洛莫司汀的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用的製作方法

2023-04-30 05:40:46 3

本發明屬於生物醫藥領域，涉及洛莫司汀的新用途，具體涉及洛莫司汀的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用。
背景技術：
：洛莫司汀為細胞周期非特異性藥，對處於G1-S邊界，或S早期的細胞最敏感，對G2期亦有抑制作用。本品進入人體後，其分子從氨甲醯胺鍵處斷裂為兩部分：一為氯乙胺部分，將氯解離，形成乙烯碳正離子，發揮烴化作用，致使DNA鏈斷裂，RNA及蛋白質受到烴化，這些主要與抗瘤作用有關。技術實現要素：本發明的目的在於提供一種洛莫司汀的藥物組合物，該藥物組合物中含有洛莫司汀和一種結構新穎的天然產物，洛莫司汀和該天然產物可以協同治療癲癇。本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：一種具有下述結構式的化合物(Ⅰ)，一種洛莫司汀的藥物組合物，包括洛莫司汀、如權利要求1所述的化合物(Ⅰ)和藥學上可以接受的載體，製備成需要的劑型。進一步地，藥學上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、溼潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。進一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、衝劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。上述化合物(Ⅰ)的製備方法，包含以下操作步驟：(a)將虎杖粉碎，用60～70％乙醇熱回流提取，合併提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用10％乙醇洗脫12個柱體積，再用70％乙醇洗脫15個柱體積，收集70％洗脫液，減壓濃縮得70％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中70％乙醇洗脫濃縮物用正相矽膠分離，依次用體積比為50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；(d)步驟(c)中組分4用正相矽膠進一步分離，依次用體積比為10:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基矽烷鍵合的反相矽膠分離，用體積百分濃度為70％的甲醇水溶液等度洗脫，收集7～13個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)。進一步地，化合物(Ⅰ)的製備方法中，步驟(a)用65％乙醇熱回流提取，合併提取液。進一步地，化合物(Ⅰ)的製備方法中，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。進一步地，化合物(Ⅰ)的製備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進行萃取，得到二氯甲烷萃取物。上述化合物(Ⅰ)在製備治療癲癇的藥物中的應用。上述洛莫司汀的藥物組合物在製備治療癲癇的藥物中的應用。本發明的優點：本發明提供的洛莫司汀的藥物組合物中含有洛莫司汀和一種結構新穎的天然產物，洛莫司汀、化合物(Ⅰ)單獨作用時，對癲癇具有治療作用；洛莫司汀和化合物(Ⅰ)聯合作用時，對癲癇的治療效果進一步提高，可以開發成治療癲癇的藥物。具體實施方式下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但並不以此限定本發明保護範圍。實施例1：化合物(Ⅰ)分離製備及結構確證分離方法：(a)將虎杖(2kg)粉碎，用65％乙醇熱回流提取(20L×3次)，合併提取液，濃縮至無醇味(4L)，依次用石油醚(4L×3次)、乙酸乙酯(4L×3次)和水飽和的正丁醇(4L×3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用10％乙醇洗脫12個柱體積，再用70％乙醇洗脫15個柱體積，收集70％洗脫液，減壓濃縮得70％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中70％乙醇洗脫濃縮物用正相矽膠分離，依次用體積比為50:1(8個柱體積)、25:1(8個柱體積)、15:1(8個柱體積)和5:1(10個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；(d)步驟(c)中組分4用正相矽膠進一步分離，依次用體積比為10:1(8個柱體積)、5:1(10個柱體積)和2:1(5個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基矽烷鍵合的反相矽膠分離，用體積百分濃度為70％的甲醇水溶液等度洗脫，收集7～13個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)(純度大於98％)。結構確證：HR-ESI-MS顯示[M+H]+為m/z219.1161，結合核磁特徵可得分子式為C15H22O，不飽和度為5。