新抗體抗-sPLA2-IIA及其用途

2023-04-30 15:27:21 1

新抗體抗-sPLA2-IIA及其用途
【專利摘要】本發明涉及抗體抗-sPLA2-IIA及其用途。CNCM I - 458720111213CNCM I - 458820111213
【專利說明】新抗體抗-SPLA2-IIA及其用途

【技術領域】
[0001] 本發明涉及抗人IIA組分泌型磷脂酶A2(sPLA2-IIA)的新抗體及其在診斷和治療 方法中的用途。
[0002] 發明背景
[0003] 分泌型磷脂酶A2(sPLA2)形成結構上相關的、催化磷脂的sn-2脂醯鍵的水解以 釋放游離脂肪酸和溶血磷脂的酶家族。通過催化此反應，sPLA2酶在多個生物學過程中起 關鍵作用，所述生物學過程包括細胞膜的穩態、脂質消化、宿主防禦、信號轉導和脂質介質 諸如類花生酸和溶血磷脂衍生物的生成（Valentin等人2000, Bioch. Biophys. Act. 59-70 ; Lambeau, G.，和 Gelb, M. H. 2008, Annu. Rev. Biochem. 77, 495-520)。此家族包括 11 個成員 / 同工型，它們被命名為 sPLA2-IB, sPLA2-IIA, sPLA2-IIC, sPLA2-IID, sPLA2-IIE, sPLA2-I IF, SPLA2-III, SPLA2-V, SPLA2-X, SPLA2-XIIA 和 sPLA2-XIIB〇
[0004] 已經證明難以在蛋白水平對特定同工型定量，因為酶活性相似且缺少同工型特異 性sPLA2抗體。
[0005] Nevalainen等人（Biochimica et Biophysica Acta 1733 (2005) 210-223)開發了 一種用於時間分辨螢光免疫分析（TR-FIA)中的抗sPLA2-IIA抗體。此多克隆抗體通過用 重組人SPLA2-IIA蛋白免疫兔子獲得。TR-FIA的分析靈敏度被記載為lng/ml。
[0006] Cayman chemical提供了一種參考號SCACC353的單克隆抗體。根據該發明人獲得 的實驗結果，SCACC353抗體結合人SPLA2-IIA的Kd為約InM(參見實施例）。
[0007] 目前存在著對能夠更準確和靈敏地檢測生物學樣品諸如血清樣品中SPLA2-IIA 的抗SPLA2-IIA的抗體的需求。


【發明內容】

[0008] 本發明由此涉及一種抗人SPLA2-IIA的分離的抗體，其中所述抗體的結合人 SPLA2-IIA 的 Kd 小於 9. 1(T10M。
[0009] 在本發明的一個實施方案中，重鏈的可變區包含下面⑶R中的至少一種：
[0010] VH-CDR1:GYTFTS(SEQ ID N0:1);
[0011] VH-CDR2:WIFP⑶GSTE(SEQ ID N0:2);和
[0012] VH-CDR3:WGITAFPLFDY(SEQ ID N0:3)，
[0013] 或具有與所述SEQ ID NO: 1-3具有至少60%同一性的胺基酸序列的任何⑶R，或 輕鏈的可變區包含下面⑶R中的至少一種：
[0014] VL-CDR1:RASESVDYD⑶SYMN(SEQ ID N0:4);
[0015] VL-CDR2:AASNLES(SEQ ID N0:5);和
[0016] VL-CDR3:LQSNEAPWT(SEQ ID N0:6)，
[0017] 或具有與所述SEQ ID NO: 4-6具有至少60%同一性的胺基酸序列的任何⑶R。
[0018] 在本發明的一個實施方案中，重鏈的可變區包含如上文所定義的⑶R中的至少一 種，並且輕鏈的可變區包含如上文所定義的⑶R中的至少一種。
[0019] 在本發明的一個實施方案中，重鏈的可變區包含下列CDR:GYTFTS(SEQ ID NO:l)，WIFP⑶GSTE(SEQ ID NO:2)和 WGITAFPLFDY(SEQ ID NO:3)，並且輕鏈的可變區包含 下列 CDR:RASESVDYD⑶SYMN(SEQ ID N0:4)，AASNLES(SEQ ID NO:5)和 LQSNEAPWT(SEQ ID NO:6)或具有與所述SEQ ID NO: 1-6具有至少60%同一性的胺基酸序列的任何⑶R。
[0020] 在本發明的一個實施方案中，編碼重鏈可變區的胺基酸序列是SEQ ID NO: 13並且 編碼輕鏈可變區的胺基酸序列是SEQ ID NO: 14,或具有與所述SEQ ID NO: 13-14具有至少 60 %同一性的胺基酸序列的任何序列。
[0021] 本發明還涉及包含如上文所述的抗人SPLA2-IIA的抗體的組合物。
[0022] 本發明還涉及如上文所述的抗人SPLA2-IIA的抗體，其用於治療SPLA2-IIA相關 的病症。
[0023] 本發明還涉及如上文所述的抗人SPLA2-IIA的抗體，其用於檢測生物學樣品中的 sPLA2-IIA〇
[0024] 本發明還涉及一種體外診斷或預後分析法，其用於使用本發明的抗人SPLA2-IIA 的抗體確定生物學樣品中SPLA2-IIA的存在。
[0025] 在本發明的一個實施方案中，所述分析法是夾心ELISA，所述夾心ELISA使用如上 文所述的抗體作為包被抗體並且使用如下的抗體作為顯示抗體，其中：
[0026]-重鏈的可變區包含下面⑶R中的至少一種：
[0027] VH-CDR1:GFTFSS(SEQ ID N0:7);
[0028] VH-CDR2:AINSNGGSTY(SEQ ID N0:8);和
[0029] VH-CDR3:QGYGNFFDY(SEQ ID N0:9)，
[0030] 或具有與所述SEQ ID N0:7-9具有至少60%同一性的胺基酸序列的任何⑶R，或
[0031] -輕鏈的可變區包含下面⑶R中的至少一種：
[0032] VL-CDR1:RSSQSIVHSNGNTYLY(SEQ ID N0:10);
[0033] VL-CDR2:RVSNRFS(SEQ ID N0:11);和
[0034] VL-CDR3:FQGTHVPRT(SEQ ID N0:12)，
[0035] 或具有與所述SEQ ID NO: 10-12具有至少60%同一性的胺基酸序列的任何CDR。
[0036] 在本發明的一個實施方案中，顯示抗體的重鏈可變區包含如上文所定義的CDR中 的至少一種（SEQ ID N0:7-SEQ ID N0:9)且顯示抗體的輕鏈可變區包含如上文所定義的 CDR 中的至少一種（SEQ ID N0:10-SEQ ID N0:12)。
[0037] 在本發明的一個實施方案中，顯示抗體的重鏈可變區包含下列⑶R:GFTFSS(SEQ ID N0:7)、AINSNGGSTY(SEQ ID N0:8)和 QGYGNFFDY(SEQ ID N0:9)並且顯示抗體的輕 鏈可變區包含下列 CDR:RSSQSIVHSNGNTYLY(SEQ ID N0:10)、RVSNRFS(SEQ ID N0:11)和 FQGTHVPRT (SEQ ID NO: 12)或具有與所述SEQ ID NO: 7-12具有至少60%同一性的胺基酸 序列的任何CDR。
