利用磁性微粒的檢測方法
2023-05-07 00:54:56
專利名稱：利用磁性微粒的檢測方法
利用磁性微粒的檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種檢測抗原或抗體的檢測方法，具體地說，涉及一種藉助磁性微粒在微孔反應井中進行檢測的檢測方法。
背景技術：
利用免疫學反應原理進行檢測是應用較廣的一種檢測方法。目前以酶聯免疫吸附試驗(Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA)最為常用。所述 ELISA 法是通過吸附作用將抗原或抗體固定在微孔反應井的部分內壁上來檢測相應的抗體或抗原；檢測過程中通過反覆浸泡、洗滌的物理方法去除不希望參加反應的物質。目前應用的ELISA檢測方法表現出以下不足之處第一是由於使用的微孔反應井內表面積有限，與之結合的抗原或抗體相對較少，在檢測過程中容易出現過多的被檢物因其不能與反應井壁上相應的抗原或抗體很好結合，以至於檢測結果低於被檢物實際含量或實際存在的被撿物不能檢測出來，檢測效果較差；第二是通過浸泡、洗滌的方法去除不希望參加反應的物質效果不理想，經常出現其殘留物影響反應結果的現象，並且操作比較繁瑣；第三是由於與反應井壁結合的抗原或抗體通常是純度很高的單一物質，在保存過程中容易出現其生物學活性下降，從而降低了檢測的敏感性；第四是免疫反應只能在結合抗原或抗體的微孔井的部分內壁進行，浪費了大量的反應空間，反應速度慢。
發明內容本發明所解決的技術問題在於提供一種利用磁性微粒的檢測方法，其可提高檢測效果、簡化操作過程。為解決上述技術問題，本發明採用如下技術方案一種利用磁性微粒的檢測方法， 包括如下步驟首先，提供一微孔反應井並在該微孔反應井中加入磁性微粒、待檢測物質和酶標記抗體或抗原結合物；再將所述微孔反應井置於25°C至45°C條件下保溫15至60分鐘；然後，將所述微孔反應井放在能產生磁力的磁力物質上1至5分鐘，待微孔反應井中的磁性微粒下沉後去除微孔反應井中的液體；最後，往微孔反應井中加入與所述酶標記抗體或抗原結合物對應的底物。作為本技術方案的進一步改進，所述磁力物質為磁鐵。作為本技術方案的進一步改進，所述磁性微粒為與抗原或抗體結合的磁顆粒。相較於現有技術，本發明所述的檢測方法藉助磁性微粒、微孔反應井和磁力物質， 能提高檢測效果、簡化操作過程。
具體實施方式本發明提供一種藉助磁性微粒和微孔反應井建立的免疫學檢測方法，有效避免現有技術中ELISA法的一些不足之處，以提高檢測效果，提高檢測系統穩定性，簡化操作過禾呈。
本檢測方法將用到如下物質磁性微粒、酶標記抗體或抗原結合物、與標記用酶對應的底物、磁力物質及微孔反應井。所述磁性微粒為與抗原或抗體結合的磁顆粒，該抗原或抗體是被檢測物中的抗體或抗原。所述酶標記抗體或抗原結合物中的抗體或抗原是與被檢測物中抗體或抗原相關的。所述磁力物質可產生磁力，如電磁物質或永磁物質，該磁力物質可對所述磁性微粒產生磁性吸引。所述微孔反應井用於容納上述檢測方法所需的各種物質，形成這些物質的反應容
器ο本發明所述的檢測方法如下1.在所述微孔反應井中加入適量磁性微粒、適量待檢測物質和適量酶標記抗體或抗原結合物；2.將所述微孔反應井置於25°C _45°C條件下保溫15_60分鐘，進行反應；3.再將所述微孔反應井放在磁力物質上1-5分鐘，使微孔反應井中的磁性微粒受磁力物質吸引而下沉，隨後去除微孔反應井中的液體；4.往微孔反應井中加入與所述酶標記抗體或抗原結合物對應的底物；5.測量在微孔反應井中液體的光吸收值或光強度；以下簡要介紹利用本發明檢測方法檢測抗風疹病毒IgM抗體的實例，以具體說明本發明所述的檢測方法。所述抗風疹病毒IgM抗體的檢測過程分為兩個步驟製備和檢測。在所述製備過程中，先取直徑100微米的磁性微粒lOOmg，用緩衝液I 50ml浸泡、 攪拌5-10分鐘；將此液體放在磁力物質(如磁鐵)上使磁性微粒下沉，棄液體，留取沉澱；
重複5次。然後，取5mg鼠抗人IgM單克隆抗體加入到上述沉澱物中，在容器中加入10mg/ml 的碳二亞胺1ml，室溫下攪拌24小時。再加入緩衝液II 50ml浸泡、攪拌5_10分鐘，將此液體放在所述磁力物質上使磁性微粒下沉，棄液體，留取沉澱；重複3次。將上述沉澱物放入含0. 吐溫-20、0. 牛血清白蛋白、20%小牛血清的緩衝液II中，置-15°c -20°C條件下保存備用。
權利要求
1.一種利用磁性微粒的檢測方法，包括如下步驟首先，提供一微孔反應井並在該微孔反應井中加入磁性微粒、待檢測物質和酶標記抗體或抗原結合物；再將所述微孔反應井置於25°c至45°C條件下保溫15至60分鐘； 然後，將所述微孔反應井放在磁力物質上1至5分鐘，待微孔反應井中的磁性微粒下沉後去除微孔反應井中的液體；最後，往微孔反應井中加入與所述酶標記抗體或抗原結合物對應的底物。
2.根據權利要求1所述的利用磁性微粒的檢測方法，其特徵在於所述磁力物質為磁鐵。
3.根據權利要求1所述的利用磁性微粒的檢測方法，其特徵在於所述磁性微粒為與抗原或抗體結合的磁顆粒。
全文摘要
本發明提供了一種利用磁性微粒的檢測方法，包括如下步驟首先，提供一微孔反應井並在該微孔反應井中加入可與抗原或抗體結合的磁性微粒、待檢測物質和酶標記抗體或抗原結合物；再將所述微孔反應井置於25℃至45℃條件下保溫15至60分鐘；然後，將所述微孔反應井放在能產生磁力的磁力物質上1至5分鐘，待微孔反應井中的磁性微粒下沉後去除微孔反應井中的液體；最後，往微孔反應井中加入前述酶標記抗體或抗原結合物對應的底物。相較於現有技術，本發明所述的檢測方法藉助磁性微粒、微孔反應井和磁力物質，能提高檢測效果、簡化操作過程。
文檔編號G01N33/543GK102262154SQ201010182820
公開日2011年11月30日 申請日期2010年5月26日 優先權日2010年5月26日
發明者侯淑霞 申請人:侯淑霞