新型苯並噻唑類及其作為藥物的用途的製作方法

2023-05-07 09:28:21

專利名稱：新型苯並噻唑類及其作為藥物的用途的製作方法
技術領域：
本發明尤其涉及新型化合物，尤其新型苯並噻唑衍生物，含有它們的組合物和它們作為藥物的用途。
更具體地說，本發明涉及通過調節蛋白尤其激酶的活性而具有抗癌活性的苯並噻唑的新型磺酸酯。
目前，大多數的在化療中使用的商品化合物具有細胞毒作用，主要的問題是副作用和患者耐受性。只要所用藥品選擇性作用於除了健康細胞以外的癌細胞，這些作用就可能被限制。限制化療的有害作用的解決辦法之一因此可能在於使用作用於代謝途徑或主要在癌細胞中表達並且在健康細胞中很少表達或完全不表達的這些途徑的組成成分的藥品。
蛋白激酶是一個催化蛋白的特定殘基例如酪氨酸、絲氨酸或蘇氨酸殘基的羥基的磷酸化的家族。這種磷酸化可以很大程度改變蛋白的功能；因此，蛋白激酶在調節各種各樣的細胞過程(尤其包括代謝，細胞增殖，細胞分化，細胞遷移或細胞存活)中具有非常重要的作用。在涉及蛋白激酶的活性的各種細胞功能中，某些過程成為了有吸引力的治療癌症疾病以及其它疾病的靶。
因此，本發明的目的之一是提出尤其通過作用於激酶而具有抗癌活性的組合物。在需要調節活性的激酶中，周期素依賴的激酶和Aurora-2是優選的。
細胞周期的進程常常由周期素依賴的激酶(CDK)控制，它們通過與屬於周期素家族的蛋白的相互作用來激活，該活化以底物的磷酸化和最終的細胞分裂而告終。另外，被活化的內源性CDK抑制劑(INK4和KIP/CIP家族)負性調節CDKs的活性。正常細胞的生長歸因於CDK活化劑(周期素類)和內源性CDK抑制劑之間的平衡。在幾類癌症中，已經有人描述了幾種這些細胞周期調節劑的表達或異常活性。
周期素E活化了激酶CDK2，後者然後將蛋白pRb(視網膜母細胞瘤蛋白)磷酸化，導致不可能細胞分裂和向S期轉變(PL Toogood，Medicinal Research Reviews(2001)，21(6)；487-498)。激酶CDK2和可能的CDK3是G1期的進展和進入S期所必需的。在與周期素E形成複合物的過程中，它們保持pRb的高度磷酸化，以有助於G1期進展到S期。作為與周期素A的複合物，CDK2在E2F失活中具有重要作用，並且是形成S期所必需的(TD.Davies等人(2001)Structure 9，389-3)。
CDK1/周期素B複合物調節G2期和M期之間的細胞周期的進展。CDK/周期素B複合物的負性調節防止正常細胞在G2期正確和完全進行之前進入S期(K.K.Roy和E.A.Sausville，CurrentPharmaceutical Design，2001，7，1669-1687)。
存在一定的CDKs的活性調節水平。周期素依賴的激酶活化劑(CAK)對CDKs具有正性調節作用。CAK使CDKs的蘇氨酸殘基磷酸化，以使目標酶具有完全的活性。
參與細胞周期的分子存在缺陷導致了CDKs的活化和周期的進展；正常希望抑制CDK酶的活性，以便阻斷癌細胞的細胞生長。
與染色體分離和紡錘體組裝有關的許多蛋白已經在酵母和果蠅中被鑑定。這些蛋白的結構破壞導致失去染色體的分離和單極或結構異常的紡錘體。在這些蛋白當中，某些激酶，包括分別來源於果蠅和S.cerevisiae的Aurora和Ipl1在內，是染色體分離和中心體分離所必需的。酵母Ipl1的人類似物最近已經被許多實驗室克隆和表徵。該激酶，稱為Aurora 2，STK15或BTAK，屬於絲氨酸/蘇氨酸激酶家族。Bischoff等人已經指出，Aurora 2是致瘤性的，並且在人結腸直腸癌中擴增(EMBO J，1998，17，3052-3065)。這也在與上皮腫瘤有關的癌症例如乳腺癌中證實。
本發明涉及新型苯並噻唑衍生物。它因此涉及苯並噻唑衍生物作為抑制激酶的藥劑和更尤其作為抗癌劑的用途。在這些當中，本發明優選涉及苯並噻唑類的磺酸酯。本發明還涉及所述衍生物用於製備治療人的藥物的用途。
在迄今已知的描述苯並噻唑類的磺酸酯的現有技術中，可以提到公開專利申請JP0539036，該申請描述了用於製備具有以下通式的衍生物的方法
其中Y1可以表示硫原子，n可以等於0，Z可以是醯氨基，基團X1、X2、X3、X4等於H或者可以表示烷基磺醯氧基。
在以上參考專利的通式中包含的大多數化合物中，沒有一個實施例描述了對應於根據本發明的活性化合物的化合物，它們也沒有描述苯並噻唑類的合成。
根據本發明的化合物對應於以下通式(I) 其中·X表示選自共價鍵，(CH2)n中的基團，其中n等於1或2，·Ar表示芳基或雜芳基；該基團任選被選自烷基、滷素、NR1R2(R1和R2選自氫，烷基，環烷基，或可以一起形成雜環基或雜芳基，這些基團本身是任選取代的)，SO2烷基，硫烷基，烷氧基，雜芳基或芳基中的基團取代，·R表示選自氫，烷基，環烷基，雜環烷基，芳基，雜芳基，烷氧基，環烷氧基，雜環烷氧基、氨基中的基團；R可以任選被一個或多個選自與以上對於R定義的那些基團中的基團取代。
在基團R1和R2上的可能存在的取代基尤其選自羥基、雜芳基、環烷基、氨基烷基。
對於本發明來說，術語「烷基」是指含有1-10個碳原子的直鏈或支鏈烷基。
對於本發明來說，術語「環烷基」是指含有3-10個碳原子的環狀烷基鏈。
對於本發明來說，術語「雜環烷基」是指含有3-10個碳原子並且含有至少一個選自O、N和S中的雜原子的環狀烷基鏈。
對於本發明來說，術語「基團NR1R2」是指氨基，優選仲胺基，即，至少一個取代基是氫的基團。
所有這些基團任選被烷基、環烷基、雜環烷基、雜芳基、芳基、氨基、羥基、烷氧基或滷素基團取代。
對於本發明來說，術語「芳基」和「雜芳基」是指任選包括一個或多個選自O、N和S中的雜原子的單環基團，或者稠合於另外的五元或六元環並且任選包括1-3個選自O、N和S中的雜原子的基團。優選地，在芳基或雜芳基中，可以提到苯基，吡啶基，嘧啶基，三嗪基，吡咯基，咪唑基，噻唑基，呋喃基，噻吩基，吲哚基，氮雜吲唑基，異苯並呋喃基，異苯並噻吩基，苯並唑基，苯並噻唑基，芳基亞乙烯基，芳基醯胺基，芳基羧醯胺基，芳烷基胺，喹啉基，異喹啉基，噌啉基，喹唑啉基，萘啶基，三唑基或四唑基。
在芳基和雜芳基中，優先選擇任選取代的苯基、噻吩基、吡唑基、咪唑基。
屬於優選的苯基的取代基的是氨基和滷素，尤其氯和氟，因此，在芳基當中，二氟苯基和三氟苯基和單烷基氨基苯基是最優選的，該烷基鏈任選被羥基或二烷基氨基取代。
在通式(I)的化合物中，還優先選擇X表示共價鍵的那些和R表示環烷基的那些。
在對應於通式(I)的化合物中，可以提到以下化合物4-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-[(哌啶-4-羰基)氨基]苯並噻唑-6-基酯；4-氟苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯；4-環戊基氨基苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)-苯並噻唑-6-基酯；4-(3-咪唑-1-基丙基氨基)苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)-苯並噻唑-6-基酯；
4-甲基氨基苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)-苯並噻唑-6-基酯；4-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)-苯並噻唑-6-基酯；4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)-苯並噻唑-6-基酯；4-[4-(4-吡啶-3-基咪唑-1-基)丁基氨基]苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)-苯並噻唑-6-基酯；4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(2-哌啶-4-基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-(3-咪唑-1-基丙基氨基)苯磺酸2-(2-哌啶-4-基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-(2-乙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(2-哌啶-4-基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-[2-(2-羥乙基氨基)乙基氨基]苯磺酸2-(2-哌啶-4-基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-(2-哌啶-4-基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(8-氨基辛醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-(3-咪唑-1-基丙基氨基)苯磺酸2-(8-氨基辛醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-(2-乙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(8-氨基辛醯胺基)苯並噻唑-6-基酯；4-[2-(2-羥乙基氨基)乙基氨基]苯磺酸2-(8-氨基辛醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-(8-氨基辛醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(3-哌啶-4-基-丙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-(3-咪唑-1-基丙基氨基)苯磺酸2-(3-哌啶-4-基-丙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；
4-(2-乙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(3-哌啶-4-基-丙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-[2-(2-羥乙基氨基)乙基氨基]苯磺酸2-(3-哌啶-4-基-丙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-異丁基氨基苯磺酸2-(2-哌啶-4-基-乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-異丁基氨基苯磺酸2-(3-哌啶-4-基-丙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-異丁基氨基苯磺酸2-(8-氨基辛醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；噻吩-2-磺酸2-[(哌啶-4-羰基)氨基]苯並噻唑-6-基酯；與三氟乙酸的化合物；噻吩-2-磺酸2-(3-哌啶-4-基-丙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯；與三氟乙酸的化合物；噻吩-2-磺酸2-(2-氨基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯；噻吩-2-磺酸2-(2-甲基氨基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯；與三氟乙酸的化合物；噻吩-2-磺酸2-(3-氨基丙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯；與三氟乙酸的化合物；噻吩-2-磺酸2-(8-氨基辛醯胺基)苯並噻唑-6-基酯；與三氟乙酸的化合物；噻吩-2-磺酸2-(3-二乙基氨基丙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯；與三氟乙酸的化合物；噻吩-2-磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯；4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-[(氮雜環丁烷-3-羰基)氨基]苯並噻唑-6-基酯；4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(8-氨基辛醯胺基)苯並噻唑-6-基酯；4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-[(1-氨基環戊烷羰基)氨基]苯並噻唑-6-基酯；4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(2-哌啶-4-基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯；
4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-乙醯胺基苯並噻唑-6-基酯；4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(2-甲氧基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯；4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(環戊烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯；4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(6-氨基己醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(7-氨基庚醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(環戊烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-異丁醯胺基-苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-丙醯胺基-苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-丙醯胺基-苯並噻唑-6-基酯；4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(環丁烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-氟苯磺酸2-(3-吡啶-3-基丙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯；4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(3-吡啶-3-基-丙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-(3-吡啶-3-基-丙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-(1-氧基-2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基氨基)苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯；4-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-(3-哌啶-4-基-丙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-丁醯胺基-苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；
4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-丁醯胺基-苯並噻唑-6-基酯；與三氟乙酸的化合物；4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-異丁醯胺基-苯並噻唑-6-基酯；與三氟乙酸的化合物；4-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-丁醯胺基-苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-丙醯胺基-苯並噻唑-6-基酯；與三氟乙酸的化合物；4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-乙醯胺基苯並噻唑-6-基酯；4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-乙醯胺基苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽；4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(2-甲氧基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯；4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(環戊烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯；4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(環丁烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯；與三氟乙酸的化合物；1-甲基-1H-咪唑-4-磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯；5-吡啶-2-基噻吩-2-磺酸2-(環戊烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯；4-(2-甲基-2-膦醯氧基丙基氨基)苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯。
