人尿中三聚氰胺和三聚氰酸的液質聯用定量檢測法的製作方法

2023-05-07 07:16:31 2

專利名稱：：人尿中三聚氰胺和三聚氰酸的液質聯用定量檢測法的製作方法
技術領域：
：本發明涉及醫藥檢測
技術領域：
，具體涉及人尿中三聚氰胺和三聚氰酸的液質聯用(液相色譜串聯質譜技術)定量檢測方法。
背景技術：
：三聚氰胺(Melamine,2，4，6-三氨基-1,3,5-三嗪)，是一種三嗪類含氮雜環有機化合物，分子式C3N3(NH2h，分子量126.12。結構式為H。NNNH三聚氰胺遇強酸或強鹼水溶液水解，胺基逐步被羥基取代，先生成三聚氰酸-醯胺，進一步水解生成三聚氰酸一醯胺，最後生成三聚氰酸HO由於蛋白質主要由胺基酸組成，其含氮量一般不超過30%，而三聚氰胺的分子式(C3N6H6)含氮量為66.7%。現階段通用的蛋白質測試方法"凱氏定氮法"，是通過測出含氮量來估算蛋白質含量，因此，不法分子在食品中添加三聚氰胺使得食品的蛋白質測試含量上升。1978年Newton和UUey發現三聚氰胺具有這種作用，近期曝光的三鹿嬰幼兒奶粉中含有大量三聚氰胺也是基於同樣的緣由。毒性學研究表明三聚氰胺在體內的毒性非常微弱，大鼠口服的LD5Q(半數致死量)為3161mg/kg。1994年國際化學品安全規劃署和歐洲聯盟委員會合編的《國際化學品安全手冊》第三巻和國際化學品安全卡片指出長期或反覆大量攝入三聚氰胺可能對腎與膀胱產生影響，導致產生結石。動物實驗表明三聚氰胺在尿內形成草酸鈣結晶，與泌尿系統結石有明顯的關聯性，並可引起腎功能衰竭，導致動物死；近期在我國所發生嬰兒死亡事件也支持這種觀點。據報導，三聚氰胺在不同物種中代謝存在差異。其在豬體內的其半衰期大約為4.04土0.37h，是老鼠體內(2.71h)的1.5倍，其原因為老鼠的腎臟清除率是豬的5倍。三聚氰胺在體內的清除機制並不明確，但是根據其作為極性小分子的理化性質，以及豬體內的清除率(27ml/min)和腎小球濾過率(31-42ml/min),可以認為主要經腎臟清除。雄性Fischer大鼠的毒代研究表明，24h90%的口服劑量在尿中清除，28小時已經超過99%，腎臟和膀胱中三聚氰胺的量髙於其他組織。體內清除速度如此之快，說明三聚氰胺可能很少在體內聚集。動物實驗研究表明，在豬體內三聚氰胺的表觀分部容積為0.61(±0.04)L/kg，接近體液的總量，故推測三聚氰胺在豬體內主要分布於細胞外液，大部分器官組織中並不存在。現有的文獻資料表明，三聚氰胺在不同的哺乳動物中的代謝特徵有較大的差異；有關三聚氰胺在人體的代謝情況尚未見報導。目前常見的三聚氰胺檢測方法有髙效液相色譜法(HPLC法)、反相HPLC法、液相色譜串聯質譜法、氣相色譜質譜聯用法、升華法、離子交換色譜-紫外檢測法。樣品來源主要為動物食品、飼料、乳製品。樣品處理方法多需固相萃取、過濾、衍生化處理等步驟，測定方法中均未見同位素內標的使用。2008年9月媒體報導三鹿嬰幼兒奶粉中檢測出三聚氰胺，並導致食用該奶粉的嬰幼兒發生腎結石的重大食品安全事件，引起了全社會的關注。建立可靠靈敏的人尿中三聚氰胺和三聚氰酸的液相色譜-串聯質譜(LC-MS/MS)定量檢測方法，以便能及時了解人體內三聚氰胺的殘留情況、臨床跟蹤觀察並採取有效的診療措施等，均具有十分重大的臨床意義。有關三聚氰胺和三聚氟酸在人尿中的檢測方法尚未見報導。
發明內容本發明所要解決的技術問題，在於利用液相色譜-串聯質譜和同位素稀釋質譜原理，為臨床提供一種搡作簡便、專一靈敏的臨床人尿中三聚氰胺和三聚氰酸定量檢測方法，以滿足臨床的需求。本發明公開的定量檢測的方法包括釆用同位素稀釋技術，在尿樣的預處理時分別加入含13C3;15N3-三聚氰胺或氘代三聚氰胺和13C3;15N3-三聚氰酸的內標溶液；液-液萃取法分別提取尿中三聚氰胺和三聚氰酸；建立LC-MS/MS方法分別定量檢測人尿中三聚氰胺和三聚氰酸濃度，液相色譜以苯基、氟苯基、矽膠等填料柱為固定相，甲醇、乙腈、水、甲酸溶液或混合液為流動相，色譜分離進行等度洗脫或梯度洗脫，質譜檢測採用電噴霧電離源(ESI)檢測人尿中三聚氰胺和三聚氰酸含量。