調節人5－羥色胺受體的吡唑衍生物的製作方法

2023-04-30 11:39:46

專利名稱：調節人5－羥色胺受體的吡唑衍生物的製作方法
技術領域：
本發明涉及非內源性、組成型活性的5-羥色胺受體的小分子調節劑；優選地，所述小分子調節劑優先選擇人5HT2A受體而非人5HT2C受體；和最優選地，所述小分子調節劑是5HT2A受體的反激活劑。
背景技術：
I.G蛋白偶聯受體G蛋白偶聯受體都具有一個相同的結構基元(motif)。所有這些受體具有七個由22到24個疏水胺基酸組成的序列，它們組成七個α螺旋，每個α螺旋都跨過膜。跨膜螺旋通過具有更大環的胺基酸鏈在細胞膜外側第4和第5跨膜螺旋之間連接。另外一個主要由親水胺基酸組成的更大的環在細胞膜內側連接第5和第6跨膜螺旋。受體的羧基端位於細胞內而氨基端位於細胞外。據認為，連接第5和第6螺旋的環以及羧基端與G蛋白相互作用。目前已經識別的G蛋白是Gq、Gs、Gi和Go。G蛋白偶聯受體的一般結構顯示在

圖1中。
在生理條件下，G蛋白偶聯受體存在於細胞膜上，並在「非活化」狀態和「活化」狀態這兩種不同的狀態或構象之間保持平衡。如圖2所示意，在非活化狀態下的受體不能與細胞內傳導途徑相偶聯以產生生物學反應。受體構象向活性狀態的轉變就使它與傳導途徑相偶聯並產生生物學反應。
受體可被內源配體或外源的激活劑配體穩定在活性狀態。近來的發現提供了除配體之外能夠使受體穩定在活性狀態構象的不同方法，這包括但不限於對受體的胺基酸序列的修飾。這些方法通過模仿與受體結合的配體的作用來有效地穩定活性狀態的受體。通過如此的配體非依賴性方法形成的穩定被稱為「組成型受體活化」。
II.5-羥色胺受體5-羥色胺(5-HT)受體是重要的一類G蛋白偶聯受體。5-HT被認為在涉及學習和記憶、睡眠、熱調節、情緒、運動活力、疼痛、性和攻擊性行為、食慾、神經變性調節和生物節律的過程中發揮作用。毫不驚奇地，5-HT與下列病理生理學狀況相關聯，如焦慮、抑鬱、強迫性人格障礙、精神分裂症、自殺、孤獨症、偏頭痛、嘔吐、酒精中毒以及神經變性障礙。關於集中在5-HT受體上的抗精神病的治療方法，這些類型的治療一般能分成兩類「典型」和「非典型」。兩者皆有抗精神病的效果，但典型治療還包括伴隨的運動有關的副作用(錐體外系綜合症如咂嘴、舌頭急投和運動系統運動等)。這樣一些副作用被認為與和其他受體如黑質紋狀體途徑中的人多巴胺D2受體相互作用的化合物相關。因此，優選非典型治療。氟哌丁苯被視為典型抗精神病藥，而將氯氮平視為非典型抗精神病藥。
5-HT受體劃分為7個亞族，稱為5-HT1至5-HT7(含)。這些亞族進一步劃分成亞類。例如，將5-HT2亞族劃分為3個受體亞類5-HT2A、5-HT2B和5-HT2C。人5-HT2C受體於1987年首先分離並克隆，而人5-HT2A受體於1990年首先分離並克隆。這兩個受體被認為是引起幻覺藥物的作用位點。另外，5-HT2A和5-HT2C受體的拮抗劑被認為在治療抑鬱、焦慮、精神病和飲食失調中是有用的。
美國專利4,985,352描述了編碼整個人5-HT1C受體(現已知為5-HT2C受體)的功能性cDNA克隆的分離、鑑定和表達。美國專利5,661,012描述了編碼整個人5-HT2A受體的功能性cDNA克隆的分離、鑑定和表達。
已有報導內源形式的大鼠5-HT2A和大鼠5-HT2C受體的突變導致這些受體的組成型活化(5-HT2ACasey，C.等，(1996)Society forNeuroscience Abstracts，22699.10，下文稱「Casey」；5-HT2CHerrick-Davis，K.和Teitler，M.，(1996.Society for NeuroscienceAbstracts，22699.18，下文稱「Herrick-Davis 1」；和Herrick-Davis，K.等，(1997)J.Neurochemistry 69(3)1138，下文稱「Herrick-Davis-2」)。Casey描述了在大鼠5-HT2A受體的位置322將半胱氨酸殘基突變成賴氨酸(C322K)、穀氨醯胺(C322Q)和精氨酸(C322R)，它們已被報導導致組成型活化。Herrick-Davis 1和Herrick-Davis 2描述了在大鼠5-HT2C受體的位置312將絲氨酸殘基突變成苯丙氨酸(S312F)和賴氨酸(S312K)，它們已被報導導致組成型活化。
發明概述本發明涉及非內源性、組成型活化形式的人5-HT2A和人5-HT2C受體的小分子調節劑，所述小分子調節劑優先選擇5-HT2A受體，和更優選在受體上具有反激活劑特徵。
附圖簡述下列附圖中，粗字體表示非內源性、組成型活化的受體中相對於對應的內源性受體突變所處的位置。
圖1顯示G蛋白偶聯受體的一般結構，數字標明了跨膜螺旋、胞內環以及胞外環。
圖2示意典型G蛋白偶聯受體活性和非活性的狀態以及活性狀態與第二信使轉導途徑的連接。
圖3提供從體內分析化合物116082在1-(2，5-二甲氧基-4-碘代苯基)-2-氨基丙烷(「DOI」)抑制研究(精細活動、移動和動物後腿站立結果測定)中的劑量-反應結果的總結圖。116082在DOI用前30分鐘施用。DOI施用後10分鐘將動物放置在運動活性測定籠中，並測定活動10分鐘。呈現的結果是處於運動活性測定儀中10分鐘所計數的總活動量。
圖4提供從體內分析化合物116081在DOI抑制研究(精細活動、移動和動物後腿站立結果測定)中劑量-反應結果的總結圖。116081在DOI用前30分鐘施用。DOI施用後10分鐘將動物放置在運動活性測定籠中，並測定活性10分鐘。呈現的結果是處於運動活性測定儀中10分鐘所計數的總活性。
圖5提供從體內分析化合物116082在僵住症肌肉僵硬度研究中結果的總結圖。116082(AR10、AR40和AR80mg/kg)和氟哌丁苯(Hal.0.8mg/kg)在大鼠棒僵住症測試中進行比較。測試化合物在測試前60分鐘腹膜內施用。兩個前肢保持在棒上的時間記載下來，最長30秒。數值代表3個連續測定的平均值(平均值±SEM，n＝6-8隻/組)。*P＜0.05對賦形劑，斯氏t檢驗。
圖6提供在大鼠DOI抑制研究中口服施用116082和116081效果的總結圖。數值代表平均值±SEM(n＝6隻/組)。#P＜0.05對賦形劑/賦形劑，*P＜0.05對賦形劑/DOI，斯氏t檢驗。
圖7提供採用116081(7A)和氯氮平(7B)逆轉MK-801-誘導的功能亢進的總結圖。116081和氯氮平劑量依賴性地衰減了MK801-誘導的功能亢進，正如由MK-801-治療的動物中走動減少所測定。116081在劑量為25μmol/kg(10mg/kg)時產生了顯著的MK-801效果的反轉。呈現的結果是在施用MK-801後接觸運動活性測定儀120分鐘所計數的總活動量。Dunnett氏檢驗(n＝6-8隻/組)後，採用ANOVA對數據(平均值±SEM)進行分析。
圖8表示本發明所使用的優選載體，pCMV。
定義涉及受體的科學文獻談及對受體具有各種效應的配體時採用了一些術語。為了清楚和前後一致，在本專利申請文件中將由始至終使用下列定義。在這些定義與這些詞語的其他定義衝突時，選擇下列定義激活劑 係指激活細胞內反應的成分，此時它們結合受體或促進GTP與膜結合。
在此應用的胺基酸縮寫列於下表1表1
部分激活劑 係指這樣的成分，它們與受體結合時，激活細胞內反應或者促進GTP與膜結合的程度低於激活劑。
拮抗劑 係指這樣的成分，它和激活劑在同一位點與受體競爭性地結合，但不激活由受體的活性形式引起的細胞內反應，並可因此抑制由激活劑或部分激活劑促進的細胞內反應。拮抗劑在沒有激活劑或部分激活劑的情形下並不削弱基本細胞內反應。
候選化合物 係指經受篩選技術的分子(例如但不限於化學化合物)。
組合物 是指至少包含兩種化合物或兩種組分的物質；例如但不限於藥物組合物是組合物。
化合物效應 係指一個化合物抑制或者刺激受體功能的能力的量度，它與受體結合親和力相對。
被組成型活化的受體 係指易受組成型受體活化的受體。
組成型受體活化 係指不利用內源配體或其化學等價物與受體結合的方法而使受體穩定在活性狀態下。
接觸 係指把至少兩種成分放在一起，無論是在體外系統還是在體內系統中。
內源 係指由哺乳動物天然產生的物質。關於內源的受體(例如但不限於)係指由哺乳動物(例如但不限於人類)或病毒天然產生的物質。與之相對比，術語「非內源」在本文中係指不是由哺乳動物(例如但不限於人類)或病毒天然產生的。例如但不限於，在其內源形式下並非組成型活化的受體，當對之進行操作而使之組成型活化時，此受體被最優選地指稱為「非內源的被組成型活化的受體」。這兩個術語都可被用來描述「體內」和「體外」系統。在篩選過程中，內源的或非內源的受體可被用於體外篩選系統，這也只作為例證而不是限制。作為進一步的例子而不是限制，當操作哺乳動物的基因組以包括非內源組成型活化受體時，可以通過體內系統篩選候選化合物。
抑制 與術語「反應」相聯繫，係指在一個化合物存在時一個反應被降低或阻止，這正好與該化合物不存在時相反。
反激活劑 係指與內源受體結合的成分或與組成型活化形式受體結合的成分，該成分將由活性內源形式的受體引發的基本細胞內反應抑制至正常基礎水平以下，該正常基礎水平是在沒有內源配體、激活劑或部分激活劑的情況下觀察的，或者它們降低GTP與膜的結合。與不存在反激活劑的基本反應相比，優選在反激活劑存在下基本細胞內反應被抑制至少30％，更優選被抑制至少50％，最優選被抑制75％。在生物學上，「GPR6反激活劑」係指可以通過其他因素而在體內估測的成分，這些其他因素係指除測定所述成分與GPR6反應之外的因素，例如當所述成分在體內與哺乳動物的GPR6反應時，可以觀察到在接觸GPR6和GPR6反激活劑的24小時至48小時之內，該哺乳動物的體重降低至少5％。
配體 係指對內源性天然產生的受體特異的內源性天然產生的分子。
藥物組合物 係指包括至少一種活性成分的組合物，藉此可以研究該組合物在哺乳動物(例如但不限於人體)中特定的效果。本領域的那些普通技術人員將能夠理解和正確評價那些適於確定活性成分是否具有技術人員所需要的預期效果的技術。
刺激 與術語「反應」相聯繫，係指當一種化合物存在時比當它不存在時反應增強。詳細描述I.特別優選的突變為方便起見，關於非內源性組成型活化的人5-HT2A和5-HT2C受體的序列信息參照表2所列出的標識符。
表2
正如下文將詳細討論，把與Casey報導的突變(C322K)相類似的突變在人5-HT2A受體中採用並在本發明稱為AP-2。但是，AP-2不能導致足以允許利用篩選技術的組成型活化。
II.一般G蛋白偶聯受體的篩選分析技術當一種G蛋白受體變為組成型活化時，它與G蛋白(例如Gq、Gs、Gi、Go)偶聯並刺激GTP與G蛋白結合。接著，G蛋白作為GTP酶慢慢地把GTP水解為GDP，受體在正常情況下藉此失活。然而，組成型活化的受體繼續把GDP轉化為GTP。GTP非可水解的類似物[35S]GTPγS，可被用來監測與表達組成型活化受體的膜的結合。據報導，[35S]GTPγS可被用來監測在配體存在或不存在的情形下G蛋白與膜的偶聯。這種監測的一個例證，與本領域中著名的和已知的其他例證一起，由Traynor和Nahorski在1995年所報導。通常，本測定系統的一個優選的應用是為了初步篩選候選化合物，因為本系統對所有蛋白-偶聯受體一般可行，而不考慮與受體的細胞內結構域相互作用的那一種特別的G蛋白。
III.G蛋白偶聯受體位點篩選分析技術的確認一旦應用「一般」G蛋白偶聯的受體測定方法(即篩選是激活劑、部分激活劑或反激活劑的化合物的方法)識別出候選化合物，優選進一步篩選以確認在受體位點發生作用的化合物。例如，應用「一般」測定方法識別的化合物可以不與受體結合，但也可以僅僅使細胞內結構域與G蛋白「解偶聯」。因此，通過篩選那些使用激活劑和/或拮抗劑競爭性結合測定中的「一般」測定方法而識別的候選化合物，提供了選擇過程的進一步精確性。
麥角酸二乙醯胺(LSD)是熟知的5-HT2A和5-HT2C受體的激動劑，而美舒麥角是熟知的5-HT2C受體的拮抗劑。因此，在最優選的實施方案中，把激活劑(LSD)和/或拮抗劑(美舒麥角)競爭性結合分析用來進一步篩選那些選自「一般」分析的化合物用於確認5-HT受體結合。
IV.特異G蛋白分析技術本領域接受的生理學介導的用於5-HT2A和5-HT2C受體的途徑是通過Gq進行的。IP3的胞內積累能用於確認這些類型的Gq偶聯受體的組成型活化(參見Herrick-Davis-1)。結果，「IP3積累」分析能用於進一步篩選那些選自激活劑和/或拮抗劑競爭性分析的化合物。
V.藥物組合物被選擇進行進一步開發的候選化合物可應用本領域周知的技術配製成藥物組合物。適當的藥物可接受的載體是本領域中的人員可得的；例如，參見Remington’s Pharmaceuctical Sciences，第16版，1980年，Mack Publishing Co.(Oslo等人編寫)。
實施例下面提供的實施例的目的是要闡明而不是限制本發明。下文中所描述的篩選技術的具體順序是為了說明的方便而排列。雖然在此公開了特定的核酸序列和胺基酸序列，本領域的普通技術人員有能力對這些序列進行修飾，並且同時可以獲得與下面報告相同或實質上相似的結果。等價、非內源性、組成型活化的人5-HT受體序列意圖包括那些與已公開序列比較具有85％同源性的序列，更優選具有90％同源性的序列，以及最優選具有95％同源性的序列。實施例1非內源性、組成型活化的人5-HT受體5-HT2C和5-HT2A的產生A.組成型活性5-HT2C受體cDNA的構建1.內源性人5-HT2C編碼內源性人5-HT2C受體的cDNA採用RT-PCR從人腦聚腺苷酸(poly-A+)RNA中獲得。5′和3′引物衍生自5′和3′不翻譯區域並包含下列序列5′-GACCTCGAGGTTGCTTAAGACTGAAGCA-3′(SEQ.ID.NO.1)，5′-ATTTCTAGACATATGTAGCTTGTACCGT-3′(SEQ.ID.NO.2)。
使用TaqPlusTM精確聚合酶(Stratagene)或rTthTM聚合酶(PerkinElmer)以及生產廠商提供的緩衝系統進行PCR，每個引物0.25μM，四種核苷酸每種0.2mM。循環條件為94℃1分鐘、57℃1分鐘以及72℃2分鐘，循環30次。將1.5kb的PCR片段用XhoI和XbaI消化並亞克隆到pBluescript的SalI-XbaI位點上。
衍生的cDNA克隆全部測序，結果對應於發表的序列。
2.AP-1 cDNA將含有人5-HT2C受體第三個胞內環中S310K突變的cDNA(AP-1cDNA)通過採用編碼所需突變的合成雙鏈寡核苷酸替代含有胺基酸310的StyI限制性片段構建。所用的有義鏈序列具有以下序列5′-CTAGGGGCACCATGCAGGCTATCAACAATGAAAGAAAAGCTAAGAAAGTC-3′(SEQ.ID.NO.3)，所用的反義鏈具有如下序列5′-CAAGGACTTTCTTAGCTTTTCTTTCATTGTTGATAGCCTGCATGGTGCCC-3′(SEQ.ID.NO.4)。
B.組成型活性5-HT2A受體cDNA的構建1.內源性人5-HT2A編碼內源性人5-HT2A受體的cDNA採用RT-PCR從人腦聚腺苷酸(poly-A+)RNA中獲得。5′引物衍生自5′不翻譯區域，帶有XhoI限制性位點，序列如下5′-GACCTCGAGTCCTTCTACACCTCATC-3′(SEQ.ID.NO.5)，以及3′引物衍生自3′不翻譯區域，含有XbaI位點，序列如下5′-TGCTCTAGATTCCAGATAGGTGAAAACTTG-3′(SEQ.ID.NO.6)。
使用TaqPlusTM精確聚合酶(Stratagene)或rTthTM聚合酶(PerkinElmer)以及生產廠商提供的緩衝系統進行PCR，每個引物0.25μM，四個核苷酸每種0.2mM。循環條件為94℃1分鐘、57℃1分鐘以及72℃2分鐘，循環30次。將1.5kb的PCR片段用XbaI消化並亞克隆到pBluescript的Eco RV-XbaI位點上。
將所得的cDNA克隆全部測序後發現與公布的序列比較編碼2個胺基酸變化。第一個變化是N-端胞外結構域中T25N突變和第二個變化是H452Y突變。這些變化可能表示序列的多態性而非PCR錯誤，因為具有2個相同突變的cDNA克隆衍生自2個獨立PCR程序，使用的Taq聚合酶來自2個不同的廠商(TaqPlusTMStratagene和rTthTMPerkin Elmer)。
2.人5-HT2A(C322K；AP-2)含有第三個胞內環中點突變C322K的cDNA採用SphI限制性酶位點構建，該位點包含胺基酸322。對於PCR程序，使用含有C322K突變的引物5′-CAAAGAAAGTACTGGGCATCGTCTTCTTCCT-3′(SEQ.ID.NO.7)和如上SEQ.ID.NO.6所闡述的來自3′不翻譯區域的引物。然後使用所得的PCR片段通過T4聚合酶平端的SphI位點以替代野生型5-HT2A cDNA的3′末端。使用pfu聚合酶(Stratagene)和廠商提供的緩衝系統進行PCR，並使用10％DMSO，每個引物0.25mM，四種核苷酸每種0.5mM。循環條件為94℃1分鐘、60℃1分鐘以及72℃1分鐘，循環25次。
3.AP-3 cDNA人5-HT2AcDNA帶有用對應的人5-HT2ccDNA替代的胞內環3(IC3)和胞質尾，其構建採用以PCR為基礎的誘變。