[0038] 在本發明的一個實施方案中，編碼顯示抗體的重鏈可變區的胺基酸序列是SEQ ID NO: 15並且編碼顯示抗體輕鏈可變區的胺基酸序列是SEQ ID NO: 16,或是具有與所述SEQ ID NO: 15-16具有至少60%同一性的胺基酸序列的任何序列。
[0039] 本發明還涉及一種試劑盒，其包含至少一種本發明的抗人SPLA2-IIA的抗體。
[0040] 在一個實施方案中，所述試劑盒包含本發明的抗體和本發明的顯示抗體。
[0041] 本發明還涉及一種表達載體，其包含SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19 和SEQ ID N0:20中的至少一種，或包含具有與所述SEQ ID NO: 17-20具有至少60%同一性 的核酸序列的任何序列。
[0042] 本發明還涉及保藏號為CNCM 1-4587和CNCM 1-4588的產生抗人SPLA2-IIA的抗 體的雜交瘤細胞系。

【具體實施方式】
[0043] 本發明人開發出了抗人SPLA2-IIA的新抗體，如實施例中所示，其顯示出比現 有抗體更高的對SPLA2-IIA的親和性，並且能夠更準確和靈敏地檢測生物學樣品中的 sPLA2-IIA〇
[0044] 另外，本發明人提供了抗人SPLA2-IIA的單克隆抗體，其表現出以下的優勢：（i) 比多克隆抗體更特異，和（ii)由於具有與其單克隆性質相關的結果可重複性，所述抗體能 夠工業應用。
[0045] 定義
[0046] SPLA2-IIA是sPLA2家族的一個同工型。人SPLA2-IIA蛋白的完整胺基酸序列 (SEQ ID N0:21) (GenBank 登錄號 NP_000291)為：
[0047] MKTLLLLAVMIFGLLQAHG (信號肽）
[0048] NLVNFHRMIKLTTGKEAALSYGFYGCHCGVGGRGSPKDATDRCCVTHDCCYKRLEKRGCGTKFLSYKFS NSGSRITCAKQDSCRSQLCECDKAAATCFARNKITYNKKYQYYSNKHCRGSTPRC(成熟蛋白）。
[0049] 在一個實施方案中，SPLA2-IIA是突變體SPLA2-IIA,優選N1A SPLA2-IIA突變體， 其具有序列SEQ ID NO:22:
[0050] MKTLLLLAVMIFGLLQAHG (信號肽）
[0051] ALVNFHRMIKLTTGKEAALSYGFYGCHCGVGGRGSPKDATDRCCVTHDCCYKRLEKRGCGTKFLSYKFS NSGSRITCAKQDSCRSQLCECDKAAATCFARNKITYNKKYQYYSNKHCRGSTPRC(成熟蛋白）。
[0052] 如本文所用的術語"抗體"（Ab)包括單克隆抗體、多克隆抗體、多特異性抗體（例 如，雙特異性抗體）、和抗體片段，只要它們表現出所需的生物學活性即可。在本文中術語 "免疫球蛋白"（Ig)與"抗體"可互換使用。
[0053] "分離的抗體"是已經從其天然環境的成分分離和/或回收的抗體。其天然環境的 汙染成分是會干擾抗體的診斷或治療用途的物質，並且可以包括酶、激素、和其他蛋白質或 非蛋白質成分。在優選的實施方案中，抗體：（1)如通過Lowry法測定被純化至抗體的大於 95%重量比，最優選大於99%重量比；（2)通過使用轉杯式測序儀被純化至足以獲得N-末 端或內部胺基酸序列的至少15個殘基的程度；或（3)如通過SDS-PAGE在還原或非還原條 件下並使用考馬斯藍（或優選地，通過銀染色）顯示被純化至均一。分離的抗體包括在重 組細胞內的原位抗體，因為抗體的天然環境的至少一個成分將不存在。然而，一般地，分離 的抗體將通過至少一個純化步驟製備。
[0054] 基本的四鏈抗體單元是由兩個相同的輕鏈（L)和兩個相同的重鏈（H)組成的異 四聚糖蛋白。來自任何脊椎動物物種的L鏈可以基於它們的恆定區（CL)的胺基酸序列歸 屬於稱為kappa([K])和lambda([A])的兩種明顯不同的類型之一。取決於它們的重鏈 的恆定區（CH)的胺基酸序列，免疫球蛋白可以歸屬於不同的類型或同種型。存在五種類型 的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG、和IgM，重鏈分別被命名為alpha ([ a ])、delta ([ A ])、 epsilon([ e ])、gamma([ y ])和mu([ y ])。[ y ]和[a ]類型基於CH序列和功能的相對 微小差異進一步分成亞類，例如，人表達下列亞類：IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。 每個L鏈通過一個共價二硫鍵與H鏈連接，而兩個H鏈通過一個或多個二硫鍵彼此連接，這 取決於H鏈同種型。每個H和L鏈還具有規則隔開的鏈內二硫鍵橋。每個H鏈在N-末端 處具有可變結構域（VH)，對於[a]和[Y]鏈中的每一個緊接著三個恆定結構域（CH)，而 對於[U ]和[e ]同種型則緊接著4個CH結構域。每個L鏈在N-末端處具有可變結構域 (VL)，在其另一端緊接著恆定結構域（CL)。VL與VH對齊，而CL與重鏈的第一個恆定結構 域（CH1)對齊。據信特定的胺基酸殘基形成輕鏈和重鏈可變結構域之間的界面。VH和VL 的配對一起形成單一抗原結合位點。IgM抗體由5個基本異四聚體單元以及稱為J鏈的額 外多肽組成，並且因此含有10個抗原結合位點，而分泌型IgA抗體可以聚合形成多價組裝 體，其包含2-5個基本4鏈單元以及J鏈。在IgG的情況下，4鏈單元通常約150, 000道爾 頓。對於不同類型的抗體的結構和特性，參見，例如，Basic and Clinical Immunology(基 礎和臨床免疫學），第8版，〇311161?.31：；^68,41^3 1.161'1'和1'1'181：四1116.?3181〇￥(編）， Appleton&Lange, Norwalk, Conn.，1994，第 71 頁，和第 6 章。
[0055] 術語"可變的"是指V結構域的某些節段的序列在抗體與抗體之間存在廣泛差異。 V結構域介導抗原結合併且限定特定抗體對其特定抗原的特異性。然而，在可變結構域的 110個胺基酸範圍內可變性並不是均勻分布的。而是，V區由被稱為"高變區"的具有高度 可變性的較短區域分開的相對不變的15-30個胺基酸的稱為框架區（FR)的序列段組成，所 述高變區每個的長度為9-12個胺基酸。天然重鏈和輕鏈的可變結構域各自包含4個FR， 大部分採取[0 ]_摺疊構型，由三個高變區連接，形成環連接，並且在一些情況下，形成部 分的[0]_摺疊結構。每條鏈中的高變區通過FR與來自另一條鏈的高變區一起緊密地保 持靠近，促成了抗體的抗原結合位點的形成（參見Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest(免疫學感興趣的蛋白的序列），第5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda，Md. (1991))。恆定結構域不直接參與 抗體與抗原的結合，但表現出多種效應器功能，諸如抗體參與抗體依賴性細胞毒性（ADCC)。