三聚氰胺和三聚氰酸的最低定量限可達IOng/ml。本發明方法包括以下步驟1、樣品預處理根據三聚氰胺和三聚氰酸的酸鹼性質，採用液-液萃取的樣品預處理方法分別處理三聚氰胺和三聚氰酸樣品。三聚氰胺用氫氧化鈉或氨水鹼化，液-液萃取所用的提取溶劑為乙酸乙酯。三聚氟酸用甲酸酸化，液-液萃取所用的提取溶劑為異丙醇、乙酸乙酯或者二者的混合溶劑。2、液相分離三聚氰胺和三聚氰酸分別進行液相色譜分離(1)流動相由A和B組成，流速為0.2-0.5ml，其中A為含0.0001~0.1%甲酸水溶液，B為含0.0001~0.1%甲酸的甲醇或乙腈或甲醇和乙腈的混合液。(2)色譜柱採用苯基、氟苯基、氰基、矽膠等填料柱，色譜柱內徑為15rnrn，長度為50~250mm(3)洗脫方法採用等度或梯度洗脫方式。釆用等度洗脫時，流動相A為0.02y。甲酸水，流動相B為含O.02%甲酸的體積比為1:1的甲醇和乙腈溶液，A:B為體積比(20-50):(80~50)。採用梯度洗脫時，流動相A:甲醇(含0.001%甲酸)，流動相B:水，梯度比例A為10~100%，B為0~90%。使用色譜柱為XbridgeTMPhenyl(150x2.lmm，5jum，Waters),梯度程序可參考表1;流速0.35ml/min。表l流動相梯度程序表tableseeoriginaldocumentpage53、質譜檢測三聚氰胺釆用電噴霧電離源(ESI)，正離子多反應監測掃描(MRM)，離子選擇通道(Ql/Q3):三聚氰胺m/z127/68(定量)和127/85(定性)，內標通道為13C3;15N3-三聚氰胺m/z133/72。離子通道範圍可為土l.Oamu。三聚氰酸採用電噴霧電離源(ESI),負離子多反應監測掃描(MRM)，離子選擇通道(Ql/Q3):ra/z128/42(定量)和128/85(定性)，內標13C3;15N3-三聚氰酸m/z134/44。離子通道範圍可為土l.Oamu。4、濃度計算方法和檢測限按內標法以峰面積或峰高法，分別計算尿中三聚氰胺和三聚氰酸含量。本發明三聚氰胺和三聚氰酸的檢測限為lng/ml，定量範圍為10-5000ng/ml，線性相關係數0.9990以上，批內、批間精密度小於10°/。，準確度85-115%之間。樣品穩定性良好。本發明的有益結果是1.根據三聚氰胺和三聚氰酸不同的理化性質，本發明分別對其進行樣品處理、色譜分離和質譜檢測。建立了相對經濟簡便的人尿中三聚氰胺和三聚氰酸的預處理方法。本研究採用了液液萃取的樣品預處理方法，在滿足方法學各項指標的前提下，與已有的固相萃取方法相比，更為快速、簡便和經濟。2.採用同位素稀釋法定量，在尿樣的預處理時就加入三聚氰胺和三聚氰酸穩定同位素內標，實現了對測試的全過程的跟蹤校正，確保測定結果的準確可靠。3.本發明方法對樣品檢測的專一性強、靈敏度高、操作簡便，各項方法學指標均能達到中國藥典的相關技術要求。具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明作進一步的闡述，但不限制本發明。實施例中非特別聲明均為體積百分濃度。實施例1檢測條件和方法實例1.試劑配製(1)標準曲線吸取三聚氰胺和三聚氰酸標準工作液適量，加入雙重蒸餾水，分別製成含三聚氰胺和三聚氰酸濃度為10、50、100、500、1000、2500、5000ng/ml的標準水溶液。含7個濃度點，每個濃度配製lml。(2)質控品吸取三聚氰胺和三聚氰酸標準工作液適量，加入雙重蒸餾水，分別製成含三聚氰胺和三聚氰酸濃度為10，20，2000，4000ng/ml的三聚氰胺和三聚氰酸作為質控品，含4個濃度點，每個濃度配製2ml。(3)內標吸取250^1三聚氟胺內標(lOOjag/ml)溶液至10ml容量瓶，用50%甲醇水溶液定容，配製成2.5yg/ml工作溶液，4'C冷藏備用，得2.5ng/ml三聚氰胺內標溶液。同時，另外吸取250|Lil三聚氟酸內標U00ug/ml)溶液至10ml容量瓶，用50%甲醇水溶液定容，配製成2.5ug/ml工作溶液，4'C冷藏備用，得2.5yg/ml三聚氰酸內標溶液。