(a)IC3環的替代人5-HT2AcDNA的IC3環首先用對應的人5-HT2CcDNA替換。進行2個單獨的PCR程序從而產生2個片段，片段A和片段B，它們將5-HT2cIC3環融合到5-HT2A的跨膜6(TM6)上。將含有5-HT2cIC3和5-HT2ATM6的起始13bp的237bp的PCR片段即片段A採用以下引物進行擴增5′-CCGCTCGAGTACTGCGCCGACAAGCTTTGAT-3′(SEQ.ID.NO.8)5′-CGATGCCCAGCACTTTCGAAGCTTTTCTTTCATTGTTG -3′(SEQ.ID.NO.9)所用模板為人5-HT2CcDNA。
將含5-HT2CIC3 C末端13bp及起始於TM6起點的5-HT2AC末端的529bp PCR產物用如下引物進行擴增5′-AAAAGCTTCGAAAGTGCTGGGCATCGTCTTCTTCCT-3′(SEQ IDNO10)5′-TGCTCTAGATTCCAGATAGGTGAAAACTTG-3′(SEQ ID NO11)所用模板為人5-HT2AcDNA。
採用片段A和片段B作為共同模板以及SEQ.ID.NO8和SEQ.ID.NO11(注意SEQ.ID.NO6和11的序列相同)作為引物進行第二輪PCR。所得740bp的PCR片段即片段C含有人5-HT2C的IC3環，其通過人5-HT2A的胞質尾末端融合到TM6中。使用pfuTM聚合酶(Stratagene)和廠商提供的緩衝系統進行PCR，並使用10％DMSO，每個引物0.25mM，四種核苷酸每種0.5mM。循環條件為94℃1分鐘、57℃(第一輪PCR)或60℃(第二輪PCR)1分鐘以及72℃1分鐘(第一輪PCR)或90秒(第二輪PCR)，循環25次。
為生成包含人5-HT2A TM5和5-HT2C的IC3環之間的融合接點的PCR片段，使用4個引物。2個外部引物衍生自人5-HT2A，具有以下序列5′-CGTGTCTCTCCTTACTTCA-3′(SEQ.ID.NO.12)所用的另一引物為SEQ.ID.NO6(參見上述有關SEQ.ID.NO6和11的注釋)。所使用的第一個內部引物是含有5-HT2CIC3起始13bp的反義鏈，所述起始13bp後面跟著衍生自5-HT2ATM5的末端23bp5′TCGGCGCAGTACTTTGATAGTTAGAAAGTAGGTGAT-3′(SEQ.ID.NO.13)。
第二個內部引物是含有衍生自5-HT2ATM5的末端14bp的有義鏈，所述末端14bp後面跟著衍生自5-HT2CIC3的起始24bp5′TTCTAACTATCAAAGTACTGCGCCGACAACCTTTGATG -3′(SEQ.ID.NO.14)。
使用內源性人5-HT2A和共同模板片段C在50ml反應體積中進行PCR。所述50ml反應液含有1×pfu緩衝液、10％DMSO、四種核苷酸每種0.5mM、每個外部引物(SEQ.ID.NO11和12)0.25mM、每個內部引物(SEQ.ID.NO13和14)0.06mM以及1.9單位的pfu聚合酶(Stratagene)。循環條件為94℃1分鐘、52℃1分鐘以及72℃2分鐘10秒，循環25次。然後將1.3kb的PCR產物進行凝膠純化並用PstI和Eco RI消化。把所得1kb的PstI-Eco RI片段用於替換內源性人5-HT2A序列中的對應片段以生成編碼5-HT2CIC3環的突變5-HT2A序列。
(b)胞質尾的替代為了用5-HT2C的胞質尾替換5-HT2A的胞質尾，PCR採用含有內源性人5-HT2ATM7的C末端22bp後面跟著內源性人5-HT2C胞質尾的起始21bp的有義引物進行5′-TTCAGCAGTCAACCCACTAGTCTATACTCTGTTCAACAAAATT-3′(SEQ.ID.NO.15)，反義引物衍生自內源性人5-HT2C的3′不翻譯區域5′-ATTTCTAGACATATGTAGCTTGTACCGT-3′(SEQ.ID.NO.16)。
所得PCR片段即片段D含有與內源性人5-HT2C的胞質尾相融合的內源性人5-HT2ATM7的最後22bp。使用片段D進行第二輪PCR，共同模板為內源性人5-HT2A，其先用AccI消化以避免不希望的擴增。所用反義引物為SEQ.ID.NO16(SEQ.ID.NO16和2的序列相同，並且所用的有義引物衍生自內源性人5-HT2A5′-ATCACCTACTTTCTAACTA-3′(SEQ.ID.NO.17)。
除退火溫度48℃以及延伸時間90秒以外，PCT條件如實施例183(a)中第一輪PCR所闡述。所得710bp的PCR產物用ApaI和XbaI消化並用於替代(a)內源性人5-HT2A或(b)帶有2C IC3的5-HT2A的對應ApaI-XbaI片段，從而分別生成(a)帶有內源性人5-HT2C胞質尾的內源性人5-HT2A和(b)AP-3。
4.AP-4 cDNA該突變的產生是將內源性人5-HT2A區域，從胺基酸247，Pro246緊後面的TM5的中部到胺基酸337，Pro338緊前面的TM6的中部，替代為AP-1 cDNA的對應區域。為方便起見，TM5中的連接點稱為「2A-2C連接」，而TM6中的連接點稱為「2C-2A連接」。
生成包含所需雜合連接的三個PCR片段。以內源性人5-HT2A為模板通過PCR生成含有TM5中的2A-2C連接的561bp的5′片段，以SEQ.ID.NO12為有義引物，反義引物衍生自後面跟著20bp的5-HT2A序列的5-HT2C的13bp片段5′-CCATAATCGTCAGGGGAATGAAAAATGACACAA -3′(SEQ.ID.NO.18)。
323bp的中部片段含有內源性人5-HT2C序列，該序列衍生自TM5的中部到TM6的中部，側翼為來自2A-2C連接和2C-2A連接的13bp的5-HT2A序列。該中部片段的生成是以AP-1 cDNA為模板，有義引物含有13bp的5-HT2A，其後面跟著橫跨2A-2C連接的20bp的5-HT2C序列，該引物具有以下序列5′-ATTTTTCATTCCCCTGACGATTATGGTGATTAC-3′(SEQ.ID.NO.19)；反義引物含有13bp 5-HT2A，其後面跟著橫跨2C-2A連接的20bp5-HT2C序列，該反義引物具有以下序列5′-TGATGAAGAAAGGGCACCACATGATCAGAAACA-3′(SEQ.ID.NO.20)。
含有2C-2A連接的487bp的3′片段的生成是通過PCR，以內源性人5-HT2A為模板，有義引物具有下列來自2C-2A連接的序列5′-GATCATGTGGTGCCCTTTCTTCATCACAAACAT -3′(SEQ.ID.NO.21)以及反義引物是SEQ.ID.NO6(參見上述有關SEQ.ID.NO6和11的注釋)。
分別進行兩個第二輪PCR反應以便連接5′和中部片段(5′M PCR)以及中部和3′片段(M3′PCR)。
所用的5′M PCR共同模板是如上所述的5′和中部PCR片段，有義引物為SEQ.ID.NO12和反義引物為SEQ.ID.NO20。5′M PCR程序導致857bp的PCR片段。
M3′PCR採用如上所述的中部和M3′PCR片段作為共同模板，SEQ.ID.NO19作為有義引物，而SEQ.ID.NO6(參見上述有關SEQ.ID.NO6和11的注釋)作為反義引物，並產生784bp的擴增產物。以來自第二輪PCR的857bp和784bp片段作為模板，並以SEQ.ID.NO12和SEQ.ID.NO6(參見上述有關SEQ.ID.NO6和11的注釋)分別作為有義和反義引物進行最後一輪PCR。從最後一輪PCR得到的1.32kb擴增產物用PstI和Eco RI消化。將所得1kb的PstI-Eco RI片段用於替代內源性人5-HT2A的對應片段，從而產生具有5-HT2CC310K/IC3的突變人5-HT2A。將AP3的Apa I-Xba片段用於替代具有5-HT2CC310K/IC3的突變5-HT2A中的對應片段以產生AP4。實施例2受體表達A.pCMV儘管本領域中的技術人員可獲得多種表達載體，但為了利用本發明所討論的內源性和非內源性受體，最優選使用的載體是pCMV。該載體根據布達佩斯條約為專利程序目的對微生物保藏的國際識別的規定於1998年10月13日保藏在美國典型培養物保藏中心(ATCC)(10801University Blvd.，Manassas，VA 20110-2209 USA)。該DNA由ATCC測試並證明存活。ATCC已將下列保藏號分配給pCMVATCC#203351。參見圖8。
B.轉染程序對於一般分析([35S]GTPγS；實施例3)和拮抗劑結合分析(美舒麥角；實施例4)，採用下列方案實現COS-7或297T細胞轉染。
第一天，將5×106個COS-7細胞或1×107個293T細胞接種到150mm的培養板上。第二天，準備兩支反應試管(比例是每板用於一支試管)通過將20μg DNA(例如pCMV載體；GPR6 cDNA的pCMV載體；GPR6融合蛋白的pCMV載體)在1.2ml無血清的DMEM(IrvineScientific，Irvine，CA)中混合來準備試管A；通過將120μl脂轉染胺試劑(Gibco BRL)在1.2ml無血清DMEM中混合來準備試管B。把試管A和B翻轉混合(幾次)，然後在室溫下溫育30-45分鐘。所得混合物被稱為「轉染混合物」。培養板上的293細胞用1X PBS洗滌，然後加入10ml無血清的DMEM。把2.4ml轉染混合物加入到細胞中去，然後在37℃/5％CO2下溫育4小時。接著通過抽吸移去轉染混合物，然後加入25ml的DMEM/10％胎牛血清。接著細胞在37℃/5％CO2溫育。溫育72小時後收穫細胞並用來進行分析。實施例3方案GTP膜結合閃爍鄰近測試法應用[35S]GTPγS結合測定組成型活化的優點是(a)[35S]GTPγS的結合對所有G蛋白偶聯受體是普遍適用的；(b)[35S]GTPγS的結合鄰近細胞膜表面，在此處較少可能遇到影響細胞內級聯反應的分子。優選使用GPCR融合蛋白。此試驗利用G蛋白偶聯受體刺激[35S]GTPγS與表達相關受體的細胞膜結合的能力。因此，本測定可用於在所公開的5-HT受體上直接篩選化合物。
一種閃爍鄰近(scintillation proximity)實驗被用於監測[35S]GTPγS與表達(例如)COS細胞中所表達的內源性人5-HT2C受體的細胞膜的結合。簡言之，一種優選的實驗程序是將檢測物在pH 7.4的20mMHEPES以及其中含有0.3nM的[35S]GTPγS和12.5μg膜蛋白和1μMGDP的結合緩衝液(100mM NaCI和10mM MgCl2)中溫育30分鐘。然後將測試培養板在室溫下以4000rpm離心15分鐘，隨後抽吸並在閃爍計數器上計數。5-HT作為內源性配體活化5-HT2C受體，以濃度依賴的方式刺激[35S]GTPγS與膜的結合(數據未顯示)。經刺激的結合能被30μM的米安色林完全抑制，米安色林為一種化合物，被視為傳統的5-HT2C拮抗劑，但也被知曉為5-HT2C反激活劑(數據未顯示)。
雖然此分析測定激活劑誘導的[35S]GTPγS與膜的結合併通常能用來測定受體的組成型活性，但是當前麥胚凝集素珠的耗費可能是昂貴的。較少耗費但同等適用的替代物也滿足大規模篩選的需要。閃光板和WallacTM閃爍條可用於設計高通量的[35S]GTPγS結合分析。該技術使得人們能監測氚化的配體與受體的結合，並同時監測通過[35S]GTPγS結合的功效。這是可能的，因為WallacTMβ計數器能轉換能量窗來分析氚和35S標記的探針。
該分析也可用作其他類型膜活化作用的檢測，該作用導致受體活化。例如，此分析可用於監測各種受體(包括G蛋白偶聯受體和酪氨酸激酶受體)的32P磷酸化作用。當膜離心至孔的底部時，結合的[35S]GTPγS受體或32P-磷酸化的受體將活化包被在孔上的閃爍體。使用Scinti條(WallacTM)顯示該原理。另外，此分析利用放射性標記配體可用作測定與受體結合的配體。以相似方式，放射性標記的結合配體離心至孔的底部並活化閃爍體。[35S]GTPγS分析結果與以傳統受體的第二信使分析獲得的結果平行。
在該分析中，當米安色林抑制此反應時，5-HT刺激[35S]GTPγS與內源性人5-HT2C受體的結合；進一步，米安色林通過抑制[35S]GTPγS與表達內源性人5-HT2C受體的膜的基礎組成型結合，充當部分反激活劑(數據未顯示)。在此分析中，在無GDP的情況下應沒有激活劑反應，這是因為沒有GDP存在來交換[35S]GTPγS。該分析系統能用來顯示天然5-HT2C受體的反應，並且也用來測定其他受體的組成型活化。
使用這一測定法，觀察到[35S]GTPγS與從僅表達對照載體的293T細胞中所製備的膜、天然5-HT2C受體或AP-1受體的結合增強。在實驗中所使用的總蛋白濃度影響[35S]GTPγS與每個受體結合的總量。在轉染的pCMV與組成型活化的突變受體之間的c.p.m差異從蛋白濃度10μg/孔時的大約1000c.p.m提高至蛋白濃度75μg/孔時的大約6-8,000c.p.m。
AP-1受體顯示最高水平的組成型活化，野生型受體跟隨其後也顯示了高於基礎線的增強的[35S]GTPγS結合。這與內源性人5-HT2C受體在沒有5HT的刺激(實施例5)下積累胞內IP3的能力一致，也與公布的數據一致，這些數據聲稱內源性人5-HT2C受體具有高的天然基礎活性。因此，AP-1受體顯示組成型活性可通過在膜界面由鄰近的[35S]GTPγS結合作用來測定。實施例4方案5HT受體激活劑/拮抗劑競爭性結合分析從轉染的COS-7細胞(參見實施例2)中製備膜的方法採用在20mMHEPES和10mM EDTA，pH7.4中勻漿並49000×g離心15分鐘。沉澱重懸浮於20mM HEPES和0.1mM EDTA，pH7.4中，並使用polytron勻漿機(Brinkman)5000rpm下勻漿10秒鐘，然後49000×g離心15分鐘。將終沉澱重懸浮於20mM HEPES和10mM MgCl2，pH7.4中，並使用polytron勻漿機(Brinkman)5000rpm下勻漿10秒鐘。
在96孔板以200μl體積一式三份進行分析。分析緩衝液(20mMHEPES和10mM MgCl2，pH7.4)用於稀釋膜、3H-LSD、3H-美舒麥角、5-HT(用於定義非特異對LSD結合)和米安色林(用於定義非特異對美舒麥角結合)。最終分析濃縮物由1nM3H-LSD或1nM3H-美舒麥角、50μg細胞膜蛋白和100μm 5-HT或米安色林構成。對於LSD分析，在37℃溫育1小時，而對於美舒麥角分析，在室溫下溫育1小時。分析終止使用Skatron細胞收集器以冰冷的結合緩衝液快速過濾通過Wallac Filtermat B型。用Wallac 1205 BctaPlate計數器測定放射性活性。實施例5方案胞內IP3積累分析對於IP3積累分析，採用與實施例2中所闡述的方案不同的轉染方案。在下列實施例中，第1-3天所使用的方案如下所述與指明的條件稍有不同；但第4天的方案所有條件相同。
A.COS-7和293細胞第一天，將COS-7細胞或293細胞塗抹在24孔板上，通常分別為1×105細胞/孔或2×105細胞/孔。第二天，首先在50μl無血清的DMEM/孔中混合0.25ug DNA(參見實施例2)，然後在50μl無血清的DMEM/孔中加入2μl脂質轉染胺試劑進行細胞轉染。將溶液(「轉染介質」)輕輕混合後室溫下溫育15-30分鐘。用0.5ml的PBS洗滌細胞，然後將400μl無血清的介質與轉染介質混合併加入到細胞中。接著將細胞在37℃/5％CO2下溫育3-4小時。然後將轉染介質移開並用1ml/孔的正常生長介質替代。第三天，將介質移開，並用0.5ml的PBS洗滌細胞。然後將0.5ml的無肌醇/無血清介質(GIBCO BRL)加入到每個含有0.25μCi的3H-肌醇/孔的孔中，並將細胞在37℃/5％CO2下溫育16-18小時過夜。方案A。
B.293細胞第一天，將每150mm平板的1×107個293細胞鋪平板。第二天，準備2個反應管(下述每個管的比例按照每一平板描述)管A的準備是將20μg DNA(如pCMV載體、pCMV載體AP-1cDNA等)混合到1.2ml的無血清DMEM(Irvine Scientific，Irvine，CA)中；管B的準備是將120μl的脂質轉染胺試劑(Gibco BRL)混合到1.2ml的無血清DMEM中。然後將管A和管B顛倒混合(數次)，接著室溫下溫育30-45分鐘。此混合物稱為「轉染混合物」。鋪板的293細胞用1×PBS洗滌，然後加入10ml的無血清DMEM。將2.4ml的轉染混合物加入到細胞中，繼續在37℃/5％CO2下溫育4小時。第三天，將細胞用胰蛋白酶消化並計數，隨後鋪1×106個細胞/孔(聚D-賴氨酸處理的12孔平板)。細胞允許附著到孔上，然後用1×PBS洗滌一次。其後，將1ml無肌醇的DMEM中的0.5μCi3H-肌醇加入到每孔中。方案B。