[0056] 術語"高變區"當在本文中使用時是指負責抗原結合的抗體胺基酸序列。高 變區通常包含來自"互補決定區"或"CDR"的胺基酸殘基（例如，當根據Kabat編號 系統編號時在VL中的約殘基24-34 (L1)、50-56 (L2)和89-97 (L3)周圍，和在VH中的 約 31-35(H1)、50_65(H2)和 95-102(H3)周圍；Kabat 等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest (免疫學感興趣的蛋白的序列），第5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda，Md. (1991));和 / 或來自"高變 環"的那些殘基（例如，當根據Chothia編號系統編號時在VL中的殘基24-34(LI)、 50-56 (L2)和 89-97 (L3)，和在 VH 中的 26-32(H1)、52-56(H2)和 95-101(H3) ;Chothia 和 Lesk，J. Mol. Biol. 196:901-917(1987));和 / 或來自"高變環"/CDR 的那些殘基（例 如，當根據頂GT編號系統編號時在VL中的殘基27-38(Ll)、56-65(L2)和105-120(L3)， 和 VH 中的殘基 27-38 (HI)、56-65 (H2)和 105-120 (H3) ;Lefranc, M. P?等人 Nucl. Acids Res. 27:209-212 (1999), Ruiz, M?等人 Nucl. Acids Res. 28:219-221 (2000))。任選地，抗體 在下列點中的一個或多個處具有勻稱的插入：當根據AHo編號時在VL中的28、36(L1)、63、 74-75(L2)和 123(L3)，以及 VH 中的 28、36(H1)、63、74-75(H2)和 123(H3) (Honneger, A?和 Plunkthun, A. J. Mol. Biol. 309:657-670 (2001)) 〇
[0057] 術語"單克隆抗體"當在本文中使用時是指從基本上同質的抗體群體獲得的抗體， SP，該群體中包含的單個抗體是相同的，除了可能微量存在的可能的天然發生的突變以外。 單克隆抗體是高度特異性的，其針對單個抗原位點。此外，與包含針對不同的決定簇（表 位）的不同抗體的多克隆抗體相反，每個單克隆抗體針對抗原上的單個決定簇。除了它們 的特異性，單克隆抗體是有優勢的，在於它們可以不受其他抗體汙染地合成。修飾語"單克 隆"不應被解釋為需要通過任何特定的方法產生所述抗體。例如，可用於本發明中的單克 隆抗體可以通過由Kohler等人，Nature, 256:495(1975)首先描述的雜交瘤方法來製備， 或可以使用在細菌、真核動物或植物細胞中的重組DNA法來製備（參見，例如，美國專利號 4, 816, 567)。"單克隆抗體"還可以使用例如在 Clackson 等人，Nature, 352:624-628 (1991) 和Marks等人，J. Mol. Biol. ,222:581-597(1991)中記述的技術從噬菌體抗體文庫中分離。
[0058] 在本文中單克隆抗體包括"嵌合抗體"，在嵌合抗體中重和/或輕鏈的一部分與 衍生自特定物種或屬於特定抗體類型或亞類的抗體中的相應序列相同或同源，而剩餘的 鏈與衍生自另一物種或屬於另一抗體類型或亞類的抗體中的相應序列相同或同源，以及 此類抗體的片段，只要它們表現出所需的生物學活性即可（參見，美國專利號4, 816, 567 ; 和 Morrison 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984))。本發明提供了衍生 自人抗體的可變結構域抗原結合序列。因此，本文中主要感興趣的嵌合抗體包括具有一條 或多條人抗原結合序列（例如，⑶R)並且包含衍生自非人抗體的一條或多條序列，例如， FR或C區序列的抗體。另外，本文中主要感興趣的嵌合抗體包括包含一種抗體類型或亞類 的人可變結構域抗原結合序列和衍生自另一抗體類型或亞類的另一序列，例如，FR或C區 序列的那些。本文中感興趣的嵌合抗體還包括含有與本文中所述的或衍生自不同的物種， 諸如非人靈長目動物（例如，舊大陸猴（Old World Monkey)、猿等）的那些相關的可變結 構域抗原結合序列的那些。嵌合抗體還包括靈長類源化和人源化抗體。此外，嵌合抗體可 以包含在受體抗體或在供體抗體中不存在的殘基。做出這些修飾以進一步改善抗體性能。 對於進一步細節，參見 Jones 等人，Nature 321:522-525 (1986) ;Riechmann 等人，Nature 332:323-329(1988);和 Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)。
[0059]"抗體片段"包括完整抗體的一部分，優選完整抗體的抗原結合區或可變區。抗 體片段的實例包括Fab、Fab'、F(ab'）2和Fv片段；雙價抗體；線性抗體（參見美國專利號 5, 641，870 ;Zapata 等人，Protein Eng. 8 (10) : 1057-1062 [1995]);單鏈抗體分子；和由抗 體片段形成的多特異性抗體。短語抗體的"功能片段或類似物"是具有在性質上與全長抗 體一樣的生物學活性的化合物。例如，抗IgE抗體的功能片段或類似物是這樣的一種功能 片段或類似物，即其可以以阻止或基本上降低此類分子結合高親和力受體Fc[ e ]RI的能 力的方式結合IgE免疫球蛋白。抗體經木瓜蛋白酶消化產生兩個相同的抗原結合片段（稱 為"Fab〃片段）和剩餘的〃Fc〃片段（這是反映出容易結晶能力的名稱）。Fab片段由整個 L鏈連同H鏈的可變區結構域（VH)，以及一條重鏈的第一恆定結構域（CH1)組成。在抗原 結合方面，每個Fab片段是單價的，S卩，它具有單個抗原結合位點。抗體經胃蛋白酶處理得 到單個大的F(ab'）2片段，其大致對應於具有二價抗原結合活性的兩個通過二硫鍵連接的 Fab片段並且仍然能夠交聯抗原。Fab'片段與Fab片段的不同之處在於在CH1結構域的羧 基末端處具有額外的少量殘基，包括來自抗體鉸鏈區的一個或多個半胱氨酸。Fab' -SH在 本文中是用於其中恆定結構域的一個或多個半胱氨酸殘基攜帶游離巰基的Fab'的名稱。 F(ab'）2抗體片段最初作為Fab'片段對產生，在Fab'片段對之間具有鉸鏈半胱氨酸。抗體 片段的其他化學偶聯也是已知的。
[0060] "人源化"或"人"抗體是指其中一個或多個人免疫球蛋白的恆定和可變框架區與 動物免疫球蛋白的結合區，例如，CDR融合的抗體。此類抗體被設計成保持從其獲得結合區 的非人抗體的結合特異性，但避免針對該非人抗體的免疫反應。此類抗體可以獲自轉基因 小鼠或其他動物，所述轉基因小鼠或其他動物已經被"工程化"以響應於抗原激發產生特異 性人抗體（參見，例如，Green 等人（1994)Nature Genet 7:13 ;Lonberg 等人（1994)Nature 368:856 ;Taylor等人（1994) Int Immun 6:579，它們的全部教導內容通過引用合併於本文 中）。完全人抗體也可以通過基因或染色體轉染法，以及噬菌體展示技術來構建，它們都是 本領域中已知的（參見，例如，McCafferty等人（1990)Nature 348:552-553)。人抗體也可 以通過體外激活的B細胞來產生（參加，例如，美國專利號5, 567, 610和5, 229, 275,它們 整體地通過引用併入）。因此，"靈長類源化"抗體是指其中一個或多個靈長類動物免疫球 蛋白的恆定和可變框架區與非靈長類動物免疫球蛋白的結合區，例如，CDR融合的抗體。