製備根據本發明的化合物的方法之一可以按照下列方式圖解表示1.根據合成路線1可以製備R＝烷基、環烷基、芳基、雜芳基的通式(I)的化合物。
合成路線1 本發明的化合物可以容易地由5-甲氧基苯並噻唑-2-基胺(商品化合物)製備。
在第一步中，該起始原料在酸性介質中，優選在乙酸/氫溴酸水溶液混合物中去甲氧基。
在第二步中，通過5-羥基苯並噻唑-2-基胺(2)和式(3)的酸(R如在通式(I)中所定義)在偶聯劑例如HATU或HBTU和鹼例如二異丙基乙基胺或三乙胺的存在下在適合溶劑中的反應獲得5-羥基苯並噻唑-2-基醯胺(4)。在可以使用的溶劑當中，可以提到二甲基甲醯胺、二氯甲烷。進行該反應的溫度選擇在室溫到回流溫度。
在第三步中，通過5-羥基苯並噻唑-2-基醯胺(4)與式(5)的磺醯氯(X和Ar如在通式(I)中所定義)在惰性溶劑(丙酮，THF，二氯甲烷、甲苯)中在鹼例如三乙胺或吡啶的存在下的反應獲得式(6)的磺酸酯。
在XAr對應於4-氟苯基的情況下，F用式(7)的胺(R1R2如在通式(I)中所定義)親核取代以獲得式(8)的衍生物的反應在密封管內或用微波在90-130℃的溫度下在非質子溶劑例如N-甲基吡咯烷酮或二甲基甲醯胺中進行。
2.根據合成路線2可以製備其中R＝烷氧基、環烷氧基或雜環烷氧基的本發明的化合物。
合成路線2 本發明的化合物可以容易地由5-甲氧基苯並噻唑-2-基胺(商品化合物)製備。
在第一步中，該起始原料在酸性介質中，優選在乙酸/氫溴酸水溶液混合物中去甲氧基。
在第二步中，通過5-羥基苯並噻唑-2-基胺(2)和式(3)的磺醯氯(X和Ar如在通式(I)中所定義)在惰性溶劑(丙酮，THF，二氯甲烷，甲苯)中在鹼例如三乙胺或吡啶的存在下的反應獲得式(4)的磺酸酯。
在XAr對應於4-氟苯基的情況下，F用式(6)的胺(R1R2如在通式(I)中所定義)親核取代以獲得式(7)的衍生物的反應在密封管內或用微波在90-130℃的溫度下在非質子溶劑例如N-甲基吡咯烷酮或二甲基甲醯胺中進行。
通過式(4)和(7)的胺與式(5)的氯甲酸酯(R3如在通式(I)中所定義)在有機鹼例如吡啶、三乙胺或二異丙基乙基胺或無機鹼例如碳酸鉀的存在下在適合溶劑中的反應獲得氨基甲酸酯(8)。在可以使用的溶劑當中，可以提到四氫呋喃，二氯甲烷和二烷。選擇進行該反應的溫度為0℃到回流溫度。
3.根據合成路線3可以製備其中R＝烷基氨基、環烷基氨基、雜環氨基的本發明的化合物。
合成路線3
通過式(8)的氨基甲酸酯(R3優選為Me)與式(9)的胺(R4和R5如在通式(I)中所定義)在密封管內或用微波在90-130℃的溫度下在非質子溶劑例如N-甲基吡咯烷酮或二甲基甲醯胺中的反應可以獲得式(10)的脲。
根據本發明的化合物可以在人類治療中，更尤其在癌症治療中，還更尤其對Aurora-2抑制劑和Cdk2抑制劑敏感的癌症的治療中使用。
以下藉助實施例來更完全地描述本發明。這些實施例不應被認為限制本發明。
DCI光譜通過解吸-化學電離(反應劑氣體氨，Finnigan SSQ7000儀器)來獲得。
電噴霧(ES+)譜使用Platform II(Micromass)儀器獲得。
LC/MS分析LC/MS分析方法(方法A1)LC/MS分析用與HP 1100儀器連接的Micromass LCT型儀器進行。產品的豐度用在200-600nm波長範圍內的HP G1315A二極體陣列檢測器和Sedex 65光散射檢測器測定。質譜在180-800的範圍內獲取。該數據使用Micromass MassLynx軟體分析。用Hypersil BDS C18柱子，3μm(50×4.6mm)進行分離，用5％-90％的含有0.05％(v/v)的三氟乙酸(TFA)的乙腈/含有0.05％(v/v)TFA的水的線性梯度在1ml/min的流速下用3.5分鐘洗脫。總分析時間(包括柱子再平衡時間)是7分鐘。
LC/MS分析方法(方法A2)用Micromass Platform型儀器進行LCMS分析。產品的豐度用在200-400nm波長範圍內的HP G1315A二極體陣列檢測器和Sedex 65光散射檢測器測定。質譜在50-1500的範圍內獲取。該數據使用Micromass MassLynx軟體分析。用Xterral 3.5μm(50×2.1mm)柱子進行分離，用5％-95％的乙腈/含有0.1％(v/v)甲酸的水的線性梯度在0.7ml/min的流速下用9分鐘洗脫。總分析時間(包括柱子再平衡時間)是9分鐘。
製備LC/MS提純(方法B)使用Waters FractionLynx系統通過LC/MS提純產品，該系統由Waters 600型梯度泵、Waters 515型再生泵、Waters Reagent Manager稀釋泵、Waters 2700型自動注射器、兩個Rheodyne LabPro型閥門、Waters 996型二極體陣列檢測器、Waters Model ZMD質譜儀和Gilson204型級分收集器組成。該系統用Waters FractionLynx軟體控制。交替地用兩根Waters Symmetry柱子(C18，5μm，19×50mm，產品目錄號186000210)進行分離，一根柱子用含有0.07％(v/v)三氟乙酸的95/5(v/v)水/乙腈混合物進行再生，而另一根柱子進行分離。這些柱子用5％-90％的含有0.07％(v/v)的三氟乙酸的乙腈/含有0.07％(v/v)三氟乙酸的水的線性梯度在10ml/min的流速下洗脫。在分離柱出口，以0.5ml/min的流速用LC Packing Accurate分離千分之一的洗脫物，用甲醇稀釋，輸送到檢測器，75％的比例輸送到二極體陣列檢測器，剩餘25％輸送到質譜儀。將剩餘的洗脫物(999/1000)輸送到級分收集器，其中只要FractionLynx軟體沒有檢測到大部分的預期產品，該料流就被丟棄。預期產品的分子式提供給FractionLynx軟體，當所檢測的物質信號對應於離子[M+H]+和/或[M+Na]+時，其起動產品的收集。在某些情況下，取決於分析LC/MS結果，當檢測到對應於[M+2H]++的強離子時，還將對應於計算分子量一半(MW/2)的值提供給FractionLynx軟體。在這些條件下，當檢測到離子[M+2H]++和/或[M+Na+H]++的物質信號時，也起動收集。產品在稱過空重的玻璃管內收集。在收集之後，在Savant AES 2000或Genevac HT8離心蒸發器中蒸發掉溶劑，通過將蒸發溶劑之後的管稱重來確定產品質量。
通過快速層析提純通過在0.5巴的氬氣壓力下通過快速層新法用粒度15-35μm的矽石提純粗產品。將對應於預期產品的級分合併，用旋轉蒸發儀在減壓下濃縮。
以下藉助實施例來更完全地說明本發明，但這些實施例不視為對本發明構成限制。
中間體12-氨基苯並噻唑-6-醇
將2-氨基-6-乙氧基苯並噻唑(5g，25.74mmol)和溶於水(130ml，1.141mol)中的48％氫溴酸在65ml醋酸中的溶液分配到十個20ml微波管內，然後用微波在150℃下加熱200秒鐘。將反應介質濃縮。將殘留物溶解在200ml的水中，通過添加75ml的飽和NaHCO3溶液鹼化至pH8，用乙酸乙酯萃取，用飽和氯化鈉溶液洗滌，用硫酸鎂乾燥，再濃縮至乾燥狀態，獲得3.4g的2-氨基苯並噻唑-6-醇(灰色粉末)。LC/MS(方法A1)[M+H]+＝167.00，保留時間1.07min。
中間體24-(6-羥基苯並噻唑-2-基氨基甲醯基)-哌啶-1-羧酸叔丁酯 將哌啶-1，4-二羧酸單叔丁基酯(276mg，1.203mmol)，HATU(549mg，1.444mmol)和二異丙基乙基胺(187mg，1.44mmol)在3mlDMF中的溶液在室溫下攪拌15分鐘。按單一部分添加溶於3ml DMF中的2-氨基苯並噻唑-6-醇(中間體1)(200mg，1.203mmol)。將該反應介質在室溫下攪拌2小時，倒入Na2CO3在水(20ml)中的10％溶液，用乙酸乙酯萃取。粗反應產物用柱層析法提純(洗脫劑EtOAc/庚烷(1/1))，獲得401mg的4-(6-羥基苯並噻唑-2-基氨基甲醯基)-哌啶-1-羧酸叔丁酯(白色固體)。LC/MS(方法A2)[M+H]+＝378.0，保留時間3.9min。
中間體34-[6-(4-氟苯磺醯氧基)苯並噻唑-2-基氨基甲醯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的製備
將4-(6-羥基苯並噻唑-2-基氨基甲醯基)-哌啶-1-羧酸叔丁酯(中間體2)(454mg，1.20mmol)，4-氟-苯磺醯氯(234mg，1.20mmol)和三乙胺(320μl)在10ml丙酮中的溶液在室溫下攪拌1小時。過濾出三乙胺鹽酸鹽，將濾液蒸發。粗反應產物用柱層析法提純(洗脫劑EtOAc/庚烷(7/3))，獲得400mg的4-氟苯磺酸2-[(哌啶-4-羰基)氨基]-苯並噻唑-6-基酯(白色固體)。LC/MS(方法A2)[M+H]+＝535.9，保留時間4.9min。
中間體44-氟苯磺酸2-[(哌啶-4-羰基)氨基]-苯並噻唑-6-基酯的製備 將4-[6-(4-氟苯磺醯氧基)苯並噻唑-2-基氨基甲醯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(中間體3)(100mg，0.187mmol)和TFA(0.5ml)在二氯甲烷(4.5ml)中的溶液在室溫下攪拌1小時。將反應介質蒸發到乾燥。將殘留物溶解在最少量的水中，通過添加10％Na2CO3水溶液來中和，用乙酸乙酯萃取，獲得55mg的4-氟苯磺酸2-[(哌啶-4-羰基)氨基]-苯並噻唑-6-基酯(白色固體)。LC/MS(方法A2)[M+H]+＝435.9，保留時間3.0min。
實施例54-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-[(哌啶-4-羰基)氨基]苯並噻唑-6-基酯的製備
將4-氟苯磺酸2-[(哌啶-4-羰基)氨基]-苯並噻唑-6-基酯(中間體4)(50mg，0.114mmol)和4-(4-吡啶-3-基-咪唑-1-基)丁基胺(40.93mg，0.459mmol)在0.5mlNMP中的溶液用微波在130℃下加熱5分鐘。粗反應產物通過製備LC/MS(鹼性介質(pH9))提純，在冷凍乾燥後，獲得21mg的4-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-(哌啶-4-羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯(淺黃色固體)。LC/MS(方法A2)[M+H]+＝505.2，保留時間2.70min。
中間體6環丙烷羧酸(6-羥基苯並噻唑-2-基)醯胺的製備 在裝有磁力攪拌棒的100ml圓底燒瓶內，將2-氨基苯並噻唑-6-醇(中間體1)(850mg，4.6mmol)，環丙烷羧酸(1.564g，18.1mmol)，N，N-二異丙基乙基胺(3.6ml，24.4mmol)和HBTU(4.1g，5.53mmol)在40ml二甲基甲醯胺中的溶液在室溫下攪拌16小時。將150ml的水加入到反應介質中，該混合物用乙酸乙酯萃取，萃取物用飽和氯化鈉溶液洗滌，用硫酸鎂乾燥，再濃縮至乾燥。所獲得的殘留物用乙酸乙酯洗滌，獲得893mg的環丙烷羧酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯。LC/MS[M+H]+＝303.18，保留時間3.53min。將氫氧化鋰一水合物(200mg，4.768mmol)在50ml甲醇和5ml水中的溶液加入到該產品中。該反應介質在攪拌下回流1小時。將該反應介質濃縮，用2N鹽酸溶液酸化至pH1，用100ml水稀釋，用乙酸乙酯萃取。有機相用水洗滌，然後用飽和氯化鈉溶液洗滌，蒸發至乾燥，獲得500mg的環丙烷羧酸(6-羥基苯並噻唑-2-基)醯胺，收率72％(米黃色粉末)。
NMR1H NMR譜(400MHz)-δ，ppm-DMSO-d60.90-1.00(未分辨的複合峰，4H)；1.98(未分辨的複合峰，1H)；6.88(dd，J＝8.5和3.0Hz，1H)；7.27(d，J＝3.0Hz，1H)；7.54(d，J＝8.5Hz，1H)；9.51(寬s，1H)；12，4(寬s，1H)。
實施例74-氟苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯的製備 在裝有磁力攪拌棒的100ml圓底燒瓶內，將環丙烷羧酸(6-羥基苯並噻唑-2-基)醯胺(中間體6)(1.81m，7.72mmol)，4-氟苯磺醯氯(1.5g，7.72mmol)和三乙胺(2.14ml，15.45mmol)在43ml丙酮中的溶液在室溫下攪拌1小時。將所獲得的沉澱過濾，將濾液蒸發。殘留物用丙酮和乙醚洗滌，獲得1.92g的4-氟苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯(灰白色粉末)，收率66％。
MassIEm/z 392[M+]，m/z 324[M+]-COC3H5，m/z 233[M+]-SO2PhF，m/z 165324-SO2PhF，m/z69(基礎峰)[COC3H5]+。
1H NMR譜(300MHz)-δ，ppm-DMSO-d60.92-1.03(未分辨複合峰，4H)；2.02(未分辨複合峰，1H)；7.04(dd，J＝8.5和2.5Hz，1H)；7.54(未分辨複合峰，2H)；7.70(d，J＝8.5Hz，1H)；7.80(d，J＝2.5Hz，1H)；7.97(未分辨複合峰，2H)；12.75(寬s，1H)。
實施例84-環戊基氨基苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯的製備
將4-氟苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯(實施例7)(50mg，127.4μmol)和環戊基胺(51μl，0.51mmol)在0.5ml NMP中的溶液用微波在150℃下加熱5分鐘。粗反應產物通過製備LC/MS(鹼性介質(pH9))提純，在冷凍乾燥後，獲得38mg的4-環戊基氨基苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯(白色固體)。LC/MS(方法A2)[M+H]+＝458.0，保留時間4.39min。
實施例94-(3-咪唑-1-基丙基氨基)苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯的製備 將4-氟苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯(實施例7)(100mg，0.255mmol)和3-咪唑-1-基-丙基胺(123μl，1.019mmol)在2ml NMP中的溶液用微波在150℃下加熱5分鐘。粗反應產物通過製備LC/MS(鹼性介質(pH9))提純，在冷凍乾燥後，獲得63mg的4-(3-咪唑-1-基丙基氨基)苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯(白色固體)。LC/MS(方法A2)[M+H]+＝498.0，保留時間2.90min。
實施例104-甲基氨基苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯的製備
將4-氟苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯(實施例7)(25mg，63.71μmol)和甲胺(2N MeOH溶液，200μl)在300μl NMP中的溶液用微波在150℃下加熱3分鐘。粗反應產物通過製備LC/MS(鹼性介質(pH9))提純，在冷凍乾燥後，獲得6.7mg的4-甲基氨基苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯(米黃色固體)。LC/MS(方法A2)[M+H]+＝404.1，保留時間3.83min。
實施例114-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯的製備 將4-氟苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯(實施例7)(100mg，255μmol)和1-氨基-2-甲基-丙-2-醇(91mg，1.02mmol)在2ml NMP中的溶液用微波在150℃下加熱5分鐘。粗反應產物通過製備LC/MS(鹼性介質(pH9))提純，在冷凍乾燥後，獲得61mg的4-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯(米黃色固體)。LC/MS(方法A2)[M+H]+＝462.1，保留時間3.83min。
實施例124-(二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯的製備