(4)流動相(甲醇乙腈為1:1，含0.02%甲酸溶液)將500ml甲醇與500ml乙腈混合，取200pl甲酸溶液於混合液中，混勻，即得。(5)流動相(含O.02%甲酸水溶液)取200ul甲酸溶液於1000ml水中，混勻，即得。(6)流動相(含0.001%甲酸甲醇溶液)取IOm1甲酸溶液於1000ml甲醇中，混勻，即得。(7)1%甲酸水溶液取lml甲酸溶液於100ml水中，混勻，即得。U)0.1°/。甲酸水溶液取100pl甲酸溶液於100ml水中，混勾，即得。(9)1%氣氧化鈉溶液稱取lg氣氧化鈉，溶於100ral水中，混勻，即得。(10)提取溶劑取異丙醇和乙酸乙酯，按體積比5:95的比例混合。配製總體積1000ml。2.尿樣採集釆集臨床尿樣約2ml，然後在-8(TC保存。樣品測定時，取凍存樣品室溫下解凍，備用。3.樣品預處理3.1測定人尿樣中三聚氰胺處理步驟取尿樣，依次加入10W三聚氰胺同位素內標工作液(5Mg/ml)及20nUNNaOH溶液,渦旋10s,加入lral乙酸乙酯，旋渦振蕩10min，18000rpm離心3min;吸取上層有機相，加入100)4含0.1。/。甲酸的水溶液，旋渦振蕩10min,18000rpm離心3min;吸取下層水相轉移至300u1塑料管進樣分析。3.2測定人尿樣中三聚氰酸處理步驟取尿樣，依次加入10W三聚氰酸同位素內標工作液(5yg/ml)及20n1含1°/。甲酸的水溶液，渦旋10s，加入lml含5%異丙醇的乙酸乙酯溶液，旋渦振蕩10min，18000rpm離心3min;吸取上層有機相，潔淨空氣37'C吹乾，殘渣加入10(HxL含70%甲醇的水溶液，旋渦振蕩3rain,18000rpm離心3min，轉移至300|ul塑料管進樣分析。4.液相色譜串聯質譜(LC-MS/MS)測定條件4.1色譜條件4.1.1測定三聚氰胺色譜條件柱AllurePFPPropyl(100x2.1mm,5",RESTEK)柱CI8(4.0x3.Omra，5jam,Phenomenex)相流動相A:雙蒸水(含O.02%甲酸)流動相比例流速柱溫進樣量-.典型保留時間:流動相B:甲醇/乙腈(1:1,含O.02%甲酸)A:B=70:300.4ml/rain室溫三聚氰胺1.9min;內標1.9min4.1.2測定三聚氰酸色譜條件XbridgeTMPhenyl(150".1mm,5|jm,Waters)CI8(4.0x3.O線5nm，Phenomenex)甲醇(含O,001%甲酸)0.35ml/min室溫三聚氰酸1.3min;內標1.3min色譜柱保護柱流動相流速柱溫進樣量典型保留時間4.2質譜條件4.2.1測定三聚氰胺質譜條件儀器API3000離子源電噴霧離子源掃描方式正離子MRM掃描離子源參數霧化氣60psi(10*);氣簾氣40psi(10*);碰撞氣42ps:(7*);輔助氣7L/min;電壓5500V;溫度450。C(注*為儀器設定值)tableseeoriginaldocumentpage84.2.2測定三聚氰酸質譜條件儀器3200QTrap離子源電噴霧離子源掃描方式負離子MRM掃描離子源參數霧化氣50*;氣簾氣20*;碰撞氣High*;輔助氣50*;電壓-4500V;溫度500'C(注*為儀器設定值)tableseeoriginaldocumentpage95.濃度計算方法按內標法以峰面積或峰高法，計算尿中三聚氰胺和三聚氰酸的濃度。6.結果三聚氰胺和三聚氰酸測定的方法學包括線性關係、準確度、精密度、穩定性等均符合中國藥典的規定。實施例2色譜條件試劑配製、樣品的採集及樣品處理的方法、檢測條件同實施例l。色譜條件中三聚氰胺改用ThermoHypersilSilica(150mmx2.1mmi.d.，5|um，Thermo)分析柱，等度洗脫，流動相(A)0.0001%甲酸水，(B)0.0001'/。甲酸乙腈，A:B為體積比15:85。在此條件下，三聚氰胺和內標的保留時間為2.6min。三聚氰酸採用RESTEKAllurePFPPropyl(100咖x2.1mmi.d.