[0061] "嵌合抗體"是這樣的抗體分子，其中（a)恆定區或其部分被改變、替換或交換使得 抗原結合位點（可變區）連接至不同或改變的類型、效應器功能和/或物種的恆定區，或連 接至賦予所述嵌合抗體以新特性的完全不同的分子，例如，酶、毒素、激素、生長因子、藥物， 等；或（b)可變區或其部分被具有不同的或改變的抗原特異性的可變區改變、替換或交換。
[0062] "Fc"片段包括由二硫鍵連在一起的兩條H鏈的羧基-末端部分。抗體的效應器功 能由Fc區中的序列決定，該區也是由某些類型細胞上發現的Fc受體（FcR)所識別的部分。
[0063] "Fv"是含有完整的抗原識別和結合位點的最小抗體片段。此片段由一個重鏈可變 區結構域和一個輕鏈可變區結構域的二聚體以緊密的、非共價締合的方式組成。從這兩個 結構域的摺疊產生6個高變環（3個環各自來自於H鏈和L鏈），其促成用於抗原結合的氨 基酸殘基並且賦予抗體以抗原結合特異性。然而，甚至單個可變結構域（或包含僅三個對 抗原特異的CFR的Fv的一半）就具有識別並結合抗原的能力，儘管親和性比完整的結合位 點低。
[0064] "單鏈Fv"也縮寫為"sFv〃或"scFv"，其是包含連接形成單條多肽鏈的VH 和VL抗體結構域的抗體片段。優選地，sFv多肽在VH和VL結構域之間進一步包含 多肽接頭，其使得sFv能夠形成用於抗原結合的所需結構。對於sFv的綜述，參見， Pluckthun，The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113,Rosenburg 和 Moore 編，Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994) ;Borrebaeck 1995，見上。
[0065] 術語"雙價抗體（diabody) "是指通過下述方式製備的小抗體片段：構建在VH和 VL結構域之間具有短接頭（約5-10個殘基）的sFv片段（參見上一段），從而獲得V結構 域的鏈間配對而非鏈內配對，得到二價片段（即，具有兩個抗原結合位點的片段）。雙特異 性雙價抗體是兩個"交叉" sFv片段的異二聚體，其中兩個抗體的VH和VL結構域存在於不 同的多肽鏈上。雙價抗體更詳細地描述於，例如，EP 404,097 ;W0 93/11161 ;和Holliger等 人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993) 〇
[0066] 當在本文中使用時，如果抗體以可檢測的水平與抗原反應，優選地以大於或等於 約⑴言1，或大於或等於約lo5]^1，大於或等於約lo 6]^1，大於或等於約lOl1，或大於或等 於108M'，或大於或等於KAT1，或大於或等於lO^T1的親合常數Ka反應，則該抗體被稱 為對該抗原"是免疫特異的"、"特異的"或與該抗原"特異性結合"。抗體對其同族抗原的親 和性也通常表示為解離常數Kd，並且在某些實施方案中，如果抗體以小於或等於1(T 4M，小 於或等於約1(T5M，小於或等於約1(T6M，小於或等於1(T 7M，或小於或等於1(T8M，或小於或 等於5. 10_9M，或小於或等於10_9M，或小於或等於5. 10_、，或小於或等於10_、的Kd結合， 則該抗體與該抗原特異性結合。抗體的親合力可以容易地使用常規技術來確定，例如，由 Scatchard等人（Ann. N. Y. Acad. Sci. USA 51:660(1949))所述的那些。抗體與抗原、細胞或 其組織的結合特性通常可以使用免疫檢測法來測定和評估，所述免疫檢測法包括，例如，基 於免疫螢光的測定，諸如免疫組織化學（IHC)和/或螢光激活細胞分選（FACS)。
[0067] "分離的核酸"是與其他基因組DNA序列以及蛋白或複合物諸如核糖體和聚合酶 (它們天然地伴隨天然序列）基本上分離的核酸。該術語包括已經從其天然存在的環境移 出的核酸序列，並且包括重組或克隆的DNA分離物，和化學合成的類似物或通過異源系統 生物學合成的類似物。基本上純的核酸包括核酸的分離形式。當然，這是指如最初分離的 核酸並且不排除以後通過人工添加至分離的核酸的基因或序列。術語"多肽"以其常規含 義使用，即，作為胺基酸序列使用。多肽不限於特定長度的產品。肽、寡肽和蛋白質包括在 多肽的定義內，並且此類術語可以在本文中互換使用，除非以其他方式具體指明。此術語也 不是指或排除多肽的表達後修飾，例如，糖基化、乙醯化、磷酸化等，以及本領域中已知的其 他修飾，兩者均為天然存在的和非天然存在的。多肽可以是完整蛋白，或其子序列。在本發 明的語境中感興趣的特定多肽是包含CFR並且能夠結合抗原的胺基酸子序列。"分離的多 肽"是已經被鑑定和從其天然環境的成分中分離和/或回收的多肽。在優選的實施方案中， 分離的多肽將（1)如通過Lowry法測定被純化至多肽的大於95%重量比，最優選大於99% 重量比；（2)通過使用轉杯式測序儀被純化至足以獲得N-末端或內部胺基酸序列的至少15 個殘基的程度；或（3)如通過SDS-PAGE在還原或非還原條件下使用考馬斯藍（或優選地， 通過銀染色）被純化至均一。分離的多肽包括重組細胞內的原位多肽，因為多肽的天然環 境的至少一種成分將不存在。然而，一般地，分離的多肽將通過至少一個純化步驟製備。
[0068] "天然序列"多核苷酸是具有與來源於自然的多核苷酸相同的核苷酸序列的多核 苷酸。"天然序列"多肽是具有與來源於自然（例如，來源於任何物種）的多肽（例如，抗 體）相同的胺基酸序列的多肽。此類天然序列多核苷酸和多肽可以從自然分離或可以通 過重組或合成手段產生。多核苷酸"變體"，當該術語在本文中使用時，是與在本文中具體 公開的多核苷酸典型地有一個或多個置換、缺失、添加和/或插入的不同的多核苷酸。此類 變體可以是天然存在的或可以合成產生，例如，通過修飾本發明的一個或多個多核苷酸序 列，並如本文所述評價所編碼的多肽的一種或多種生物學活性和/或使用本領域中熟知的 多種技術中的任一種。多肽"變體"，當該術語在本文中使用時，是與在本文中具體公開的 多肽典型地有一個或多個置換、缺失、添加和/或插入的不同的多肽。此類變體可以是天然 存在的或可以合成產生，例如，通過修飾本發明的一個或多個上述多肽序列，並如本文所述 評價所述多肽的一種或多種生物學活性和/或使用本領域中熟知的多種技術中的任一種。 修飾可以在本發明的多核苷酸和多肽的結構中做出，並且仍然可以獲得編碼具有所需特徵 的變體或衍生多肽的功能分子。當需要改變多肽的胺基酸序列以形成本發明的多肽的變 體或部分的等效物，或甚至改良的本發明的多肽的變體或部分時，本領域專業技術人員將 典型地改變一個或多個編碼DNA序列的密碼子。