將4-氟苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯(實施例7)(100mg，255μmol)和N，N-二異丙基-乙烷-1，2-二胺(147mg，1.02mmol)在2ml NMP中的溶液用微波在110℃下加熱10分鐘。粗反應產物通過製備LC/MS(鹼性介質(pH9))提純，在冷凍乾燥後，獲得66mg的4-(2-羥基-2-甲基-丙基氨基)苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯(米黃色固體)。LC/MS(方法A2)[M+H]+＝517.1，保留時間2.93min。
實施例134-[4-(4-吡啶-3-基咪唑-1-基)丁基氨基]-苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯的製備 將4-氟苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯(實施例7)(50mg，127.4μmol)和4-(4-吡啶-3-基咪唑-1-基)丁基胺(110.2mg，0.51mmol)在0.5ml NMP中的溶液用微波在150℃下加熱8分鐘。粗反應產物通過製備LC/MS(鹼性介質(pH9))提純，在冷凍乾燥後，獲得36mg的4-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)-苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯(米黃色固體)。LC/MS(方法A2)[M+H]+＝589.0，保留時間3.14min。
中間體14(6-羥基苯並噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯的製備
在安裝了磁力攪拌棒的100ml圓底燒瓶內，將2-氨基苯並噻唑-6-醇(中間體1)(1.91g，11.49mmol)，二碳酸二叔丁基酯(7.52g，34.47mmol)，三乙胺(4.9ml，34.47mmol)和4-二甲基氨基吡啶(168mg，1.38mmol)在50ml二氯甲烷中的溶液在室溫下攪拌過夜。將該反應介質蒸發至乾燥，所得殘留物用二氯甲烷和乙醚洗滌，以定量收率獲得4.2g的碳酸2-叔丁氧羰基氨基苯並噻唑-6-基酯叔丁酯。LC/MS[M+H]+311.16，保留時間5.27min。
將氫氧化鈉(920mg，22.8mmol)在110ml甲醇中的溶液加入到該產品中。將該反應介質在室溫下用超聲攪拌2小時，然後用2N鹽酸溶液酸化至pH4。
將反應介質蒸發至乾燥，所得殘留物用二氯甲烷和乙醚洗滌，獲得2.35g的(6-羥基苯並噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯(米黃色粉末)，收率77％)。
MassIEm/z 266[M+]，m/z 166(基礎峰)[M+]-CO2tBuIRKBr3422；3263；3091；2981；1725；1608；1562；1468；1278；1245；1154；1049；862和852cm-11H NMR譜(300MHz)-δ，ppm-DMSO-d61.52(s，9H)；6.85(dd，J＝9.0和3.0Hz，1H)；7.24(d，J＝3.0Hz，1H)；7.49(d，J＝9.0Hz，1H)；9.44(寬的未分辨的複合峰，1H)；11.5(寬的未分辨的複合峰，1H)。
中間體154-氟苯磺酸2-叔丁氧羰基氨基苯並噻唑-6-基酯的製備
在安裝了磁力攪拌棒的100ml圓底燒瓶內，將(6-羥基苯並噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯(中間體14)(3.61g，13.08mmol)，4-氟苯磺醯氯(2.56g，13.08mmol)和三乙胺(3.63ml，26.16mmol)在65ml的丙酮中的溶液在室溫下攪拌過夜。將所得沉澱過濾，濾液蒸發至乾燥。乾燥殘留物用乙酸乙酯洗滌，獲得5.02g的4-氟苯磺酸2-叔丁氧羰基氨基苯並噻唑-6-基酯(白色粉末)，收率62％。
1H NMR譜(400MHz)-δ，ppm-DMSO-d61.53(s，9H)；7.02(dd，J＝9.0和2.5Hz，1H)；7.55(t，J＝9.0Hz，2H)；7.65(d，J＝9.0Hz，1H)；7.78(d，J＝2.5Hz，1H)；7.98(dd，J＝5.0和9.0Hz，2H)；11.9(寬s，1H)。
中間體164-氟苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯的製備 在安裝了磁力攪拌棒的100ml圓底燒瓶內，將4-氟苯磺酸2-叔丁氧羰基氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體15)(1.7g，3.60mmol)，10ml的三氟乙酸(130mmol)在10ml二氯甲烷和1ml水中的溶液在室溫下攪拌2小時。將反應介質蒸發至乾燥，所得殘留物用乙醚洗滌，獲得1.31g的三氟乙酸鹽形式的4-氟苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(白色粉末)，收率83％。LC/MS(方法A1)[M+H]+＝325.13，保留時間3.12min。
中間體174-{[6-(4-氟苯磺醯氧基)苯並噻唑-2-基氨基甲醯基]甲基}哌啶-1-羧酸叔丁酯的製備
在安裝了磁力攪拌棒的試管內，將4-氟苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體16)(580mg，1.32mmol)，4-羧甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(640mg，2.63mmol)，HBTU(1.1g，2.9mmol)和N，N-二異丙基胺(1.2ml，6.89mmol)在12ml二甲基甲醯胺中的溶液在室溫下攪拌3天。將200ml的水加入到該反應介質中，混合物用乙酸乙酯萃取。然後用水和飽和氯化鈉溶液洗滌有機相，然後用硫酸鎂乾燥，再蒸發。所得殘留物溶解在乙酸乙酯中，用含有50g的孔隙度15-35μ的矽石的Varian快速層析柱提純，梯度為5-30％乙酸乙酯/環己烷，時間100分鐘。在蒸發掉溶劑之後，獲得了700mg的4-{[6-(4-氟苯磺醯氧基)苯並噻唑-2-基氨基甲醯基]甲基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(黃色油)，收率96％。LC/MS(方法A1)[M+H]+550.11，保留時間4.14min。
實施例184-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(2-哌啶-4-基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽 第一步在安裝了磁力攪拌棒的試管內，將4-{[6-(4-氟苯磺醯氧基)苯並噻唑-2-基氨基甲醯基]甲基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(中間體17)(174mg，0.3187mmol)，N-異丙基亞乙基二胺(97mg，0.954mmol)和碳酸銫(103mg，0.318mmol)在3ml二甲亞碸中的溶液在90℃下攪拌過夜。將100ml的水加入到該反應介質中，用乙酸乙酯萃取該混合物。有機相然後用水和用飽和氯化鈉水溶液洗滌，然後用硫酸鎂乾燥，再蒸發，獲得103mg的4-({6-[4-(3-咪唑-1-基丙基氨基)-苯磺醯氧基]苯並噻唑-2-基氨基甲醯基}甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(白色粉末)，收率50％。
第二步將103mg的4-({6-[4-(3-咪唑-1-基丙基氨基)-苯磺醯氧基]苯並噻唑-2-基氨基甲醯基}甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯，2ml的二烷和2ml的4N鹽酸在二烷中的溶液在室溫下攪拌3小時。將所得沉澱過濾，用二烷和乙醚洗滌，獲得110mg的4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(2-哌啶-4-基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽(白色粉末)，收率88％。
MassLC/MSm/z 532[M+H]+，m/z 407(基礎峰)[M+H]+-C5H10NCH2COIRKBr3432；2960；2793；2464；2598；1560；1470；1364；1162；1120；1093；915；853和753cm-11H NMR(400MHz)-δ，ppm-DMSO-d61.28(d，J＝7.0Hz，6H)；1.48(m，2H)；1.83(寬d，J＝12.5Hz，2H)；2.12(未分辨的複合峰，1H)；2.52(掩蔽的，2H)；2.92(m，2H)；3.10(未分辨的複合峰，2H)；3.28(寬d，J＝12.5Hz，2H)；3.36(mt，J＝7.0Hz，1H)；3.50(t，J＝6.0Hz，2H)；6.78(寬d，J＝9.0Hz，2H)；7.03(dd，J＝8.5和2.5Hz，1H)；7.30(寬的未分辨的複合峰，1H)；7.56(寬d，J＝9.0Hz，2H)；7.71(d，J＝8.5Hz，1H)；7.78(d，J＝2.5Hz，1H)；8.58(寬的未分辨的複合峰，1H)；8.81(寬的未分辨的複合峰，1H)；9.00(寬的未分辨的複合峰，2H)；12.5(寬s，1H)。
實施例19使用與實施例18所述相同的方法，使用4-{[6-(4-氟苯磺醯氧基)苯並噻唑-2-基氨基甲醯基]甲基}哌啶-1-羧酸叔丁酯作為前體(中間體17)與各種胺結合製備以下實施例。在以下實施例中，在第一步之後獲得的化合物用5g Interchim矽石(15-35μ)的快速層析柱提純，梯度為5％-10％甲醇/二氯甲烷，流速為10ml/min。這些實施例在下表中給出
中間體204-氟苯磺酸2-(8-叔丁氧羰基氨基辛醯胺基)苯並噻唑-6-基酯的製備
根據中間體17的方法，通過將4-氟苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體16)與Boc-8-氨基辛酸合併，製備4-氟苯磺酸2-(8-叔丁氧羰基氨基辛醯胺基)苯並噻唑-6-基酯。
LC/MS(方法A1)[M+H]+566.01，保留時間4.21min。
實施例214-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(8-氨基辛醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽的製備 根據實施例18的方法，通過將4-氟苯磺酸2-(8-叔丁氧羰基氨基辛醯胺基)苯並噻唑-6-基酯(中間體20)與N-異丙基亞乙基二胺合併來製備4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(8-氨基辛醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽。由第一步獲得的化合物，4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(8-叔丁氧羰基氨基辛醯胺基)苯並噻唑-6-基酯用矽石提純，梯度為4％-15％甲醇/二氯甲烷。
MassEIm/z 406[M+]-C8H16O，m/z 335[M+]-C4H10N，m/z 72C4H10N(基礎峰)。
CIm/z 548[M+H]+(基礎峰)，m/z 407[M+H]+-C8H16NOIRKBr3426；2923；2448；1717；1597；1563；1472；1371；1165；1092；911；857；755；574和548cm-11H NMR譜(400MHz)-δ，ppm-DMSO-d61.30(t，J＝7.0Hz，6H)；1.33(未分辨的複合峰，6H)；1.58(未分辨的複合峰，2H)；1.67(未分辨的複合峰，2H)；2.52(掩蔽的，2H)；2.79(未分辨的複合峰，2H)；3.01(未分辨的複合峰，2H)；3.36(mt，J＝7.0Hz，1H)；3.48(未分辨的複合峰，2H)；6.78(寬d，J＝9.0Hz，2H)；7.02(dd，J＝8.5和2.5Hz，1H)；7.30(未分辨的複合峰，1H)；7.56(寬d，J＝9.0Hz，2H)；7,70(d，J＝8.5Hz，1H)；7.77(d，J＝2.5Hz，1H)；7.82(寬的未分辨的複合峰，3H)；9.00(寬的未分辨的複合峰，2H)；12.45(寬s，1H).
實施例22採用與實施例21相同的方法，用4-氟苯磺酸2-(8-叔丁氧羰基氨基辛醯胺基)苯並噻唑-6-基酯(中間體20)作為前體與各種胺結合來製備以下實施例。這些實施例在下表中提供
中間體234-{2-[6-(4-氟苯磺醯氧基)苯並噻唑-2-基氨基甲醯基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯的製備 根據中間體17的方法，通過將4-氟苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體16)與N-Boc-4-哌啶丙酸結合來製備4-{2-[6-(4-氟苯磺醯氧基)苯並噻唑-2-基氨基甲醯基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯。LC/MS(方法A1)[M+H]+564.16，保留時間4.24min。
實施例244-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(3-哌啶-4-基丙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽 根據實施例18的方法，通過將4-{2-[6-(4-氟苯磺醯氧基)苯並噻唑-2-基氨基甲醯基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(中間體23)與N，N-二異丙基胺結合來製備4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(3-哌啶-4-基丙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽。由第一步獲得的化合物(4-(2-{6-[4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺醯氧基]苯並噻唑-2-基氨基甲醯基}乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯)用5g的孔隙度15-35μ的矽石的快速層析柱提純，梯度為1％-10％甲醇/二氯甲烷。
MassLC/MSm/z 546[M+H]+，m/z 407[M+H]+-C5H10NC2H4CO，m/z 274[M+2H]2+m/z 294(基礎峰)。
1H NMR譜(300MHz)-δ，ppm-DMSO-d61.25(d，J＝7.0Hz，6H)；1.32(m，2H)；1.45-1.65(未分辨的複合峰，3H)；1.81(寬d，J＝12.5Hz，2H)；2.52(掩蔽的，2H)；2.82(m，2H)；3.07(未分辨的複合峰，2H)；3.25(寬d，J＝12.5Hz，2H)；3.35(掩蔽的，1H)；3.45(未分辨的複合峰，2H)；6.73(寬d，J＝9.0Hz，2H)；6.99(dd，J＝8.5和2.5Hz，1H)；7.20(寬的未分辨的複合峰，1H)；7.52(寬d，J＝9.0Hz，2H)；7.67(d，J＝8.5Hz，1H)；7.73(d，J＝2.5Hz，1H)；8.40(寬的未分辨的複合峰，1H)；8.65(寬的未分辨的複合峰，1H)；8.87(寬的未分辨的複合峰，2H)；12.4(寬s，1H)。
實施例25使用與實施例24相同的方法，使用4-{2-[6-(4-氟苯磺醯氧基)苯並噻唑-2-基氨基甲醯基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯作為前體(中間體23)與各種胺結合製備以下實施例。這些實施例在下表中提供
中間體264-異丁基氨基苯磺酸2-叔丁氧羰基氨基苯並噻唑-6-基酯的製備 將4-氟苯磺酸2-叔丁氧羰基氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體15)(1g，2.32mmol)，異丁基胺((517mg，7.07mmol)和碳酸銫(845mg，2.59mmol)在12mlDMSO中的溶液在80℃下攪拌過夜。將60ml的水加入到反應介質中。用乙酸乙酯萃取該混合物。有機相用水和飽和氯化鈉溶液洗滌，用硫酸鎂乾燥，然後蒸發至乾燥。殘留物用乙醚洗滌，獲得880mg的4-異丁基氨基苯磺酸2-叔丁氧羰基氨基苯並噻唑-6-基酯(米黃色固體)，收率80％。
LC/MS(方法A1)[M+H]+478.01，保留時間4.31min。
中間體274-異丁基氨基苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯的製備
將4-異丁基氨基苯磺酸2-叔丁氧羰基氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體26)(880mg，1.93mmol)和三氟乙酸(5.7ml，74mmol)在6ml二氯甲烷和600μl水中的溶液在室溫下攪拌過夜。