，5nm,RESTEK)分析柱，等度洗脫，流動相(A)0.1%甲酸水，(B)0.1%甲酸50%乙腈50%甲醇，A:B為體積比30:70。在此條件下，三聚氰酸和內標的保留時間為1.3min。三聚氰胺和三聚氰酸的色譜峰峰形良好，在相應的色譜保留時間未見幹擾存在。實施例3方法學驗證釆用實施例1所列的檢測條件和方法，對測定方法進行了方法學驗證。在10-5000ng/ml三聚氰胺和三聚氰酸的濃度範圍內，線性關係良好(r>0.9990),最低檢測限可達lng/ml。批內、批間精密度RSD分別《3.26%和《5.43%,準確度為93.7-102.8%。提取回收率為78.0-83.3%，RSD<4.6°/。，介質效應為96.4~97.6%。方法學驗證的結果說明LC-MS/MS可靈敏、準確、快速地對大批量臨床樣品進行檢測。1.標準曲線和定量範圍按實施例1方法配製標準曲線，分三批處理和進樣測定，共得3套標準曲線。以濃度為x軸，三聚氰胺和三聚氰酸與各自同位素內標峰面積之比為y軸，進行線性回歸，建立回歸方程。結果表明標準曲線方程為Y=0.0304X+0.04036(三聚氰胺)，Y-0.00406X+0.01367(三聚氰酸)。3批次測定標準曲線的r值分別為0.9994~0.9998。詳見表2。本法三聚氰胺和三聚氰酸的最低定量限為10ng/ml。表2標準曲線測定結果(3批次，每批11=2)理論濃度測定濃度(ng/ml)仏^準確度批次1批次2批次3%RSD三聚氰胺1010.08.78.89.1509.42791.505051.151.354.652.334.550104.710098.4跳794.797.823.30297.82500500.4520.1515.4511.92.368102.410001005.21065.01081.010504.051105.025002426.52540.52454.524742.38098鄰50005068.04874.04951.049642.10299.29斜率0.03090.030.03030.03041.507/截距-0.006430.04260.08490.04036//相關係數r0.99970.99940.99940.9995//三聚氰酸109.09.38.48.9316.49289.315054.053.052.052.993.583106.0100103.8102.5105.7104.01.726104.0500510.4497.6522.0510.02.745102,01000968.4997.21040.010023.239100.225002426.52453.02458.524462.09397.8450005088.05047.54974.050372.108100.7斜率0.004130.004070.003990.004061,729/截距0.01070.01130.0190.01367//相關係數r0.99940.99980.99970.9996//2.準確度與精密度按實施例1方法配製質控品。每種濃度配製6份，在同一天內按上述樣品處理方法及液相色譜串聯質譜條件進行處理和分析，計算批內精密度和準確度。按上述方法，分3天配製3批樣品處理和分析，計算批間精密度和準確度。結果見10表3，批內、批間精密度CVy。《10%,準確度88.91~111.6%之間。表3準確度和精密度結果(3批次，每批n-6)理論濃度(ng/ml)批內批間精密度(°/)準確度《)批次l批次2批次3批次1批次2批次3精密度(w準確度(%)M105.8037.7977.054111.6100.192.7410.12100.9204.0147.42010.16104.5104.4100.47.321103,0M20003.9844.4792.96594.72104.8103.95.875101.140000.87570.67162.28392.97101.698.524.00297.69CA10202000400016.1110.192.3611.8467.4195.4493.4572.40215.1213.433.3052.638104.4102.796.91101.3100.298.0498.9697.7188.9195.59101.798.4114.379.9743.5562.69697.8198.5699.2099.13注MLM:三聚氱胺，CA:三聚氰酸3.