例如，在蛋白質結構中某些胺基酸可以被 置換為其他的胺基酸而不顯著地喪失其結合其他多肽（例如，抗原）或細胞的能力。由於 限定蛋白質生物學功能活性的是蛋白質的結合能力和性質，因此可以在蛋白質序列中（並 且當然可以在其基礎的DNA編碼序列中）做出某些胺基酸序列置換，並且儘管如此仍獲得 具有相似性質的蛋白質。因此考慮可以在公開的組合物的肽序列中，或編碼所述肽的相應 DNA序列中做出多種變化，而不顯著地喪失它們的生物學效用或活性。在許多情況下，多肽 變體將含有一個或多個保守置換。"保守置換"是其中胺基酸被置換為具有相似性質的另 一胺基酸，使得肽化學領域中的專業技術人員將預期所述多肽的二級結構和疏水性質將基 本上不會改變的置換。如上所述，胺基酸置換因此通常基於胺基酸側鏈取代基的相對相似 性，例如，它們的疏水性、親水性、電荷、尺寸等。考慮到多種前述特徵的示例性置換是本領 域技術人員所熟知的並且包括：精氨酸和賴氨酸；穀氨酸和天冬氨酸；絲氨酸和蘇氨酸；谷 氨醯胺和天冬醯胺；以及纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸。胺基酸置換可以進一步基於殘基的極 性、電荷、溶解度、疏水性、親水性和/或兩親性質的相似性做出。例如，帶負電荷的胺基酸 包括天冬氨酸和穀氨酸；帶正電荷的胺基酸包括賴氨酸和精氨酸；和具有相似的親水性值 的帶有不帶電荷的極性頭基的胺基酸包括亮氨酸，異亮氨酸和纈氨酸；甘氨酸和丙氨酸； 天冬醯胺和穀氨醯胺；以及絲氨酸，蘇氨酸，苯丙氨酸和酪氨酸。可以代表保守變化的其 他組胺基酸包括：（1) ala, pro, gly, glu, asp, gin, asn, ser, thr ; (2) cys, ser, tyr, thr ; (3) val，ile，leu, met, ala, phe ; (4) lys，arg，his ;和（5)phe，tyr，trp，his〇 變體還可以，或可 選地，含有非保守變化。在優選的實施方案中，變體多肽與天然序列的不同為置換、缺失或 添加5個或更少的胺基酸。變體還可以（或可選地）通過，例如，缺失或添加對多肽的免疫 原性、二級結構和疏水性質具有最小影響的胺基酸來修飾。
[0069] 術語"同一性"或"相同的"，當用於兩個或多個多肽的序列之間的關係時，是 指多肽之間的序列關聯性程度，如通過多串兩個或更多個胺基酸殘基之間的匹配數目 來確定。"同一性"測量兩個或多個序列中的較小者與由特定數學模型或電腦程式 (即，"算法"）所找到的空位比對（如果有的話）之間的相同匹配的百分比。相關多肽 的同一性可以容易地通過已知方法計算。此類方法包括，但不限於，在Computational Molecular Biology (計算分子生物學），Lesk, A. M.，編輯，Oxford University Press, New York, 1988 ;Biocomputing:Informatics and Genome Projects(生物計算：信息學和基 因組計劃），Smith, D.W.,編輯，Academic Press, New York, 1993 ;Computer Analysis of Sequence Data (序列的計算機分析），第 1 部分，Griff in, A. M?，和 Griff in, H.G.,編輯， Humana Press, New Jersey, 1994 ；Sequence Analysis in Molecular Biology (分子生物 學中的序列分析），von Heinje，G.，Academic Press，1987;Sequence Analysis Primer (序 列分析引物），Gribskov，M?和 Devereux，J.，編輯，M.Stockton Press，New York，1991 ;和 Carillo等人，SIAM J. Applied Math. 48,1073(1988)中描述的那些。優選的用於確定同 一性的方法被設計為給出所測試的序列之間的最大匹配。確定同一性的方法記述於可公 共獲得的電腦程式中。優選的用於確定兩條序列之間的同一性的電腦程式方法包括 GCG 程序包，包括 GAP (Devereux 等人，Nucl. Acid. Res. \2, 387 (1984) ;Genetics Computer Group，University of Wisconsin，Madison，Wis.)、BLASTP、BLASTN，和 FASTA(Altschul 等 人，J. Mol. Biol. 215, 403-410 (1990))。BLASTX程序可從國家生物技術信息中心（NCBI)和 其他來源（BLAST Manual, Altschul 等人 NCB/NLM/NIH Bethesda，Md. 20894 ;Altschul 等 人，見上）公開獲得。熟知的Smith Waterman算法也可以用於確定同一*性。
[0070]"哺乳動物"當在本文中使用時，是指任何哺乳動物，包括人、家畜和農場動物，以 及動物園動物、運動動物或寵物動物，諸如犬、貓、牛、馬、綿羊、豬、山羊、兔，等。優選地，哺 乳動物是人。在一個實施方案中，哺乳動物是雄性的。在另一個實施方案中，哺乳動物是雌 性的。
[0071]"治療"或"緩解"是指治療性治療和預防或預後性措施兩者；其中目的是防止或減 緩（減輕）目標的病理狀況或病症。需要治療的那些包括已經患有病症的那些以及易於患 有病症的那些或待預防病症的那些。如果根據本發明的方法在接受治療量的抗體後，患者 顯示出可觀察到的和/或可測量到的下列一項或多項的減少或缺少下列一項或多項，則成 功地"治療"了受試者或哺乳動物的感染：致病細胞數目的減少；總細胞中致病性細胞百分 比減少；和/或與具體疾病或病況相關的一種或多種症狀一定程度地緩解；降低的發病率 和死亡率，以及生活質量問題的改善。用於評估成功治療和改善疾病的上述參數容易通過 臨床醫生熟悉的常規規程來測量。
[0072] 術語"治療有效量"是指有效"治療"受試者或哺乳動物中的疾病或病症的抗體或 藥物的量。
[0073] 發明
[0074] 本發明涉及分離的抗SPLA2-IIA的抗體。
[0075]抗體抗-SPLA2-IIA
[0076] 本發明的一個目的是抗人SPLA2-IIA的抗體，其中所述抗體的結合人SPLA2-IIA 的 Kd 小於 9. lO'M,優選小於 8. lO'M, 7. lO'M, 6. lO'M, 5. lO'M, 4. lO'M,更優選小於 3. 10_、且甚至更優選小於2. l〇-1QM。
[0077] Kd可以在試驗A的條件下測定：
[0078] 微板孔用PBS pH 7. 5中的50ng重組人SPLA2-IIA在室溫下包被過夜。然後用含 有0. 05% Tween 20的PBS洗滌樣品孔三次。在最後的洗滌後，用含有在PBS緩衝液中的 1%牛血清白蛋白（BSA)的封閉溶液在室溫下處理樣品孔60分鐘。在用含有0.05% Tween 20的PBS洗滌後，將增加量（0. Ing/mL直達10 y g/mL)的抗人PLA2-IIA的mAb添加至抗 原包被的孔，並且在室溫下孵育120min。在用含有0. 05% Tween 20的PBS洗滌後，通過用 HRP-綴合的多克隆山羊抗鼠IgG(Abcam ab7068)在室溫下處理60min來檢測mAb的結合。 添加TMB，通過添加HC1終止反應，並在450nm測定吸光度。數據用單址飽和模型擬合，並從 該模型估算相對Kd值。
