動物食品中阿散酸、硝苯砷酸及洛克沙砷的測定方法

2023-04-30 09:14:41 1

專利名稱：動物食品中阿散酸、硝苯砷酸及洛克沙砷的測定方法
技術領域：
本發明涉及一種動物源性食品中阿散酸、硝苯砷酸與洛克沙砷殘留量的測定方法。
背景技術：
近年來，作為動物抗病原微生物和促生長類的飼料添加劑——有機砷類製劑在世界範圍內廣泛使用。其種類主要有阿散酸(ASA)、洛克沙砷(ROX)、硝苯砷酸(NIT)。現有技術中，關於它們的檢測方法主要是色譜和檢測器聯用技術:如採用高效液相色譜-紫外檢測器測定了飼料中的阿散酸、硝苯砷酸和洛克沙砷，但此法僅適用於飼料樣品的檢測；另如低檢出限、低溶劑消耗量、少量固定相的液相色譜-質譜法測定有機砷獸藥的方法，特別是色譜與電感耦合等離子體質譜聯用技術。該法靈敏度高，樣品前處理簡單。但由於其價格昂貴，運行成本高，目前很難普及，而且樣品中的鹽分對ICP-MS測定砷時的幹擾較大。另外，HPLC的流動相中通常會含有一定比例的有機溶劑，有機溶劑在ICP中所產生的碳可造成ICP-MS的進樣管堵塞和採樣錐、截取錐兩錐孔變得越來越小甚至堵塞，從而導致ICP-MS的信號不穩定；再如現有的改進方案中，利用液相色譜-氫化物發生-原子螢光聯用同時檢測，砷化合物在一定的濃度範圍內與螢光峰面積呈良好的線性關係，但該類方案對於複雜基質樣品的溶劑提取和萃取效率低，因此，有必要對動物源性食品中阿散酸、硝苯砷酸與洛克沙砷殘留量的測定方法作進 一步的改進。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是針對上述現有技術現狀而提供一種提取溶劑用量少，快速，基體影響小，萃取效率高且檢測準確度高的動物食品中阿散酸、硝苯砷酸及洛克沙砷的測定方法。本發明解決上述技術問題所採用的技術方案為:本發明的測定動物源性食品中阿散酸、硝苯砷酸與洛克沙砷殘留量的方法，其特徵在於，所述方法為:稱取質量A的試樣於研缽中，加入質量B的弗羅裡矽土充分拌勻後，用體積比為3: 7的甲醇-水溶液做提取劑，用加速溶劑萃取儀提取，提取完成後，再用水定容到體積C。經濾膜過濾後，供液相色譜-原子螢光光譜測定；上述的質量A與質量B的質量比為1: 3。作為改進，所述試樣選取豬肝或雞肝，動物源性樣品種類繁多，其中動物的肝臟和腎由於對砷有富集作用，因而有機砷絕大多數都殘留在這兩個部位，因此，我們選擇肝臟作為實驗樣品。再改進，通過實驗的優化，所述加速溶劑萃取條件優選為:提取溫度80°C ;壓強1500psi，靜態萃取時間為4分鐘；衝洗體積60% ;提取次數為3次；氮氣吹掃60秒。再改進，所述濾膜的濾孔大小優選為0.45 μ m。
再改進，所述液相色譜條件為:色譜柱採用C18柱(250_Χ4.60_，5μπι);流速為1.2mL/min ;進樣量為100 μ L ;在反相色譜流動相中添加緩衝鹽，有助於改善色譜峰形並且提高色譜峰的分離度，因此流動相優選為5%甲醇-0.1%三氟乙酸-0.05mol/L磷酸二氫鉀；再改進，所述原子螢光工作條件為:綜合考慮靈敏度、燈的使用壽命、發射譜線的自蝕現象等因素，選擇總電流為100mA，負高壓為330V;為達到靈敏度最高，載氣流速優選為300mL/min,屏蔽氣流速優選為900mL/min ；與現有技術相比，本發明的優點在於:本實施例研究並建立了加速溶劑萃取-液相色譜-原子螢光同時測定動物源性食品中阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷殘留量的方法；優化了加速溶劑萃取技術的提取溶劑比例、提取溫度、提取時間和提取次數，提取溶劑用量少，快速，基體影響小，萃取效率高，選擇性好；研究了液相色譜流動相和原子螢光的工作條件；在O 2.0mg/L範圍內內阿散酸、硝苯砷酸和洛克沙砷的線性關係良好，線性相關係數大於0.999，阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷檢出限(S/N = 3)分別為2.4μ g/L、7.4μ g/L、