第四天，將細胞用0.5ml PBS洗滌，然後加入0.45ml的分析介質，該介質包含無肌醇/無血清介質、10μM巴吉林、10mM氯化鋰，或加入0.4ml分析介質和50μl的10×酮色林(ket)至終濃度10μM。然後將細胞在37℃下溫育30分鐘。用0.5ml PBS洗滌細胞，每孔加入200μl新鮮/冰冷的終止溶液(1M KOH、18mM硼酸鈉、3.8mM EDTA)。將溶液放置於冰上5-10分鐘或直到細胞裂解，然後用200μl的新鮮/冰冷的中和溶液(7.5％HCl)中和。將裂解液轉移到1.5ml的微離心管中，並每管加入1ml的氯仿/甲醇(1∶2)。將溶液旋渦震蕩15秒，將上層施用到Biorad AG1-X8陰離子交換樹脂(100-200目)。用水洗滌樹脂並將0.9ml的上層裝到柱子中。該柱子用10ml的5mM肌醇和10ml的5mM硼酸鈉/60mM甲酸鈉洗滌。將肌醇三磷酸酯用2ml的0.1M甲酸/1M甲酸銨洗脫到含有10ml閃爍混合物的閃爍瓶中。柱子用10ml的0.1M甲酸/3M甲酸銨洗滌再生，並用dd H2O衝洗兩次，然後室溫下儲存於水中。結果下文討論。實施例7抗非內源性、組成型活化的人5-HT受體AP-1的候選化合物的篩選大約5500個候選化合物(Tripos，Inc.，St.Louis，MO)採用實施例3的分析方案(用AP-1突變受體)作為抗所述受體的反激活劑進行篩選鑑定，對於此分析，建立至少50％抑制的任選取捨點用於鑑定反激活劑。這些化合物中大約有120個在10μM候選化合物時顯示至少50％抑制[35S]GTPγS結合(數據未顯示)。實施例8選定化合物的篩選以確認受體結合性AP-1採用實施例4的分析方案(美舒麥角)和AP-1突變受體對來自實施例7中所鑑定的候選化合物進行篩選。測定IC50(nM)值；實施例7的將近120個化合物中的5個經測定具有有力的受體結合親和性。結果總結在表4中。
表4
實施例9a一般篩選範例臨床前候選先導化合物的篩選為直接鑑定人5HT2A/5HT2C受體反激活劑而設計的「初級」篩選由基於膜的GTPγS結合分析組成，該分析利用從AP-1人受體瞬時轉染的COS-7細胞中製備的細胞膜。直接鑑定成在GTPγS結合中抑制受體介導的增加程度大於50-75％(任選取捨點的值)的候選化合物(10μM終分析濃度)被視為活性「匹配物」(hit)。然後將初級分析採樣數以相同分析再測試以再確認它們的反激活劑活性。如果初級分析採樣數再確認為活性(50％或更高的抑制)，因此直接鑑定為例如反激活劑，可利用二種方法中的一種(a)能產生所謂的「定向庫」，即額外的候選化合物在經再確認的採樣數的基礎上合成(適合於例如化合物特徵的改進)，由此評價定向化合物庫用於與和突變5HT2C(AP-1)和內源性5HT2A受體結合的放射性配體競爭的能力，或(b)然後評價再確認的採樣數用於與放射性配體競爭與突變5HT2C(AP-1)和內源性5HT2A受體結合的能力。因此，當使用方法(a)時，因為這些定向庫的候選化合物是基於下述化合物的結構，所述化合物從基於膜GTPγS結合分析中直接鑑定，定向庫化合物在基於膜的GTPγS結合分析中不進行再測試，而是通過放射性配體結合分析確認。放射性配體結合分析測試起始在測試化合物濃度10μM時一式三份進行，並且如果化合物抑制放射性標記的結合達50％或更多，接著以8個濃度競爭曲線進行分析以測定Ki值。次級分析評價中的最後步驟是測定測試化合物是否能夠抑制AP-3受體介導的肌醇磷酸酯(例如IP3)積累。該最終分析確認直接鑑定的化合物保持了反激活劑特性。實施例9b組成型活化的人5HT2C受體(AP-1)介導促進GTPγS與COS7膜結合本方案基本上與上述實施例6中所闡述的相同。
初級篩選分析測定GTPγS與膜結合，該膜從以人突變5HT2C受體(AP-1)瞬時轉染的COS7細胞中製備，將所述初級篩選分析用於直接鑑定篩選庫(Tripos，Inc.)中的反激活劑。候選化合物的篩選在總分析體積200μl中採用閃爍體包被的Wallac ScintistripTM板進行。初級分析由下列化學物組成(在標記的終分析濃度下)20mM HEPES、pH7.4、100mM NaCl、20mM MgCl2、0.2％皂苷、0.2mM抗壞血酸、1μMGDP、0.3nM GTPγ35S以及12.5μg上述定義的膜。在環境室溫下溫育60分鐘。結合分析溫育由分析板4000rpm離心15分鐘終止，接著快速吸出反應混合物並用Wallac MicroBetaTM閃爍計數器計數。
初級篩選候選化合物起始涉及在單一式份、終分析濃度為10μM的候選化合物中測試每分析板72個測試化合物(採用96孔板)。每個板總16個孔用於8個濃度的氯氮平(確認的5HT2C/2A反激活劑)劑量反應曲線(每個濃度重複測定二次)。最終，每個板的總共5個分析孔用於定義陰性對照(表達AP-1受體的膜，不加入候選化合物)，並且每個板的3個孔用於定義陽性對照(沒有AP-1受體的細胞膜)。
再確認實驗涉及以上述相同分析重新測試候選化合物，除了候選化合物以一式三份進行評價，因此每96孔分析板允許評價24個化合物。與初級分析板相似，8個濃度的氯氮平劑量反應曲線(每個濃度重複測定二份)，以及相同陰性和陽性對照孔也包括在每個96孔板內。實施例9c(1)對直接鑑定的化合物突變人5HT2C受體(AP-1)的競爭性研究採用標準96孔微量滴定板在總分析體積200μl中進行放射性結合競爭性實驗。終分析成分由分析緩衝液(20mM HEPES和10mMMgCl2)、1nM[3H]美舒麥角和50μg的膜(帶有如上所定義AP-1的COS7)所組成。非特異的[3H]美舒麥角結合限定在100μM米安色林存在下。37℃下溫育1小時。受體結合的放射性配體通過在Wallac FiltermatTMB型過濾膜上快速過濾分析混合物與游離放射性配體分開，然後使用SkatronTM細胞收集器用冰冷分析緩衝液洗滌。放射性活性採用Wallac1205 BetaPlateTM計數器計數。每個分析板含有5個陰性對照孔(表達受體的膜，不加入候選化合物)和3個陽性對照孔(每個含有100μM米安色林)。對一種濃度測試來說，將候選化合物用分析緩衝液稀釋並在終濃度10μM下篩選，一式三份。對於IC50測定，將候選化合物用分析緩衝液稀釋並將8個不同濃度進行評價，一式三份。對兩個分析來說，為8個濃度米安色林劑量反應曲線評價指定總共16個孔。實施例9c(2)競爭性研究野生型人5HT2A受體採用標準96孔微量滴定板在總分析體積200μ1中進行放射性結合競爭性實驗。終分析成分包括分析緩衝液(20mM HEPES和10mMMgCl2)、1nM[3H]LSD和50μg的前述膜(帶有AP-1的COS7)。非特異的[3H]LSD結合限定在100μM 5-HT存在下。37℃下溫育1小時。受體結合的放射性配體通過在Wallac FiltermatTMB型過濾膜上快速過濾分析混合物與游離放射性配體分開，然後使用SkatronTM細胞收集器用冰冷分析緩衝液洗滌。放射性活性採用Wallac 1205 BetaPlateTM計數器計數。每個分析板含有5個陰性對照孔(表達受體的膜，不加入候選化合物)和3個陽性對照孔(每個含有100μM米安色林)。對一種濃度測試來說，將候選化合物用分析緩衝液稀釋並在終濃度10μM下篩選，一式三份。對於IC50測定，將候選化合物用分析緩衝液稀釋並將8個不同濃度進行評價，一式三份。對兩個分析來說，為8個濃度5-羥色胺劑量反應曲線評價指定總共16個孔。實施例9d受體介導的肌醇磷酸酯積累將實施例9a-9c中分析鑑定的候選化合物進行評價用於肌醇磷酸酯積累，按照實施例5的方案(表達人突變5HT2A受體AP-3的COS7細胞)，修改如下管A的準備是將16μg DNA(如pCMV載體、pCMV載體AP-1 cDNA等)混合到1.0ml的無血清DMEM(Irvine Scientific，Irvine，CA)中；管B的準備是將60μl的脂質轉染胺試劑(Gibco BRL)混合到1.0ml的無血清DMEM中。然後將管A和管B顛倒混合(數次)，接著室溫下溫育30分鐘。此混合物稱為「轉染混合物」。鋪板的293細胞用10ml無血清DMEM洗滌，然後加入11ml的無血清DMEM。將2.0ml的轉染混合物加入到細胞中，繼續在37℃/5％CO2下溫育5小時。第三天，將細胞用胰蛋白酶消化並計數，隨後鋪1×106個細胞/孔(12孔平板)。細胞允許附著到孔上8小時，然後用1×PBS洗滌一次。其後，將1ml無肌醇的DMEM中的0.5μCi3H-肌醇加入到每孔中。
第四天，將細胞用1.5ml PBS洗滌，然後加入0.9ml的分析介質在37℃/5％CO2下5分鐘，該介質包含無肌醇/無血清介質、10μM巴吉林、10mM氯化鋰，隨後加入100μl用相同物質稀釋的候選化合物。然後將細胞在37℃下溫育120分鐘。用1.5ml PBS洗滌細胞，每孔加入200μl新鮮/冰冷的終止溶液(1M KOH、18mM硼酸鈉、3.8mMEDTA)。將溶液放置於冰上5-10分鐘或直到細胞裂解，然後用200μl的新鮮/冰冷的中和溶液(7.5％HCl)中和。將裂解液轉移到1.5ml的微離心管中，並每管加入1ml的氯仿/甲醇(1∶2)。溶液旋渦震蕩15秒，將上層施用到Biorad AG1-X8陰離子交換樹脂(100-200目)。用水洗滌樹脂並將0.9ml的上層裝到柱子中。該柱子用10ml的5mM肌醇和10ml的5mM硼酸鈉/60mM甲酸鈉洗滌。將肌醇三磷酸酯用2ml 0.1M甲酸/1M甲酸銨洗脫到含有10ml閃爍混合物的閃爍瓶中。柱子用10ml 0.1M甲酸/3M甲酸銨洗滌再生，並用dd H2O衝洗兩次，然後室溫下儲存於水中。
經過這輪分析後，IC50值小於10μM的候選化合物被視為潛在的先導化合物，可用於開發藥物組合物。實施例10侯選化合物的篩選按照上文所述的程序，一個化合物(實施例8，參見上文)顯示出如下結果
根據這些結果，化合物103487的結構活性分析提示3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯胺的一系列的衍生物將顯示出與5-HT2A類似的活性和選擇性。合成了3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯胺的一系列的衍生物。然後根據實施例9c(1)，9c(2)和9d所述的方案對這些直接的(″directed″)文庫化合物(Tripos，Inc.)進行了分析。
具有5-HT2A受體活性的優選的一系列化合物可用作這些受體的反激活劑，這些化合物由下列通式(A)表示
其中W是F、Cl、Br、I、C1～8直鏈或支鏈烷基、C3～8環烷基、C4～9烷基環烷基、或C2～8鏈烯基；X是O或S或NR2；Y是NR3R4或(CH2)mR5或O(CH2)nR6m是包括0和4在內的0到4之間的整數；n是包括0和4在內的0到4之間的整數；Z是H、C1～8直鏈或支鏈烷基、C3～8環烷基、C4～9烷基環烷基、或C2～8鏈烯基；R1，R2，R3和R10各自獨立地選自H，C1～8直鏈或支鏈烷基，C3～8環烷基、C4～9烷基環烷基、或C2～8鏈烯基；R4，R5，和R6各自獨立地選自C1～8直鏈或支鏈烷基，C2～8鏈烯基或環烷基、或烷基環烷基、或芳基、或CH2芳基；其中在所述C1～8直鏈或支鏈烷基、C2～8鏈烯基或環烷基、或烷基環烷基、或芳基或CH2芳基中的每一結構部分可在任何位置被至多4個取代基任選取代，所述每一取代基各自獨立地選自H，F，Cl，Br，I，R7，CF3，CF2R7，CF2CF2，CCl3，CCl2R7，CCl2CCl2R7，NR8R9，NR10COR7，NR10SO2R7，OR7，OCF3，OCF2R7，OCF2CF2R7，OCOR7，OSO2R7，OPO(OR7)2，SR7，SCF3，SCF2R7，SCF2CF2R7，SCOR7，SO3R7，SO2NR8R9，PO(OR7)3，PO(OR7)2R7，NO2，CN，CNR10(NR8R9)，CNR10(SR7)，COOR7，COSR7，CONR8R9，條件是當R4，R5，或R6含有在芳基環的至少兩個相鄰位置上被取代的芳基環時，則所述兩個相鄰位置可一起選自SCH2S、SCH2CH2S、OCH2O或OCH2CH2O以形成雙環結構；R7是H，C1～8直鏈或支鏈烷基，C3～8環烷基、C4～9烷基環烷基、C2～8鏈烯基，芳基或烷基芳基；和R8和R9各自獨立地選自H，C1～8直鏈或支鏈烷基，C2～8鏈烯基或環烷基、或烷基環烷基、或芳基、或CH2芳基；其中在所述C1～8直鏈或支鏈烷基、C2～8鏈烯基或環烷基、或烷基環烷基、或芳基或CH2芳基中的每一結構部分可在任何位置被至多4個取代基任選取代，所述每一取代基各自獨立地選自F，Cl，Br，I，CF3，CCl3，CH3，C2H5，C3H7，C4H9，NH2，NHCH3，N(CH3)2，NHC2H5，N(C2H5)2，NHC3H7，N(C3H7)2，NHC4H9，N(C4H9)2，NHCOH，NHCOCH3，NHCOC2H5，NHCOC3H7，NHCOC4H9，NHSO2CH3，NHSO2C2H5，NHSO2C3H7，NHSO2C4H9，OH，OCH3，OC2H5，OC3H7，OC4H7，OC4H9，OC5H9，OC5H11，OC6H11，OC6H13，OCF3，OCOCH3，OCOC2H5，OCOC3H7，OCOC4H9，OSO2CH3，OSO2C2H5，OSO2C3H7，OSO2C4H9，SH，SCH3，SC2H5，SC3H7，SC4H7，SC4H9，SC5H9，SC5H11，SC6H11，SC6H13，，SCF3，SCOCH3，SCOC2H5，SCOC3H7，SCOC4H9，SO3CH3，SO3C2H5，SO3C3H7，SO3C4H9，SO2NH，SO2NH2，SO2NHCH3，SO2N(CH3)2，SO2NHC2H5，SO2N(C2H5)2，SO2NHC3H7，SO2N(C3H7)2，SO2NHC4H9，SO2N(C4H9)2，NO2，CN，COOCH3，COOC2H5，COOC3H7，COOC4H9，COSCH3，COSC2H5，COSC3H7，COSC4H9，CONH2，CONHCH3，CON(CH3)2，CONHC2H5，CON(C2H5)2，CONHC3H7，CON(C3H7)2，CONHC4H9，CON(C4H9)2，以及條件是當R8或R9中的一個或兩者含有在芳基環的至少兩個相鄰位置上被取代的芳基環時，則所述兩個相鄰位置可一起選自SCH2S，SCH2CH2S，OCH2O，或OCH2CH2O以形成雙環結構；或者R8和R9可一起形成5、6或7元環結構的一部分，其中所述結構是飽和的或不飽和的，進一步地所述的結構含有選自O、N或S的至多4個雜原子，並且再進一步地所述環結構中的每一結構部分在任意位置被至多4個取代基任選取代，所述取代基各自獨立地選自F，Cl，Br，I，CF3，CCl3，CH3，C2H5，C3H7，C4H9，NH2，NHCH3，N(CH3)2，NHC2H5，N(C2H5)2，NHC3H7，N(C3H7)2，NHC4H9，N(C4H9)2，NHCOH，NHCOCH3，NHCOC2H5，NHCOC3H7，NHCOC4H9，NHSO2CH3，NHSO2C2H5，NHSO2C3H7，NHSO2C4H9，OH，OCH3，OC2H5，OC3H7，OC4H7，OC4H9，OC5H9，OC5H11，OC6H11，OC6H13，OCF3，OCOCH3，OCOC2H5，OCOC3H7，OCOC4H9，OSO2CH3，OSO2C2H5，OSO2C3H7，OSO2C4H9，SH，SCH3，SC2H5，SC3H7，SC4H7，SC4H9，SC5H9，SC5H11，SC6H11，SC6H13，SCF3，SCOCH3，SCOC2H5，SCOC3H7，SCOC4H9，SO3CH3，SO3C2H5，SO3C3H7，SO3C4H9，SO2NH，SO2NH2，SO2NHCH3，SO2N(CH3)2，SO2NHC2H5，SO2N(C2H5)2，SO2NHC3H7，SO2N(C3H7)2，SO2NHC4H9，SO2N(C4H9)2，NO2，CN，COOCH3，COOC2H5，COOC3H7，COOC4H9，COSCH3，COSC2H5，COSC3H7，COSC4H9，CONH2，CONHCH3，CON(CH3)2，CONHC2H5，CON(C2H5)2，CONHC3H7，CON(C3H7)2，CONHC4H9，CON(C4H9)2，以及條件是當R8和R9形成在芳基環的至少兩個相鄰的位置被取代的芳基環時，則所述的兩個相鄰位置可一起選自SCH2S，SCH2CH2S，OCH2O，或OCH2CH2O以形成雙環結構。
芳基結構部分可以是5或6元芳族雜環(含有至多4個獨立地選自N，O或S的雜原子)或不含雜原子的6元芳族環或多環；C1-8烷基的適當的例子包括(但不限於)甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，和叔丁基。
5或6元環結構部分包括(但不限於)苯基，呋喃基，噻吩基，咪唑基，吡啶基，吡唑基，噁唑基，異噁唑基，三唑基，吡唑基，四唑基，噻唑基，和異噻唑基。多環結構部分的例子包括但不限於萘基，苯並噻唑基，苯並呋喃基，苯並咪唑基，喹啉基，異喹啉基，吲哚基，喹喔啉基，喹唑啉基，和苯並噻吩基。