核磁共振氫譜數據δH(ppm，CDCl3，500MHz)：H-1β(1.78，m)，H-2α(2.23，m)，H-2β(1.76，m)，H-3(5.54，J＝7.8，4.8Hz)，H-5(2.67，dd，J＝11.4，7.8Hz)，H-6α(2.09，m)，H-6β(1.68，m)，H-8α(1.37，m)，H-8β(1.56，m)，H-9α(1.74，m)，H-9β(1.71，m)，H-12(1.72，s)，H-13a(4.45，s)，H-13b(4.76，s)，H-14(1.37，s)，H-15(1.84，s)；核磁共振碳譜數據δC(ppm，CDCl3，125MHz)：47.5(CH，1-C)，32.1(CH2，2-C)，121.2(CH，3-C)，134.1(C，4-C)，51.2(CH，5-C)，25.3(CH2，6-C)，90.2(C，7-C)，34.3(CH2，8-C)，39.5(CH2，9-C)，85.7(C，10-C)，145.4(C，11-C)，30.8(CH3，12-C)，112.2(CH2，13-C)，24.6(CH3，14-C)，33.3(CH3，15-C)。化合物的氫譜中顯示該化合物有三個單峰甲基信號(δH1.72，1.37和1.84)，一個末端雙鍵質子信號[δH4.45(1H，s)和4.76(1H，s)]，以及一個烯屬次甲基質子信號[δH5.54(1H，J＝7.8，4.8Hz)]。該化合物的碳譜顯示15個碳信號，其中有兩組雙鍵碳信號，以及兩個連氧碳信號。綜合高分辨質譜以及核磁數據，該化合物可能為一個倍半萜類化合物。查閱文獻可以看出該化合物和已知化合物7α,10α-Epoxyguaiane-4α,11-diol具有相似的結構。比較兩者的核磁以及高分辨數據發現，新化合物中相較於7α,10α-Epoxyguaiane-4α,11-diol最大的區別是多出了兩個不飽和度即兩個雙鍵。在新化合物的HMBC譜中，H-15/C-3，H-15/C-4，H-3/C-4之間的相關性說明C-3和C-4位為雙鍵。同時，H-12/C-7，H-12/C-13，H-13/C-7，H-13/C-11之間的相關性說明該化合物中存在的另一個末端雙鍵位於C-11和C-13位。因此，該化合物仍然是一個C-10、C-7位形成氧橋的愈創木烷型倍半萜。ROESY譜中，H-5與H-1，H-14/H-1，H-14/H-8β之間的相關信號可以推斷該化合物H-1、H-5和H-14都是位於β位的。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和ROESY譜，以及文獻關於相關類型核磁數據，可基本確定該化合物如下所示，立體構型進一步通過ECD試驗確定，理論值與實驗值基本一致。該化合物化學式及碳原子編號如下：實施例2：藥理作用本實施例以大鼠腹腔注射青黴素600萬U/kg製作癲癇模型，觀察藥物治療癲癇的效果。1、材料與方法1.1動物Wistar大鼠90隻，雌雄各半，體重120±20g，由黑龍江中醫藥大學實驗動物中心提供。1.2試劑與樣品洛莫司汀購自中國藥品生物製品檢定所。化合物(Ⅰ)自製，製備方法見實施例1。苯妥英鈉：天津市力生製藥總廠生產；青黴素：哈爾濱製藥總廠；烏拉坦：哈爾濱製藥總廠。1.3儀器LMB-2B型二道生理記錄儀：成都儀器廠生產。1.4動物分組及模型製備取大鼠50隻，雌雄各半，隨機分為5組，每組10隻，分別為：模型對照組、陽性對照組(苯妥英鈉4.2mg·kg-1)、洛莫司汀組(80mg·kg-1)、化合物(Ⅰ)組(80mg·kg-1)、洛莫司汀與化合物(Ⅰ)組合物組【40mg·kg-1洛莫司汀+40mg·kg-1化合物(Ⅰ)】。各組給藥組按照各自劑量給藥，均為口服灌胃給藥。模型組灌服同體積水。各組動物均在給藥或蒸餾水1h後，腹腔注射青黴素600萬U/kg，觀察大鼠行為。1.5癲癇大鼠驚厥潛伏期測定實驗腹腔注射青黴素後，觀測各組小鼠癇性發作行為及癇性發作的潛伏期。1.6大鼠癇性發作程度觀測實驗癇性發作行為觀察，參照Racine標準：0級：無反應或抽搐停止。Ⅰ級：節律性嘴或面部抽動。Ⅱ級：點頭或甩尾。Ⅲ級：單肢抽動。Ⅳ級：多肢抽動或強直。Ⅴ級：全面性強直-陣攣發作。1.7統計學方法實驗數據用均數±標準差表示，應用SPSS18.0版統計軟體進行單因素方差分析和t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。2、實驗結果2.1對青黴素誘導癲癇大鼠驚厥潛伏期的影響與模型對照組比較，陽性對照組大鼠驚厥潛伏期顯著延長(P＜0.01)；與模型對照組相比，洛莫司汀與化合物(Ⅰ)組合物組大鼠驚厥潛伏期顯著延長(P＜0.01)；與模型對照組比較，洛莫司汀組、化合物(Ⅰ)組大鼠驚厥潛伏期延長(P＜0.05)。結果見表1。2.2對青黴素誘導大鼠癇性發作程度的影響與模型對照組比較，陽性對照組大鼠癇性發作程度顯著減小(P＜0.01)；與模型對照組相比，洛莫司汀與化合物(Ⅰ)組合物組大鼠癇性發作程度顯著減小(P＜0.01)；與模型對照組比較，洛莫司汀組、化合物(Ⅰ)組大鼠癇性發作程度減小(P＜0.05)。見表2。表1對青黴素誘導癲癇大鼠驚厥潛伏期的影響組別潛伏期(s)驚厥百分率(％)模型對照組45.4±16.9100％陽性對照組87.5±17.370％洛莫司汀組73.3±18.380％化合物(Ⅰ)組72.7±18.680％洛莫司汀與化合物(Ⅰ)組合物組85.2±18.870％表2對青黴素誘導大鼠癇性發作程度的影響青黴素是經典的致癇劑，其急性或點燃癲癇動物模型已獲公認。青黴素能抑制GABA能神經元，引起抑制性突觸活動減弱或興奮性突觸活動增強，從而導致神經元興奮性增高。當神經元興奮性突觸後電位(EPSP)綜合超過一定閾值即可產生陣發性去極化飄移(PDS)。結果表明，洛莫司汀、化合物(Ⅰ)單獨作用時，對癲癇具有治療作用；洛莫司汀和化合物(Ⅰ)聯合作用時，對癲癇的治療效果進一步提高，可以開發成治療癲癇的藥物。上述實施例的作用在於說明本發明的實質性內容，但並不以此限定本發明的保護範圍。本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質和保護範圍。當前第1頁1&nbsp2&nbsp3&nbsp