[0079] 本發明的一個目的是抗人SPLA2-IIA的抗體，其中重鏈可變區包含下列⑶R中的 至少一種：
[0080] VH-CDR1:GYTFTS(SEQ IDN0:1)或 GFTFSS(SEQ IDN0:7);
[0081] VH-CDR2:WIFP⑶GSTE(SEQIDN0:2)或AINSNGGSTY(SEQIDN0:8);和
[0082] VH-CDR3:WGITAFPLFDY(SEQ ID NO:3)或 QGYGNFFDY(SEQ ID NO:9)。
[0083] ⑶R編號和定義依照Chothia定義。
[0084] 本發明的另一個目的是抗人sPLA2-IIA的抗體，其中輕鏈可變區包含下列CDR中 的至少一種：
[0085] VL-CDR1:RASESVDYD⑶SYMN(SEQ ID N0:4)或 RSSQSIVHSNGNTYLY(SEQ ID N0:10);
[0086] VL-CDR2:AASNLES(SEQ ID NO:5)或 RVSNRFS(SEQ ID NO:ll);和
[0087] VL-CDR3:LQSNEAPWT(SEQ ID NO:6)或 FQGTHVPRT(SEQ ID NO:12)。
[0088] 在本發明的一個實施方案中，抗體抗-SPLA2-IIA在其重鏈中包含GYTFTS(SEQ ID NO:l)或 GFTFSS(SEQ ID NO:7)中的一個 VH-CDR1，WIFP ⑶ GSTE(SEQ ID NO:2) 或 AINSNGGSTY(SEQ ID NO:8)中的一個VH-CDR2 和 WGITAFPLFDY(SEQ ID NO:3)或 QGYGNFFDY(SEQ ID N0:9)中的一個 VH-CDR3。
[0089] 在本發明的另一個實施方案中，抗體抗-SPLA2-IIA在其輕鏈中包含 RASESVDYD⑶SYMN(SEQ ID N0:4)或 RSSQSIVHSNGNTYLY(SEQ ID N0:10)中的一個 VL-CDR1， AASNLES(SEQ ID N0:5)或RVSNRFS(SEQ ID N0:11)中的一個VL-CDR2和LQSNEAPWT(SEQ ID N0:6)或 FQGTHVPRT(SEQ ID N0:12)中的一個 VL-CDR3。
[0090] 在本發明的另一個實施方案中，抗體抗-SPLA2-IIA在其重鏈中包含3個⑶R :SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2 和 SEQ ID NO:3。
[0091] 在本發明的另一個實施方案中，抗體抗-SPLA2-IIA在其重鏈中包含3個⑶R :SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8 和 SEQ ID NO:9。
[0092] 在本發明的另一個實施方案中，抗體抗-SPLA2-IIA在其輕鏈中包含3個⑶R :SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5 和 SEQ ID NO:6。
[0093] 在本發明的另一個實施方案中，抗體抗-SPLA2-IIA在其輕鏈中包含3個⑶R :SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11 和 EQ ID NO:12。
[0094] 根據本發明，重鏈和輕鏈的CDR 1、2和3中的任一個可以表徵為具有與在相應的 SEQ ID NO 中列舉的特定的CDR或CDR組共享至少60%、70%、75%、80%、90%、95%、96%、 97%、98%、99%的同一性的胺基酸序列。
[0095] 在本發明的另一個實施方案中，抗體抗-SPLA2-IIA選自由下列各項組成的組：
[0096] -具有⑴分別如SEQ ID N0:l、2和3中所示的重鏈CDR 1、2和3(VH-CDR1、 VH-⑶R2、VH-⑶R3)胺基酸序列和（ii)分別如SEQ ID N0:4、5和6中所示的輕鏈⑶R 1、2 和3(VL-CDR1、VL-CDR2、VL-CDR3)胺基酸序列的抗體；
[0097] -具有⑴分別如SEQ ID N0:7、8和9中所示的重鏈CDR 1、2和3(VH-CDR1、 VH-⑶R2、VH-⑶R3)胺基酸序列和（ii)分別如SEQ ID N0:10、ll和12中所示的輕鏈⑶R 1、2 和 3(VL-CDR1、VL-CDR2、VL-CDR3)胺基酸序列的抗體；
[0098] 任選地，其中所述序列中任一個中的一個、兩個、三個或更多個胺基酸可以被不同 的胺基酸置換。
[0099] 在本發明的另一個實施方案中，抗體抗-sPLA2-IIA(6G2抗體）包含序列SEQ ID NO: 13的重鏈可變區和序列SEQ ID NO: 14的輕鏈可變區。
[0100] (SEQ ID NO: 13)
[0101] QVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYDINWVRQRPEQGLEWIGWIFP⑶GSTEYNEKFKGKAT LTTDKSSSTAYMQLSRLTSEDSAVYFCARWGITAFPLFDYWGQGTALTVSS
[0102] (SEQ ID NO: 14)
[0103] DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDYD⑶SYMNWYQQKPGQPPKLLIYAASNLESGIPARFSGS GSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCLQSNEAPWTFGGGTKLEIKR
[0104] 在本發明的另一個實施方案中，抗-SPLA2-IIA抗體（9C8抗體）包含序列SEQ ID NO: 15的重鏈可變區和序列SEQ ID NO: 16的輕鏈可變區。
[0105] (SEQ ID NO: 15)
[0106] DVELVESGGGLVKLGGSLKLSCAASGFTFSSYYMSWVRQTPEKRLELVAAINSNGGSTYYPDTVKGRFT ISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTALYYCARQGYGNFFDYWGQGTTLTVSS
[0107] (SEQIDNO: 16)
[0108] DWMTQTPLSLPVSL⑶QASISCRSSQSIVHSNGNTYLYWYLQKPGQSPKLLIYRVSNRFSGVPDRFSG SGSGTDFTLKISRVEAEDMGVYYCFQGTHVPRTFGGGTNLEIKR
[0109] 根據本發明，重鏈或輕鏈可變區的一個、兩個、三個或更多個胺基酸可以被不同的 胺基酸置換。