提取回收率三聚氰胺、三聚氰酸及各自內標的提取回收率見表4，結果顯示低、中、髙濃度質控樣品的三聚氰胺平均提取回收率分別為17.69%、20.23%和20.88%;三聚氰胺內標的提取回收率為19.68%;三聚氰酸平均提取回收率分別為70.88%、71.51%和64.32%;三聚氰酸內標的提取回收率為64.59°/。。表4三聚氰胺、三聚氰酸及內標的提取回收率提取回收率(％)重複次數三聚氰胺內標20ng/ml2000ng/ml4000ng/ml250ng/ml117,1819.8122,2118.2218.1821.12217.4418.5521.7619.4818.6020.90317.8921.3016.9018.2221.7916.08417.7220.2521.3520.1619.6920.30518.5620.4122.3120.4520.4420.96617.3321.0920.7519.0521.1619.46均值17朋20.2320.8819.68標準差SD0.49760.99102.0341.430%RSD2.8134.8989.7427.266提取回收率(％)重複次數三聚氰酸內標20ng/ml2000ng/ml4000ng/ml250ng/ml183.3269.5475.2183.9664朋59.16275,3575.0375.6680.5166.6862.41359.8068.7172.0272.9863.2357.744NA70.6456.3781.1266.6844.52577.1470.9135.5574.2067.0928.06658.8074.2171.1165.4667.2956.92均值70.8871.5164.3264.59標準差SD10.982.55115.7713.21%RSD15.503.56824.5220.454.穩定性4.l樣品在自動進樣器中(室溫)的穩定性三個濃度質控樣品，經過樣品處理步驟搡作後，放入自動進樣器中(室溫)，在不同時間測定，其結果見表5，表明提取後的樣品在自動進樣器中6h內穩定。表5自動進樣器穩定性結果時間(h)二聚氰胺(ng/ml)三;艮氰酸(ng/ml)2020004000202000糊0022.012027401919.2719574006221.771986399020.2619753991420.231958382821.8920284003620.911936382622.7120024247均值21.231977391621.0319914062標準差SD0.817039.25103.21.55531.10123.7%RSD3.8481.9862.6357.3931.5623.045準確度(％)106.298.8497.89105.299.53101.54.2樣品室溫放置的穩定性質控樣品室溫放置24h內的濃度測定值結果見表6。結果表明樣品在室溫放置24h內保持穩定。表6樣品室溫放置的穩定性結果時間(h)聚氰胺(ng/ml)三l!氰酸(ng/ml)20200040002020004000022.012027401920.8220264120228.47204844471.64559.60104.7621.53223639817.9022.9422.5412421.321684287104.1101.3103.0均值23.332120418420.8220264120標準差SD3.441199.32222.31.64559,60104.7%RSD14.754.6855.3137,9022.9422.541準確度(％)116.6106,0104.6104.1101.3103,04.3多次凍融試驗凍融後與不經凍融的質控樣品的濃度測定值結果見表7。結果表明三個濃度質控樣品經過3次凍融後的仍保持穩定。