用於治療神經變性的α的製作方法

2023-04-30 17:08:01 1

專利名稱：用於治療神經變性的α的製作方法
技術領域：
本發明涉及保護神經細胞的方法，具體而言，涉及保護哺乳動物的中樞神經系統，使其不因包括穀氨酸鹽毒性和凋亡在內的有害損傷而遭到破壞。本發明方法使用α2腎上腺素能受體選擇性激動劑預防如帕金森病和阿茲海默病中所觀察到的神經細胞的損傷和死亡。
背景技術：
本發明涉及藥用組合物，具體而言涉及一種包括能影響α2腎上腺素能受體的化合物的藥用組合物。本發明還涉及治療多種症狀和病症的方法，具體而言，涉及與中樞神經系統功能障礙相關的症狀和病症。
人類的腎上腺素能受體是一種內在膜蛋白質(integral membraneprotein)，分為兩大類，即α腎上腺素能受體和β腎上腺素能受體。上述兩者均可通過結合兒茶酚胺、去甲腎上腺素和腎上腺素介導外周交感神經系統的作用。
去甲腎上腺素是由腎上腺素能的神經末梢產生的，而腎上腺素是由腎上腺髓質產生的。腎上腺素能受體對所述化合物的結合親和力是分類的依據之一α受體與去甲腎上腺素的結合強於與腎上腺素的結合併遠遠高於與合成化合物異丙腎上腺素的結合。上述激素的優選結合親和力對於β受體則正好相反。在很多組織中，由α受體激活引起的諸如平滑肌收縮的功能應答與β受體結合引起的應答相反。
其次，α和β受體間的功能差異由從各種動物和組織來源中提取的上述受體的藥理特性進一步突出和明確。因此，α和β腎上腺素能受體進一步分為α1、α2、β1和β2亞型。
並且，已意識到上述各受體均具有多個亞型；因此人類的α2受體可進一步分為α2A、α2B和α2C受體亞型。
對α1和α2受體間的功能差異已有認知，對所述兩種亞型表現出選擇性結合的化合物也已有描述。
例如，在WO 92/0073中，報導了特拉唑嗪的右(+)對映異構體對α1亞型腎上腺素能受體的選擇性結合的能力。由於α2受體的激動劑刺激被認為可阻止腎上腺素和去甲腎上腺素的分泌，而α2受體的拮抗作用被認為可提高所述激素的分泌，因此發現上述化合物的α1/α2選擇性是引人注目的。故而，一般認為使用非選擇性α腎上腺素能阻止劑，如苯氧苄胺和酚妥拉明受到限制，是由於其α2腎上腺素能受體介導引起的血漿中兒茶酚胺濃度的增大及伴隨的生理後遺症(心率加快以及平滑肌收縮)。還應注意的是被稱為「α1選擇性」或「 α2選擇性」的化合物，其選擇性通常是根據KD數據得出的，但該數據僅限於比較上述化合物對受體的結合親和力，而未比較化合物在所比較受體上的實際生物活性。
相反地，一種測量α受體激動劑選擇性的方法包括如Messier等，High Throughput Assays of Cloned Adrenergic，Muscarinic，Neurokinin And Neurotrophin Receptors In Living MammalianCells，Pharmacol.Toxicol.76308-11(1995)所述的RSAT(ReceptorSelection and Amplification Technology，受體選擇與擴增技術)檢測，經改進已用於α2受體。上述公開出版物在此通過援引的方式納入。RSAT檢測方法測量導致匯合細胞混合群體中含受體細胞選擇性增殖的接觸抑制的受體介導(receptor-mediated)的缺失。細胞數量的增加用適當的諸如b-半乳糖苷酶等轉染標誌基因估算，其活性可易於在96孔微量板中測量。激活G蛋白Gq的受體引起所述響應。α2受體通常與Gi偶聯，它在與稱為Gq/i52的具有Gi受體識別域的雜合Gq蛋白共表達(coexpress)時激活RSAT響應。