4.1 μ g/L0附圖/表說明

圖1為發明的阿散酸、硝苯砷酸和洛克沙砷混合標準溶液(lmg/L的LC-AFS譜圖)；圖2為載氣流量對砷形態螢光信號強度的影響的折線圖。
具體實施例方式以下結合附圖實施例對本發明作進一步詳細描述。如圖1至2所示，本實施例的動物食品中阿散酸、硝苯砷酸及洛克沙砷的測定方法，所述方法包括以下步驟:稱取2g(精確到0.0lg)試樣於研缽中，加入6.0OOg弗羅裡矽土充分拌勻後，用體積比為3: 7的甲醇-水溶液做提取劑，用加速溶劑萃取儀提取。提取完成後，用水定容到10mL。此溶液過0.45 μ m濾膜後，供液相色譜-原子螢光光譜測定。所述試樣選取豬肝或雞肝。所述加速溶劑萃取條件為:提取溫度80°C ;壓強1500psi ;靜態萃取時間為4分鐘；衝洗體積60% ;提取次數為3次；氮氣吹掃60秒。所述濾膜的濾孔大小為0.45 μ m。所述液相色譜條件為:色譜柱採用C18柱(250mmX4.60mm,5 μ m);流速為1.2mL/min ;進樣量為100 μ L ;流動相為5%甲醇-0.1 %三氟乙酸-0.05mol/L磷酸二氫鉀。所述原子螢光工作條件為:總電流為IOOmA ;負高壓為330V ;載氣流速為300mL/min ;屏蔽氣流速為 900mL/min。 以下結合實施例對本發明作進一步說明:I實驗部分1.1儀器、試劑與樣品液相色譜/原子螢光光譜儀(LC-AFS9800):北京海光儀器公司；高速均質器(德國IKA公司)；超聲波水浴器(美國Ney公司)；LD4_2型離心機(北京醫用離心機廠)；渦旋混合器(美國Fisher公司)；超純水儀(美國Millipore公司)；加速溶劑萃取儀(ASE300):美國戴安公司；0.45μπι濾膜(直徑47mm，美國Millipore公司)。甲醇為色譜純；鹽酸為優級純；三氟乙酸、氫氧化鈉、硼氫化鉀、磷酸二氫鉀均為分析純；阿散酸標準品(純度99%，Dr.Ehrenstorfer GmbH，德國)；硝苯砷酸標準品(純度95%，日本和光純藥工業株式會社)；洛克沙砷標準品(純度97.5%,Dr.Ehrenstorfer GmbH,德國)；實驗用水為超純水。豬肝、雞肝均為市售。1.2溶液的配製載流:5%鹽酸(優級純)；還原劑(0.5%氫氧化鈉-2.0%硼氫化鉀):稱取氫氧化鈉5g，硼氫化鉀20g溶於水中，並稀釋至IOOOmL混勻；提取劑:取甲醇300mL，倒入700mL水中，混勻；流動相(5%甲醇-0.1%三氟乙酸-0.05mol/L磷酸二氫鉀):取甲醇50mL，三氟乙酸lmL，磷酸二氫鉀3.9g溶於水中，並稀釋至IOOOmL混勻；標準儲備液:準確稱取阿散酸、洛克沙砷、硝苯砷酸標準品各IOOmg於IOOmL容量瓶中，用超純水在超聲波水浴中溶解，配製成1000mg/L的標準儲備液；標準工作液:使用前將上述儲備液以超純水稀釋至所需濃度。1.3實驗條件LC 條件:色譜柱:C18 柱(250_X4.60mm, 5 μ m);流速:1.2mL/min ;進樣量:IOOyL ;流動相:5%甲醇-0.1 %三氟乙酸-0.05mol/L磷酸二氫鉀。原子螢光工作條件:總電流:100mA ;負高壓:330V ;載氣流速:300mL/min ;屏蔽氣流速:QOOmT ,/mi η。1.4樣品處理稱取2g(精確到0.0lg)試樣於研缽中，加入6.0OOg弗羅裡矽土充分拌勻後，用體積比為3: 7的甲醇- 水溶液做提取劑，用加速溶劑萃取儀提取。提取溫度80°C，壓強1500psi，靜態萃取時間為4分鐘，衝洗體積60%，提取次數為3次，氮氣吹掃60秒。提取完成後，用水定容到10mL。此溶液過0.45 μ m濾膜後，供液相色譜-原子螢光光譜測定。2結果與分析2.1超聲離心提取和加速溶劑萃取的比較2.1.1超聲離心提取樣品稱取試樣2g置於50mL高速離心管中，加入提取溶劑甲醇-水溶液(體積比