表7凍融試驗穩定性結果凍融次數-三聚氰胺(ng/ml)三！《氰酸(ng/ml)20200040002020004000022.012027401919.2719574006119.822151420421.7620453986225.892021427422.920954073320.922268418920.4520634181均值22.162117417221.1020404062標準差SD2,643117.3108.21.57659.0787.93WSD11.925.5412.5947.4692.8962.165準確度(％)110.8105.8104.3105.5102.0101.5實施例4臨床尿樣中的測定結果按實施例1的條件和方法，從2008年9月19日到2008年10月1日期間，收集到"奶粉門診"嬰幼兒尿樣86例，年齡0-8歲。收集成人健康體檢尿樣IIO例年齡25-57歲。尿樣中三聚氰胺和三聚氰酸測定結果見表8。表8"奶粉門診"嬰幼兒和健康體檢尿樣中三聚氰胺和三聚氰酸的濃度分布範圍及比例tableseeoriginaldocumentpage13從表8可見，110例健康體檢尿樣中96例(87.2%)檢測出三聚氰胺，109例(99.1%)檢測出三聚氰酸。說明採用同位素稀釋液相色譜串聯質譜法可靈敏、準確的對尿樣中三聚氰胺和三聚氰酸進行定量檢測。權利要求1.人尿中三聚氰胺和三聚氰酸的液質聯用定量檢測法，其特徵在於，以同位素稀釋法定量，在尿樣的預處理時加入含三聚氰胺和三聚氰酸穩定同位素的內標溶液；液-液萃取法分別提取尿中三聚氰胺和三聚氰酸；液相色譜串聯質譜技術檢測人尿中三聚氰胺和三聚氰酸含量；按內標法以峰面積或峰高法，計算尿中三聚氰胺和三聚氰酸的濃度。2.根據權利要求l所述定量檢測方法，其特徵在於，在尿樣預處理時添加的穩定同位素內標分別是13C3;15N3-三聚氰胺或氘代三聚氰胺，13C3;15N3-三聚氰酸。3.根據權利要求l所述定量檢測方法，其特徵在於，所述液-液萃取是樣品用氫氧化鈉或氨水鹼化，然後用提取溶劑乙酸乙酯提取三聚氰胺；樣品用甲酸酸化，再用提取溶劑異丙醇或乙酸乙酯，或異丙醇和乙酸乙酯的混合溶劑提取三聚氰酸。4.根據權利要求l所述定量檢測方法，其特徵在於，色譜分離時以苯基、氟苯基、矽膠等填料柱為固定相，甲醇、乙腈、水、甲酸溶液或混合液為流動相，色譜分離，等度洗脫或梯度洗脫。5.根據權利要求i所述定量檢測方法，其特徵在於，質譜檢測用電噴霧電離源；(1)三聚氰胺用正離子多反應監測掃描(MRM)模式，離子選擇通道(Q1/Q3):定量通道m/z127/68和定性通道m/z127/85，內標通道為13C3,15N3-三聚氰胺ra/z133/72;(2)三聚氰酸用負離子多反應監測掃描(MRM)模式，離子選擇通道(Q1/Q3):定量通道m/z128/42和定性通道m/z128/85,內標通道13C3,15N3-三聚氰酸m/z134/44。全文摘要本發明公開的人尿中三聚氰胺和三聚氰酸的液質聯用定量檢測法，其特徵在於包括採用同位素稀釋技術，在尿樣的預處理時分別加入含13C3；15N3-三聚氰胺或氘代三聚氰胺和13C3；15N3-三聚氰酸的內標溶液；液-液萃取法分別提取尿中三聚氰胺和三聚氰酸；建立LC-MS/MS方法分別定量檢測人尿中三聚氰胺和三聚氰酸濃度，液相色譜以苯基、氟苯基、矽膠等填料柱為固定相，甲醇、乙腈、水、甲酸溶液或混合液為流動相，色譜分離進行等度洗脫或梯度洗脫，質譜檢測採用電噴霧電離源(ESI)檢測人尿中三聚氰胺和三聚氰酸含量。三聚氰胺和三聚氰酸的最低定量限可達10ng/ml。本方法的樣品處理經濟、簡便，檢測專一性強、靈敏度高，各項方法學指標均能達到中國藥典的相關技術要求。文檔編號G01N30/00GK101446574SQ200810200988公開日2009年6月3日申請日期2008年10月10日優先權日2008年10月10日發明者健何,琛餘,昀劉,劉罡一,劉豔梅,紅周,周菊珍,宋曉濤,張夢琪,方戴,朱建民,李水軍,賈晶瑩,川陸,高淳新申請人:上海市徐匯區中心醫院