據報導多種α腎上腺素能受體激動劑可用於治療多種症狀和病症。例如，α腎上腺素能受體激動劑，如可樂定已有描述並已用作全身和眼部降壓劑，以及治療諸如吸菸和藥物濫用等上癮行為的脫癮症候群的可用試劑和調經劑。另一種α腎上腺素能受體激動劑，替扎尼定，已用於通過緩解肌肉緊張治療多發性硬化患者的痙攣症狀。上述試劑據報導還具有一定的止痛活性。
雖然所述試劑是有用的，但有時會受到包括鎮靜作用、諸如低血壓和心率降低等心血管作用以及頭暈等嚴重副作用的困擾，上述副作用限制了其對某些適應症的適用性。具體而言，上述試劑的治療劑量響應曲線和鎮靜劑量響應曲線易有重疊，從而在體內出現治療(例如，低血壓或止痛)活性的相同劑量下鎮靜活性也開始變得顯著。
文獻中將諸如但不限於可樂定、替扎尼定和右美託咪定(dexmedetomidine)等化合物歸為「α2腎上腺素能受體激動劑」主要是基於結合研究。參考Hieble等，J.Med chem.383415(1995年9月1日)；Ruffolo等，J.Med.Chem.383681(1995年9月15日)，上述兩者在這裡均以援引的方式納入。雖然所述試劑確實是α2受體激動劑，但通常忽視的是上述試劑也含有顯著量的α1受體激動劑活性。上述α1受體活性對α2活性的影響尚未普遍認知或認識到。
相形之下，化合物溴莫尼定及其功能相似的2-吲唑啉(inidazolin)-2-基亞氨基衍生物(如下所述)均為α2激動劑，它們對α2受體表現出的激動劑活性顯著高於對α1受體亞型的活性。
此外，所述化合物目前還被認為是α2「pan激動劑」，這表示在α2A、α2B和α2C受體亞型的刺激中很少觀察到或未觀察到其功能選擇性。
最近公開了對α2B和/或α2C受體亞型有選擇性或特異性的化合物，及其某些益處。例如，美國專利No 6,329,369和6,313,172和共同未決的美國專利申請09/778975、09/794874和10/153328公開了上述化合物及其在下列症狀中的用途，包括疼痛、肌肉痙攣；疼痛；神經變性疾病、脊柱缺血和中風；記憶力和識別力短缺症；精神病、焦慮症和抑鬱症；高血壓；充血性心力衰竭；心臟缺血和鼻充血。所述參考物特此全部以援引方式完整納入。在上述專利中，如果與α2A受體亞型上的功效相比，所述化合物作為α2B或α2B/2C受體亞型激動劑的功效差異大於0.3並且其在α2A受體亞型上的功效比在α2B和/或α2C受體亞型上的功效低至少約10倍，則所述化合物被視為選擇性α2B或α2B/2C受體激動劑。
CNS病症是一類神經病症。幾種CNS病症可歸因於膽鹼能缺乏、多巴胺能缺乏、腎上腺素能缺乏和/或血清素能缺乏。較常見的CNS病症包括早老性痴呆症(早期發作的阿茲海默病)、老年性痴呆症(阿茲海默型痴呆症)以及帕金森症候群，包括帕金森病。
現在對阿茲海默病認識的依據是基於如下觀察結果，即受感染人的腦的某些區域，如海馬和大腦皮層，表現出明顯的神經細胞缺失。自20世紀70年代以來，研究人員已認識到某些上述垂死神經元是膽鹼能性的—即其使用神經遞質乙醯膽鹼通訊，該乙醯膽鹼最終由一種稱為乙醯膽鹼酯酶的酶分解。參考Jones等，Intern.J.Neurosi.50147(1990)；Perry，Br.Med.Bull.4262(1986)；以及Sitaram等，Science 201274(1978)。
在過去十年裡逐漸出現的藥物，如他克林和杜尼匹次，均是乙醯膽鹼酯酶的抑制劑。通過阻止乙醯膽鹼的分解，所述化合物減緩了早期阿茲海默病的發展。然而，一旦膽鹼能神經元完全變性並且不再產生乙醯膽鹼神經遞質，所述藥物就會失效。