[0110] 根據本發明，重鏈可變區涵蓋與SEQ ID N0:13或15具有60%、70%、75%、80%、 90%、95%、96%、97%、98%、99% 的同一性的序列。
[0111] 根據本發明，輕鏈可變區涵蓋與SEQ ID勵：14或16具有60%、70%、75%、80%、 90%、95%、96%、97%、98%、99% 的同一性的序列。
[0112] 在本發明的任一抗體中，例如，6G2和9C8,指定的可變區和⑶R序列可以包含保守 序列修飾。保守序列修飾是指不顯著地影響或改變包含胺基酸序列的抗體的結合特性的氨 基酸修飾。這種保守修飾包括胺基酸置換、添加和缺失。可以通過本領域中已知的標準技術 將修飾引入至本發明的抗體中，諸如定向誘變和PCR介導的誘變。保守胺基酸置換典型地 是其中胺基酸殘基被帶有具有相似物理化學性質的側鏈的胺基酸殘基替換的那些。指定的 可變區和CDR序列可以包含一個、兩個、三個、四個或更多個胺基酸插入、缺失或置換。在進 行置換的情況下，優選的置換將是保守修飾。具有相似側鏈的胺基酸殘基的家族在本領域 中已經被定義。這些家族包括具有鹼性側鏈的胺基酸（例如，賴氨酸、精氨酸、組氨酸），具 有酸性側鏈的胺基酸（例如，天冬氨酸、穀氨酸），具有不帶電荷的極性側鏈的胺基酸（例 如，甘氨酸，天冬醯胺、穀氨醯胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸），具有非極性 側鏈的胺基酸（例如，丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸），具有 0-分支的側鏈的胺基酸（例如，蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸）和具有芳香族側鏈的胺基酸 (例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸）。因此，本發明的抗體的CDR區內的一個或多個 胺基酸殘基可以用來自相同側鏈家族的其他胺基酸殘基替換，並且可以使用本文所述的測 定法測試改變的抗體的保留功能（即，本文所給出的特性）。
[0113] 在一個實施方案中，本發明還提供了一種抗體，其結合的表位與6G2或9C8抗體 基本上相同。在本發明中，結合與6G2或9C8抗體基本上相同的表位的抗體將分別稱為 6G2-樣或9C8-樣抗體。
[0114] 本發明的另一目的是一種分離的核酸序列，其編碼序列SEQ ID N0:13的重鏈可變 區。優選地，所述核酸序列是 SEQ ID N0:17(CAG GIT CAG CTG CAG CAG TCT GGA GCT GAA CTG GTA MG CCT GGG GCT TCA GTG MG TTG TCC TGC AAG GCT TCT GGC TAC ACC TTC ACA AGC TAT GAT ATA MC TGG GTG AGG CAG AGG CCT GAA CAG GGA CTT GAG TGG ATT GGA TGG ATT TTT CCT GGA GAT GGT AGT ACT GAG TAC AAT GAG AAG TTC AAG GGC AAG GCC ACA CTG ACT ACA GAC AAA TCC TCC AGC ACA GCC TAC ATG CAG CTC AGC AGG CTG ACA TCT GAG GAC TCT GCT GTC TAT TTC TGT GCA AGG TGG GGT ATT ACG GCT TTC CCC CTT TTT GAC TAC TGG GGC CAA GGC ACC GCT CTC ACA GTC TCC TCA)〇
[0115] 本發明的另一目的是一種分離的核酸序列，其編碼序列SEQ ID N0:14的輕鏈可變 區。優選地，所述核酸序列是 SEQ ID NO: 18 (GAC AIT GTG CTG ACC CAA TCT CCA GCT TCT TTG GCT GTG TCT CTA GGG CAG AGG GCC ACC ATC TCC TGC AGA GCC AGC GM AGT GTT GAT TAT GAT GGC GAT AGT TAT ATG MC TGG TAC CM CAG AM CCA GGA CAG CCA CCG AM CTC CTC ATC TAT GCT GCA TCC MT CTA GAA TCT GGG ATC CCT GCC AGG TTT AGT GGC AGT GGG TCT GGG ACA GAC TTC ACC CTC MC ATT CAT CCT GTG GAG GAG GAG GAT GCT GCA ACC TAT TAC TGT CTG CAA AGT MT GAG GCT CCG TGG ACG TTC GGT GGA GGC ACC AAG CTG GM ATC AAA CGG)〇
[0116] 本發明的另一目的是一種分離的核酸序列，其編碼序列SEQ ID NO:15的重鏈可變 區。優選地，所述核酸序列是 SEQ ID NO: 19 (GAC GTG GAG CTC GTG GAG TCT GGG GGA GGC TTA GTG MG CTT GGA GGG TCC CTA AAA CTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACT TTC AGT AGC TAT TAC ATG TCT TGG GTT CGC CAG ACT CCA GAG AAG AGG CTG GAG TTG GTC GCA GCC ATT MT AGT MT GGT GGT AGC ACC TAC TAT CCA GAC ACT GTG AAG GGC CGA TTC ACC ATC TCC AGA GAC MT GCC MG MC ACC CTG TAC CTG CM ATG AGC AGT CTG AAG TCT GAG GAC ACA GCC TTG TAT TAC TGT GCA AGA CAG GGG TAT GGT AAC TTC TTT GAC TAC TGG GGC CM GGC ACC ACT CTC ACA GTC TCC TCA)〇
[0117] 本發明的另一目的是一種分離的核酸序列，其編碼序列SEQ ID N0:16的輕鏈可變 區。優選地，所述核酸序列是 SEQ ID NO: 20 (GAT GIT GTG ATG ACC CAA ACT CCA CTC TCC CTG CCT GTC AGT CTT GGA GAT CAA GCC TCC ATC TCT TGT AGA TCT AGT CAG AGC ATT GTA CAC AGT MT GGA MC ACC TAT TTA TAT TGG TAC CTG CAG AM CCA GGC CAG TCT CCA AAG CTC CTG ATC TAC AGG GTT TCC MC CGA TTT TCT GGG GTC CCA GAC AGG TTC AGT GGC AGT GGA TCA GGG ACA GAT TTC ACA CTC MG ATC AGC AGA GTG GAG GCT GAG GAT ATG GGA GTT TAT TAC TGC TTT CAA GGT ACA CAT GTT CCT CGG ACG TTC GGT GGA GGC ACC AAC TTG GM ATC AAA CGG)〇