3: 7) 30mL，均質2分鐘，然後置於超聲波水浴器中超聲20分鐘。超聲完成後，置於LD4-2型離心機，12000r/min離心10分鐘，將上清液轉移到50mL容量瓶中。向殘渣中滴加10mL3: 7甲醇-水提取劑，在渦旋混合器上充分混合均勻，然後12000r/min高速離心5分鐘，合併上清液於50mL容量瓶中，用去離子水定容。此溶液過0.45um濾膜後，供LC-AFS測定。2.1.2加速溶劑提取樣品稱取試樣2g於研缽中，加入6.0OOg弗羅裡矽土充分拌勻後，裝入到不鏽鋼的加速溶劑萃取池，放置在加速溶劑萃取儀的樣品臺卡口處，然後將提取條件輸入到加速溶劑萃取儀的控制面板:提取溫度80°C，壓強1500psi，預熱5分鐘，用體積比為3: 7的甲醇-水溶液做提取劑，靜態萃取時間為4分鐘，衝洗體積60%，提取次數為3次，氮氣吹掃60秒，收集全部的提取溶液。提取完成後，用水定容到10mL。此溶液過0.45 μ m濾膜後，供LC-AFS測定。2.1.3超聲離心提取和加速溶劑提取的比較在超聲離心提取方法中，優化了提取溶劑的組成、超聲時間、離心時間以及提取次數，最後得到的最優化超聲離心提取方法是:提取溶劑:甲醇:水(3: 7)，超聲時間20分鐘，離心時間10分鐘，提取次數3次；在加速溶劑提取方法中，優化了提取溶劑的組成、提取溫度、提取過程中的靜態時間以及提取次數，最後得到的最優化加速溶劑提取方法是:提取溶劑:甲醇:水(3: 7)，提取溫度80°C，提取過程中的靜態時間為4分鐘，提取次數為3次。以加標lug/mL的樣品分別採用超聲離心提取和快速溶劑提取，兩種提取方法均在最優化條件下進行，連續測定4次，其三種砷形態回收率結果見表I和表2。表I超聲離心提取方法的加標回收率The sp iked recoveries of ultrasound centrifugation extraction
權利要求
1.一種動物食品中阿散酸、硝苯砷酸及洛克沙砷的測定方法，其特徵在於，所述測定方法包括以下步驟為: 稱取待測樣品A克於研缽中，加入弗羅裡矽土 3A克充分拌勻後，用甲醇比水的體積比為3: 7的甲醇水溶液做提取劑，用加速溶劑萃取儀提取，提取完成後，再用水定容到體積5A毫升；經濾膜過濾後，供液相色譜-原子螢光光譜測定；所述A為不為零的整數。
2.根據權利要求1所述的測定方法，其特徵在於:所述待測樣品為豬肝或雞肝。
3.根據權利要求1所述的測定方法，其特徵在於，所述加速溶劑萃取條件為:提取溫度800C ;壓強1500pa ;靜態萃取時間為4分鐘；衝洗體積60% ;提取次數為3次；氮氣吹掃60秒。
4.根據權利要求1所述的測定方法，其特徵在於:所述濾膜的濾孔大小為0.45 μ m。
5.根據權利要求1所述的測定方法，其特徵在於，所述液相色譜條件為:色譜柱採用C18柱；流速為1.2mL/min ;進樣量為100 μ L ;流動相為5%甲醇-0.1%三氟乙酸-0.05mol/L磷酸二氫鉀。
6.根據權利要求 1所述的測定方法，其特徵在於，所述原子螢光工作條件為:總電流為IOOmA ;負高壓為330V ;載氣流速為300mL/min ;屏蔽氣流速為900mL/min。
全文摘要
一種動物食品中阿散酸、硝苯砷酸及洛克沙砷的測定方法，其特徵在於，所述測定方法包括以下步驟為稱取待測樣品A克於研缽中，加入弗羅裡矽土3A克充分拌勻後，用甲醇比水的體積比為3∶7的甲醇水溶液做提取劑，用加速溶劑萃取儀提取，提取完成後，再用水定容到體積5A毫升；經濾膜過濾後，供液相色譜-原子螢光光譜測定；所述A為不為零的整數。與現有技術相比，本發明的優點在於本實施例研究並建立了加速溶劑萃取-液相色譜-原子螢光同時測定動物源性食品中阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷殘留量的方法；優化了加速溶劑萃取技術的提取溶劑比例、提取溫度、提取時間和提取次數，提取溶劑用量少，快速，基體影響小，萃取效率高，選擇性好。
文檔編號G01N21/64GK103234946SQ20131011490
公開日2013年8月7日 申請日期2013年3月19日 優先權日2013年3月19日
發明者肖亞兵, 張霞, 王偉, 崔穎 申請人:天津出入境檢驗檢疫局動植物與食品檢測中心