除了注意到神經細胞的缺失外，患有阿茲海默病的患者的腦部還特徵性地含有蛋白簇(cluster)。所述堆積以兩種形式出現即在神經元內部發現的以及在細胞間的空間中發現的。細胞內的簇稱為神經纖維纏結並且以類似成對纖維螺旋狀相互纏繞的形式出現。分析表明上述纏結是由tau蛋白組成的。由於tau與引起微管形成的微管蛋白結合，因此非常重要。神經纖維纏結的數量似乎與疾病的嚴重程度有關聯。
細胞間的蛋白簇或噬斑(plaque)由沉積的β澱粉狀蛋白組成。附近的神經元通常表現有腫脹和變形，並且澱粉狀噬斑常伴隨著炎性小膠質。上述小膠質是腦免疫系統的一部分，其存在有望降解或除去受損的神經元或者也許噬斑本身。
由於噬斑的密度僅與痴呆症的嚴重程度微弱關聯，因此不清楚上述噬斑內部或附近的神經元是否正常作用。此外，所述噬斑存在於大多數老年人中，而不論其是否患有阿茲海默病。然而，其廣泛存在於海馬和大腦皮層中卻是阿茲海默患者所特有的，並且所述噬斑在出現神經纖維纏結很久以前就出現了。
β澱粉狀噬斑含有稱為β澱粉樣前蛋白(BAPP)的內在膜蛋白的42胺基酸片斷。所述片斷由BAPP蛋白經兩步切割產生，即首先由稱為β分泌酶的蛋白酶切割，然後由γ分泌酶切割。β分泌酶和γ分泌酶的正常切割產物是40胺基酸肽，與42胺基酸衍生物不同的是，該胺基酸肽未顯示出涉及阿茲海默病的引發或進行。
帕金森病(PD)是一種虛弱性的神經變性疾病，以震顫和肌肉強直為特徵，目前尚不知曉其病因。上述疾病的特徵表現為包括多巴胺能神經元(即分泌多巴胺的神經元)的變性，特別是在賽梅林神經節(substantia nigra)和中腦的腹側被蓋區(ventral tegmentalarea)。參考Rinne等，Brain Res.54167(1991)和Clark等，Br.J.Pharm.85827(1985)。賽梅林神經節涉及協調移動和姿勢的神經信號。中腦的腹側被蓋區(VTA)含有投射到以下部位的神經元，所述部位包括前額皮質以及腦部與較高認知功能相關的區域。
為治療PD已進行了某些嘗試。一種推薦的治療PD的藥物是SINEMET，它是一種緩釋片，含有卡比多巴和左旋多巴的混合物，可從DuPont Merck Pharmaceutical Co.購得。另一種推薦的治療PD的藥物是ELDEPRYL，它是一種含有鹽酸司來吉蘭的片劑，可從SomersetPharmaceuticals Inc.購得。另一種推薦的治療PD的藥物是PARLODEL，它是一種含有甲磺酸溴隱亭的片劑，可從SandozPharmaceuticals Corporation購得。通過黑色素療法治療PD以及其它多種神經變性疾病的另一種方法見諸於Berliner等的美國專利No.5,210,076。然而，上述治療均未表現出對神經元的保護作用，使其免於細胞死亡。

發明內容
雖然已知當在神經損傷部位局部給藥或注射某些化合物，包括某些α腎上腺素能激動劑，如溴莫尼定時能為眼部或視網膜細胞及脊柱的神經細胞提供神經保護活性，但由於以前認為α2B和/或α2C受體在腦的上述區域中並不豐富，因此迄今為止並不認為上述試劑是治療諸如阿茲海默病和帕金森病等腦神經變性症狀的有效試劑。此外，雖然α腎上腺素能受體激動劑在局部治療給藥中顯示出有效的神經保護活性，但上述化合物在治療劑量觀察到的鎮靜作用嚴重限制了其作為實用的非局部或全身試劑的用途。
本申請人令人驚奇的發現某些α腎上腺素能試劑在全身給藥時，能保護腦中賽梅林神經節和腹側被蓋區的神經細胞。並且，所述試劑的神經保護活性和鎮靜活性之間的治療窗帶顯著寬於大部分前述α腎上腺素能激動劑。