落入通式(A)範圍的優選的化合物是那些其中Y＝NR3R4的如下所述的式(1)所示的化合物 其中X是O或S或NR2；Z是H或CH3；R2，R3和R10各自獨立地選自H，C1～8直鏈或支鏈烷基，C3-8環烷基，C4-9烷基環烷基或C2～8鏈烯基；R11is H，F，Cl，Br，I，R7，CF3，CF2R7，CF2CF2，CCl3，CCl2R7，CCl2CCI2R7，NR8R9，NR10COR7，NR10SO2R7，OR7，OCF3，OCF2R7，OCF2CF2R7，OCOR7，OSO2R7，OPO(OR7)2，SR7，SCF3，SCF2R7，SCF2CF2R7，SCOR7，SO3R7，SO2NR8R9，PO(OR7)3，PO(OR7)2R7，NO2，CN，CNR10(NR8R9)，CNR10(SR7)，COOR7，COSR7，CONR8R9，條件是當與R11相鄰的位置被取代時，則R11和所述的相鄰位置可一起選自SCH2S，SCH2CH2S，OCH2O或OCH2CH2O以形成雙環結構；
R7is H、C1-8直鏈或支鏈烷基、C3-8環烷基、C4-9烷基環烷基、C2-8鏈烯基、芳基或烷基芳基；R8和R9各自獨立地選自H，C1～8直鏈或支鏈烷基，C2～8鏈烯基或環烷基，或烷基環烷基，或芳基或CH2芳基； 其中在所述C1～8直鏈或支鏈烷基、C2～8鏈烯基或環烷基、或烷基環烷基、或芳基或CH2芳基中的每一結構部分可在任何位置任選地被至多4個取代基取代，所述取代基獨立地選自F，Cl，Br，I，CF3，CCl3，CH3，C2H5，C3H7，C4H9，NH2，NHCH3，N(CH3)2，NHC2H5，N(C2H5)2，NHC3H7，N(C3H7)2，NHC4H9，N(C4H9)2，NHCOH，NHCOCH3，NHCOC2H5，NHCOC3H7，NHCOC4H9，NHSO2CH3，NHSO2C2H5，NHSO2C3H7，NHSO2C4H9，OH，OCH3，OC2H5，OC3H7，OC4H7，OC4H9，OC5H9，OC5H11，OC6H11，OC6H13，OCF3，OCOCH3，OCOC2H5，OCOC3H7，OCOC4H9，OSO2CH3，OSO2C2H5，OSO2C3H7，OSO2C4H9，SH，SCH3，SC2H5，SC3H7，SC4H7，SC4H9，SC5H9，SC5H11，SC6H11，SC6H13，SCF3，SCOCH3，SCOC2H5，SCOC3H7，SCOC4H9，SO3CH3，SO3C2H5，SO3C3H7，SO3C4H9，SO2NH，SO2NH2，SO2NHCH3，SO2N(CH3)2，SO2NHC2H5，SO2N(C2H5)2，SO2NHC3H7，SO2N(C3H7)2，SO2NHC4H9，SO2N(C4H9)2，NO2，CN，COOCH3，COOC2H5，COOC3H7，COOC4H9，COSCH3，COSC2H5，COSC3H7，COSC4H9，CONH2，CONHCH3，CON(CH3)2，CONHC2H5，CON(C2H5)2，CONHC3H7，CON(C3H7)2，CONHC4H9，CON(C4H9)2，條件是當R8或R9中的一個含有在芳基環的至少兩個相鄰位置上被取代的芳基環時，則所述兩個相鄰的位置可一起選自SCH2S，SCH2CH2S，OCH2O或OCH2CH2O以形成雙環結構；R12，R13，R14，和R15各自獨立地選自F，Cl，Br，I，CF3，CCl3，CH3，C2H5，C3H7，C4H9，NH2，NHCH3，N(CH3)2，NHC2H5，N(C2H5)2，NHC3H7，N(C3H7)2，NHC4H9，N(C4H9)2，NHCOH，NHCOCH3，NHCOC2H5，NHCOC3H7，NHCOC4H9，NHSO2CH3，NHSO2C2H5，NHSO2C3H7，NHSO2C4H9，OH，OCH3，OC2H5，OC3H7，OC4H7，OC4H9，OC5H9，OC5H11，OC6H11，OC6H13，OCF3，OCOCH3，OCOC2H5，OCOC3H7，OCOC4H9，OSO2CH3，OSO2C2H5，OSO2C3H7，OSO2C4H9，SH，SCH3，SC2H5，SC3H7，SC4H7，SC4H9，SC5H9，SC5H11，SC6H11，SC6H13，SCF3，SCOCH3，SCOC2H5，SCOC3H7，SCOC4H9，SO3CH3，SO3C2H5，SO3C3H7，SO3C4H9，SO2NH，SO2NH2，SO2NHCH3，SO2N(CH3)2，SO2NHC2H5，SO2N(C2H5)2，SO2NHC3H7，SO2N(C3H7)2，SO2NHC4H9，SO2N(C4H9)2，NO2，CN，COOCH3，COOC2H5，COOC3H7，COOC4H9，COSCH3，COSC2H5，COSC3H7，COSC4H9，CONH2，CONHCH3，CON(CH3)2，CONHC2H5，CON(C2H5)2，CONHC3H7，CON(C3H7)2，CONHC4H9，CON(C4H9)2，以及條件是當R12，R13，R14，和R15中的任意兩個相鄰的位置被取代時，所述兩個相鄰的位置可進一步一起選自SCH2S，SCH2CH2S，OCH2O或OCH2CH2O以形成雙環結構；和條件是R12，R13，R14，和R15中至少有一個必須是H。落入式(1)所示化合物範圍內的更優選的化合物是如下定義的化合物 其中X＝O或S；Z是H或CH3；R3和R10各自獨立地選自H，C1～8直鏈或支鏈烷基，C3～8環烷基、C4～9烷基環烷基、或C2～8鏈烯基；R11是H，F，Cl，Br，I，R7，CF3，CCl3，NR8R9，NR10COR7，NR10SO2R7，OR7，OCF3，OCOR7，OSO2R7，SR7，SCF3，SCOR7，SO3R7，SO2NR8R9，NO2，CN，COOR7，COSR7，CONR8R9，條件是當與R11相鄰的位置被取代時，則R11和所述的相鄰位置可一起選自SCH2S，SCH2CH2S，OCH2O，或OCH2CH2O以形成雙環結構；R7是H，C1～8直鏈或支鏈烷基，C3～8環烷基，C4～9烷基環烷基，C2～8鏈烯基，芳基或烷基芳基；R8和R9各自獨立地選自H，C1～8直鏈或支鏈烷基，C2～8鏈烯基或環烷基，或烷基環烷基，或芳基或CH2芳基；其中在所述C1～8直鏈或支鏈烷基、C2～8鏈烯基或環烷基、或烷基環烷基、或芳基或CH2芳基中的每一結構部分可在任何位置被至多4個取代基任選取代，所述每一取代基各自獨立地選自F，Cl，Br，I，CF3，CCl3，CH3，C2H5，C3H7，C4H9，NH2，NHCH3，N(CH3)2，NHC2H5，N(C2H5)2，NHC3H7，N(C3H7)2，NHC4H9，N(C4H9)2，NHCOH，NHCOCH3，NHCOC2H5，NHCOC3H7，NHCOC4H9，NHSO2CH3，NHSO2C2H5，NHSO2C3H7，NHSO2C4H9，OH，OCH3，OC2H5，OC3H7，OC4H7，OC4H9，OC5H9，OC5H11，OC6H11，OC6H13，OCF3，OCOCH3，OCOC2H5，OCOC3H7，OCOC4H9，OSO2CH3，OSO2C2H5，OSO2C3H7，OSO2C4H9，SH，SCH3，SC2H5，SC3H7，SC4H7，SC4H9，SC5H9，SC5H11，SC6H11，SC6H13，SCF3，SCOCH3，SCOC2H5，SCOC3H7，SCOC4H9，SO3CH3，SO3C2H5，SO3C3H7，SO3C4H9，SO2NH，SO2NH2，SO2NHCH3，SO2N(CH3)2，SO2NHC2H5，SO2N(C2H5)2，SO2NHC3H7，SO2N(C3H7)2，SO2NHC4H9，SO2N(C4H9)2，NO2，CN，COOCH3，COOC2H5，COOC3H7，COOC4H9，COSCH3，COSC2H5，COSC3H7，COSC4H9，CONH2，CONHCH3，CON(CH3)2，CONHC2H5，CON(C2H5)2，CONHC3H7，CON(C3H7)2，CONHC4H9，CON(C4H9)2，以及條件是當R8或R9中的一個含有在芳基環的至少兩個相鄰位置上被取代的芳基環時，則所述兩個相鄰位置可一起選自SCH2S，SCH2CH2S，OCH2O或OCH2CH2O以形成雙環結構；R12，R13，R14和R15各自獨立地選自F，Cl，Br，I，CF3，CCl3，CH3，C2H5，C3H7，C4H9，NH2，NHCH3，N(CH3)2，NHC2H5，N(C2H5)2，NHC3H7，N(C3H7)2，NHC4H9，N(C4H9)2，NHCOH，NHCOCH3，NHCOC2H5，NHCOC3H7，NHCOC4H9，NHSO2CH3，NHSO2C2H5，NHSO2C3H7，NHSO2C4H9，OH，OCH3，OC2H5，OC3H7，OC4H7，OC4H9，OC5H9，OC5H11，OC6H11，OC6H13，OCF3，OCOCH3，OCOC2H5，OCOC3H7，OCOC4H9，OSO2CH3，OSO2C2H5，OSO2C3H7，OSO2C4H9，SH，SCH3，SC2H5，SC3H7，SC4H7，SC4H9，SC5H9，SC5H11，SC6H11，SC6H13，SCF3，SCOCH3，SCOC2H5，SCOC3H7，SCOC4H9，SO3CH3，SO3C2H5，SO3C3H7，SO3C4H9，SO2NH，SO2NH2，SO2NHCH3，SO2N(CH3)2，SO2NHC2H5，SO2N(C2H5)2，SO2NHC3H7，SO2N(C3H7)2，SO2NHC4H9，SO2N(C4H9)2，NO2，CN，COOCH3，COOC2H5，COOC3H7，COOC4H9，COSCH3，COSC2H5，COSC3H7，COSC4H9，CONH2，CONHCH3，CON(CH3)2，CONHC2H5，CON(C2H5)2，CONHC3H7，CON(C3H7)2，CONHC4H9，CON(C4H9)2，以及條件是當R12，R13，R14和R15中的任意兩個相鄰的位置是被取代的時候，所述兩個相鄰的位置可一起進一步選自SCH2S，SCH2CH2S，OCH2O，或OCH2CH2O以形成雙環結構；和條件是R12，R13，R14和R15中至少兩個必須是H。
通式(A)，式(1)所示的示例性的化合物說明如下。根據現已獲得的活體內數據(如下文所述)，化合物116081和116082是特別優選的。
肌醇磷酸酯積累試驗證明了被試化合物的活性。相對於對照的單一濃度的百分數和IC50的測定值都表明了活性。在下表中各欄中的符號具有下列含義IP3％對照該欄中的數值反映的是在IP積累試驗中被試化合物是在10μM的一個濃度下被評估的。為進行這些試驗，將所述化合物在不含肌醇但含10μM巴吉林和10mM LiCl的Dulbecco′s Eagle培養基中稀釋，並在10μM的終試驗濃度測試，重複三次。基於沒加被試化合物的對照的值，計算出相對於的對照的百分數。
IP3AP-3 IC50nM該欄中的數值反映的是在IP積累試驗中被試化合物是在幾個不同的濃度下被評估的，從而可得出IC50值。此欄對應於上文的表中標明肌醇磷酸酯積累，AP-3，IC50值(μM)的那欄。
WT 5HT2ALSD IC50nM該欄中的數值反映的是採用LSD的競爭性結合試驗。此欄對應於上文的表中標明競爭性結合，WT 5HT2A，([3H]LSD)，IC50值(μM)的那欄。
(注表中的短線「-」表示沒有測定值)

符合式(1)中各參數定義的其他的化合物如下
實施例11活體內分析A.1-(2，5-二甲氧基-4-碘代苯基)-2-氨基丙烷(″DOI″)運動機能障礙分析116081和116082116082和116081在體內功能分析測驗中的結果提示這一化合物展現出了選擇性的5HT2A反激活劑特性。通過在大鼠中進行由Krebs-Thomson(Psychopharmacology，14069-74，1998)描述的DOI運動活性試驗，進行活體內5-HT2受體拮抗劑的評估。
以0.3mg/kg的劑量外周給藥致幻劑和5HT2激活劑DOI[1-(2，5-二甲氧基-4-碘代苯基)-2-氨基丙烷]通常在大鼠中產生運動機能障礙，表現出移動(即，行走和跑)、休息時身體的精細活動(即，修飾、舔)和後肢活動(即以後肢站立)下降。採用全自動的運動活性測定籠來評估運動功能。將大鼠放置在一標準的齧齒動物籠中，周圍布滿光電管束，這樣可以將大鼠的運動活性自動記錄下來。被測動物不受任何運動的限制，可在籠的周圍自由活動。在該試驗中，對雄性Sprague-Dawley大鼠(n＝6，每個劑量)給藥11081和11082(腹膜內注射)然後30分鐘後再經皮下給藥DOI。對由DOI誘導的運動機能障礙的逆轉被看作受試化合物能在活體內拮抗5HT2受體的一種提示。
基於在圖3和圖4中所示的結果，從這些數據中可以得出結論116081和116082能有利地逆轉DOI誘導的運動機能障礙。根據已獲得的數據，可以得出的另一個結論是，化合物116082在5-10mg/kg的劑量範圍內表現出它的5-羥色胺5HT2拮抗劑特性，而化合物116081在2.5-10mg/kg的劑量範圍內表現出它的5-羥色胺5HT2拮抗劑特性。
B.椎體外系副作用分析116082目前市售的一般的抗精神病的藥物如氟哌丁苯的顯著的問題在於椎體外系副作用的發生。椎體外系運動綜合症(EPS)的特徵在於帕金森樣綜合症，其是由大腦紋狀體多巴胺D2和D1受體受封閉引起的(Snyder，SH.Am.J.Psychiatry，138461-468，1981)。
通過在齧齒動物中測量僵住症的誘導來評估潛在的治療藥物封閉大腦紋狀體多巴胺受體的傾向性(Hoffman和Donavan，Psychopharmacology 120128-133，1995)。僵住症的特徵在於身體僵直，並通常是在大鼠中採用棒條測驗(bar test)來進行測量(Prinssen et al.Psychopharmacology，14420-29，1999)。因此，採用該測驗，以確定化合物116082在活體內的可能的EPS副作用傾向性。
在上述棒條測驗中，使大鼠的前肢放在水平的圓柱狀的金屬棒(直徑0.75cm，高10cm)，測量兩前肢同時放在棒上的時間，最長達30秒。連續重複該測驗3次，由3次測量的平均數確定僵住症。在進行該測驗前60分鐘，給雄性Sprague-Dawley大鼠(平均體重300g)給藥化合物116082(腹膜內注射)。每個劑量下的受試動物數為6-8隻。
圖5中所示的數據支持如下之結論116082並不引起大鼠在棒上所呆時間的劑量依賴性的增加，因此提示116082在10-80mg/kg的劑量範圍內並不誘導大鼠的僵住症。另一方面，氟哌丁苯卻誘導大鼠呆在棒上的時間明顯增加，這說明此化合物在0.8mg/kg的劑量下誘導大鼠的僵住症。這些數據支持這樣的結論化合物116082在活體內在劑量為比封閉5HT2A受體所需的劑量(即，參見上文的DOI實施例)大8倍的劑量下也不誘導大鼠的椎體外系副作用。
利用同樣的劑量參數和方案，還測定出化合物116081在滿足上文所述的條件下也不產生僵住症反應(n＝10，每個劑量)。數據未列出。
C.口服利用度116081和116082根據已獲得的活體內的數據，考察了化合物110681和110682的口服生物利用度。在大鼠中在給藥DOI前30分鐘以50mg/kg的劑量通過口服填餵法對大鼠給藥化合物(參見上文所述實施例11A)。在給藥DOI 10分鐘後將動物置於運動活性測定籠中，並測量其10分鐘內的活動。結果如圖6所示，顯示了在10分鐘內被運動活性測定儀所計數出的總活動數。
圖6中的數據支持這樣的結論以50mg/kg的劑量給大鼠口服116082和116081逆轉了DOI誘導的運動機能障礙。這些數據還支持這樣的結論50mg/kg的化合物116082和116081的口服劑量與以腹膜內以10mg/kg的劑量給藥同樣的化合物(圖3和圖4)一樣有效。
這些數據支持這樣的結論化合物116082和116081是口服有活性的，其口服生物利用度大於或等於20％。
D.對MK801-誘導的運動過度的拮抗潛在的抗精神病(抗陰性)活性模型在齧齒動物中，非競爭性NMDA受體拮抗劑MK-801誘導運動活性和刻板症的顯著增加。由於精神分裂症的部分症狀可能與穀氨酸傳遞在NMDA受體的改變有關，在齧齒動物中將MK-801誘導的運動活性過度的逆轉已被常規地用作檢測潛在的抗精神病活性的動物模型(O』Neill et al.，Pharmacology Biochem.Behav.，53237-243，1999)。因此，採用該試驗以確定化合物11 6081的體內的可能的抗精神病活性。
如上文(實施例11(A)，上文)所述，採用全自動「運動活性測定籠」評價運動活性。給雄性Sprague-Dawley大鼠(250-350g體重)腹膜內給藥受試化合物，並將其置於「運動活性測定籠」中達30分鐘。此後，對動物給藥MK-801(0.5μM/kg＝0.17mg/kg，皮下)，然後再立即放回到運動活性測定籠中，並測量其在120分鐘內活動數。對MK-801在大鼠中誘導的運動活性(表現為活動的明顯增加)的逆轉被看成是受試化合物能逆轉精神病症狀的指示。結果如圖7所示。
根據圖7A和7B所示的結果，在逆轉由MK-801誘導的運動活性方面，化合物116081看來與非典型的抗精神病藥氯氮平具有同等的功效。因此，這些數據支持這樣的結論，即，AR116081可能具有抗精神病的特性。實施例12合成路徑本發明公開的化合物可按照各種合成方法容易地進行製備，本領域的普通技術人員對於所述的合成方法是熟悉的。在下文所述的一般合成中，被標明的取代基與在上文有關化合物的定義部分所述的具有同樣的含義。