將該反應介質濃縮至乾燥，殘留物用乙醚洗滌，獲得700mg的三氟乙酸鹽形式的4-異丁基氨基苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(白色固體)，收率52％。
LC/MS(方法A1)[M+H]+378.05，保留時間3.60min。
實施例284-異丁基氨基苯磺酸2-(2-哌啶-4-基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽的製備 第一步將4-異丁基氨基苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體27)(300mg，0.495mmol)，4-羧甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(361mg，1.485mmol)、HBTU(563mg，1.485mmol)和N，N-二異丙基乙基胺(432μl，2.475mmol)在4ml二甲基甲醯胺中的溶液在室溫下攪拌過夜。將水加入到反應介質中，再用乙酸乙酯萃取。有機相先後用水和飽和氯化鈉溶液洗滌，用硫酸鎂乾燥，再濃縮至乾燥。所得殘留物用HPLC方法上Dynamax C18，60，21×300mm柱提純，其中，95/5水/乙腈混合物5分鐘；5-40％乙腈/水的梯度5分鐘，40-80％的乙腈/水的梯度30分鐘，80-95％的乙腈/水的梯度5分鐘，然後5/95的水/乙腈的混合物5分鐘，流速20ml/分鐘。這些溶劑各自含有0.07％(v/v)的三氟乙酸。每30秒收集級分，通過分析HPLC用HypersilC18，4.6×50mm柱監控，0-100％乙腈/水的梯度，10分鐘，流速1ml/min。這些溶劑各自含有0.07％(v/v)的三氟乙酸。將含有預期產物的級分濃縮至乾燥，獲得4-{[6-(4-異丁基氨基苯磺醯氧基)苯並噻唑-2-基氨基甲醯基]甲基}哌啶-1-羧酸叔丁酯。
第二步將4-{[6-(4-異丁基氨基苯磺醯氧基)苯並噻唑-2-基氨基甲醯基]甲基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(110mg，182μmol)，二烷(2ml)和4N鹽酸在二烷中的溶液在室溫下攪拌2小時。將該反應介質濃縮至乾燥，所獲得殘留物用乙醚洗滌，獲得183mg的4-異丁基氨基苯磺酸2-(2-哌啶-4-基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽(白色粉末)，收率64％。
MassIEm/z 502[M+]，m/z 377[M+]-C7H12NO，m/z 212[SO2PhNHiBu]+-m/z 165[377-212]+-，m/z 126[C7H12NO]+-(基礎峰)。
1H NMR譜(300MHz)-δ，ppm-DMSO-d60.94(d，J＝6.5Hz，6H)；1.45(m，2H)；1.77-1.88(未分辨的複合峰，3H)；2.10(寬的未分辨的複合峰，1H)；2.52(掩蔽的，2H)；2.83(m，2H)；2.91(d，J＝6.5Hz，2H)；3.25(寬d，J＝12.5Hz，2H)；6.67(寬d，J＝9.0Hz，2H)；7.00(dl，J＝9.0Hz，1H)；7.15(非常寬的未分辨的複合峰，1H)；7.45(寬d，J＝9.0Hz，2H)；7.67(d，J＝9.0Hz，1H)；7.73(d，J＝2.5Hz，1H)；8.62(寬的未分辨的複合峰，1H)；8.85(寬的未分辨的複合峰，1H)；12.5(寬s，1H)。
實施例29使用與實施例28相同的方法，使用4-異丁基氨基苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯作為前體(中間體27)與各種酸結合製備以下實施例。這些實施例在下表中提供
中間體30噻吩-2-磺酸-2-叔丁氧羰基氨基苯並噻唑-6-基酯的製備
將(6-羥基苯並噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯(中間體14)(527mg，1.979mmol)，2-噻吩磺醯氯(433mg，2.37mmol)和三乙胺(677μl，4.75mmol)在10ml丙酮中的溶液在室溫下攪拌過夜。將反應介質濃縮至乾燥。所獲得的殘留物先後用水、丙酮和乙醚洗滌，獲得621mg的噻吩-2-磺酸-2-叔丁氧羰基氨基苯並噻唑-6-基酯(淺灰色粉末)，收率76％。LC/MS[M+H]+＝412.98，保留時間3.99min。
中間體31噻吩-2-磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯的製備 將噻吩-2-磺酸-2-叔丁氧羰基氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體30)(1.5g，3.63mmol)和三氟乙酸(15ml，196mmol)在15ml二氯甲烷和600μl水中的溶液在室溫下攪拌2小時。將反應介質濃縮至乾燥，獲得900mg的三氟乙酸鹽形式的噻吩-2-磺酸-2-氨基苯並噻唑-6-基酯(油)，收率76％。LC/MS(方法A1)[M+H]+313，保留時間3.11min。
實施例32噻吩-2-磺酸2-[(哌啶-4-羰基)氨基]苯並噻唑-6-基酯；與三氟乙酸的化合物的製備 第一步將噻吩-2-磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體31)(80mg，0.256mmol)，Boc-異哌啶酸(isonipecotic acid)(176mg，0.768mmol)，HBTU(291mg，0.768mmol)和N，N-二異丙基乙基胺(223μl，1.28mmol)在4ml二甲基甲醯胺中的溶液在室溫下攪拌3天。將30ml的水加入到該反應介質中，再用乙酸乙酯萃取。有機相用水和用飽和氯化鈉溶液洗滌，用硫酸鎂乾燥，再濃縮至乾燥狀態，獲得4-[6-噻吩-2-磺醯氧基]苯並噻唑-2-基氨基甲醯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。LC/MS[M+H]+523.96，保留時間4.00min。
第二步將4-[6-噻吩-2-磺醯氧基]苯並噻唑-2-基氨基甲醯基]哌啶-1-羧酸叔丁酯和三氟乙酸(1.5ml)在1.5ml二氯甲烷和100μl水中的溶液在室溫下攪拌過夜。將該反應介質濃縮至乾燥狀態，將殘留物溶解在500μl的DMSO中，通過製備LC/MS(方法B)提純樣品，獲得3mg的噻吩-2-磺酸2-[(哌啶-4-羰基)氨基]苯並噻唑-6-基酯；與三氟乙酸的化合物。
LC/MS[M+H]+423.97，保留時間2.74min。
實施例33使用與實施例32相同的方法，使用噻吩-2-磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯作為前體(中間體31)與各種酸結合製備以下實施例。這些實施例在下表中提供；LC/MS根據方法A1進行
中間體344-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯的製備 使用「EmrysTMOptimizer」儀器將4-氟苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體16)(100mg，0.225mmol)和N，N-二異丙基亞乙基二胺(395μl，2.25mmol)在5ml NMP中的溶液用微波在150℃下加熱20分鐘。將粗反應產物溶解在50ml的乙酸乙酯中，所形成的溶液用5×50ml的水洗滌。在通過沉降分離各相之後，有機相用硫酸鈉乾燥，過濾，在減壓下蒸發，獲得100mg的4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯。
LC/MS(方法A1)[M+H]+＝449.22，保留時間2.36min。
中間體353-{6-[4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺醯氧基]苯並噻唑-2-基氨基甲醯基}氮雜環丁烷-1-羧酸叔丁酯的製備 將68mg的氮雜環丁烷-1，3-二羧酸單叔丁酯，256mg的HBTU和235μl的DIEA加入到4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體34)(100mg，0.225mmol)在5ml二甲基甲醯胺中的溶液中。將所得溶液在室溫下攪拌20小時。在添加50ml水之後，該反應介質用3×25ml的乙酸乙酯萃取。萃取物用硫酸鎂乾燥，過濾，在減壓下蒸發，獲得700mg的粗油。該油用20g矽石通過在95/5二氯甲烷/甲醇混合物中在10ml/min的流速下洗脫來提純，獲得39mg的3-{6-[4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺醯氧基]苯並噻唑-2-基氨基甲醯基}氮雜環丁烷-1-羧酸叔丁酯。
LC/MS[M+H]+632.11，保留時間3.00min，方法A1。
中間體364-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(8-叔丁氧羰基氨基辛醯胺基)苯並噻唑-6-基酯的製備 將175mg的8-叔丁氧羰基氨基辛酸，256mg的HBTU和235μl的DIEA加入到4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體34)(100mg，0.225mmol)在5ml二甲基甲醯胺中的溶液中。將所得溶液在室溫下攪拌20小時。在添加50ml水之後，該反應介質用3×25ml的乙酸乙酯萃取。萃取物用硫酸鎂乾燥，過濾，在減壓下蒸發，獲得338mg的粗油。該油用10g矽石通過在95/5二氯甲烷/甲醇混合物中在10ml/min的流速下洗脫來提純，獲得153mg的4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(8-叔丁氧羰基氨基辛醯胺基)苯並噻唑-6-基酯。
LC/MS[M+H]+690.33，保留時間3.25min，方法A1。
中間體374-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-[(1-叔丁氧羰基氨基環戊烷羰基)氨基]苯並噻唑-6-基酯的製備
將155mg的1-叔丁氧羰基氨基環戊烷羧酸，256mg的HBTU和235μl的DIEA加入到4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體34)(100mg，0.225mmol)在5ml二甲基甲醯胺中的溶液中。將所得溶液在室溫下攪拌20小時。在添加50ml水之後，該反應介質用3×25ml的乙酸乙酯萃取。萃取物用硫酸鎂乾燥，過濾，在減壓下蒸發，獲得720mg的粗油。該油用10g矽石通過在95/5二氯甲烷/甲醇混合物中在10ml/min的流速下洗脫來提純，獲得120mg的4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-[(1-叔丁氧羰基氨基環戊烷羰基)氨基]苯並噻唑-6-基酯。
LC/MS[M+H]+660.56，保留時間3.11min，方法A1。
中間體384-({6-[4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)-苯磺醯氧基]苯並噻唑-2-氨基甲醯基}甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的製備 將164mg的1-羧甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯，256mg的HBTU和235μl的DIEA加入到4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體34)(100mg，0.225mmol)在5ml二甲基甲醯胺中的溶液中。將所得溶液在室溫下攪拌20小時。在添加50ml水之後，該反應介質用3×25ml的乙酸乙酯萃取。萃取物用硫酸鎂乾燥，過濾，在減壓下蒸發，獲得380mg的粗油。該油用10g矽石通過在95/5二氯甲烷/甲醇混合物中在10ml/min的流速下洗脫來提純，獲得90mg的4-({6-[4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)-苯磺醯氧基]苯並噻唑-2-氨基甲醯基}甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
LC/MS[M+H]+674.57，保留時間3.11min，方法A1。
實施例394-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-[(氮雜環丁烷-3-羰基)氨基]苯並噻唑-6-基酯的製備 將1.5ml的鹽酸二烷加入到39mg的3-{6-[4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺醯氧基]苯並噻唑-2-基氨基甲醯基}氮雜環丁烷-1-羧酸叔丁酯(中間體35)在1.5ml二烷中的溶液中。將所得溶液在室溫下攪拌5小時，然後在減壓下蒸發，獲得49mg的油，再通過LC/MS提純，獲得9.7mg的4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-[(氮雜環丁烷-3-羰基)氨基]苯並噻唑-6-基酯。
MSDCIm/z＝532[M+H]+ES+m/z＝532[M+H]+；m/z＝266.8[M+2H]++。
實施例404-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(8-氨基辛醯胺基)苯並噻唑-6-基酯的製備 將3ml的鹽酸二烷加入到153mg的3-{6-[4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺醯氧基]苯並噻唑-2-基氨基甲醯基}氮雜環丁烷-1-羧酸叔丁酯(中間體36)在3ml二烷中的溶液中。將所得溶液在室溫下攪拌5小時，然後在減壓下蒸發，獲得152mg的4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(8-氨基辛醯胺基)苯並噻唑-6-基酯。
MSDCIm/z＝590[M+H]+ES+m/z＝590[MH]+；m/z＝295.95[M+2H]++1H NMR譜(300MHz)-δ，ppm-DMSO-d61.20-1.38(未分辨的複合峰，16H)；1.42-1.68(未分辨的複合峰，6H)；2.29(t，J＝7.0Hz，2H)；2.74(mf，4H)；3.16(未分辨的複合峰，2H)；3.50-3.80(未分辨的複合峰，2H)；6.71(寬d，J＝9.0Hz，2H)；6.96(寬d，J＝9.0Hz，1H)；7.33(寬t，J＝6.0Hz，1H)；7.51(寬d，J＝9.0Hz，2H)；7.64(d，J＝9.0Hz，1H)；7.68(寬s，1H)；7.85(寬的未分辨的複合峰，3H)；9.98(未分辨的複合峰，1H)；12.4(寬s，1H)。
實施例414-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-[(1-氨基環戊烷羰基)氨基]苯並噻唑-6-基酯的製備 將3ml的鹽酸二烷加入到120mg的4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-[(1-叔丁氧羰基氨基環戊烷羰基)氨基]苯並噻唑-6-基酯(中間體37)在3ml二烷中的溶液中。將所得溶液在室溫下攪拌5小時，然後在減壓下蒸發，獲得90mg的油，再通過LC/MS提純，獲得32mg的4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-[(1-氨基環戊烷羰基)氨基]苯並噻唑-6-基酯。
1H NMR譜(300MHz)-δ，ppm-DMSO-d6+1滴AcCOD1.26(d，J＝6.5Hz，12H)；1.85-2.02(未分辨的複合峰，6H)；2.35(未分辨的複合峰，2H)；3.19(t，J＝7.0Hz，2H)；3.50(t，J＝7.0Hz，2H)；3.68(mt，J＝6.5Hz，2H)；6.72(寬d，J＝9.0Hz，2H)；6.98(dd，J＝8.5和2.5Hz，1H)；7.55(寬d，J＝9.0Hz，2H)；7.76(d，J＝8.5Hz，1H)；7.85(d，J＝2.5Hz，1H)。
實施例424-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(2-哌啶-4-基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯的製備 將3ml的鹽酸二烷加入到90mg的4-({6-[4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)-苯磺醯氧基]苯並噻唑-2-氨基甲醯基}甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(中間體38)在3ml二烷中的溶液中。將所得溶液在室溫下攪拌5小時，然後在減壓下蒸發，獲得90mg的油，再通過LC/MS提純，獲得101mg的4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(2-哌啶-4-基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯。
LC/MS[M+H]+574.23，保留時間2.24min，方法A1。