在這類藥物中，多種具有α2激動劑活性的喹噁啉衍生物最初由Danielewicz等在美國專利No.3,890,319和No.4,029,792中提出用作治療劑。上述專利公開的作為心血管系統調節劑的化合物具有如下分子式
其中，2-咪唑啉-2-基氨基基團可位於喹噁啉環的5-、6-、7-或8-位置；x、y和z可位於剩下的5-、6-、7-或8-位置並可選自氫、滷素、C1-5烷基、C1-5烷氧基或三氟甲基；R是位於喹噁啉環2-或3-位置的可任選的取代基，並且可為氫、C1-5烷基或C1-5烷氧基。本發明可用的化合物可根據專利No.3,890,319和No.4,029,792所述的方法製備，上述專利在這裡通過援引的方式納入。
在Ocular Effects of a Relatively Selective Alpha-2 Agonist(UK-14，304-18) in Cats，Rabbits and Monkeys，J.A.Burke等，Current Eye Rsrch.，5，(9)，665～676頁(1986)中，如下所示通用名為溴莫尼定的喹噁啉衍生物顯示出可有效降低兔、貓和猴的眼內壓。本研究的化合物局部給藥到所研究動物的角膜。
溴莫尼定已知α2受體激動劑溴莫尼定在局部或全身給藥時，可保護視網膜神經細胞，包括光感受器和視網膜神經節細胞，使其在下述症狀中不受損傷，如青光眼、色素性視網膜炎和年齡相關性黃斑(age-relatedmacular)變性。
本發明一方面涉及治療腦神經變性症狀的方法，包括向需要其的哺乳動物的腦給藥治療有效量的選擇性α2腎上腺素能激動劑。
這裡所用的「選擇性α2腎上腺素能受體激動劑」或「選擇性α2激動劑」表示如下試劑，即其在α2受體上的功效與其在α1受體上的功效的比值大於試劑右美託咪啶(dexmedatomidine)提供的比值。優選地，其在α2受體上的功效比其在α1受體上的功效大至少12倍；更優選地，其在α2受體上的功效比其在α1受體上的功效大至少25倍。
在一例實施方案中，選擇性α2激動劑是結構如上述結構I所示的2-咪唑啉-2-基氨基化合物。在優選實施方案中，選擇性α2激動劑是溴莫尼定或其鹽。
在另一例實施方案中，選擇性α2激動劑是也是選擇性α2B或選擇性α2B/2C激動劑。這裡所用的「選擇性α2B或α2B/2C激動劑」或「選擇性α2B或α2B/2C腎上腺素能受體激動劑」表示如下化合物，即其在在α2B受體或在α2B受體以及α2C受體亞型上的功效比其在α2A受體亞型上的功效大至少10倍(優選至少50倍，更優選至少100倍)。
優選的「選擇性」化合物是「特異性」的，這表示化合物在指定受體或受體亞型上的功效比在與其相比較的受體或受體亞型上的功效大至少100倍(優選至少500倍；更優選至少1000倍；更優選至少5000倍)。
根據本發明，使用如上所述的RSAT檢測方法測定指定受體或受體亞型的功效。
選擇性α2B和α2B/2C激動劑在本發明方法中特別有用。由於選擇性α2激動劑與具有α1受體活性的類似化合物相比，其EC50較低(導致藥物在較低濃度下即具有治療效果)，因此表現出較高的治療指數，而其鎮靜劑量響應曲線沒有變化。選擇性α2B或α2B/2C激動劑的鎮靜活性也較低，因為其α2A受體活性較低，而發明者已發現該活性可導致鎮靜作用和心血管作用，如低心率和低血壓。當化合物對其指定靶具有特異性而不僅僅是選擇性時，上述作用將顯著最大化。
另一方面，本發明涉及預防投射到或投射自腦部區域的神經細胞死亡或變性的方法，包括向所述細胞給藥選擇性α2腎上腺素能受體激動劑，所述腦部區域選自賽梅林神經節、藍斑(locus ceruleus)和腹側被蓋區。在一例實施方案中，選擇性α激動劑還是選擇性α2B或α2B/2C激動劑。優選的試劑對其指定靶有特異性。