通式(I)的化合物可通過本領域普通技術人員所熟知的各種合成路線來得到。異氰酸酯類與胺類的反應是合成脲類的常規反應方法(參見，Org.Syn.Coll.Vol.V，(1973)，555)。胺(IV)，3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯胺可從Maybridge Chemical Company公司買到，其產品編號為KM01978，CAS No.175201-77-1]，在惰性溶劑如滷代烴中很容易與異氰酸酯類(V)反應，生成由通式(I)所示的所需脲類，其中R1＝R2＝H 或者，在惰性溶劑如滷代烴中在有機鹼如三乙胺或乙基二異丙基胺的存在下，通過使胺(IV)與光氣或適當的光氣等價物如三光氣反應可將其轉化成相應的異氰酸酯(VI)。異氰酸酯(VI)與通式(VII)所示的胺類以與上述的(IV)與(V)之反應類似的反應方式進行反應，生成通式(I)所示的所需的脲類，其中R1＝H 或者，當通式(V)所示的異氰酸酯是市場上所不能買到的時候，可通過與上文製備(VI)所述之類似過程從通式(VIII)所示的相應的胺來製備它。這些異氰酸酯與(IV)的反應將同樣產生出如通式(I)所示的所需的脲類，其中R1＝R2＝H 通過按序與四氫呋喃中的羰基二咪唑和乙腈中的碘代甲烷作用，通式(VII)所示的胺類可容易地被轉化成通式(IX)所示的活化的異氰酸酯等價物。(R.A.Batey et al.，Tetrahedron lett.，(1998)，39，6267-6270)。(IX)和(IV)在惰性溶劑如滷代烴中的反應將產生通式(I)所示的所需的脲類，其中R1＝H 根據J.Barbuenga et al.，J.Chem.Soc.，Chem.Commun.，(1984)，20，1334-1335所述的步驟可將胺(IV)單甲基化，或者根據P.Marchini et al.，J.Org.Chem.，(1975)40(23)，3453-3456所述的步驟將胺(IV)烷基化，產生通式(X)所示的化合物，其中R1＝低級烷基。這些材料可按如下路徑與通式(V)和(IX)所示的物質反應 通式(A)的化合物或其溶劑化物或生理上有功能的衍生物可用作治療劑，特別是用作5-羥色胺5-HT2A受體活性的調節劑。據信，5-羥色胺受體活性的調節劑可用於治療或預防CNS、胃腸、心血管和炎症紊亂。式(A)的化合物可通過口、舌下、胃腸外、直腸或局部施用給藥。除了那些通過適當加入可離子化的取代基而製成的式(A)化合物的中性形式外(所述取代基並不改變化合物的受體特異性)，也可製備此化合物的生理上可接受的鹽並用作治療劑。為達到所需的生物效果將需要不同量的式(A)所示的化合物。該量取決於各種因素如具體的化合物、其所要針對的用途、給藥方式和被治療的個體的狀況。通常的劑量預計應在0.001-200mg/千克被治療個體的體重。單位劑量可含有1-200mg式(A)化合物，並可一天分一次或多次、單劑或多劑給藥。在使用式(A)化合物的鹽或溶劑化物的情況下，該劑量是基於陽離子(對於鹽)或未溶劑化的化合物而定的。
組合物(包括但不限於，藥物組合物)包含作為活性成分的至少一種式(A)化合物和/或其可接受的鹽或溶劑化物(例如，可藥用鹽或溶劑化物)，該活性成分與至少一種載體或賦型劑(例如，藥物載體或賦型劑)組合在一起。在治療其中表明需要5-羥色胺5-HT2A受體的調節劑的臨床症狀時，特別是當活性成分對5HT2A受體比對5HT2A受體有更高的選擇性時，尤其是當活性成分也是5HT2A受體的反激活性時，可以使用藥物組合物。至少一種式(A)化合物可與固體或液體載體組合在單位劑量的配方中。藥物載體必須是與組合物中的其它成分相容性的，並且必須是可被接受者個體耐受的。如果需要，可將其它的生理活性成分摻入到本發明的藥物組合物中，如果這些成分是與組合物中的其它成分相容的話。可用任何適當的方法進行製劑，通常是將活性化合物與液體或細碎的固體載體或兩者按所需的比例均勻混合，然後，如果需要，再將所得混合物製成所需的形狀。
在用於口服給藥的片劑和膠囊中使用常規的賦型劑如粘合劑、填料、可接受的溼潤劑、壓片潤滑劑和崩解劑。用於口服給藥的液體製劑，其可為溶液、乳液、水或油懸浮液和糖漿。另外，口服製劑也可為在使用前用水或其它適當的液體溶媒重建的乾粉形式。其它的添加劑如懸浮劑或乳化劑、非水溶媒(包括食用油)、防腐劑和矯味劑和著色劑也可加入到液體製劑中。通過將本發明的化合物溶解在適當的液體溶媒並將其過濾滅菌，然後灌裝到適當的瓶或安瓿中並密封，這樣可製備胃腸外給藥劑型。這些只是在劑型製備領域所熟知的許多適當方法中的少數幾個例子。
本發明的第五方面提供了式(A)化合物在製備藥物中的應用，所述藥用是用於治療其中表明需要5-羥色胺5-HT2A受體活性的調節劑的病症的藥物。
本發明的另一方面提供了一種用於治療哺乳動物例如人的病症的方法，所述病症的治療表明需要5-羥色胺5-HT2A受體活性的調節劑，該方法包括對所述哺乳動物施用治療有效量的式(A)化合物或生理上可接受的其鹽、溶劑化物或生理上的功能衍生物。實施例13試驗數據採用帶有Gilson HPLC的Micromass PlatformTMLC記錄質譜。在Nicolet AvatarTM360 FT-IR上記錄紅外光譜。熔點由ElectrothermalIA9200TM儀記錄，但未校正。由BrukerTM300MHz機器記錄質子核磁共振譜。參照四甲基矽烷給出化學遷移。在本文中，使用下列縮略詞s(單峰)，d(雙重峰)，t(三重峰)，m(多重峰)或其組合。化學遷移以百萬分之份數(ppm)以及以赫茲(Hz)為單位的偶合常數給出。
採用鋁襯二氧化矽板進行薄層色譜(250μL；GF254)。在使用Hichrom 3.5 C18反相柱(50mm×2.1mm內徑)的HP ChemstationTM1100HPLC上記錄HPLC。5分鐘內的線性梯度洗脫——95％水(+0.1TFA)/5％乙腈(+0.05％TFA)逐漸減到5％水/95％乙腈。流速為0.8mL/分鐘[方法A]；或在Hichron 3.5 C18反相柱(100mm×3.2mm，內徑)上進行。在11分鐘內的線性梯度95％水(+0。1％TFA)/5％乙腈(+0.05％TFA)逐漸減到5％水/95％乙腈。流速為1mL/分鐘[方法B]。樣品通常在254nM監測，除非另有指明。
所有的試劑均購自商業來源。試驗例1103487的製備和分析N-[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基][{(4-三氟甲氧基)苯基}氨基]甲醯胺該化合物可從Maybridge Chemical Company購買得到，其產品目錄編號為KM04515。
使用下列兩個合成方案中的一個或另一個(如所指明的)，製備以下各化合物方案A向存在於CH2Cl2(4mL)中的異氰酸酯(1mmol)中滴加3-(3-氨基苯基)-4-溴-1-甲基吡唑(1mmol)的CH2Cl2(4mL)溶液。將混合物攪拌16小時並濃縮。進行閃蒸矽膠(20％-80％乙酸乙酯/己烷)色譜純化，然後進行重結晶，得到純的脲。
方案B向溶於CH2Cl2(4mL)的三光氣(0.33mmol)溶液中滴加溶於CH2Cl2(4mL)的3-(3-氨基苯基)-4-溴-1-甲基吡唑(1mmol)和三乙胺(2mmol)的溶液。1小時後，加入苯胺1mmol。將混合物攪拌16小時並濃縮。進行閃蒸矽膠(20％-80％乙酸乙酯/己烷)色譜純化，然後進行重結晶，得到純的脲。試驗例2116079的製備和分析N-[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基][(4-甲硫基苯基)氨基]甲醯胺[方案A]-4-(甲硫基)苯基異氰酸酯無色固體(乙酸乙酯/己烷)
MS(ES+)m/z(％)＝419(M+H81Br，100)，417(M+H79Br，94).
1H-NMR(MeOH d4)δ＝2.42(3H，s，SCH3)，3.81(3H，s，NCH3)，7.06(1H，m，ArH)，7.22(2H，m，ArH)，7.37(2H，m，ArH)，7.42-7.61(4H，m，ArH).
HPLC滯留時間3.35分鐘(方法A)。試驗例3116081的製備和分析N-[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3基)苯基][4-(氯代苯基)氨基]甲醯胺[方案A]-4-氯代苯基異氰酸酯無色固體(乙酸乙酯/己烷)MS(ES+)m/z(％)＝409(M+H81Br37Cl，19)，407(M+H79Br37Cl(81Br35Cl)，100)，405(M+H79Br35Cl，81).
1H-NMR(MeOH d4)δ＝3.81(3H，s，CH3)，7.07(1H，m，ArH)，7.23(2H，m，ArH)，7.36-7.60(6H，m，ArH).
HPLC滯留時間3.42分鐘(方法A)。試驗例4116082的製備和分析{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3基)苯基]氨基}-N-4-(氟代苯基)甲醯胺[方案A]-4-氟代苯基異氰酸酯無色固體(乙酸乙酯/己烷)MS(ES+)m/z(％)＝391(M+H81Br，96)，389(M+H79Br，100).
1H-NMR(MeOHd4)δ＝3.81(3H，s，CH3)，6.93-7.11(3H，m，ArH)，7.37-7.61(6H，m，ArH).
HPLC滯留時間3.11分鐘。試驗例5116087的製備和分析
{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}-N-[2-(三氟甲氧基)苯基]甲醯胺[方案A]-2-(三氟甲氧基)苯基異氰酸酯無色固體(乙酸乙酯/己烷)MS(ES+)m/z(％)＝457(M+H81Br，100)，455(M+H79Br，95).
1H-NMR(DMSO d6)δ＝3.79(3H，s，CH3)，7.06-7.18(2H，m，ArH)，7.38-7.49(2H，m，ArH)，7.51-7.62(2H，m，ArH)，7.65(1H，m，ArH)，7.71(1H，s，ArH)，8.24(1H，dd，J＝1.1，8.2，ArH)，8.56(1H，s，NH)，9.49(1H，s，NH).
HPLC滯留時間3.40分鐘。試驗例6116089的製備和分析{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}-N-(2-硝基苯基)甲醯胺[方案A]-2-硝基苯基異氰酸酯黃色固體(乙酸乙酯/己烷)MS(ES+)n/z(％)＝418(M+H81Br，98)，416(M+H79Br，100).
1H-NMR(DMSO d6)δ＝1H-NMR(DMSO d6)□＝3.79(3H，s，NCH3)，7.14(1H，m，ArH)，7.24(1H，m，ArH)，7.50(1H，t，J＝7.7，ArH)，7.60(2H，m，ArH)，7.67(1H，s，ArH)，7.71(1H，s，ArH)，8.10(1H，m，ArH)，8.29(1H，m，ArH)，9.65(1H，s，NH)，10.09(1H，s，NH).
HPLC滯留時間3.10分鐘[方法A]。試驗例7116091的製備和分析{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}-N-(4-甲氧基苯基)甲醯胺[方案A]-4-甲氧基苯基異氰酸酯無色固體(乙酸乙酯/己烷)MS(ES+)m/z(％)＝403(M+H81Br，100)，401(M+H79Br，96).
1H-NMR(DMSO d6)δ＝3.71(3H，s，OCH3)，3.79(3H，s，NCH3)，6.87(2H，d，J＝8.9，ArH)，7.06(1H，d，J＝7.5，ArH)，7.39(2H，d，J＝8.9，ArH)，7.45-7.61(3H，m，ArH)，7.65(1H，s，ArH)，8.52(1H，s，NH)，8.84(1H，s，NH).
HPLC滯留時間3.08分鐘.試驗例8116092的製備和分析{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}-N-(2-甲基苯基)甲醯胺[方案A]-鄰甲苯基異氰酸酯無色固體(乙酸乙酯/己烷)MS(ES+)m/z(％)＝387(M+H81Br，94)，385(M+H79Br，100).
1H-NMR(MeOH d4)δ＝2.29(3H，s，CH3)，3.81(3H，s，NCH3)，7.03(1H，dt，J＝1.1，7.5，ArH)，7.09(1H，dt，J＝1.1，7.5，ArH)，7.13-7.22(2H，m，ArH)，7.45(1H，t，J＝7.9，ArH)，7.49-7.57(2H，m，ArH)，7.60-7.68(2H，m，ArH).
HPLC滯留時間2.96分鐘.試驗例9116097的製備和分析{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}-N-[4-(三氟甲基)苯基]甲醯胺[方案A]-4-(三氟甲基)苯基異氰酸酯無色固體(乙酸乙酯/己烷)MS(ES+)m/z(％)＝441(M+H81Br，94)，439(M+H79Br，100).
1H-NMR(MeOH d4)δ＝3.82(3H，s，CH3)，7.04-7.16(3H，m，ArH)，7.20-7.47(6H，m，ArH).
HPLC滯留時間3.56分鐘。試驗例10116105的製備和分析{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}-N-(3-氯代苯基)甲醯胺[方案A]-3-氯代苯基異氰酸酯無色固體(乙酸乙酯/己烷)MS(ES+)m/z(％)＝409(M+H81Br37Cl，26)，407(M+H79Br37Cl(81Br35Cl)，100)，405(M+H79Br35Cl，70).
1H-NMR(MeOH d4)δ＝3.81(3H，s，NCH3)，7.04(1H，m，ArH)，7.10(1H，m，ArH)，7.28(2H，m，ArH)，7.47(1H，t，J＝7.8，ArH)，7.55(1H，m，ArH)，7.63(1H，m，ArH)，7.68(1H，s，ArH)，7.73(1H，m，ArH)，9.04(2H，s，NH).
HPLC滯留時間3.20分鐘[方法A]。試驗例11116108的製備和分析{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}-N-(2-氯代苯基)甲醯胺[方案A]-2-氯代苯基異氰酸酯無色固體(乙酸乙酯/己烷)MS(ES+)m/z(％)＝409(M+H81Br37Cl，24)，407(M+H79Br37Cl(81Br35Cl)，100)，405(M+H79Br35Cl，72).
1H-NMR(MeOH d4)δ＝3.81(3H，s，NCH3)，7.03(1H，m，ArH)，7.11(1H，m，ArH)，7.28(1H，m，ArH)，7.35-7.53(3H，m，ArH)，7.55(1H，s，ArH)，7.62(1H，m，ArH)，8.11(1H，m，ArH).
HPLC滯留時間3.13分鐘。試驗例12116110的製備和分析{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}-N-[4-(甲基乙基)苯基]甲醯胺[方案A]-4-異丙基苯基異氰酸酯無色固體(THF/己烷)MS(ES+)m/z(％)＝415(M+H81Br，100)，413(M+H79Br，92).
1H-NMR(MeOH d4)δ＝1.23(6H，d，J＝6.8，2xCH3)，2.86(1H，septet，J＝6.8，CH)，3.82(3H，s，NCH3)，7.09(1H，m，ArH)，7.16(2H，d，J＝7.6，ArH)，7.31(2H，d，J＝7.6，ArH)，7.42-7.51(2H，m，ArH)，7.54(1H，s，ArH)，7.59(1H，m，ArH).
HPLC滯留時間3.66分鐘。試驗例13116111的製備和分析{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}-N-(3-甲氧基苯基)甲醯胺[方案A]-3-甲氧基苯基異氰酸酯無色固體(乙酸乙酯/己烷)MS(ES+)m/z(％)＝403(M+H81Br，100)，401(M+H79Br，96).
1H-NMR(MeOH d4)δ＝3.73(3H，s，OCH3)，3.81(3H，s，NCH3)，6.59(1H，m，ArH)，6.91(1H，m，ArH)，7.08(1H，m，ArH)，7.14(2H，m，ArH)，7.39-7.61(4H，m，ArH).
HPLC滯留時間2.90分鐘。試驗例14116112的製備和分析{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}-N-(3-甲基苯基)甲醯胺[方案A]-間甲苯基異氰酸酯無色固體(乙酸乙酯/己烷)MS(ES+)m/z(％)＝387(M+H81Br，100)，385(M+H79Br，96).