[0118] 本發明的另一目的是包含編碼本發明的抗體抗-sPLA2-IIA的核酸序列的表達載 體。在一個實施方案中，本發明的表達載體包含SEQ ID N0:17、SEQ ID N0:18、SEQ ID N0:19 和SEQ ID N0:20中的至少一個或具有與所述SEQ ID勵：17-20共享至少60%、70%、75%、 80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%的同一性的核酸序列的任何序列。
[0119] 本發明的另一目的是包含所述載體的分離的宿主細胞。所述宿主細胞可以用於重 組生產本發明的抗體。
[0120] 本發明的另一目的是產生本發明的所述抗體的雜交瘤細胞系。
[0121] 根據本發明的優選雜交瘤細胞系保藏於法國國立微生物保藏中心（Collection Nationale de Culture de Microorganismes(CNCM))(Institut Pasteur, 25rue du Docteur Roux, 75014Paris):
[0122]

【權利要求】
1. 一種抗人SPLA2-IIA的分離的抗體，其中所述抗體的結合人SPLA2-IIA的Kd小於 9. KT10M0
2. 根據權利要求1所述的抗人SPLA2-IIA的分離的抗體，其中重鏈的可變區包含下面 ⑶R中的至少一種： VH-CDRl:GYTFTS(SEQ ID NO:1); VH-CDR2:WIFP⑶GSTE(SEQ ID N0:2);和 VH-CDR3:WGITAFPLFDY(SEQ ID N0:3)， 或具有與SEQ ID NO: 1-3具有至少60%同一性的胺基酸序列的任何⑶R， 或其中輕鏈的可變區包含下面⑶R中的至少一種： VL-CDR1:RASESVDYD⑶SYMN(SEQ ID N0:4); VL-CDR2:AASNLES(SEQ ID N0:5);和 VL-CDR3:LQSNEAPWT(SEQ ID N0:6)， 或具有與SEQ ID N0:4-6具有至少60%同一性的胺基酸序列的任何⑶R。
3. 根據權利要求1-2中任一項所述的抗人SPLA2-IIA的分離的抗體，其中重鏈的可變 區包含如權利要求2中所定義的CDR中的至少一種且輕鏈的可變區包含如權利要求2中所 定義的⑶R中的至少一種。
4. 根據權利要求1-3中任一項所述的抗人SPLA2-IIA的分離的抗體，其中重鏈的可變 區包含下列 CDR:GYTFTS(SEQ ID N0:1)、WIFP⑶GSTE(SEQ ID N0:2)和WGITAFPLFDY(SEQ ID N0:3)並且輕鏈的可變區包含下列 CDR:RASESVDYD⑶SYMN(SEQ ID N0:4)、AASNLES(SEQ ID NO:5)和LQSNEAPWT (SEQ ID NO: 6)，或具有與所述SEQ ID NO:1-6具有至少60%同一性的 胺基酸序列的任何CDR。
5. 根據權利要求1-4中任一項所述的抗人SPLA2-IIA的分離的抗體，其中編碼重鏈可 變區的胺基酸序列是SEQ ID NO: 13且編碼輕鏈可變區的胺基酸序列是SEQ ID NO: 14,或具 有與所述SEQ ID NO: 13-14具有至少60%同一性的胺基酸序列的任何⑶R。
6. 包含根據權利要求1-5中任一項所述的抗人SPLA2-IIA的抗體的組合物。
7. 根據權利要求1-5中任一項所述的抗人SPLA2-IIA的抗體，其用於治療 SPLA2-IIA-相關的病況。
8. 根據權利要求1-5中任一項所述的抗人SPLA2-IIA的抗體用於檢測生物學樣品中的 SPLA2-IIA 的用途。
9. 一種體外診斷或預後分析法，其使用根據權利要求1-5中任一項所述的抗人 SPLA2-IIA的抗體確定生物學樣品中SPLA2-IIA的存在。
10. 根據權利要求9所述的體外診斷或預後分析法，其中所述分析法是使用權利要求4 所述的抗體作為包被抗體並使用下列抗體作為顯示抗體的夾心ELISA，在作為顯示抗體的 抗體中： -重鏈的可變區包含下面⑶R中的至少一種： VH-CDRl:GFTFSS(SEQ ID NO:7); VH-CDR2:AINSNGGSTY(SEQ ID N0:8);和 VH-CDR3:QGYGNFFDY(SEQ ID N0:9)， 或具有與SEQ ID N0:7-9具有至少60%同一性的胺基酸序列的任何⑶R，或 -輕鏈的可變區包含下面⑶R中的至少一種： VL-CDRl:RSSQSIVHSNGNTYLY(SEQ ID NO:10); VL-CDR2:RVSNRFS(SEQ ID N0:11);和 VL-CDR3:FQGTHVPRT(SEQ ID N0:12), 或具有與SEQ ID NO: 10-12具有至少60%同一性的胺基酸序列的任何⑶R。
11. 根據權利要求10所述的體外診斷或預後分析法，其中所述顯示抗體的重鏈可變區 包含如權利要求10中所定義的CDR中的至少一種，並且所述顯示抗體的輕鏈可變區包含如 權利要求10中所定義的CDR中的至少一種。
12. 根據權利要求10或11所述的體外診斷或預後分析法，其中所述顯示抗體的重鏈可 變區包含下列CDR:GFTFSS(SEQ ID N0:7)、AINSNGGSTY(SEQ ID N0:8)和QGYGNFFDY(SEQ ID N0:9)並且所述顯示抗體的輕鏈可變區包含下列CDR:RSSQSIVHSNGNTYLY(SEQ ID N0:10)、 RVSNRFS(SEQIDN0:ll)和FQGTHVPRT(SEQIDN0:12)，或具有與所述SEQIDN0:7-12具 有至少60%同一性的胺基酸序列的任何⑶R。
13. 根據權利要求10-12中任一項所述的體外診斷或預後分析法，其中編碼所述顯示 抗體的重鏈可變區的胺基酸序列是SEQ ID NO: 15,且編碼所述顯示抗體的輕鏈可變區的氨 基酸序列是SEQ ID NO: 16,或是具有與所述SEQ ID NO: 15-16具有至少60%同一性的氨基 酸序列的任何序列。
14. 一種試劑盒，其包含至少一種根據權利要求1-5中任一項所述的抗人SPLA2-IIA的 抗體。
15. 根據權利要求14所述的試劑盒，其包含權利要求4所述的抗體和根據權利要求 10-12所述的顯示抗體。
16. -種表達載體，其包含SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19和SEQ ID NO:20 中的至少一種，或包含具有與所述SEQ ID NO: 17-20具有至少60%同一性的核酸序列的任 何序列。
17. 保藏號為CNCM 1-4587和CNCM 1-4588的產生抗人SPLA2-IIA的抗體的雜交瘤細 胞系。
【文檔編號】C07K16/40GK104520332SQ201380026328
【公開日】2015年4月15日 申請日期:2013年3月22日 優先權日:2012年3月23日
【發明者】G·朗博, E·瓦倫廷, M·雷恩諾 申請人:國家科學研究中心, 尼斯大學