另一方面，本發明涉及治療腦神經變性症狀的方法，包括向需要其的哺乳動物的腦給藥治療有效量的α2腎上腺素能受體激動劑和α1受體拮抗劑。將α受體拮抗劑與α2受體激動劑一起使用將導致具有選擇性α2活性的聯合藥物，從而獲得單獨使用選擇性α2激動劑的益處。參考美國專利申請10/152,424，特在此通過援引的方式納入。
所述方法在作為預防療法給藥時特別有效，即在神經損傷尚未發生前，或在發病狀態，如阿茲海默病或帕金森病長期進行發生以前給藥。不希望局限於某一具體理論，關於本發明化合物在神經保護中所起的作用，申請人推測所述化合物和方法可刺激bcl-2家族某些因子的產生；所述因子的增強表達已通過編碼其產生的mRNA的增強表達得以衡量；所述因子(bcl-2和bcl-XL)可抑制凋亡程序。上述因子可平衡bcl-2凋亡因子，如bad和bax的存在或誘導，所述凋亡因子可在神經細胞受到有害激發後產生。因此，進一步設想向神經提供細胞存活信號(survival signal)的本發明化合物在與抑制細胞死亡的化合物組合使用是有利的。所述抑制細胞死亡的化合物包括NMDA拮抗劑，特別是阻斷過量穀氨酸鹽的興奮作用的二甲金剛烷、氧化氮合成酶抑制劑、自由基清除劑和鈣通道阻斷劑。
可使用任何適宜方法向待治療哺乳動物給藥本發明可用的一種或多種化合物。在所有方法中，優選的哺乳動物是人類。所選擇的具體給藥方法優選以有效方式使本發明可用的一種或多種化合物具有所需的治療效果，例如，低有效濃度和低副作用發生率。
用於本發明方法的本發明可用的化合物的給藥包括，但不限於口服、腸胃外、靜脈內、皮下和其它全身給藥模式。化合物以治療有效量單獨給藥或與適宜的可藥用載體或賦形劑結合給藥。
根據給藥的預定模式，本發明可用的一種或多種化合物可包括在任何可藥用的劑型中，例如，片劑、栓劑、丸劑、膠囊、粉末、液體、溶液、衝劑、懸濁液、乳劑、氣溶膠等，對於單劑量給藥優選適宜的精確劑量的劑型，或對於連續控制給藥，優選緩釋劑型。優選的劑型將包括可藥用的賦形劑和本發明可用的一種或多種化合物，還可含有其它藥劑(medicinal agent)、製藥劑(pharmaceutical agent)、載體、助劑(adjutant)等。
對於固體劑型，非毒性固體載體包括，但不限於，藥用級的甘露醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、聚亞烷基二醇、滑石、纖維素、葡萄糖、蔗糖和碳酸鎂。實施本發明的固體劑型的一個實例是含有丙二醇作為載體的栓劑。
可給藥的液體藥用劑型可包括，例如，一種或多種本發明可用的化合物及可任選的藥用助劑在載體中的溶液或懸濁液，所述載體有，例如，水、鹽水、葡萄糖水溶液、甘油、乙醇等，從而形成溶液或懸濁液。如果需要，待給藥的藥用組合物還可含有微量的非毒性輔助物質，如溼潤劑或乳化劑、pH緩衝劑等。所述輔助劑的典型實例有乙酸鈉、山梨聚糖單月桂酸酯、三乙醇胺、乙酸鈉、三乙醇胺油酸酯等。所屬技術領域的技術人員已知或易於知曉製備上述劑型的實際方法；例如，參考在這裡通過援引方式納入的Remington’s PharmaceuticalSciences，Mack Publishing Company，伊斯頓，賓夕法尼亞州，第16版，1980。待給藥的組合物製劑肯定包括有效量的一種或多種本發明可用的化合物以提供所需的治療效果。
腸胃外給藥通常指皮下、肌肉或靜脈注射。注射劑可製成如下常規劑型液體溶液或懸濁液、注射前宜於在液體中形成溶液或懸濁液的固體劑型、或乳劑或衝劑。適宜的賦形劑有，例如，水、鹽水、葡萄糖、甘油、乙醇等。此外，如果需要，待給藥的注射性或難溶性藥用組合物還可含有微量的非毒性輔助物質，如溼潤劑或乳化劑、pH緩衝劑等。