MSDCIm/z＝574[MH+]ES+m/z＝574[MH+]；m/z＝287.9[(M+2H)/2]+1H NMR譜(400MHz)-δ，ppm-DMSO-d6+1滴AcCOD，383K(110℃)1.33(d，J＝7.0Hz，12H)；1.42-1.58(未分辨的複合峰，2H)；1.85-1.95(未分辨的複合峰，2H)；2.15(未分辨的複合峰，1H)；2.31(d，J＝7.0Hz，2H)；2.87-2.97(未分辨的複合峰，2H)；3.22(t，J＝6.5Hz，2H)；3.24-3.32(未分辨的複合峰，2H)；3.58(t，J＝6.5Hz，2H)；3.65-3.75(未分辨的複合峰，2H)；6.75(寬d，J＝9.0Hz，2H)；7.08(dd，J＝8.5和2.5Hz，1H)；7.58(寬d，J＝9.0Hz，2H)；7.62(d，J＝2.5Hz，1H)；7.65(d，J＝8.5Hz，1H)。
實施例434-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-乙醯胺基苯並噻唑-6-基酯的製備
將28mg的乙酸，177.5mg的HBTU和163μl的DIEA加入到4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體34)(70mg，0.156mmol)在4ml二甲基甲醯胺中的溶液中。將所得溶液在室溫下攪拌20小時。在添加50ml水之後，該反應介質用3×25ml的乙酸乙酯萃取。萃取物用硫酸鎂乾燥，過濾，在減壓下蒸發，獲得130mg的粗油。該油通過LC/MS來提純，獲得15mg的4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-乙醯胺基苯並噻唑-6-基酯。
IR3420；2989；2680；1674；1599；1542；1452；1367；1268；1202；1176；1161；1134；1094；914；851；831；753；720和579cm-11H NMR譜(300MHz)-δ，ppm-DMSO-d61.30(d，J＝6.5Hz，12H)；2.22(s，3H)；3.23(mf，2H)；3.51(未分辨的複合峰，2H)；3.72(未分辨的複合峰，2H)；6.74(寬d，J＝9.0Hz，2H)；6.90(寬的未分辨的複合峰，1H)；7.03(寬d，J＝9.0Hz，1H)；7.56(寬d，J＝9.0Hz，2H)；7.68(d，J＝9.0Hz，1H)；7.70(d，J＝3.0Hz，1H)；8.46(未分辨的複合峰，1H)；12.4(寬s，1H)。
實施例43a4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-乙醯胺基苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽的製備 由250mg(0.557mmol)的4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體34)與57mg(0.557mmol)的乙酸酐和216mg(1.671mmol)的N，N-二異丙基乙基胺在10ml二氯甲烷中的溶液合成實施例43a。將該反應介質攪拌過夜，然後兩次添加同樣量的乙酸酐和N，N-二異丙基乙基胺，讓該反應在室溫下繼續3天。然後添加50ml的二氯甲烷，用水洗滌反應介質。將2N鹽酸溶液加入到有機相中至pH3，所形成的有機相然後用飽和氯化鈉水溶液洗滌，用硫酸鎂乾燥，蒸發至乾燥狀態，獲得140mg的4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-乙醯胺基苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽，收率48％。
MassES m/z＝491MH+基礎峰NMR1H NMR譜，300MHz，Bruker Avance DPX-300譜儀，化學位移(δ，ppm)-在溶劑二甲亞碸-d6(DMSO-d6)中，以2.50ppm為參考0.90-1.35(m，12H)；2.20(s，3H)；3.18(寬m，2H)；3.53(寬m，2H)；3.60-3.77(寬m，2H)；6.72(寬d，J＝9.0Hz，2H)；7.00(dd，J＝2.5和8.5Hz，1H)；7.04(寬m，1H)；7.53(寬d，J＝9.0Hz，2H)；7.66(d，J＝8.5Hz，1H)；7.68(d，J＝2.5Hz，1H)；9.09(寬m，1H)；12.4(寬s，1H)。
IRKBr3427；2978；2658；1693；1598；1542；1452；1367；1267；1160；1093；913；850和578cm-1實施例444-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(2-甲氧基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯的製備 將42.1mg的甲氧基乙酸，177.5mg的HBTU和163μl的DIEA加入到4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體34)(70mg，0.156mmol)在4ml二甲基甲醯胺中的溶液中。將所得溶液在室溫下攪拌20小時。在添加50ml水之後，該反應介質用3×25ml的乙酸乙酯萃取。萃取物用硫酸鎂乾燥，過濾，在減壓下蒸發，獲得98mg的粗油。該油通過LC/MS來提純，獲得47.8mg的4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(2-甲氧基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯。
IR3390；2993；2666；1674；1599；1541；1452；1365；1269；1202；1175；1161；1125；1094；914；852；830；757；720和570cm-1。
1H NMR譜(300MHz)-δ，ppm-DMSO-d61.29(d，J＝6.5Hz，12H)；3.23(mf，2H)；3.40(s，3H)；3.52(未分辨的複合峰，2H)；3.72(寬的未分辨的複合峰，2H)；4.22(s，2H)；6.75(寬d，J＝9.0Hz，2H)；6.90(寬t，J＝6.0Hz，1H)；7.05(dd，J＝9.0和2.5Hz，1H)；7.55(寬d，J＝9.0Hz，2H)；7.70(d，J＝9.0Hz，1H)；7.72(d，J＝2.5Hz，1H)；8.48(未分辨的複合峰，1H)；12.35(s，1H)。
實施例44a4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(2-甲氧基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽的製備 根據實施例44的方法合成實施例44a，用750mg(1.672mmol)的4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體34)起始，獲得粗4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(2-甲氧基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯。將該產品溶於1ml甲醇和3ml二烷中。將4ml的二烷/4N HCl加入到該溶液中。將該反應介質在室溫下攪拌過夜，然後蒸發至乾燥。所得殘留物通過快速層析法上第一根20g矽石柱提純，梯度為0-10％甲醇/二氯甲烷。因為所獲得的產品具有90％的純度，所以第二次提純用50g矽石層析柱進行，梯度為0-10％甲醇/二氯甲烷，時間1小時30分鐘，流速為20ml/min。在濃縮至乾燥後，獲得了含產品的級分，205mg的4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(2-甲氧基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽，收率22％。
MassES m/z＝521MH+基礎峰NMR1H NMR譜，300MHz，Bruker Avance DPX-300譜儀，化學位移(δ，ppm)-在溶劑二甲亞碸-d6(DMSO-d6)中，以2.50ppm為參考0.80-1.40(m，12H)；2.90-3.70(部分掩蔽的，6H)；3.38(s，3H)；4.20(s，2H)；6.68(寬d，J＝8.5Hz，2H)；7.00(dd，J＝2.5和8.5Hz，1H)；7.49(寬d，J＝8.5Hz，2H)；7.68(d，J＝8.5Hz，1H)；7.70(d，J＝2.5Hz，1H)；12.35(寬s，1H)。
IRKBr388；2965；2653；1704；1598；1539；1451；1363；1160；1093；914；852；754和567cm-1。
實施例454-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(環戊烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯 將42.1mg的甲氧基乙酸，177.5mg的HBTU和163μl的DIEA加入到4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體34)(70mg，0.156mmol)在4ml二甲基甲醯胺中的溶液中。將所得溶液在室溫下攪拌20小時。在添加50ml水之後，該反應介質用3×25ml的乙酸乙酯萃取。萃取物用硫酸鎂乾燥，過濾，在減壓下蒸發，獲得135mg的粗油。該油通過LC/MS來提純，獲得55.2mg的4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(環戊烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯。
IR3423；2968；2672；1673；1599；1541；1451；1365；1261；1202；1175；1161；1137；1094；916；852；829；752；720和568cm-11H NMR譜(300MHz)-δ，ppm-DMSO-d6+1滴AcOD1.27(d，J＝6.5Hz，12H)；1.52-1.80(未分辨的複合峰，7H)；1.90(未分辨的複合峰，1H)；2.97(mt，J＝7.5Hz，1H)；3.20(t，J＝6.5Hz，2H)；3.50(t，J＝6.5Hz，2H)；3.69(mt，J＝6.5Hz，2H)；6.71(寬d，J＝9.0Hz，2H)；7.04(dd，J＝9.0和2.5Hz，1H)；7.53(寬d，J＝9.0Hz，2H)；7.58(d，J＝2.5Hz，1H)；7.64(d，J＝9.0Hz，1H)。
中間體464-氟苯磺酸2-(6-叔丁氧羰基氨基己醯胺基)苯並噻唑-6-基酯的製備 在安裝了磁力攪拌棒的20ml圓底燒瓶內，將4-氟苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體16，brevetbenzothiazole-V2)(0.15g，0.46mmol)，BOC-6-氨基己酸(0.128g，0.555mmol)，HATU(0.211g，0.555mmol)和N，N-二異丙基乙基胺(95μl，0.555mmol)在2ml DMF中的溶液在大約60℃(ext.)下加熱5小時。
反應介質用乙酸乙酯萃取，用N鹽酸溶液洗滌，然後用水洗滌。有機相用硫酸鈉乾燥，過濾，然後蒸發至乾燥.殘留物使用Quad 12/25上Biotage層析柱(40g矽石)層析提純，用97/3二氯甲烷/異丙醇混合物洗脫。在蒸發掉溶劑之後，以80％的收率回收0.199g的4-氟苯磺酸2-(6-叔丁氧羰基氨基己醯胺基)苯並噻唑-6-基酯。
中間體474-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(6-叔丁氧羰基氨基己醯胺基)苯並噻唑-6-基酯的製備 將0.194g的4-氟苯磺酸2-(6-叔丁氧羰基氨基己醯胺基)苯並噻唑-6-基酯(0.194g，0.36mmol)和N，N-二異丙基亞乙基二胺(0.33ml，1.8mmol)在4ml NMP中的溶液用微波在150℃下加熱150分鐘。粗反應產物用EtOAc萃取，用水洗滌。有機相用硫酸鈉乾燥，過濾，然後蒸發，獲得1.8g(黃色液體)。該物質上矽石60(40-63μm)層析，用93/7CH2Cl2/MeOH混合物洗脫。在蒸發掉溶劑之後，獲得了樹膠狀物(0.215g)，用水研磨。除去水，然後將該樹膠狀物溶解在甲苯中，蒸發至乾燥，獲得0.13g的4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(6-叔丁氧羰基氨基己醯胺基)苯並噻唑-6-基酯，即，收率54％。
實施例494-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(6-氨基己醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽的製備 在安裝了磁力攪拌棒的10ml圓底燒瓶內，將0.12g的4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(6-叔丁氧羰基氨基己醯胺基)苯並噻唑-6-基酯投入到2ml EtOAc中，隨後滴加溶於EtOAc中的0.5ml鹽酸，在室溫下攪拌1小時。
將該反應介質溶於水中，然後用28％氨水調至pH8。該混合物用EtOAc萃取，用水洗滌，有機相然後用硫酸鈉乾燥。在過濾之後，將濾液蒸發至乾燥，獲得0.1g的白色粉末，再溶於5ml甲醇中，然後用溶於EtOAc的鹽酸調至pH2。將懸浮液蒸發至乾燥，將殘留物溶於5ml水中，然後凍幹，獲得91mg的4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(6-氨基己醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽，即，收率80％。
中間體504-氟苯磺酸2-(7-叔丁氧羰基氨基庚醯胺基)苯並噻唑-6-基酯的製備
按照中間體46的方法，通過4-氟苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體16，brevetbenzothiazole-V2)與BOC-7-氨基-庚酸的作用製備4-氟苯磺酸2-(7-叔丁氧羰基氨基庚醯胺基)苯並噻唑-6-基酯，獲得0.164g產物。
中間體514-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(7-叔丁氧羰基庚醯胺基)苯並噻唑-6-基酯的製備 根據中間體47的方法，通過4-氟苯磺酸2-(7-叔丁氧羰基氨基庚醯胺基)苯並噻唑-6-基酯與N，N-二異丙基亞乙基二胺的作用製備4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(7-叔丁氧羰基庚醯胺基)苯並噻唑-6-基酯。該產品上Biotage柱(8g矽石)層析來提純，用95/5CH2Cl2/MeOH混合物洗脫，獲得86mg的產物，即，收率44％。
實施例524-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(7-氨基庚醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽的製備
根據實施例49的方法，通過在溶於EtOAc的鹽酸的存在下水解4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(7-叔丁氧羰基庚醯胺基)苯並噻唑-6-基酯來製備4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(7-氨基庚醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽，獲得47mg的鹽酸鹽，即，收率77％。
實施例534-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(-環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽的製備 將4-氟苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯(實施例53，brevetbenzothiazole-V2)(145mg，0.37mmol)和N-異丙基亞乙基二胺(233μl，1.85mmol)在4.5ml NMP中的溶液用微波在150℃下加熱5分鐘。粗反應產物用EtOAc洗脫，用水洗三次，用EtOAc萃取兩次。將有機相合併，用硫酸鈉乾燥，過濾，然後蒸發至乾燥。165mg的粗產物上矽石柱層析提純8g AIT柱，洗脫劑90/10/1CH2Cl2/MeOH/NH4OH。將所得固體(96mg)溶於EtOAc中，然後用溶於EtOAc的鹽酸調至pH2。將該懸浮液蒸發至乾燥，溶解在5ml水中，然後凍幹，獲得76mg的4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(-環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽。