1H-NMR(DMSO d6)δ＝2.26(3H，s，CH3)，3.76(3H，s，NCH3)，6.79(1H，m，ArH)，7.06-7.22(3H，m，ArH)，7.29(1H，m，ArH)，7.43-7.62(3H，m，ArH)，7.68(1H，s，ArH)，8.65(1H，s，NH)，8.89(1H，s，NH).
HPLC滯留時間3.05分鐘[方法A]。試驗例15116113的製備和分析{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}-N-甲基-N-[4-(三氟甲氧基)苯基]甲醯胺[方案B]-N-甲基-4-(三氟甲氧基)苯胺淺黃色固體(乙酸乙酯/己烷)MS(ES+)m/z(％)＝471(M+H81Br，88)，469(M+H79Br，100).
1H-NMR(MeOH d4)δ＝3.35(3H，s，NCH3)，3.81(3H，s，NCH3)，7.09(1H，m，ArH)，7.25-7.51(8H，m，ArH).
HPLC滯留時間3.56分鐘[方法A]。試驗例16116119的製備和分析N-[4-(叔丁基)苯基]{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}甲醯胺[方案B]-4-叔丁基苯胺無色固體(乙酸乙酯/己烷)MS(ES+)m/z(％)＝429(M+H81Br，98)，427(M+H79Br，100).
1H-NMR(DMSO d6)δ＝1.27(9H，s，3xCH3)，3.79(3H，s，NCH3)，7.07(1H，d，J＝7.5，ArH)，7.29(2H，d，J＝8.7，ArH)，7.37(2H，d，J＝8.7，ArH)，7.45(1H，t，J＝7.5，ArH)，7.51-7.60(2H，m，ArH)，7.66(1H，s，ArH)，8.65(1H，s，NH)，8.83(1H，s，NH).
HPLC滯留時間3.77分鐘。試驗例17116122的製備和分析N-[4-(二甲基氨基)苯基]{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}甲醯胺[方案B]-N，N-二甲基-對亞苯基二胺無色固體(乙酸乙酯/己烷)MS(ES+)m/z(％)＝416 (M+H81Br，96)，414(M+H79Br，100).
1H-NMR(DMSO d6)δ＝2.86(6H，s，NCH3)，3.80(3H，s，NCH3)，6.80(2H，m，ArH)，7.09(1H，d，J＝7.7，ArH)，7.28(2H，m，ArH)，7.42(1H，t，J＝7.8，ArH)，7.52(1H，m，ArH)，7.59(1H，s，ArH)，7.67(1H，s，ArH)，8.45(1H，s，NH)，8.75(1H，s，NH).
HPLC滯留時間2.07分鐘[方法A]。試驗例18116138的製備和分析N-(3，5-二氯-4-甲基苯基){[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}甲醯胺[方案B]-3，5-二氯-4-甲基苯胺無色固體(乙酸乙酯/己烷)MS(ES+)m/z(％)＝457(M+H，35)，455(M+H，100)，453(M+H，65).
1H-NMR(DMSO d6)δ＝2.32(3H，s，CH3)，3.79(3H，s，NCH3)，7.11(1H，d，J＝7.4，ArH)，7.46(1H，t，J＝7.8，ArH)，7.50-7.64(4H，m，ArH)，7.68(1H，s，ArH)，9.02(1H，s，NH)，9.09(1H，s，NH).
HPLC滯留時間3.66分鐘。試驗例19116139的製備和分析{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}-N-[4-(三氟甲硫基)苯基]甲醯胺[方案B]-4-(三氟甲硫基)苯胺無色固體(乙酸乙酯/己烷)MS(ES+)m/z(％)＝473(M+H81Br，100)，471(M+H79Br，94).
1H-NMR(DMSO d6)δ＝3.81(3H，s，NCH3)，7.11(1H，d，J＝7.5，ArH)，7.47(1H，t，J＝7.9，ArH)，7.51-7.63(6H，m，ArH)，7.66(1H，s，ArH)，9.03(1H，s，NH)，9.16(1H，s，NH).
HPLC滯留時間3.76分鐘。試驗例20116141的製備和分析{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}-N-環己基)甲醯胺[方案B]-環己胺無色固體，m.p.155.5-156.3℃(乙酸乙酯/己烷)。
MS(ES+)m/z(％)＝379(M+H81Br，93)，377(M+H79Br，100).
1H-NMR(DMSO d6)δ＝1.07-1.34(5H，m，5xCH)，1.52(1H，m，CH)，1.63(2H，m，2xCH)，1.76(2H，m，2xCH)，3.48(1H，m，NCH)，3.74(3H，s，CH3)，6.15(1H，d，J＝7.8，ArH)，6.98(1H，d，J＝7.5，ArH)，7.32-7.43(2H，m，ArH)，7.51(1H，m，NH)，7.62(1H，s，ArH)，8.50(1H，s，NH).
HPLC滯留時間3.16分鐘[方法A]。
TLC滯留因子0.35(50％乙酸乙酯/己烷)。試驗例21116143的製備和分析{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}-N-(苯基甲基)甲醯胺[方案B]-苄胺無色固體，m.p.144.5-146.2℃(乙酸乙酯/己烷)。
IR□max＝1622，1565，1467，1374，1239，973，802，752，695cm-1.
MS(ES+)m/z(％)＝387(M+H81Br，89)，385(M+H79Br，100).
1H-NMR(CD3OD)δ＝3.81(3H，s，CH3)，4.40(2H，s，CH2)，7.05(1H，m，ArH)，7.19-7.51(9H，m，ArH).
HPLC滯留時間3.06分鐘[方法A].a試驗例22116144的製備和分析{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}-N-(2-氟代苯基)甲醯胺[方案A]-2-氟代苯基異氰酸酯無色固體(DCM/己烷)MS(ES+)m/z(％)＝391(M+H81Br，100)，389(M+H79Br，90).
1H-NMR(MeOH d4)δ＝3.79(3H，s，NCH3)，7.00-7.11(4H，m，ArH)，7.40-7.56(3H，m，ArH)，7.61(1H，m，ArH)，8.09(1H，m，ArH).
HPLC滯留時間3.01分鐘。試驗例23116145的製備和分析2-({[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}羰基氨基)苯甲醯胺[方案B]-2-氨基苯甲醯胺無色固體(乙酸乙酯/己烷)
MS(ES+)m/z(％)＝399(M+H-1781Br，100)，397(M+H-1779Br，94).
1H-NMR(DMSO d6)δ＝3.79(3H，s，NCH3)，6.93-7.10(2H，m，ArH)，7.45(2H，t，J＝7.8，ArH)，7.59-7.72(5H，m，ArH)，8.22(2H，m)，9.92(1H，s，NH)，10.69(1H，s，NH).
HPLC滯留時間2.88分鐘。試驗例24116147的製備和分析{(3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基)氨基}-N-(4-氰基苯基)甲醯胺[方案B]-4-氨基苯基氰無色固體(乙酸乙酯/己烷)MS(ES+)m/z(％)＝398(M+H81Br，100)，396(M+H79Br，96).
1H-NMR(MeOH d4)δ＝3.81(3H，s，NCH3)，7.12(1H，m，ArH)，7.46-7.57(3H，m，ArH)，7.62-7.69(5H，m，ArH).
HPLC滯留時間3.12分鐘。試驗例25116148的製備和分析{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}-N-(2-氰基苯基)甲醯胺[方案B]-2-氨基苯基氰無色固體(乙酸乙酯/己烷)MS(ES+)m/z(％)＝398(M+H81Br，95)，396(M+H79Br，100).
1H-NMR(CDCl3)δ＝3.79(3H，s，CH3)，7.13-7.28(2H，m，ArH)，7.49(1H，t，J＝7.8，ArH)，7.57(1H，m，ArH)，7.62(1H，m，ArH)，7.65-7.71(2H，m，ArH)，7.78(1H，m，ArH)，8.07(1H，d，J＝8.6，ArH)，8.83(1H，s，NH)，9.62(1H，s，NH).
HPLC滯留時間3.05分鐘[方法A]。試驗例26116182的製備和分析{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}-N-(4-氟代苯基甲基)甲醯胺-4-氟苄胺無色固體，m.p.185.5-186.6℃(乙酸乙酯/己烷)。
MS(ES+)m/z(％)＝405(M+H81Br，97)，403(M+H79Br，100).
1H-NMR(DMSO d6)δ＝3.75(3H，s，CH3)，4.28(2H，d，J＝6.0，CH2)，6.73(1H，t，J＝5.9，NH)，7.01(1H，d，J＝7.5，ArH)，7.10-7.18(2H，m，ArH)，7.27-7.41(4H，m，ArH)，7.56(1H，s，ArH)，7.62(1H，s，ArH)，8.82(1H，s，NH).
HPLC滯留時間3.10分鐘[方法A]。
TLC滯留因子0.25(50％乙酸乙酯/己烷)。試驗例27116183的製備和分析{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}-N-(3，4-二甲氧基苯基甲基)甲醯胺[方案B]-3，4-二甲氧基苄胺無色固體，m.p.174.9-175.5℃(乙酸乙酯/己烷)。
MS(CI+)m/z(％)＝447(M+H81Br，100)，445(M+H79Br，92).
1H-NMR(DMSO d6)δ＝3.71(3H，s，CH3)，3.73(3H，s，CH3)，3.76(3H，s，CH3)，4.22(2H，d，J＝5.8，CH2)，6.62(1H，t，J＝5.7，NH)，6.80(1H，m，ArH)，6.89(2H，m，ArH)，6.98(1H，m，ArH)，7.36-7.51(3H，m，ArH)，7.63(1H，s，ArH)，8.76(1H，s，NH).
HPLC滯留時間2.86分鐘[方法A]。
TLC滯留因子0.20(50％乙酸乙酯/己烷)。試驗例28116184的製備和分析{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}-N-(3，4，5-三甲氧基苯基甲基)甲醯胺[方案B]3，4，5-三甲氧基苄胺無色固體(乙酸乙酯/己烷)。
MS(CI+)m/z(％)＝477(M+H81Br，100)，475(M+H79Br，95).
1H-NMR(DMSO d6)δ＝3.63(3H，s，OCH3)，3.75(9H，s，3xCH3)，4.21(1H，d，J＝5.9，CH2)，6.61(2H，s，ArH)，6.65(1H，t，J＝5.9，NH)，6.99(1H，m，ArH)，7.40(1H，t，J＝7.7，ArH)，7.45(1H，m，ArH)，7.56(1H，m，ArH)，7.64(1H，s，ArH)，8.77(1H，s，NH).
HPLC滯留時間5.91分鐘[Method B]。
TLC滯留因子0.50(50％乙酸乙酯/己烷).試驗例29116185的製備和分析{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}-N-(2-甲基苯基甲基)甲醯胺[方案B]-2-甲基苄胺無色固體(乙酸乙酯/己烷)MS(CI+)m/z(％)＝401(M+H81Br，96)，399(M+H79Br，100).
1H-NMR(DMSO d6)δ＝2.28(3H，s，CH3)，3.76(3H，s，NCH3)，4.28(1H，d，J＝5.8，CH2)，6.60(1H，t，J＝5.8，NH)，7.01(1H，m，ArH)，7.15(3H，m，ArH)，7.24(1H，m，ArH)，7.38-7.50(2H，m，ArH)，7.57(1H，m，ArH)，7.65(1H，s，ArH)，8.77(1H，s，NH).
HPLC滯留時間2.74分鐘[方法A]。
TLC滯留因子0.20(50％乙酸乙酯/己烷)。試驗例30116189的製備和分析{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}-N-(4-甲氧基苯基甲基)甲醯胺[方案B]-4-甲氧基苄胺無色固體(乙酸乙酯/己烷)。
MS(CI+)m/z(％)＝417(M+H81Br，94)，415(M+H79Br，100).
1H-NMR(DMSO d6)δ＝3.72(3H，s，CH3)，3.77(3H，s，NCH3)，4.22(1H，d，J＝5.9，CH2)，6.62(1H，t，J＝5.9，NH)，6.90(2H，d，J＝8.8，ArH)，7.00(1H，m，ArH)，7.23(2H，d，J＝8.8，ArH)，7.39(1H，t，J＝7.8，ArH)，7.43(1H，m，ArH)，7.56(1H，m，ArH)，7.64(1H，s，ArH)，8.73(1H，s，NH).
HPLC滯留時間6.41分鐘[方法B]。
TLC滯留因子0.25(50％乙酸乙酯/己烷)。試驗例31116194的製備和分析{[3-(4-溴-1-甲基吡唑-3-基)苯基]氨基}-N-[2-(4-甲氧基)苯基乙基]甲醯胺[方案B]-2-(4-甲氧基苯基)乙胺無色固體(乙酸乙酯/己烷)MS(ES+)m/z(％)＝431(M+H81Br，95)，429(M+H79Br，100).
1H-NMR(DMSO d6)δ＝2.68(2H，t，J＝7.1，CH2)，3.31(2H，m，CH2)，3.71(3H，s，CH3)，3.77(3H，s，CH3)，6.16(1H，t，J＝5.8，NH)，6.87(2H，d，J＝8.6，ArH)，6.99(1H，dt，J＝1.4，7.3，ArH)，7.16(2H，d，J＝8.6，ArH)，7.33-7.48(2H，m，ArH)，7.52(1H，m，ArH)，7.63(1H，s，ArH)，8.71(1H，s，NH).