本發明可用的一種或多種化合物的給藥量當然取決於下列因素治療效果或所需效果、受治療的特定哺乳動物、哺乳動物症狀的嚴重程度和性質、給藥方式、所使用的一種或多種具體化合物的效能和藥效以及處方醫師的判斷。通常，本發明可用的一種或多種化合物的治療有效劑量優選在約0.5或約1～約100mg/kg/天的範圍內。
具體實施例方式
本發明一方面涉及治療腦神經變性症狀的方法，包括向需要其的哺乳動物的腦給藥治療有效量的選擇性α2腎上腺素能受體激動劑。
與本發明上述方面相關的是申請人發現選擇性或特異性的α2受體激動劑的功效出人意料地高於具有α1受體激動劑活性的化合物。申請人相信刺激α1腎上腺素能受體將幹擾所述試劑的神經保護活性，從而使所述試劑可能具有的任何鎮靜作用的EC50與所述化合物的神經保護活性相似，或落在其約三倍範圍內。因此，由所述非選擇性試劑提供的任何神經保護活性均出現在易於使患者鎮靜或對其有毒性的濃度。部分基於上述原因，α腎上腺素能試劑在過去未廣泛用作神經保護試劑，除了局部應用(如眼部應用)，這種情況下該試劑通常不全身給藥。
除了這裡直接描述的或另外通過援引方式納入的公開出版物所描述的化合物外，具有選擇性或特異性α2B或α2B/2C活性的其它化合物類型在共同未決的美國專利申請09/794,874和10/153,328中也有描述，上述兩申請在這裡均通過援引的方式納入。
雖然本申請人不希望受到理論的限制，但他們相信上述試劑的大部分或全部神經保護功效都是由α2B和/或α2C受體的刺激提供的。通常不認為腦具有豐富的α2B或α2C受體。然而，申請人發現本發明的試劑和方法可為神經元提供神經保護作用，所述神經元投射自或投射到腦的賽梅林神經節和腹側被蓋區，並且申請人相信上述作用還可見於投射到皮層的藍斑神經元中。因此，所述試劑可用於治療諸如阿茲海默病和帕金森病等症狀。
實施例1方法戶外(open-field)試驗將各動物置於明亮的塑料戶外箱中，在箱子的側面裝有兩行發光光束(photo-beam)以區分水平運動(即移動距離)和垂直運動(即「直立(rear)」)。環境條件噪聲低，燈光昏暗。動物在箱子中的運動每5分鐘測量一次，並根據所記錄的「光束打斷」或發光光束交叉的數量和類型進行計算。在最後一次戶外試驗中，僅考察了直立，並將其分為「有支撐的」或「無支撐的」。有支撐的直立指在記錄直立時，動物將至少一隻前肢放在箱子的側壁上。而在無支撐的直立中，小鼠僅靠後肢支撐。上述直立通過錄像區分。在本試驗中，無支撐直立的數量是最可靠的測量多巴胺神經元缺失的方式。
尾巴懸掛試驗將小鼠通過其尾巴懸掛3次，每次約10秒。將小鼠通過其尾巴的根部懸掛起來，距工作檯的表面約30cm，直至小鼠向左轉或向右轉。左轉計0分，右轉計1分。
在尾巴懸掛的過程中還注意了前肢的放置。前肢的放置分4個級別計分。伸展的前肢，或其置於頭部以上計0分。前肢緊握或抱握著靠在身上計3分。兩極端之間的相對階段計1分或2分。對後肢的放置也進行了計分，如下所示。
建巢試驗將一組中性別相同的4隻小鼠置於塑料桶中。在桶的前部整齊地堆放有八條紙巾。對由紙巾搭建而成的巢在其處理後24小時、48小時、72小時和96小時進行評分。計分如下0＝紙被撕碎並形成完整的有天花板的巢；1＝紙被撕碎並形成完整的但沒有天花板的巢；2＝有少量紙被撕碎或咬碎並鬆散地聚集在一個區域中；3＝有少量紙被咬碎，但沒有明顯地聚集起來；4＝沒有明顯的聚集。