中間體544-氟苯磺酸2-異丁醯胺基苯並噻唑-6-基酯的製備 根據中間體46的方法，通過4-氟苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體16，brevetbenzothiazole-V2)與異丁酸的作用製備4-氟苯磺酸2-異丁醯胺基苯並噻唑-6-基酯。粗反應產物從乙醚中結晶出來，在通過抽吸過濾後，分離出0.17g的無色固體，即，收率86％。
實施例554-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-異丁醯胺基苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽的製備 根據實施例53的方法，通過4-氟苯磺酸2-異丁醯胺基-苯並噻唑-6-基酯與N，N-二異丙基亞乙基二胺的作用製備2，4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-異丁醯胺基苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽。粗反應產物用EtOAc萃取，再用水洗滌。有機相用硫酸鈉乾燥，過濾，然後蒸發獲得0.327g的粗產物，再上Biotage矽石(40g)柱層析，用90/10CH2Cl2/MeOH混合物洗脫。所獲得的油從庚烷中結晶出來。將產品再溶於5mlEtOAc中，然後滴加鹽酸在EtOAc中的溶液至pH2。通過抽吸過濾出鹽酸鹽，用EtOAc洗滌，然後在真空和40℃下乾燥。分離出0.112g的4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-異丁醯胺基苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽，即，收率42％。
中間體564-氟苯磺酸2-丙醯胺基苯並噻唑-6-基酯的製備 根據中間體46的方法，通過4-氟苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體16，brevetbenzothiazole-V2)與丙酸的作用製備4-氟苯磺酸2-丙醯胺基苯並噻唑-6-基酯。獲得了0.397g產物，收率93％。
實施例574-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-丙醯胺基苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽的製備 根據實施例53的方法，通過將4-氟苯磺酸2-丙醯胺基苯並噻唑-6-基酯與N，N-二異丙基亞乙基二胺用微波在150℃下加熱10分鐘來製備4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-丙醯胺基苯並噻唑-6-基酯。在提純後，獲得了0.09g的鹽酸鹽形式的產物，收率45％。
實施例584-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-丙醯胺基苯並噻唑-6-基酯的製備
根據實施例53的方法，通過用微波將4-氟苯磺酸2-丙醯胺基苯並噻唑-6-基酯與1-氨基-2-甲基丙-2-醇在150℃下加熱20分鐘來製備4-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-丙醯胺基苯並噻唑-6-基酯。在提純之後，獲得了0.096g的鹽酸鹽形式的產物，收率50％。
中間體594-氟苯磺酸2-(環丁烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯 根據中間體46的方法，通過4-氟苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯與環丁烷羧酸的作用製備4-氟苯磺酸2-(環丁烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯。
實施例604-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(環丁烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽的製備 根據實施例53的方法，通過用微波將4-氟苯磺酸2-丙醯胺基苯並噻唑-6-基酯與N，N-二異丙基亞乙基二胺在150℃下加熱10分鐘來製備4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(環丁烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽。在提純之後獲得0.054g的鹽酸鹽形式的產物，收率18％。
中間體614-氟苯磺酸2-(3-吡啶-3-基-丙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯的製備
根據中間體46的方法，通過4-氟苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯與3-(3-吡啶基)丙酸的作用製備4-氟苯磺酸2-(3-吡啶-3-基-丙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯。產品以定量收率獲得。
實施例624-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(3-吡啶-3-基丙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽的製備 根據實施例7的方法，通過用微波將4-氟苯磺酸2-(3-吡啶-3-基-丙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯與N，N-二異丙基亞乙基二胺在150℃下加熱10分鐘來製備4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(3-吡啶-3-基丙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯。在提純後獲得了0.045g的鹽酸鹽形式的產物，收率23％。
實施例634-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-(3-吡啶-3-基丙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽的製備
根據實施例53的方法，通過用微波將4-氟苯磺酸2-(3-吡啶-3-基-丙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯與1-氨基-2-甲基丙-2-醇在150℃下加熱20分鐘來製備4-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-(3-吡啶-3-基丙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯。在提純後獲得了0.104g的鹽酸鹽形式的產物，收率52％。
中間體644-氟苯磺酸2-乙醯胺基苯並噻唑-6-基酯的製備 在裝有磁力攪拌棒的試管內，將4-氟苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體16)(101.2mg，0.312mmol)，乙酸(56.2mg，0.936mmol)，HBTU(355mg，0.936mmol)和N，N-二異丙基胺(326μl，1.872mmol)在5ml二甲基甲醯胺中的溶液在室溫下攪拌20小時。添加100ml的水，用乙酸乙酯萃取該反應介質。用硫酸鎂乾燥有機相，再蒸發。所得殘留物溶解在乙酸乙酯中，用含有5g的孔隙度15-35μ的矽石的Varian快速層析柱提純，用1％甲醇/二氯甲烷混合物洗脫。在蒸發掉溶劑之後，獲得了66mg的4-氟苯磺酸2-乙醯胺基苯並噻唑-6-基酯(黃色油)，收率58％。LC/MS(方法A1)[M+H]+367.14，保留時間3.50min。
實施例654-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-乙醯胺基苯並噻唑-6-基酯的製備
在裝有磁力攪拌棒的試管內，將4-氟苯磺酸2-乙醯胺基苯並噻唑-6-基酯(中間體64)(66mg，0.180mmol)，N-異丙基亞乙基二胺(55.2mg，0.540mmol)和碳酸銫(58.6mg，0.180mmol)在2ml二甲亞碸中的溶液在80℃下攪拌過夜。添加100ml的水，用乙酸乙酯萃取該反應介質。然後用水洗滌有機相，用硫酸鎂乾燥，再蒸發。通過LC/MS提純殘留物，獲得43mg的4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-乙醯胺基苯並噻唑-6-基酯(白色粉末)，收率53％。
LC/MS(方法A1)[M+H]+449.35，保留時間3.28min。
1H NMR譜，300MHz，Bruker Avance DPX-300譜儀，化學位移(δ，ppm)-在溶劑二甲亞碸-d6(DMSO-d6)中，以2.50ppm為參考與TFA成鹽的產品的有力假設1.21(d，J＝7.0Hz，6H)；2.20(s，3H)；3.07(m，2H)；3.20-3.35(m，掩蔽的，1H)；3.41(m，2H)；6.72(寬d，J＝8.5Hz，2H)；6.93(寬t，J＝6.0Hz，1H)；7.01(dd，J＝2.5和8.5Hz，1H)；7.53(寬d，J＝8.5Hz，2H)；7.68(d，J＝8.5Hz，1H)；7.69(d，J＝2.5Hz，1H)；8.30(寬m，2H)；12.4(寬s，1H)。
中間體664-氟苯磺酸2-(2-甲氧基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯的製備
在裝有磁力攪拌棒的試管內，將4-氟苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體16)(101.2mg，0.312mmol)，甲氧基乙酸(84.3mg，0.936mmol)，HBTU(355mg，0.936mmol)和N，N-二異丙基胺(326μl，1.872mmol)在5ml二甲基甲醯胺中的溶液在室溫下攪拌20小時。添加100ml的水，用乙酸乙酯萃取該反應介質。用硫酸鎂乾燥有機相，再蒸發。將所得殘留物溶解在乙酸乙酯中，用含有5g的孔隙度15-35μ的矽石的Varian快速層析柱提純，用1％甲醇/二氯甲烷混合物洗脫。在蒸發掉溶劑之後，獲得了89mg的4-氟苯磺酸2-J-3-烯醯胺基苯並噻唑-6-基酯(黃色油)，收率72％。LC/MS(方法A1)[M+H]+397.11，保留時間3.59min。
實施例674-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(2-甲氧基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯的製備 在裝有磁力攪拌棒的試管內，將4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(2-甲氧基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯(中間體66)(89mg，0.224mmol)，N-異丙基亞乙基二胺(68.7mg，0.672mmol)和碳酸銫(73mg，0.224mm0l)在2ml二甲亞碸中的溶液在80℃下攪拌過夜。添加100ml的水，用乙酸乙酯萃取該反應介質。然後用水洗滌有機相，用硫酸鎂乾燥，再蒸發。通過LC/MS提純殘留物，獲得46.6mg的4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(2-甲氧基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯(白色粉末)，收率43％。
LC/MS(方法A1)[M+H]+479.35，保留時間3.33min。
1H NMR譜，300MHz，Bruker Avance DPX-300譜儀，化學位移(δ，ppm)-在溶劑二甲亞碸-d6(DMSO-d6)中，以2.50ppm為參考與TFA成鹽的產品的有力假設1.21(d，J＝7.0Hz，6H)；3.07(寬t，J＝6.5Hz，2H)；3.15-3.35(m掩蔽的，1H)；3.38(s，3H)；3.41(m，2H)；4.20(s，2H)；6.72(寬d，J＝8.5Hz，2H)；6.93(寬t，J＝6.0Hz，1H)；7.03(dd，J＝2.5和8.5Hz，1H)；7.53(寬d，J＝8.5Hz，2H)；7.69(d，J＝8.5Hz，1H)；7.71(d，J＝2.5Hz，1H)；8.10-8.45(m，寬，2H)；12.0-12.5(非常寬的m，1H)。
中間體684-氟苯磺酸2-(環戊烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯的製備 在裝有磁力攪拌棒的試管內，將4-氟苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體16)(101.2mg，0.312mmol)，環戊烷羧酸(decyclopentanecarboxylique acid)(53.4mg，0.936mmol)，HBTU(355mg，0.936mmol)和N，N-二異丙基胺(326μl，1.872mmol)在5ml二甲基甲醯胺中的溶液在室溫下攪拌20小時。添加100ml的水，用乙酸乙酯萃取該反應介質。用硫酸鎂乾燥有機相，再蒸發。將所得殘留物溶解在乙酸乙酯中，用含有5g的孔隙度15-35μ的矽石的Varian快速層析柱提純，用1％的甲醇/二氯甲烷混合物洗脫。在蒸發掉溶劑之後，獲得了90mg的4-氟苯磺酸2-(環戊烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯(黃色油)，收率68％。LC/MS(方法A1)[M+H]+421.13，保留時間4.05min。
實施例694-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(環戊烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯的製備 在裝有磁力攪拌棒的試管內，將4-氟苯磺酸2-(2-甲氧基乙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯(中間體68)(90mg，0.214mmol)，N-異丙基亞乙基二胺(65.6mg，0.642mmol)和碳酸銫(69.7mg，0.214mmol)在2ml二甲亞碸中的溶液在80℃下攪拌過夜。添加100ml的水，用乙酸乙酯萃取該反應介質。然後用水洗滌有機相，用硫酸鎂乾燥，再蒸發。通過LC/MS提純殘留物，獲得26.2mg的4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-(2-環戊烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯(白色粉末)，收率24％。
LC/MS(方法A1)[M+H]+503.39，保留時間3.68min。
1H NMR譜，300MHz，Bruker Avance DPX-300譜儀，化學位移(δ，ppm)-在溶劑二甲亞碸-d6(DMSO-d6)中，以2.50ppm為參考與TFA成鹽的產品的有力假設1.21(d，J＝7.0Hz，6H)；1.50-1.80(m，6H)；1.82-1.98(m，2H)；2.98(m，1H)；3.04(m，2H)；3.15-3.55(m，3H)；6.71(寬d，J＝8.5Hz，2H)；6.92(寬t，J＝6.0Hz，1H)；7.02(dd，J＝2.5和8.5Hz，1H)；7.53(寬d，J＝8.5Hz，2H)；7.65-7.70(m，2H)；8.05-8.45(非常寬m，2H)；12.4(寬m，1H)中間體704-氟苯磺酸2-丙醯胺基苯並噻唑-6-基酯的製備
將4-氟苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體16)(500mg，1.14mmol)，丙酸(253mg，3.42mmol)，HBTU(1.23g，3.42mmol)和N，N-二異丙基胺(737mg，5.7mmol)在6.5ml二甲基甲醯胺中的溶液在室溫下攪拌過夜。將反應介質蒸發至乾燥。該乾燥殘留物用50ml乙酸乙酯萃取兩次，再用水洗滌。然後用飽和氯化鈉溶液洗滌有機相。用硫酸鎂乾燥有機相，然後蒸發。將所獲得的油溶解在35ml二甲亞碸中，然後通過製備HPLC上Nucléodur C18，100，10μm反相柱提純7次，52分鐘，梯度為5-95％的補加0.07％三氟乙酸的乙腈/補加0.07％三氟乙酸的水。流速是70ml/min。將含有純淨產品的級分濃縮，獲得300mg的4-氟苯磺酸2-丙醯胺基苯並噻唑-6-基酯，收率69％。
NMR1H NMR譜，300MHz，Bruker Avance DPX-300譜儀，化學位移(δ，ppm)-在溶劑二甲亞碸-d6(DMSO-d6)中，以2.50ppm為參考1.11(t，J＝7.5Hz，3H)；2.50(部分掩蔽的m，2H)；7.01(dd，J＝2.5和8.5Hz，1H)；7.51(寬t，J＝9.0Hz，2H)；7.68(d，J＝8.5Hz，1H)；7.79(d，J＝2.5Hz，1H)；7.94(dd，寬，J＝5.5和9.0Hz，2H)；12.4(寬s，1H)。