HPLC滯留時間6.62分鐘[方法B]。
從以上數據可以得出的重要的一點是，通過在侯選化合物的直接識別過程中使用受體的組成型活化形式，化合物的選擇性是指數級的正如本領域的人所知道的，在人5HT2A和5HT2C受體之間有約95％的同源性，即使有這樣的同源性，某些被直接識別的化合物例如化合物116081和116082對5HT2A受體的優先選擇性(通過IC50值測量)與對5HT2C受體的選擇性相比顯示出了100倍的差異。這一點對於藥物組合物而言是重要的，因為這樣的選擇性將有助於減少藥物與非靶受體相互作用相關的副作用。
本發明的不同的實施方案將由不同的組成型活化的受體、不同的表達系統、不同的分析試驗、和不同的化合物組成。本領域的普通技術人員會明白並能確定何種受體與何種的表達系統以及分析試驗一起使用。所有這些都被認為是在本發明的範圍內。另外，本領域的普通技術人員將理解的是可在不背離本發明精神的前提下，對上文闡述的本發明的描述性實施例作出各種修改、增加、代換、和改變，因此，這些種修改、增加、代換、和改變也在本發明的範圍內。所有在上文中引用的文獻(包括但不限於臨時和常規專利申請)以其全文在此引入本文。
序列表序列表110 阿瑞那製藥公司(Arena Pharmaceuticals，Inc.)120 非內源的組成型活化的人5-羥色胺受體的小分子調節劑(Small Molecule Modulators of Non-Endogenous，Constitutively Activated Human Serotonin Receptors)130 AREN-0085150 US 60/152,798151 1999-09-07150 US 09/418,721151 1999-10-15150 US 09/292,072151 1999-04-14150 US 60/123,000151 1999-03-05150 US 09/292,071151 1999-04-14150 US 09/292,069151 1999-04-14150 US 60/112,909151 1998-12-18160 27170 PatentIn version 3.0210 1211 28212 DNA213 人工序列400 1gacctcgagg ttgcttaaga ctgaagca 28210 2211 28212 DNA213 人工序列400 2atttctagac atatgtagct tgtaccgt 28210 3211 50212 DNA213 人工序列400 3ctaggggcac catgcaggct atcaacaatg aaagaaaagc taagaaagtc 50210 4211 50212 DNA213 人工序列400 4caaggacttt cttagctttt ctttcattgt tgatagcctg catggtgccc 50210 5211 26212 DNA213 人工序列400 5gacctcgagt ccttctacac ctcatc 26210 6211 30212 DNA213 人工序列400 6tgctctagat tccagatagg tgaaaacttg 30210 7211 31212 DNA213 人工序列400 7caaagaaagt actgggcatc gtcttcttcc t31210 8211 31212 DNA213 人工序列400 8ccgctcgagt actgcgccga caagctttga t31210 9211 38212 DNA213 人工序列400 9cgatgcccag cactttcgaa gcttttcttt cattgttg 38210 10211 36212 DNA213 人工序列400 10aaaagcttcg aaagtgctgg gcatcgtctt cttcct36210 11211 30212 DNA213 人工序列400 11tgctctagat tccagatagg tgaaaacttg 30210 12211 19212 DNA213 人工序列400 12cgtgtctctc cttacttca 19210 13211 36212 DNA213 人工序列400 13tcggcgcagt actttgatag ttagaaagta ggtgat36210 14211 38212 DNA213 人工序列400 14ttctaactat caaagtactg cgccgacaag ctttgatg 38210 15211 43212 DNA213 人工序列400 15ttcagcagtc aacccactag tctatactct gttcaacaaa att43210 16211 28212 DNA213 人工序列400 16atttctagac atatgtagct tgtaccgt 28210 17211 19212 DNA213 人工序列400 17atcacctact ttctaacta 19210 18211 33212 DNA213 人工序列400 18ccataatcgt caggggaatg aaaaatgaca caa 33210 19211 33212 DNA213 人工序列400 19atttttcatt cccctgacga ttatggtgat tac 33210 20211 33212 DNA213 人工序列400 20tgatgaagaa agggcaccac atgatcagaa aca 33210 21211 33212 DNA213 人工序列400 21gatcatgtgg tgccctttct tcatcacaaa cat 33210 22211 1377212 DNA213 智人(Homo sapiens)400 22atggtgaacc tgaggaatgc ggtgcattca ttccttgtgc acctaattgg cctattggtt 60tggcaatgtg atatttctgt gagcccagta gcagctatag taactgacat tttcaatacc 120tccgatggtg gacgcttcaa attcccagac ggggtacaaa actggccagc actttcaatc 180gtcatcataa taatcatgac aataggtggc aacatccttg tgatcatggc agtaagcatg 240gaaaagaaac tgcacaatgc caccaattac ttcttaatgt ccctagccat tgctgatatg 300ctagtgggac tacttgtcat gcccctgtct ctcctggcaa tcctttatga ttatgtctgg360ccactaccta gatatttgtg ccccgtctgg atttctttag atgttttatt ttcaacagcg420tccatcatgc acctctgcgc tatatcgctg gatcggtatg tagcaatacg taatcctatt480gagcatagcc gtttcaattc gcggactaag gccatcatga agattgctat tgtttgggca540atttctatag gtgtatcagt tcctatccct gtgattggac tgagggacga agaaaaggtg600ttcgtgaaca acacgacgt cgtgctcaac gacccaaatt tcgttcttat tgggtccttc660gtagctttct tcataccgct gacgattatg gtgattacgt attgcctgac catctacgtt720ctgcgccgac aagctttgat gttactgcac ggccacaccg aggaaccgcc tggactaagt780ctggatttcc tgaagtgctg caagaggaat acggccgagg aagagaactc tgcaaaccct840aaccaagacc agaacgcacg ccgaagaaag aagaaggaga gacgtcctag gggcaccatg900caggctatca acaatgaaag aaaagctaag aaagtccttg ggattgtttt ctttgtgttt960ctgatcatgt ggtgcccatt tttcattacc aatattctgt ctgttctttg tgagaagtcc 1020tgtaaccaaa agctcatgga aaagcttctg aatgtgtttg tttggattgg ctatgtttgt 1080tcaggaatca atcctctggt gtatactctg ttcaacaaaa tttaccgaag ggcattctcc 1140aactatttgc gttgcaatta taaggtagag aaaaagcctc ctgtcaggca gattccaaga 1200gttgccgcca ctgctttgtc tgggagggag cttaatgtta acatttatcg gcataccaat 1260gaaccggtga tcgagaaagc cagtgacaat gagcccggta tagagatgca agttgagaat 1320ttagagttac cagtaaatcc ctccagtgtg gttagcgaaa ggattagcag tgtgtga 1377210 23211 458212 PRT213 智人(Homo sapiens)400 23Met Val Asn Leu Arg Asn Ala Val His Ser Phe Leu Val His Leu Ile1 510 15Gly Leu Leu Val Trp Gln Cys Asp Ile Ser Val Ser Pro Val Ala Ala20 25 30Ile Val Thr Asp Ile Phe Asn Thr Ser Asp Gly Gly Arg Phe Lys Phe35 40 45Pro Asp Gly Val Gln Asn Trp Pro Ala Leu Ser Ile Val Ile Ile Ile50 55 60Ile Met Thr Ile Gly Gly Asn Ile Leu Val Ile Met Ala Val Ser Met65 70 75 80Glu Lys Lys Leu His Asn Ala Thr Asn Tyr Phe Leu Met Ser Leu Ala85 90 95Ile Ala Asp Met Leu Val Gly Leu Leu Val Met Pro Leu Ser Leu Leu100 105 110Ala Ile Leu Tyr Asp Tyr Val Trp Pro Leu Pro Arg Tyr Leu Cys Pro115 120 125Val Trp Ile Ser Leu Asp Val Leu Phe Ser Thr Ala Ser Ile Met His130 135 140Leu Cys Ala Ile Ser Leu Asp Arg Tyr Val Ala Ile Arg Asn Pro Ile145 150 155 160Glu His Ser Arg Phe Asn Ser Arg Thr Lys Ala Ile Met Lys Ile Ala165 170 175Ile Val Trp Ala Ile Ser Ile Gly Val Ser Val Pro Ile Pro Val Ile180 185 190Gly Leu Arg Asp Glu Glu Lys Val Phe Val Asn Asn Thr Thr Cys Val195 200 205Leu Asn Asp Pro Asn Phe Val Leu Ile Gly Ser Phe Val Ala Phe Phe210 215 220Ile Pro Leu Thr Ile Met Val Ile Thr Tyr Cys Leu Thr Ile Tyr Val225 230 235 240Leu Arg Arg Gln Ala Leu Met Leu Leu His Gly His Thr Glu Glu Pro245 250 255Pro Gly Leu Ser Leu Asp Phe Leu Lys Cys Cys Lys Arg Asn Thr Ala260 265 270Glu Glu Glu Asn Ser Ala Asn Pro Asn Gln Asp Gln Asn Ala Arg Arg275 280 285Arg Lys Lys Lys Glu Arg Arg Pro Arg Gly Thr Met Gln Ala Ile Asn290 295 300Asn Glu Arg Lys Ala Lys Lys Val Leu Gly Ile Val Phe Phe Val Phe305 310 315 320Leu Ile Met Trp Cys Pro Phe Phe Ile Thr Asn Ile Leu Ser Val Leu325 330 335Cys Glu Lys Ser Cys Asn Gln Lys Leu Met Glu Lys Leu Leu Asn Val340 345 350Phe Val Trp Ile Gly Tyr Val Cys Ser Gly Ile Asn Pro Leu Val Tyr355 360 365Thr Leu Phe Asn Lys Ile Tyr Arg Arg Ala Phe Ser Asn Tyr Leu Arg370 375 380Cys Asn Tyr Lys Val Glu Lys Lys Pro Pro Val Arg Gln Ile Pro Arg385 390 395 400Val Ala Ala Thr Ala Leu Ser Gly Arg Glu Leu Asn Val Asn Ile Tyr405 410 415Arg His Thr Asn Glu Pro Val Ile Glu Lys Ala Ser Asp Asn Glu Pro420 425 430Gly Ile Glu Met Gln Val Glu Asn Leu Glu Leu Pro Val Asn Pro Ser435 440 445Ser Val Val Ser Glu Arg Ile Ser Ser Val450 455210 24211 1437212 DNA213 智人(Homo sapiens)400 24atggatattc tttgtgaaga aaatacttct ttgagctcaa ctacgaactc cctaatgcaa 60ttaaatgatg acaacaggct ctacagtaat gactttaact ccggagaagc taacacttct 120gatgcattta actggacagt cgactctgaa aatcgaacca acctttcctg tgaagggtgc 180ctctcaccgt cgtgtctctc cttacttcat ctccaggaaa aaaactggtc tgctttactg 240acagccgtag tgattattct aactattgct ggaaacatac tcgtcatcat ggcagtgtcc 300ctagagaaaa agctgcagaa tgccaccaac tatttcctga tgtcacttgc catagctgat 360atgctgctgg gtttccttgt catgcccgtg tccatgttaa ccatcctgta tgggtaccgg 420tggcctctgc cgagcaagct ttgtgcagtc tggatttacc tggacgtgct cttctccacg 480gcctccatca tgcacctctg cgccatctcg ctggaccgct acgtcgccat ccagaatccc 540atccaccaca gccgcttcaa ctccagaact aaggcatttc tgaaaatcat tgctgtttgg 600accatatcag taggtatatc catgccaata ccagtctttg ggctacagga cgattcgaag 660gtctttaagg aggggagttg cttactcgcc gatgataact ttgtcctgat cggctctttt 720gtgtcatttt tcattccctt aaccatcatg gtgatcacct actttctaac tatcaaggtt 780ctgcgccgac aagctttgat gttactgcac ggccacaccg aggaaccgcc tggactaagt 840ctggatttcc tgaagtgctg caagaggaat acggccgagg aagagaactc tgcaaaccct 900aaccaagacc agaacgcacg ccgaagaaag aagaaggaga gacgtcctag gggcaccatg 960caggctatca acaatgaaag aaaagcttcg aaggtactgg gcatcgtctt cttcctgttt1020gtggtgatgt ggtgcccttt cttcatcaca aacatcatgg ccgtcatctg caaagagtcc1080tgcaatgagg atgtcattgg ggccctgctc aatgtgtttg tttggatcgg ttatctctct1140tcagcagtca acccactagt ctatactctg ttcaacaaaa tttaccgaag ggcattctcc1200aactatttgc gttgcaatta taaggtagag aaaaagcctc ctgtcaggca gattccaaga1260gttgccgcca ctgctttgtc tgggagggag cttaatgtta acatttatcg gcataccaat1320gaaccggtga tcgagaaagc cagtgacaat gagcccggta tagagatgca agttgagaat1380ttagagttac cagtaaatcc ctccagtgtg gttagcgaaa ggattagcag tgtgtga 1437210 25211 478212 PRT213 智人(Homo sapiens)400 25Met Asp Ile Leu Cys Glu Glu Asn Thr Ser Leu Ser Ser Thr Thr Asn1 5 10 15Ser Leu Met Gln Leu Asn Asp Asp Asn Arg Leu Tyr Ser Asn Asp Phe20 25 30Asn Ser Gly Glu Ala Asn Thr Ser Asp Ala Phe Asn Trp Thr Val Asp35 40 45Ser Glu Asn Arg Thr Asn Leu Ser Cys Glu Gly Cys Leu Ser Pro Ser50 55 60Cys Leu Ser Leu Leu His Leu Gln Glu Lys Asn Trp Ser Ala Leu Leu65 70 75 80Thr Ala Val Val Ile Ile Leu Thr Ile Ala Gly Asn Ile Leu Val Ile85 90 95Met Ala Val Ser Leu Glu Lys Lys Leu Gln Asn Ala Thr Asn Tyr Phe100 105 110Leu Met Ser Leu Ala Ile Ala Asp Met Leu Leu Gly Phe Leu Val Met115 120 125Pro Val Ser Met Leu Thr Ile Leu Tyr Gly Tyr Arg Trp Pro Leu Pro130 135 140Ser Lys Leu Cys Ala Val Trp Ile Tyr Leu Asp Val Leu Phe Ser Thr145 150 155 160Ala Ser Ile Met His Leu Cys Ala Ile Ser Leu Asp Arg Tyr Val Ala165 170 175Ile Gln Asn Pro Ile His His Ser Arg Phe Asn Ser Arg Thr Lys Ala180 185 190Phe Leu Lys Ile Ile Ala Val Trp Thr Ile Ser Val Gly Ile Ser Met195 200 205Pro Ile Pro Val Phe Gly Leu Gln Asp Asp Ser Lys Val Phe Lys Glu210 215 220Gly Ser Cys Leu Leu Ala Asp Asp Asn Phe Val Leu Ile Gly Ser Phe225 230 235 240Val Ser Phe Phe Ile Pro Leu Thr Ile Met Val Ile Thr Tyr Phe Leu245 250 255Thr Ile Lys Val Leu Arg Arg Gln Ala Leu Met Leu Leu His Gly His260 265 270Thr Glu Glu Pro Pro Gly Leu Ser Leu Asp Phe Leu Lys Cys Cys Lys275 280 285Arg Asn Thr Ala Glu Glu Glu Asn Ser Ala Asn Pro Asn Gln Asp Gln290 295 300Asn Ala Arg Arg Arg Lys Lys Lys Glu Arg Arg Pro Arg Gly Thr Met305 310 315 320Gln Ala Ile Asn Asn Glu Arg Lys Ala Ser Lys Val Leu Gly Ile Val325 330 335Phe Phe Leu Phe Val Val Met Trp Cys Pro Phe Phe Ile Thr Asn Ile340 345 350Met Ala Val Ile Cys Lys Glu Ser Cys Asn Glu Asp Val Ile Gly Ala355 360 365Leu Leu Asn Val Phe Val Trp Ile Gly Tyr Leu Ser Ser Ala Val Asn370 375 380Pro Leu Val Tyr Thr Leu Phe Asn Lys Ile Tyr Arg Arg Ala Phe Ser385 390 395 400Asn Tyr Leu Arg Cys Asn Tyr Lys Val Glu Lys Lys Pro Pro Val Arg405 410 415Gln Ile Pro Arg Val Ala Ala Thr Ala Leu Ser Gly Arg Glu Leu Asn420 425 430Val Asn Ile Tyr Arg His Thr Asn Glu Pro Val Ile Glu Lys Ala Ser435 440 445Asp Asn Glu Pro Gly Ile Glu Met Gln Val Glu Asn Leu Glu Leu Pro450 455 460Val Asn Pro Ser Ser Val Val Ser Glu Arg Ile Ser Ser Val465 470 475210 26211 1380212 DNA213 智人(Homo sapiens)400 26atggatattc tttgtgaaga aaatacttct ttgagctcaa ctacgaactc cctaatgcaa 60ttaaatgatg acaacaggct ctacagtaat gactttaact ccggagaagc taacacttct 120gatgcattta actggacagt cgactctgaa aatcgaacca acctttcctg tgaagggtgc 180ctctcaccgt cgtgtctctc cttacttcat ctccaggaaa aaaactggtc tgctttactg 240acagccgtag tgattattct aactattgct ggaaacatac tcgtcatcat ggcagtgtcc 300ctagagaaaa agctgcagaa tgccaccaac tatttcctga tgtcacttgc catagctgat 360atgctgctgg gtttccttgt catgcccgtg tccatgttaa ccatcctgta tgggtaccgg 