神經元計數在注射MPTP後的55～60天內，採用戊巴比妥鈉使小鼠死亡。將磷酸鹽緩衝的鹽水輸注到小鼠的腦中，然後輸注Lana固定劑(多聚甲醛和苦味酸)。移除腦並置於Lana固定劑中7～10天。使用振動切片機將腦做成50微米的冠狀切片。切片用一種多巴胺合成中的限速酶，酪氨酸羥化酶的抗體染色。然後在放大率為100X的顯微鏡下觀察切片。在SN和VTA中選擇用於計算細胞數的組織切片(Bregma後面-2.9mm和-3.6mm)。所述切片分別位於SN的嘴(rostral)半部中點和尾半部中點。各TH標記的細胞如清晰可見並具有2～6個神經突則被認為是神經元。各動物的總平均數是根據四個切片(嘴和尾，左和右)計算出的，從而得到四個切片的平均。對由SN和VTA得到的神經元數進行獨立分析。使用重複測量ANOVA分析所述得數，然後使用費希爾HSD方法測試組間結果。
實驗方法接受吡啶毒素1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(MPTP)全身注射的小鼠在賽梅林神經節(SN)和腹側被蓋區(VTA)選擇性缺失大量多巴胺神經元。SN中多巴胺細胞的缺失酷似帕金森病中所見的臨床症狀。由於神經元投射到額皮質，因此VTA中所述細胞的缺失可促成帕金森病和阿茲海默病中所見的識別力短缺症。
使50隻C57B1/B6型小鼠(8～12周)在用於實驗前先適應環境12～14天。然後將小鼠隨機分為以下幾組MPTP和DMSO賦形劑、單獨的賦形劑、MPTP與溴莫尼定(3mg/kg/天)、MPTP和AGN 197075(3mg/kg/天)以及MPTP和AGN 196923(3mg/kg/天)。
197075的結構如下所示 並且該化合物的合成信息可在美國專利No 6,313,172中找到。
196923的結構如下所示 並且有關該化合物的合成信息可在系列號為09/815,362的美國專利申請中找到，該專利申請與上述專利申請的所有權相同。專利6,313,172和申請09/815,362均通過援引的方式作為本專利申請的一部分納入。
然後在所述檢測中對各小鼠進行初次戶外試驗和尾巴懸掛試驗。戶外試驗是MPTP治療小鼠最常用的行為檢測方法，它對來自賽梅林神經節的多巴胺輸入的缺失表現出敏感性。尾巴懸掛試驗對直接的紋狀體損傷敏感；建巢試驗對來自額皮質的紋狀體輸入的缺失敏感。
對5組小鼠中的4組輸注受試化合物(或不含化合物的賦形劑)。所述輸注經由皮下植入的滲透微型泵在14天內以0.25微升/小時的流速進行。在植入泵後三天，對上述小鼠和未植入微型泵的對照小鼠組進行戶外試驗和尾巴懸掛試驗。試驗後即刻對含有泵的小鼠皮下注射MPTP 40mg/kg。在MPTP治療後10～12天以及30～40天對所有組進行戶外試驗和尾巴懸掛試驗。在MPTP治療後50～55天進行戶外試驗和尾巴懸掛試驗。
對於所有的行為試驗，其結果先使用重複測量ANOVA進行分析，然後使用費希爾HSD方法測試組間結果。
試驗結果戶外試驗MPTP治療前，5組在移動距離或直立數量上沒有顯著差異。
在MPTP治療後10天和30天，賦形劑組顯著地比對照組活潑。溴莫尼定治療的小鼠在上述活性提高上沒有表現出任何變化；因此該組和賦形劑組之間沒有顯著差異。AGN 196923顯著降低活性的量(與賦形劑相比)，並且這些小鼠與對照組無區別。AGN 197075組在相同方面表現出相似傾向。在MPTP治療後30天，兩種AGN化合物與賦形劑均無顯著差異。
在MPTP治療後10天，所述治療似乎導致直立總數減少。而在30天，MPTP對總直立數沒有影響(與賦形劑組相比)，直立數相對於對照組僅有微弱減少。