實施例714-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-丙醯胺基苯並噻唑-6-基酯；與三氟乙酸的化合物的製備 將4-氟苯磺酸2-丙醯胺基苯並噻唑-6-基酯(中間體70)(300mg，0.789mmol)，N-異丙基亞乙基二胺(242mg，2.37mmol)和碳酸銫(256mg，0.789mmol)在4ml二甲亞碸中的溶液在攪拌下在80℃保持7小時30分鐘，然後在室溫下保持2天。將反應介質過濾，用8ml的二甲亞碸衝洗。預期產物通過製備HPLC在與中間體70相同的條件下提純3次。獲得205mg的4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-丙醯胺基苯並噻唑-6-基酯；與三氟乙酸的化合物，收率56％。
NMR1H NMR譜，300MHz，Bruker Avance DPX-300譜儀，化學位移(δ，ppm)-在溶劑二甲亞碸-d6(DMSO-d6)中，以2.50ppm為參考1.11(t，J＝7.5Hz，3H)1.22(d.J＝6.5Hz，6H)；2.45-2.54(部分掩蔽的m，2H)；3.07(m，2H)；3.22-3.47(部分掩蔽的m，3H)；6.72(寬d，J＝9.0Hz，2H)；6.93(寬t，J＝6.0Hz，1H)；7.02(dd，J＝2.5和8.5Hz，1H)；7.53(寬d，J＝9.0Hz，2H)；7.67(d，J＝8.5Hz，1H)；7.69(d，J＝2.5Hz，1H)；8.22-8.38(寬m.2H)；12.35(寬s，1H)。
中間體724-氟苯磺酸2-丁醯胺基苯並噻唑-6-基酯的製備 根據中間體70的方法，使用丁酸製備中間體72。獲得了80mg的4-氟苯磺酸2-丁醯胺基苯並噻唑-6-基酯，收率18％。
NMR1H NMR譜，300MHz，Bruker Avance DPX-300譜儀，化學位移(δ，ppm)-在溶劑二甲亞碸-d6(DMSO-d6)中，以2.50ppm為參考0.92(t，J＝7.5Hz，3H)；1.64(m，2H)；2.48(部分掩蔽的m，2H)；7.01(dd，J＝2.5和8.5Hz，1H)；7.51(寬t，J＝9.0Hz，2H)；7.68(d，J＝8.5Hz，1H)；7.78(d，J＝2.5Hz，1H)；7.93(寬dd，J＝5.5和9.0Hz，2H)；12.4(寬s，1H)。
實施例734-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-丁醯胺基苯並噻唑-6-基酯；與三氟乙酸的化合物的製備
根據實施例71的方法，使用中間體72與N-異丙基亞乙基二胺獲得實施例73。獲得了37mg的4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-丁醯胺基苯並噻唑-6-基酯；與三氟乙酸的化合物，收率36％。
NMR1H NMR譜，300MHz，Bruker Avance DPX-300譜儀，化學位移(δ，ppm)-在溶劑二甲亞碸-d6(DMSO-d6)中，以2.50ppm為參考0.91(t，J＝7.5Hz，3H)；1.22(d，J＝6.5Hz，6H)；1.63(m，2H)；2.47(部分掩蔽的t，J＝7.5Hz，2H)；3.07(m，2H)；3.20-3.37(掩蔽的m，1H)；3.41(m，2H)；6.72(寬d，J＝9.0Hz，2H)；6.94(寬t，J＝6.0Hz，1H)；7.02(dd，J＝2.5和8,5Hz，1H)；7.53(寬d，J＝9.0Hz，2H)；7.66(d，J＝8.5Hz，1H)；7.69(d，J＝2.5Hz，1H)；8.32(寬m，2H)；12.4(寬s，1H)。
中間體744-氟苯磺酸2-異丁醯胺基苯並噻唑-6-基酯的製備 根據中間體70的方法，使用異丁酸合成中間體74。獲得了75mg的4-氟苯磺酸2-異丁醯胺基苯並噻唑-6-基酯，收率17％。
NMR1H NMR譜，300MHz，Bruker Avance DPX-300譜儀，化學位移(δ，ppm)-在溶劑二甲亞碸-d6(DMSO-d6)中，以2.50ppm為參考1.14(d，J＝7.0Hz，6H)；2.79(m，1H)；7.02(dd，J＝2.5和8.5Hz，1H)；7.51(寬t，J＝9.0Hz，2H)；7.68(d.J＝8.5Hz，1H)；7.79(d，J＝2.5Hz，1H)；7.93(寬dd，J＝5.5和9.0Hz，2H)；12.4(寬s，1H)。
實施例754-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-異丁醯胺基苯並噻唑-6-基酯；與三氟乙酸的化合物的製備 根據實施例71的方法，使用中間體74與N-異丙基亞乙基二胺獲得實施例75。獲得49mg的4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-異丁醯胺基苯並噻唑-6-基酯；與三氟乙酸的化合物，收率44％。
NMR1H NMR譜，300MHz，Bruker Avance DPX-300譜儀，化學位移(δ，ppm)-在溶劑二甲亞碸-d6(DMSO-d6)中，以2.50ppm為參考1.14(d，J＝6.5Hz，6H)；1.22(d，J＝6.5Hz，6H)；2.79(m，1H)；3.07(m，2H)；3.25-3.37(掩蔽的m，1H)；3.41(m，2H)；6.72(寬d，J＝9.0Hz，2H)；6.93(寬t，J＝6.0Hz，1H)；7.03(dd，J＝2.5和8.5Hz，1H)；7.53(寬d，J＝9.0Hz12H)；7.64-7.70(m，2H)；8.30(寬m，2H)；12.4(寬s，1H)。
中間體764-氟苯磺酸2-(環丁烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯的製備 根據中間體70的方法，中間體76使用環丁烷羧酸合成。獲得185mg的4-氟苯磺酸2-(環丁烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯，收率40％。
實施例774-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸(2-環丁烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯；與三氟乙酸的化合物的製備 根據實施例71的方法，使用中間體76與N-異丙基亞乙基二胺獲得實施例77。獲得了41mg的4-(2-異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸(2-環丁烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯；與三氟乙酸的化合物，收率37％。
NMR1H NMR譜，300MHz，Bruker Avance DPX-300譜儀，化學位移(δ，ppm)-在溶劑二甲亞碸-d6(DMSO-d6)中，以2.50ppm為參考1.22(d，J＝6.5Hz，6H)；1.84(m，1H)；1.99(m，1H)；2.10-2.30(m，4H)；3.07(m，2H)；3.20-3.47(掩蔽的m，4H)；6.72(寬d，J＝9.0Hz，2H)；6.97(寬t，J＝6.0Hz，1H)；7.01(dd，J＝2.5和8.5Hz，1H)；7.53(寬d，J＝9.0Hz，2H)；7.67(d，J＝8.5Hz，1H)；7.69(d，J＝2.5Hz，1H)；8.27-8.44(寬m，2H)；12.3(寬s，1H)。
中間體784-氟苯磺酸2-丁醯胺基苯並噻唑-6-基酯的製備 在安裝了磁力攪拌棒的20ml圓底燒瓶內，將4-氟苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體16)(359mg，1.107mmol)，丁酸(146mg，1.66mmol)，HATU(631mg，1.66mmol)和N，N-二異丙基乙基胺(0.286ml，1.66mmol)在5.5ml二甲基甲醯胺中的溶液在大約60℃下攪拌8小時，然後在室溫下留置過夜。反應介質用乙酸乙酯萃取，先後用水和0.1N鹽酸溶液洗滌。有機相用硫酸鈉乾燥，過濾，然後蒸發至乾燥。所得殘留物(567mg的淺黃色固體)通過上40g Biotage矽石柱層析來提純，用9/1甲苯/異丙醇混合物洗脫。在蒸發掉溶劑之後，獲得239mg的4-氟苯磺酸2-丁醯胺基苯並噻唑-6-基酯(白色固體)，收率55％。
MassLC/MSm/z 395[M+H]+，m/z 393[M-H]-1H NMR譜，400MHz，化學位移(δ，ppm)-在溶劑二甲亞碸-d6(DMSO-d6)中，以2.50ppm為參考0.9ns 1(t，J＝7.5Hz，3H)；1.64(m，2H)；2.47(部分掩蔽的t，J＝7.5Hz，2H)；7.01(dd，J＝2.5和8.5Hz，1H)；7.51(寬t，J＝9.0Hz，2H)；7.68(d，J＝8.5Hz，1H)；7.79(d，J＝2.5Hz，1H)；7.93(dd，J＝6.0和9.0Hz，2H)；12.4(寬s，1H)。
實施例794-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-丁醯胺基苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽的製備 在裝有磁力攪拌棒的5ml微波管形瓶內，將4-氟苯磺酸2-丁醯胺基苯並噻唑-6-基酯(中間體78)(100mg，0.2mmol)和N，N-二異丙基亞乙基二胺(185μl，1.01mmol)在3ml N-甲基吡咯烷酮中的溶液用微波在150℃下加熱10分鐘。該反應介質用乙酸乙酯萃取，用水洗滌。有機相用硫酸鎂乾燥，過濾，然後蒸發至乾燥。所得殘留物通過用Merck矽石(40-63μm)層析來提純。在蒸發掉溶劑之後，獲得41mg的無色油(當乾燥時結晶)。將產品溶解在最少量的乙酸乙酯中，然後添加作為在二烷中的溶液的4N鹽酸。讓該介質沉澱，進行濃縮，溶解在水中，然後用Milex 45μm過濾器過濾。讓該溶液沉澱，真空過濾，然後在真空和40℃下乾燥，獲得了31mg(28％收率)的4-(2-二異丙基氨基乙基氨基)苯磺酸2-丁醯胺基苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽。
Mass·IEm/z 114(C3H7)2NCH2+(基礎峰)，不存在分子離子。
·ICm/z 519[M+H]+(基礎峰)。
·LC/MSm/z519[M+H]+，m/z517[M-H]-1H NMR譜，300MHz，化學位移(δ，ppm)-在溶劑二甲亞碸-d6(DMSO-d6)中，以2.50ppm為參考0.91(t，J＝7.5Hz，3H)；1.20-1.32(寬m，12H)；1.63(m，2H)；2.42-2.55(部分掩蔽的t，J＝7.5Hz，2H)；3.19(m，2H)；3.51(m，2H)；3.69(寬m，2H)；6.72(寬d，J＝9.0Hz，2H)；6.97(寬t，J＝6.0Hz，1H)；7.02(dd，J＝2.5和8.5Hz，1H)；7.53(寬d，J＝9.0Hz1 2H)；7.63-7.69(m，2H)；8.78(寬m，1H)；12.4(寬s，1H)。
實施例804-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-丁醯胺基苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽 在裝有磁力攪拌棒的5ml微波管形瓶內，將4-氟苯磺酸2-丁醯胺基苯並噻唑-6-基酯(中間體78)(135mg，0.34mmol)和1-氨基-2-甲基丙-2-醇(153mg，1.718mmol)在3ml N-甲基吡咯烷酮中的溶液用微波在150℃下加熱20分鐘。該反應介質用乙酸乙酯(3×20ml)萃取，用水(4×25ml)洗滌。有機相用硫酸鎂乾燥，過濾，然後蒸發至乾燥。所得殘留物通過上8g 13-35μmAIT柱進行矽石層析來提純，用9/1乙酸乙酯/環己烷混合物洗脫。在蒸發掉溶劑之後，獲得55mg的無色固體。將產品溶解在最少量的二烷中，然後添加溶於二烷的4N鹽酸。通過抽吸過濾出所得沉澱，用二烷洗滌，然後在真空和40℃下乾燥，獲得了42mg的4-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-丁醯胺基苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽，即，25％收率。
Mass·IEm/z 463[M+]，m/z 228[M+]-SO2PhNHCH2C3H7O·ICm/z 464[M+H]+·LC/MSm/z 464[M+H]+，m/z 462[M-H]-1H NMR譜，400MHz，化學位移(δ，ppm)-在溶劑二甲亞碸-d6(DMSO-d6)中，以2.50ppm為參考0.93(t，J＝7.5Hz，3H)；1.15(s，6H)；1.66(m，2H)；2.46-2.59(部分掩蔽的m，2H)；3.04(s，2H)；6.76(寬d，J＝9.0Hz，2H)；6.98(dd，J＝2.5和8.5Hz，1H)；7.42(寬d，J＝9.0Hz，2H)；7.66(d，J＝8.5Hz，1H)；7.70(d，J＝2.5Hz，1H)；12.4(寬s，1H)。
中間體814-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-叔丁氧羰基氨基苯並噻唑-6-基酯的製備 將4-氟苯磺酸2-叔丁氧羰基氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體(15)(300mg，0.707mmol)，碳酸銫(230mg，0.707mmol)和1-氨基-2-甲基丙-2-醇(126mg，1.414mmol)在5ml二甲亞碸中的溶液在80℃下攪拌72小時。將水加入到反應介質中，該混合物用乙酸乙酯萃取3次。有機相用飽和氯化鈉溶液洗滌，然後用硫酸鎂乾燥，最終蒸發至乾燥狀態，獲得290mg的4-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-叔丁氧羰基氨基苯並噻唑-6-基酯，收率83％。
中間體824-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯；與三氟乙酸的化合物的製備 將4-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-叔丁氧羰基氨基苯並噻唑-6-基酯(中間體81)(170mg，0.344mmol)和三氟乙酸(14.9g，130.7mmol)在10ml的二氯甲烷和100μl水中的溶液在室溫下攪拌2小時。將反應介質蒸發至乾燥，溶解在乙酸乙酯中，用水洗滌，然後用飽和氯化鈉溶液洗滌。有機相用硫酸鎂乾燥，濃縮至乾燥狀態，獲得130mg的4-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯；與三氟乙酸的化合物，收率96％。
LC/MS[M+H]+＝394.06，保留時間＝2.90min。
中間體834-(2-{6-[4-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)-苯磺醯氧基]苯並噻唑-2-基氨基甲醯基}乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯 將1-Boc-哌啶-4-基丙酸(176mg，0.686mmol)，HBTU(260mg，0.686mmol)和N，N-二異丙基乙基胺(185mg，1.435mmol)在10ml二甲基甲醯胺中的溶液攪拌10分鐘。添加4-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-氨基苯並噻唑-6-基酯；與三氟乙酸的化合物(中間體82)(130mg，0.33mmol)，將該反應介質在室溫下攪拌48小時。將水加入到反應介質中，然後用乙酸乙酯將所得混合物萃取3次。有機相用硫酸鎂乾燥，然後濃縮至乾燥。乾燥殘留物通過上300×20mmDynamax C18柱反相層析來提純，梯度為5-40％乙腈/補加0.07％三氟乙酸的水，5分鐘；然後40-80％乙腈/補加0.07％三氟乙酸的水，30分鐘。將含有產品的級分蒸發至乾燥，獲得111mg的4-(2-{6-[4-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)-苯磺醯氧基]苯並噻唑-2-基氨基甲醯基}乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯，收率51％。
LC/MS[M+H]+＝633.00，保留時間＝3.94min。
實施例844-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-(3-哌啶-4-基丙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽的製備 將4-(2-(6-[4-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)-苯磺醯氧基]苯並噻唑-2-基氨基甲醯基}乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(110mg，0.173mmol)在8ml二烷和8ml二烷/4N HCl中的溶液在室溫下攪拌過夜。過濾出所形成的沉澱，溶於甲醇中，然後將該溶液蒸發至乾燥。殘留物用乙酸乙酯洗滌，獲得103mg的4-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-(3-哌啶-4-基丙醯胺基)苯並噻唑-6-基酯鹽酸鹽，收率95％。