420tggcctctgc cgagcaagct ttgtgcagtc tggatttacc tggacgtgct cttctccacg 480gcctccatca tgcacctctg cgccatctcg ctggaccgct acgtcgccat ccagaatccc 540atccaccaca gccgcttcaa ctccagaact aaggcatttc tgaaaatcat tgctgtttgg 600accatatcag taggtatatc catgccaata ccagtctttg ggctacagga cgattcgaag 660gtctttaagg aggggagttg cttactcgcc gatgataact ttgtcctgat cggctctttt 720gtgtcatttt tcattcccct gacgattatg gtgattacgt attgcctgac catctacgtt 780ctgcgccgac aagctttgat gttactgcac ggccacaccg aggaaccgcc tggactaagt 840ctggatttcc tgaagtgctg caagaggaat acggccgagg aagagaactc tgcaaaccct 900aaccaagacc agaacgcacg ccgaagaaag aagaaggaga gacgtcctag gggcaccatg 960caggctatca acaatgaaag aaaagctaag aaagtccttg ggattgtttt ctttgtgttt1020ctgatcatgt ggtgcccttt cttcatcaca aacatcatgg ccgtcatctg caaagagtcc1080tgcaatgagg atgtcattgg ggccctgctc aatgtgtttg tttggatcgg ttatctctct1140tcagcagtca acccactagt ctatactctg ttcaacaaaa tttaccgaag ggcattctcc1200aactatttgc gttgcaatta taaggtagag aaaaagcctc ctgtcaggca gattccaaga1260gttgccgcca ctgctttgtc tgggagggag cttaatgtta acatttatcg gcataccaat1320gaaccggtga tcgagaaagc cagtgacaat gagcccggta tagagatgca agttgagaat 1380210 27211 478212 PRT213 智人(Homo sapiens)400 27Met Asp Ile Leu Cys Glu Glu Asn Thr Ser Leu Ser Ser Thr Thr Asn1 5 10 15Ser Leu Met Gln Leu Asn Asp Asp Asn Arg Leu Tyr Ser Asn Asp Phe20 25 30Asn Ser Gly Glu Ala Asn Thr Ser Asp Ala Phe Asn Trp Thr Val Asp35 40 45Ser Glu Asn Arg Thr Asn Leu Ser Cys Glu Gly Cys Leu Ser Pro Ser50 55 60Cys Leu Ser Leu Leu His Leu Gln Glu Lys Asn Trp Ser Ala Leu Leu65 70 75 80Thr Ala Val Val Ile Ile Leu Thr Ile Ala Gly Asn Ile Leu Val Ile85 90 95Met Ala Val Ser Leu Glu Lys Lys Leu Gln Asn Ala Thr Asn Tyr Phe100 105 110Leu Met Ser Leu Ala Ile Ala Asp Met Leu Leu Gly Phe Leu Val Met115 120 125Pro Val Ser Met Leu Thr Ile Leu Tyr Gly Tyr Arg Trp Pro Leu Pro130 135 140Ser Lys Leu Cys Ala Val Trp Ile Tyr Leu Asp Val Leu Phe Ser Thr145 150 155 160Ala Ser Ile Met His Leu Cys Ala Ile Ser Leu Asp Arg Tyr Val Ala165 170 175Ile Gln Asn Pro Ile His His Ser Arg Phe Asn Ser Arg Thr Lys Ala180 185 190Phe Leu Lys Ile Ile Ala Val Trp Thr Ile Ser Val Gly Ile Ser Met195 200 205Pro Ile Pro Val Phe Gly Leu Gln Asp Asp Ser Lys Val Phe Lys Glu210 215 220Gly Ser Cys Leu Leu Ala Asp Asp Asn Phe Val Leu Ile Gly Ser Phe225 230 235 240Val Ser Phe Phe Ile Pro Leu Thr Ile Met Val Ile Thr Tyr Cys Leu245 250 255Thr Ile Tyr Val Leu Arg Arg Gln Ala Leu Met Leu Leu His Gly His260 265 270Thr Glu Glu Pro Pro Gly Leu Ser Leu Asp Phe Leu Lys Cys Cys Lys275 280 285Arg Asn Thr Ala Glu Glu Glu Asn Ser Ala Asn Pro Asn Gln Asp Gln290 295 300Asn Ala Arg Arg Arg Lys Lys Lys Glu Arg Arg Pro Arg Gly Thr Met305 310 315 320Gln Ala Ile Asn Asn Glu Arg Lys Ala Lys Lys Val Leu Gly Ile Val325 330 335Phe Phe Val Phe Leu Ile Met Trp Cys Pro Phe Phe Ile Thr Asn Ile340345 350Met Ala Val Ile Cys Lys Glu Ser Cys Asn Glu Asp Val Ile Gly Ala355 360 365Leu Leu Asn Val Phe Val Trp Ile Gly Tyr Leu Ser Ser Ala Val Asn370 375 380Pro Leu Val Tyr Thr Leu Phe Asn Lys Ile Tyr Arg Arg Ala phe Ser385 390 395 40OAsn Tyr Leu Arg Cys Asn Tyr Lys Val Glu Lys Lys Pro pro Val Arg405 410 415Gln Ile Pro Arg Val Ala Ala Thr Ala Leu Ser Gly Arg Glu Leu Asn420 425 430Val Asn Ile Tyr Arg His Thr Asn Glu Pro Val Ile Glu Lys Ala Ser435 440 445Asp Asn Glu Pro Gly Ile Glu Met Gln Val Glu Asn Leu Glu Leu Pro450 455 460Val Asn Pro Ser Ser Val Val Ser Glu Arg Ile Ser Ser Val465 470 47權利要求
1.一種化合物，其結構如下所示
2.一種化合物，其結構如下所示
3.一種組合物，其含有權利要求1所述的化合物。
4.一種組合物，其含有權利要求2所述的化合物。
5.一種化合物，其結構如下所示
6.一種化合物，其結構如下所示
7.一種組合物，其含有權利要求5所述的化合物。
8.一種組合物，其含有權利要求6所述的化合物。
9.一種化合物，其結構如下所示 其中W是F、Cl、Br、I、C1～8直鏈或支鏈烷基、C3～8環烷基、C4～9烷基環烷基、或C2～8鏈烯基；X是O或S或NR2；Y是NR3R4或(CH2)mR5或O(CH2)nR6m是包括0和4在內的0到4之間的整數；n是包括0和4在內的0到4之間的整數；Z是H、C1～8直鏈或支鏈烷基、C3～8環烷基、C4～9烷基環烷基、或C2～8鏈烯基；R1,R2,R4和R10各自獨立地選自H，C1～8直鏈或支鏈烷基，C3～8環 烷基、C4～9烷基環烷基、或C2～8鏈烯基；R4，R5，和R6各自獨立地選自C1～8直鏈或支鏈烷基，C2～8鏈烯基或環烷基、或烷基環烷基、或芳基、或CH2芳基；其中在所述C1～8直鏈或支鏈烷基、C2～8鏈烯基或環烷基、或烷基環烷基、或芳基或CH2芳基中的每一結構部分可在任何位置被至多4個取代基任選取代，所述每一取代基各自獨立地選自H，F，Cl，Br，I，R7，CF3，CF2R7，CF2CF2，CCl3，CCl2R7，CCl2CCl2R7，NR8R9，NR10COR7，NR10SO2R7，OR7，OCF3，OCF2R7，OCF2CF2R7，OCOR7，OSO2R7，OPO(OR7)2，SR7，SCF3，SCF2R7，SCF2CF2R7，SCOR7，SO3R7，SO2NR8R9，PO(OR7)3，PO(OR7)2R7，NO2，CN，CNR10(NR8R9)，CNR10(SR7)，COOR7，COSR7，CONR8R9，條件是當R4，R5，或R6含有在芳基環的至少兩個相鄰位置上被取代的芳基環時，則所述兩個相鄰位置可一起選自SCH2S、SCH2CH2S、OCH2O或OCH2CH2O以形成雙環結構；R7是H，C1～8直鏈或支鏈烷基，C3～8環烷基、C4～9烷基環烷基、C2～8鏈烯基，芳基或烷基芳基；和R8和R9各自獨立地選自H，C1～8直鏈或支鏈烷基，C2～8鏈烯基或環烷基、或烷基環烷基、或芳基、或CH2芳基；其中在所述C1～8直鏈或支鏈烷基、C2～8鏈烯基或環烷基、或烷基環烷基、或芳基或CH2芳基中的每一結構部分可在任何位置被至多4個取代基任選取代，所述每一取代基各自獨立地選自F，Cl，Br，I，CF3，CCl3，CH3，C2H5，C3H7，C4H9，NH2，NHCH3，N(CH3)2，NHC2H5，N(C2H5)2，NHC3H7，N(C3H7)2，NHC4H9，N(C4H9)2，NHCOH，NHCOCH3，NHCOC2H5，NHCOC3H7，NHCOC4H9，NHSO2CH3，NHSO2C2H5，NHSO2C3H7，NHSO2C4H9，OH，OCH3，OC2H5，OC3H7，OC4H7，OC4H9，OC5H9，OC5H11，OC6H11，OC6H13，OCF3，OCOCH3，OCOC2H5，OCOC3H7，OCOC4H9，OSO2CH3，OSO2C2H5，OSO2C3H7，OSO2C4H9，SH，SCH3，SC2H5，SC3H7，SC4H7，SC4H9，SC5H9，SC5H11，SC6H11，SC6H13，，SCF3，SCOCH3，SCOC2H5，SCOC3H7，SCOC4H9，SO3CH3，SO3C2H5，SO3C3H7，SO3C4H9，SO2NH，SO2NH2，SO2NHCH3，SO2N(CH3)2，SO2NHC2H5，SO2N(C2H5)2，SO2NHC3H7，SO2N(C3H7)2，SO2NHC4H9，SO2N(C4H9)2，NO2，CN，COOCH3，COOC2H5，COOC3H7，COOC4H9，COSCH3，COSC2H5，COSC3H7，COSC4H9，CONH2，CONHCH3，CON(CH3)2，CONHC2H5，CON(C2H5)2，CONHC3H7，CON(C3H7)2，CONHC4H9，CON(C4H9)2，以及條件是當R8或R9中的一個或兩者含有在芳基環的至少兩個相鄰位置上被取代的芳基環時，則所述兩個相鄰位置可一起選自SCH2S，SCH2CH2S，OCH2O，或OCH2CH2O以形成雙環結構；或者R8和R9可一起形成5、6或7元環結構的一部分，其中所述結構是飽和的或不飽和的，進一步地所述的結構含有選自O、N或S的至多4個雜原子，並且再進一步地所述環結構中的每一結構部分在任意位置被至多4個取代基任選取代，所述取代基各自獨立地選自F，Cl，Br，I，CF3，CCl3，CH3，C2H5，C3H7，C4H9，NH2，NHCH3，N(CH3)2，NHC2H5，N(C2H5)2，NHC3H7，N(C3H7)2，NHC4H9，N(C4H9)2，NHCOH，NHCOCH3，NHCOC2H5，NHCOC3H7，NHCOC4H9，NHSO2CH3，NHSO2C2H5，NHSO2C3H7，NHSO2C4H9，OH，OCH3，OC2H5，OC3H7，OC4H7，OC4H9，OC5H9，OC5H11，OC6H11，OC6H13，OCF3，OCOCH3，OCOC2H5，OCOC3H7，OCOC4H9，OSO2CH3，OSO2C2H5，OSO2C3H7，OSO2C4H9，SH，SCH3，SC2H5，SC3H7，SC4H7，SC4H9，SC5H9，SC5H11，SC6H11，SC6H13，SCF3，SCOCH3，SCOC2H5，SCOC3H7，SCOC4H9，SO3CH3，SO3C2H5，SO3C3H7，SO3C4H9，SO2NH，SO2NH2，SO2NHCH3，SO2N(CH3)2，SO2NHC2H5，SO2N(C2H5)2，SO2NHC3H7，SO2N(C3H7)2，SO2NHC4H9，SO2N(C4H9)2，NO2，CN，COOCH3，COOC2H5，COOC3H7，COOC4H9，COSCH3，COSC2H5，COSC3H7，COSC4H9，CONH2，CONHCH3，CON(CH3)2，CONHC2H5，CON(C2H5)2，CONHC3H7，CON(C3H7)2，CONHC4H9，CON(C4H9)2，以及條件是當R8和R9形成在芳基環的至少兩個相鄰的位置被取代的芳基環時，則所述的兩個相鄰位置可一起選自SCH2S，SCH2CH2S，OCH2O，或OCH2CH2O以形成雙環結構。
10.一種組合物，其含有權利要求9的化合物。
11.一種化合物，其結構如下所示 其中X＝O或S；Z是H或CH3；R3和R10各自獨立地選自H，C1～8直鏈或支鏈烷基，C3～8環烷基、C4～9烷基環烷基、或C2～8鏈烯基；R11是H，F，Cl，Br，I，R7，CF3，CCl3，NR8R9，NR10COR7，NR10SO2R7，OR7，OCF3，OCOR7，OSO2R7，SR7，SCF3，SCOR7，SO3R7，SO2NR8R9，NO2，CN，COOR7，COSR7，CONR8R9，條件是當與R11相鄰的位置被取代時，則R11和所述相鄰的位置可一起選自SCH2S，SCH2CH2S，OCH2O或OCH2CH2O以形成雙環結構；R7是H，C1～8直鏈或支鏈烷基，C3～8環烷基，C4～9烷基環烷基，C2～8鏈烯基，芳基或烷基芳基；R8和R9各自獨立地選自H，C1～8直鏈或支鏈烷基，C2～8鏈烯基或環烷基，或烷基環烷基，或芳基或CH2芳基；其中在所述C1～8直鏈或支鏈烷基、C2～8鏈烯基或環烷基、或烷基環烷基、或芳基或CH2芳基中的每一結構部分可在任何位置被至多4個取代基任選取代，所述每一取代基各自獨立地選自F，C1，Br，I，CF3，CCl3，CH3，C2H5，C3H7，C4H9，NH2，NHCH3，N(CH3)2，NHC2H5，N(C2H5)2，NHC3H7，N(C3H7)2，NHC4H9，N(C4H9)2，NHCOH，NHCOCH3，NHCOC2H5，NHCOC3H7，NHCOC4H9，NHSO2CH3，NHSO2C2H5，NHSO2C3H7，NHSO2C4H9，OH，OCH3，OC2H5，OC3H7，OC4H7，OC4H9，OC5H9，OC5H11，OC6H11，OC6H13，OCF3，OCOCH3，OCOC2H5，OCOC3H7，OCOC4H9，OSO2CH3，OSO2C2H5，OSO2C3H7，OSO2C4H9，SH，SCH3，SC2H5，SC3H7，SC4H7，SC4H9，SC5H9，SC6H11，SC6H11，SC6H13，SCF3，SCOCH3，SCOC2H5，SCOC3H7，SCOC4H9，SO3CH3，SO3C2H5，SO3C3H7，SO3C4H9，SO2NH，SO2NH2，SO2NHCH3，SO2N(CH3)2，SO2NHC2H5，SO2N(C2H5)2，SO2NHC3H7，SO2N(C3H7)2，SO2NHC4H9，SO2N(C4H9)2，NO2，CN，COOCH3，COOC2H5，COOC3H7，COOC4H9，COSCH3，COSC2H5，COSC3H7，COSC4H9，CONH2，CONHCH3，CON(CH3)2，CONHC2H5，CON(C2H5)2，CONHC3H7，CON(C3H7)2，CONHC4H9，CON(C4H9)2，以及條件是當R8或R9中的一個含有在芳基環的至少兩個相鄰位置上被取代的芳基環時，則所述兩個相鄰位置可一起選自SCH2S，SCH2CH2S，OCH2O，或OCH2CH2O以形成雙環結構；R12，R13，R14，和R15各自獨立地選自F，C1，Br，I，CF3，CCl3，CH3，C2H5，C3H7，C4H9，NH2，NHCH3，N(CH3)2，NHC2H5，N(C2H5)2，NHC3H7，N(C3H7)2，NHC4H9，N(C4H9)2，NHCOH，NHCOCH3，NHCOC2H5，NHCOC3H7，NHCOC4H9，NHSO2CH3，NHSO2C2H5，NHSO2C3H7，NHSO2C4H9，OH，OCH3，OC2H5，OC3H7，OC4H7，OC4H9，OC5H9，OC5H11，OC6H11，OC6H13，OCF3，OCOCH3，OCOC2H5，OCOC3H7，OCOC4H9，OSO2CH3，OSO2C2H5，OSO2C3H7，OSO2C4H9，SH，SCH3，SC2H5，SC3H7，SC4H7，SC4H9，SC5H9，SC5H11，SC6H11，SC6H13，SCF3，SCOCH3，SCOC2H5，SCOC3H7，SCOC4H9，SO3CH3，SO3C2H5，SO3C3H7，SO3C4H9，SO2NH，SO2NH2，SO2NHCH3，SO2N(CH3)2，SO2NHC2H5，SO2N(C2H5)2，SO2NHC3H7，SO2N(C3H7)2，SO2NHC4H9，SO2N(C4H9)2，NO2，CN，COOCH3，COOC2H5，COOC3H7，COOC4H9，COSCH3，COSC2H5，COSC3H7，COSC4H9，CONH2，CONHCH3，CON(CH3)2，CONHC2H5，CON(C2H5)2，CONHC3H7，CON(C3H7)2，CONHC4H9，CON(C4H9)2，以及條件是當R12，R13，R14和R15中的任意兩個相鄰的位置是被取代的時候，所述兩個相鄰的位置可一起進一步選自SCH2S，SCH2CH2S，OCH2O，或OCH2CH2O以形成雙環結構；和條件是R12，R13，R14和R15中至少兩個必須是H。
12.權利要求11的化合物，其結構如下所示 其中X＝O或S；Z是H或CH3；R3和R10各自獨立地選自H，C1～8直鏈或支鏈烷基，C3～8環烷基、C4～9烷基環烷基、或C2～8鏈烯基；R11是H，F，Cl，Br，I，R7，CF3，CCl3，NR8R9，NR10COR7，NR10SO2R7，OR7，OCF3，OCOR7，OSO2R7，SR7，SCF3，SCOR7，SO3R7，SO2NR8R9，NO2，CN，COOR7，COSR7，CONR8R9，條件是當與R11相鄰的位置被取代時，則R11和所述的相鄰位置可一起選自SCH2S，SCH2CH2S，OCH2O，或OCH2CH2O以形成雙環結構；R7是H，C1～8直鏈或支鏈烷基，C3～8環烷基，C4～9烷基環烷基，C2～8鏈烯基，芳基或烷基芳基；R8和R9各自獨立地選自H，C1～8直鏈或支鏈烷基，C2～8鏈烯基或環烷基，或烷基環烷基，或芳基或CH2芳基；其中在所述C1～8直鏈或支鏈烷基、C2～8鏈烯基或環烷基、或烷基環烷基、或芳基或CH2芳基中的每一結構部分可在任何位置被至多4個取代基任選取代，所述每一取代基各自獨立地選自F，Cl，Br，I，CF3，CCl3，CH3，C2H5，C3H7，C4H9，NH2，NHCH3，N(CH3)2，NHC2H5，N(C2H5)2，NHC3H7，N(C3H7)2，NHC4H9，N(C4H9)2，NHCOH，NHCOCH3，NHCOC2H5，NHCOC3H7，NHCOC4H9，NHSO2CH3，NHSO2C2H5，NHSO2C3H7，NHSO2C4H9，OH，OCH3，OC2H5，OC3H7，OC4H7，OC4H9，OC5H9，OC5H11，OC6H11，OC6H13，OCF3，OCOCH3，OCOC2H5，OCOC3H7，OCOC4H9，OSO2CH3，OSO2C2H5，OSO2C3H7，OSO2C4H9，SH，SCH3，SC2H5，SC3H7，SC4H7，SC4H9，SC5H9，SC5H11，SC6H11，SC6H13，SCF3，SCOCH3，SCOC2H5，SCOC3H7，SCOC4H9，SO3CH3，SO3C2H5，SO3C3H7，SO3C4H9，SO2NH，SO2NH2，SO2NHCH3，SO2N(CH3)2，SO2NHC2H5，SO2N(C2H5)2，SO2NHC3H7，SO2N(C3H7)2，SO2NHC4H9，SO2N(C4H9)2，NO2，CN，COOCH3，COOC2H5，COOC3H7，COOC4H9，COSCH3，COSC2H5，COSC3H7，COSC4H9，CONH2，CONHCH3，CON(CH3)2，CONHC2H5，CON(C2H5)2，CONHC3H7，CON(C3H7)2，CONHC4H9，CON(C4H9)2，以及條件是當R8或R9中的一個含有在芳基環的至少兩個相鄰位置上被取代的芳基環時，則所述兩個相鄰位置可一起選自SCH2S，SCH2CH2S，OCH2O或OCH2CH2O以形成雙環結構；R12，R13，R14和R15各自獨立地選自F，Cl，Br，I，CF3，CCl3，CH3，C2H5，C3H7，C4H9，NH2，NHCH3，N(CH3)2，NHC2H5，N(C2H5)2，NHC3H7，N(C3H7)2，NHC4H9，N(C4H9)2，NHCOH，NHCOCH3，NHCOC2H5，NHCOC3H7，NHCOC4H9，NHSO2CH3，NHSO2C2H5，NHSO2C3H7，NHSO2C4H9，OH，OCH3，OC2H5，OC3H7，OC4H7，OC4H9，OC5H9，OC5H11，OC6H11，OC6H13，OCF3，OCOCH3，OCOC2H5，OCOC3H7，OCOC4H9，OSO2CH3，OSO2C2H5，OSO2C3H7，OSO2C4H9，SH，SCH3，SC2H5，SC3H7，SC4H7，SC4H9，SC5H9，SC5H11，SC6H11，SC6H13，SCF3，SCOCH3，SCOC2H5，SCOC3H7，SCOC4H9，SO3CH3，SO3C2H5，SO3C3H7，SO3C4H9，SO2NH，SO2NH2，SO2NHCH3，SO2N(CH3)2，SO2NHC2H5，SO2N(C2H5)2，SO2NHC3H7，SO2N(C3H7)2，SO2NHC4H9，SO2N(C4H9)2，NO2，CN，COOCH3，COOC2H5，COOC3H7，COOC4H9，COSCH3，COSC2H5，COSC3H7，COSC4H9，CONH2，CONHCH3，CON(CH3)2，CONHC2H5，CON(C2H5)2，CONHC3H7，CON(C3H7)2，CONHC4H9，CON(C4H9)2，以及條件是當R12，R13，R14和R15中的任意兩個相鄰的位置是被取代的時候，所述兩個相鄰的位置可一起進一步選自SCH2S，SCH2CH2S，OCH2O，或OCH2CH2O以形成雙環結構；和條件是R12，R13，R14和R15中至少兩個必須是H。
13.一種組合物，其含有權利要求11所述的化合物。
14.一種組合物，其含有權利要求12所述的化合物。
全文摘要
本發明公開的是非內源性、組成型活化形式的人5－HT
文檔編號C07D231/12GK1411448SQ00817253
公開日2003年4月16日 申請日期2000年10月13日 優先權日1999年10月15日
發明者多米尼克·P·比漢, 奈傑爾·R·A·比利, 德裡克·T·查默斯, 理察·J·福斯特, 羅伯特·C·格倫, 麥可·S·勞利斯, 蓁·W·廖, 求恩·劉, 弗裡德裡克·門扎奇, 約瑟夫·F·魯索, 朱利安·R·史密斯, 威廉·J·湯姆森 申請人:阿瑞那製藥公司, 臺甫公司