肽類衍生物，其製備方法，含它們的藥物組合物及它們在治療與內皮素及前列腺有關疾病的用途。
文檔編號A61P9/12GK1504480SQ03145929
公開日2004年6月16日 申請日期2003年7月17日 優先權日2002年11月28日
發明者劉克良, 耿波, 董俊軍, 梁遠軍, 吳萍, 許笑宇, 李昕, 池木根 申請人:中國人民解放軍軍事醫學科學院毒物藥物研究所, 中國人民解放軍軍事醫學科學院毒物藥