LC/MS(方法A1)[M+H]+＝533.04，保留時間＝2.66min。
NMR1H NMR譜，300MHz，Bruker Avance DPX-300譜儀，化學位移(δ，ppm)-在溶劑二甲亞碸-d6(DMSO-d6)中，以2.50ppm為參考以下是80％混合物的共振數據1.13(s，6H)；1.22-1.40(m，2H)；1.42-1.65(m，3H)；1.75-1.85(m，2H)；2.40-2.58(部分掩蔽的m，2H)；2.75-2.90(m，2H)；3.02(s，2H)；3.15-3.30(m，2H)；6.73(寬d，J＝9.0Hz，2H)；6.97(dd，J＝2.5和8.5Hz，1H)；7.41(寬d，J＝9.0Hz，2H)；7.65(d，J＝8.5Hz，1H)；7.70(d，J＝2.5Hz，1H)；8.32-8.53(寬m，1H)；8.65-8.80(寬m，1H)；12.4(寬s，1H)。
IRKBr3405；2971；1725；1597；1539；1470；1365；1161；1094；915；856；748和578cm-1實施例855-吡啶-2-基噻吩-2-磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯的製備 將環丙烷羧酸(6-羥基苯並噻唑-2-基)醯胺(中間體6)(60mg，0.256mmol)，吡啶(80μl，0.991mmol)，4-二甲基氨基吡啶(3mg，0.025mmol)和5-(2-吡啶基)噻吩-2-磺醯氯(99mg，0.384mmol)在2ml丙酮中的溶液在40℃下攪拌24小時。將反應介質濃縮至乾燥，溶解在2ml DMSO中，通過製備LC/MS(方法B)提純4次，獲得10mg的5-吡啶-2-基噻吩-2-磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯。
NMR1H NMR譜，300MHz，Bruker Avance DPX-300譜儀，化學位移(δ，ppm)-在溶劑二甲亞碸-d6(DMSO-d6)中，以2.50ppm為參考0.98-1.10(m，4H)；1.90(m，1H)；7.15(寬d，J＝8.5Hz，1H)；7.30-7.38(m，2H)；7.61(d，J＝4.0Hz，1H)；7.67(寬s，1H)；7.77(d，J＝4.0Hz，1H)；7.87(寬t，J＝8.0Hz，1H)；7.99(寬d，J＝8.0Hz，1H)；8.55(寬d，J＝5.0Hz，1H)；13.5(寬m，1H)。
MSIE m/z＝457 M+
m/z＝389 (M-C4H4O)+m/z＝325 (m/z＝389-SO2)+m/z＝69C4H5O+基礎峰。
實施例874-(1-氧基-2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基氨基)苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯的製備 將4-氟苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)-苯並噻唑-6-基酯(實施例7)(0.352mmol，138mg)，4-氨基-TEMPO(0.387mmol，66mg)和碳酸銫(0.352mmol，114mg)在3.5ml二甲亞碸中的溶液攪拌24小時。在24和48小時之後兩次添加4-氨基-TEMPO(2×66mg)。在48小時後，將反應物在室溫下放置48小時。然後用水稀釋該溶液，用乙酸乙酯萃取，用飽和氯化鈉溶液洗滌，再用硫酸鈉乾燥，然後蒸發至乾燥，獲得258mg的粗產物。該產品通過上5g矽石柱快速層析來提純。所用洗脫劑先後分別是二氯甲烷和具有1％的7M 0.01％含氨甲醇的二氯甲烷。獲得了28mg的4-(1-氧基-2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基氨基)苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯，收率為14％。
MSES m/z＝544MH+基礎峰IRKBr3388；3252；2925；1686；1598；1546；1451；1327；1266；1167；1094；907；852和747cm-1中間體884-[2-(雙-苄氧基磷醯氧基)-2-甲基丙基氨基]苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯的合成
將4-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯(實施例11)(0.855mmol，394mg)，1H-四唑(2.563mmol，179mg)和二苄基二異丙基亞磷醯胺(1.70mmol，590mg)在6.4ml二氯甲烷中的溶液在室溫下攪拌2小時。將該反應介質冷卻到7℃，緩慢添加3-氯過苯甲酸(1.025mmol，252mg)在1.2ml二氯甲烷中的溶液。將該反應介質攪拌過夜。
添加10ml的1M焦亞硫酸鈉(sodium metabisulfite)溶液。有機相然後用10ml 1M焦亞硫酸鈉溶液洗滌，用10ml的飽和碳酸氫鈉溶液洗滌兩次，然後用10ml飽和氯化鈉溶液洗滌。
有機相用硫酸鎂乾燥，過濾，再濃縮至乾燥，將所得乾燥殘留物溶解在二氯甲烷中，然後用含有50g的孔隙度為15-35μm的Interchim快速層析柱提純，用梯度20-50％乙酸乙酯/環己烷洗脫。從含有預期產品的級分中蒸發掉溶劑，獲得419mg的4-[2-(雙-苄氧基磷醯氧基)-2-甲基丙基氨基]苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯。收率68％。
LC/MS(方法A1)[M+H]+＝722.13，保留時間＝4.13min。
實施例894-(2-甲基-2-膦醯氧基丙基氨基)苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯的合成
將300mg的10％Pa/C加入到4-[2-(雙-苄氧基磷醯氧基)-2-甲基丙基氨基]苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯(中間體88)(0.441mmol，318mg)和甲酸銨(4.41mmol，278mg)在15ml乙醇的溶液中。
該反應介質在攪拌下回流過夜。LC/MS分析指示，留有單苄基產物。添加280mg(4.41mmol)的甲酸銨和100mg的10％Pa/C，將反應介質回流6小時。將反應介質過濾，然後濃縮。所獲得的油返回與278mg的甲酸銨(4.41mmol)和300mg的10％Pa/C在15ml乙醇中反應。該反應介質在攪拌下回流1小時20分鐘。將反應介質過濾，濃縮至乾燥。所得殘留物通過製備LC/MS(方法B)提純，獲得6.2mg的4-(2-甲基-2-膦醯氧基丙基氨基)苯磺酸2-(環丙烷羰基氨基)苯並噻唑-6-基酯，收率3％。
NMR1H NMR譜，300MHz，Bruker Avance DPX-300譜儀，化學位移(δ，ppm)-在溶劑二甲亞碸-d6(DMSO-d6)中，以2.50ppm為參考0.90-1.01(m，4H)；1.41(s，6H)；2.00(m，1H)；3.10-3.50(掩蔽的m，2H)；6.75(寬d，J＝9.0Hz，2H)；6.89(寬t，J＝6.0Hz，1H)；7.97(dd，J＝2.5和8.5Hz，1H)；7.43(寬d，J＝9.0Hz，2H)；7.66(d，J＝8.5Hz，1H)；7.70(d，J＝2.5Hz，1H)；12.7(寬s，1H)。
生化試驗的實驗程序1.CDK2/周期素E試驗用IMAC(固定化金屬離子親和層析凝純CDK2/周期素E-(His)6複合物
使用分別攜帶CDK2和周期素E的人類編碼序列的兩種重組杆狀病毒共感染昆蟲Sf21細胞。在共感染開始後2或3天，通過離心收穫細胞，然後在-40℃下儲存至使用時。在細胞解凍和機械溶解之後，通過鎳親和層析法(IMAC)提純存在於溶解上清中的複合物，在-80℃下儲存。
96孔格式平板的CDK2/周期素E閃爍板(Flashplate)試驗使用塗有鏈黴抗生物素蛋白的96孔格式板來測試所述化合物對CDK2/周期素E的激酶活性的活性。
為了進行該試驗，將生物素標記的肽底物，pRb蛋白的片段(生物素基-SACPLNLPLQNNHTAADMYLSPVRSPKKKGSTTR-OH)以1mM的濃度溶解在激酶緩衝液(HEPES/NaOH 50mM，NaCl1mM，MgCl25mM，pH 7.5)中，構成110μl等份形式的儲備溶液，在-20℃下儲存。在實驗日，將等份的該溶液解凍，用含有1mM二硫蘇糖醇的激酶緩衝液稀釋，臨時加入到該緩衝液中，以便獲得14.3μM的濃度。將70μl的該溶液加入到閃爍板的每一個孔內，以便在酶促反應中獲得10μM的最終底物濃度，該酶促反應的最終反應介質體積為100μl(參見以下)。
在單獨的管內，由10mM的儲備溶液製備在DMSO中的不同濃度的中間稀釋的抑制劑(本發明的產品)。因此製備了1000μM、333.3μM、111.1μM、37.03μM、12.35μM、4.11μM和1.37μM稀釋物。將1μl的這些溶液的每一種(或1μl的DMSO，用於對比)轉移到試板的孔內。
然後向每一個孔添加19μl的三磷酸腺苷(ATP)和ATPy33P的混合物在激酶緩衝液中的溶液，濃度為5.26μM的總ATP和52.6μCi/ml的P33。酶促反應通過添加10μl/孔的200nM的CDK2/周期素E在含有1mM二硫蘇糖醇的激酶緩衝液中的溶液(或10μl的含有1mM二硫蘇糖醇的激酶緩衝液，作為空白反應)來觸發。
在添加每一種試劑後，每一個孔的最終體積是100μl，最終底物濃度是10μM，最終抑制劑濃度是10μM、3.33μM、1.11μM、0.37μM、0.123μM、0.041μM和0.014μM(根據中間稀釋物的濃度)，最終ATP濃度是1μM，33P的最終量是1μCi/孔以及CDK2/周期素E複合物的最終濃度是20nM。在添加所有試劑之後，平板在30℃下孵育，同時軌道在650rpm下攪拌。
當孵育結束時，該平板用300μl/孔的PBS(磷酸鹽緩衝鹽水，pH＝7.4，沒有鈣或鎂，產品號10010-015，Gibco BRL)衝洗。33P在肽上的引入通過使用Packard Topcount的閃爍計數來定量。本發明的產品的抑制活性通過測定使酶活性減低50％的抑制濃度(IC50)來評價。
2.CDK4/周期素D1試驗用IMAC(固定化金屬離子親和層析)提純CDK4-HA/周期素D1-(His)6複合物使用分別攜帶CDK4-HA(C端與紅細胞凝集素tag融合和周期素D1-(His)6的人類編碼序列的兩種重組杆狀病毒共感染昆蟲Sf9細胞。在共感染開始後60小時，通過離心收穫細胞，然後在-20℃下冷凍至使用時。在緩衝液A(HEPES 200mM，pH 7.0，NaCl 50mM，MgCl22mM，咪唑25mM，TCEP 1mM，甘油10％(p/v)，NaF 1mM，Na3VO41mM)中解凍，在4℃下攪拌1小時，離心，之後，通過鎳親和層析法(IMAC)提純存在於溶解上清中的複合物，在-80℃下儲存。
96孔格式平板的CDK4/周期素D1閃爍板(Flashplate )試驗使用塗有鏈黴抗生物素蛋白的96孔「閃爍板(Flashplate)」試驗評價本發明的產品抑制CDK4/周期素D1激酶複合物的作用。為了進行該試驗，將生物素標記的肽底物，pRb蛋白的片段(生物素基-RPPTLSPIPHIPRSPYKFPSSPLR-醯胺)以2mM的濃度溶解在激酶緩衝液(HEPES/NaOH 50mM，NaCl 1mM，MgCl25mM，pH 7.5)中，構成110μl等份形式的儲備溶液，在-20℃下儲存。在實驗日，將等份的該溶液解凍，用含有1mM二硫蘇糖醇的激酶緩衝液稀釋，臨時加入到該緩衝液中，以便獲得2.571μM的最終肽濃度。將70μl的該溶液加入到閃爍板的每一個孔內，以便在酶促反應中獲得1.8μM的最終底物濃度，該酶促反應的最終反應介質體積為100μl(參見以下)。在單獨的管內，由10mM的儲備溶液製備在DMSO中的不同濃度的中間稀釋的抑制劑(本發明的產品)。因此製備了1000μM、333.3μM、111.1μM、37.03μM、12.35μM、4.11μM和1.37μM稀釋物。將1μl的這些溶液的每一種(或1μ1的DMSO，用於對比)轉移到試板的孔內。然後向每一個孔添加19μl的三磷酸腺苷(ATP)和ATPy33P的混合物在激酶緩衝液中的溶液，濃度為5.26μM的總ATP和78.9μCi/ml的P33。該酶促反應通過添加10μl/孔的250nM的CDK4/周期素D1在含有1mM二硫蘇糖醇的激酶緩衝液中的溶液(或10μl的含有1mM二硫蘇糖醇的激酶緩衝液，作為空白反應)來觸發。在添加各種試劑後，每一個孔的最終體積是100μl，最終底物濃度是1.8μM，最終抑制劑濃度是10μM、3.33μM、1.11μM、0.37μM、0.123μM、0.041μM和0.014μM(根據中間稀釋物的濃度)，最終ATP濃度是1μM，33P的最終量是1.5μCi/孔以及CDK4/周期素D1複合物的最終濃度是25nM。
在添加所有試劑之後，試板在30℃下孵育，同時軌道在650rpm下攪拌。在孵育結束後，該試板用300μl/孔的PBS(磷酸鹽緩衝鹽水，pH＝7.4，沒有鈣或鎂，產品號10010-015，Gibco BRL)衝洗。33P在肽上的引入通過使用Packard Topcount的閃爍計數來定量。本發明的產品的抑制活性通過測定使酶活性減低50％的抑制濃度(IC50)來評價。
3.Aurora 2通過放射性閃爍試驗確定所述化合物對激酶Aurora 2的抑制效應。
在大腸桿菌中表達完全重組Aurora 2酶(其N端用組氨酸標記)，並且提純至接近均一的質量。
通過用鎳螯合物的層析提純在大腸桿菌中表達的、其N端用組氨酸標記的NuMA(與有絲分裂器(Mitotic Apparatus)連接的核內蛋白)的C端片段(Q1687-H2101)，並且在Aurora 2激酶試驗中用作底物。
通過在鎳螯合物飽和的微量培養板(New England Nuclear，SMP107模型)上的閃爍法測定Aurora 2的激酶活性。每一個孔含有100μl的以下溶液0.02μM的Aurora 2；0.5μM的NuMA底物；1μM的ATP，補加了0.5μCi的ATP-[33P]。將該溶液在37℃下孵育45分鐘。然後除去試驗緩衝液，用300μl的激酶緩衝液衝洗孔兩次。使用Packard Model Top Count NXT儀器測定每一孔內的放射性。
在僅含有放射性ATP和含有按照對於其它樣品相同方式處理的緩衝激酶的孔內雙份測定本底噪聲。
通過雙份測定沒有試驗化合物的完全試驗混合物(ATP、Aurora 2和NuMA底物)中的放射性來測定對照物的活性。
本發明化合物抑制Aurora 2的活性的作用表示為在試驗化合物存在下的對照物活性的抑制百分率。作為抑制對照物，在每一試板上添加星形孢菌素。










權利要求
1.對應於以下通式(I)的化合物 其中·X表示選自共價鍵，(CH2)n中的基團，其中n等於1或2，·Ar表示芳基或雜芳基；該基團任選被選自烷基、滷素、NR1R2(R1和R2選自氫基團，烷基，環烷基，或可以一起形成雜環基或雜芳基，這些基團本身是任選取代的)，SO2烷基，烷硫基，烷氧基，雜芳基或芳基中的基團取代，·R表示選自氫，烷基，環烷基，雜環烷基，芳基，雜芳基，烷氧基，環烷氧基，雜環烷氧基或氨基中的基團；R可以任選被一個或多個選自與以上對於R定義的那些基團中的基團取代。
2.如權利要求1所述的化合物，其特徵在於在基團R1和R2上的任選存在的取代基選自羥基、雜芳基、環烷基和氨基烷基。
3.如權利要求1所述的化合物，其中所述烷基是含有1-10個碳原子的直鏈或支鏈。
4.如權利要求1所述的化合物，其中所述環烷基是含有3-10個碳原子的環烷基鏈。
5.如權利要求1所述的化合物，其中所述雜環烷基是含有3-10個碳原子並且含有至少一個選自O、N和S中的雜原子的環狀烷基鏈。
6.如權利要求1所述的化合物，其中，在基團NR1R2中，基團R1或R2之一是氫原子。
7.如權利要求1-6的任一項所述的化合物，其中所有基團R、R1和R2任選被烷基、環烷基、雜環烷基、雜芳基、芳基、氨基、羥基、烷氧基或滷素基團取代。
8.如權利要求1所述的化合物，其中所述芳基和雜芳基選自任選包括一個或多個選自O、N和S中的雜原子的單環基團，或者稠合於另外的五元或六元環並任選包括1-3個選自O、N和S中的雜原子的基團。
9.如權利要求1所述的化合物，其中所述芳基或雜芳基選自苯基，吡啶基，嘧啶基，三嗪基，吡咯基，咪唑基，噻唑基，呋喃基，噻吩基，吲哚基，氮雜吲唑基，異苯並呋喃基，異苯並噻吩基，苯並唑基，苯並噻唑基，芳基亞乙烯基，芳基醯胺基，芳基羧醯胺基，芳烷基胺，喹啉基，異喹啉基，噌啉基，喹唑啉基，萘啶基，三唑基或四唑基。
10.如權利要求9所述的化合物，其中所述芳基和雜芳基選自任選取代的苯基，噻吩基，吡唑基、咪唑基。
11.如權利要求10所述的化合物，其中所述苯基被選自氨基和滷素基團，尤其氯和氟中的基團取代。
12.如權利要求11所述的化合物，其中所述芳基選自二氟苯基，三氟苯基和單烷基氨基苯基。
13.如權利要求1所述的化合物，其中X表示共價鍵。
14.如權利要求1所述的化合物，其中R表示環烷基。
全文摘要
本發明尤其涉及新型化合物，尤其新型苯並噻唑衍生物，含有所述化合物的組合物以及它們作為藥劑的用途。
文檔編號C07D277/82GK1950369SQ200580014073
公開日2007年4月18日 申請日期2005年3月30日 優先權日2004年4月1日
發明者S·德普雷特斯, A·斯坦默茨, O·案戈蘭特－博尼法策, D·比扎德, J·張, Y·本內德蒂, F·克勒克 申請人:艾文蒂斯藥品公司