在MPTP治療後50～60天，接受AGN 197075的小鼠無支撐的直立顯著多於接受賦形劑的小鼠。賦形劑組無支撐的直立少於正常小鼠。MPTP或化合物對有支撐的直立均無影響。
尾巴懸掛試驗MPTP治療前在尾巴懸掛試驗中未觀察到各組之間有顯著差異，並且在MPTP治療後，後肢也沒有任何差異。MPTPO在損傷後所有三個時間點均顯著影響前肢伸展。因此，所述影響並不隨著時間好轉。AGN197075在給藥期間顯著降低上述影響。AGN 196923和溴莫尼定未表現出上述傾向。然而，所述三種化合物在給藥後的測量中(即化合物給藥後14天)，均有降低該影響的傾向。
神經元計數在賽梅林神經節中，MPTP治療的動物，其神經元比未治療的動物少58％。而接受溴莫尼定、AGN196923或AGN197075的動物，其神經元減少顯然低得多。


在腹側被蓋區，發現MPTP使神經元比對照組平均減少28％。各受試化合物(AGN 196923、AGN 197075和溴莫尼定)使所述減少平均降低約10％。
上述實施例僅說明本發明的優選實施方案，而不用於限制其範圍。本發明由對說明書進行總結的權利要求限定。
權利要求
1.一種治療腦神經變性症狀的方法，包括向需要其的哺乳動物的腦給藥治療有效量的選擇性α2B或選擇性α2B/2C腎上腺素能受體激動劑。
2.權利要求1的方法，其中所述選擇性α2B或選擇性α2B/2C腎上腺素能受體激動劑通過全身遞釋給藥到所述哺乳動物的腦。
3.權利要求2的方法，其中給藥所述選擇性α2B或選擇性α2B/2C腎上腺素能受體激動劑可有效防止投射到或投射自所述哺乳動物腦部區域的神經元的死亡或變性，所述腦部區域選自腹側被蓋區和賽梅林神經節。
4.權利要求1的方法，其中所述神經變性症狀為帕金森病。
5.權利要求1的方法，其中所述神經變性症狀為阿茲海默病。
6.權利要求2～5中任一項的方法，其中所述化合物是一種可任選取代的化合物，選自咪唑啉、硫脲、硫酮、喹噁啉和咪唑酮。
7.權利要求1的方法，其中所述選擇性α2B或選擇性α2B/2C腎上腺素能受體激動劑化合物是特異性α2B或特異性α2B/2C腎上腺素能受體激動劑。
8.權利要求7的方法，其中所述化合物是一種可任選取代的化合物，選自咪唑啉、硫脲、硫酮、喹噁啉和咪唑酮。
9.權利要求1的方法，其中以指定程度的治療功效給藥所述藥物所伴隨的鎮靜作用的量小於以相同程度的治療功效給藥右美託咪定所伴隨的量。
10.一種防止投射到或投射自腦部區域的神經細胞死亡或變性的方法，所述腦部區域選自賽梅林神經節、藍斑和腹側被蓋區，該方法包括向需要其的哺乳動物給藥選擇性α2B或α2B/2C腎上腺素能受體激動劑到所述細胞。
11.權利要求10的方法，其中所述選擇性α2腎上腺素能受體激動劑對α2B或α2B/2C腎上腺素能受體的選擇性，與α1受體相比，比右美託咪啶大至少約12倍。
12.權利要求11的方法，其中所述選擇性α2受體激動劑是一種化合物，選自咪唑啉、硫脲、硫酮、喹噁啉和咪唑酮。
13.權利要求10～12中任一項的方法，其中所述選擇性α2B或α2B/2C受體激動劑是特異性α2受體激動劑。
14.權利要求10～12中任一項的方法，其中所述選擇性α2B或α2B/2C受體激動劑是特異性α2B或α2B/2C受體激動劑。
15.權利要求14的方法，其中所述特異性α2B或α2B/2C受體激動劑是特異性α2受體激動劑。
全文摘要
預防或延緩神經元變性的方法。公開的還有通過給藥選擇性α
文檔編號A61K31/137GK1703213SQ200380101115
公開日2005年11月30日 申請日期2003年10月7日 優先權日2002年10月8日
發明者L·A·惠勒, D·W·吉爾, J·E·唐奈羅 申請人:阿勒根公司