一種氯膦酸二鈉脂質體注射劑的製作方法

2023-04-26 20:01:41

專利名稱：一種氯膦酸二鈉脂質體注射劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種氯膦酸二鈉的新製劑，具體涉及一種氯膦酸二鈉脂質體注射劑及其製法，屬於醫藥技術領域。
背景技術：
惡性腫瘤骨轉移是晚期腫瘤常見併發症之一，患者一旦出現骨轉移常常產生難以忍受的骨痛，嚴重影響患者的生存質量。雙膦酸鹽類是目前治療骨轉移公認的有效藥物，第一、二代雙膦酸鹽類藥物在近十餘年來陸續上市後，成為有效緩解骨痛、防止骨骼病變進展、改善生活質量，防止骨相關事件發生等骨轉移姑息治療的重要角色。雙膦酸鹽是一組結構與焦膦酸鹽類似的藥物，後者系內源性化合物，能調節骨礦物質的沉積和吸收。與焦膦酸鹽相同，雙膦酸鹽與羥基磷灰石晶體結合，但較焦膦酸鹽更不易被體內的焦膦酸酶降解，與骨組織親合力更強且穩定，影響破骨細胞與骨表面的結合過程，阻止骨組織的生長和分解。通過抑制骨重吸收，這些藥物對癌症患者的骨代謝可產生有利的效果。因此，雙膦酸鹽類藥物成為腫瘤患者治療的重要選擇，可以使惡性腫瘤相關高鈣血症患者的血鈣恢復正常，減少骨相關事件，緩解骨痛，改善骨質疏鬆。氯膦酸二鈉是是芬蘭羅拉斯公司開發的第二代雙膦酸鹽類藥物，具有口服和靜脈使用兩種劑型，已在全球多數國家獲得批准用於骨轉移癌骨相關事件的治療，有些還批准了預防性使用減少乳腺癌骨轉移發生的適應症。氯膦酸二鈉中含有雙膦酸鹽特徵性P-C-P結構，這一結構非常穩定，耐高溫，對許多化學物質穩定，以原形方式在體內吸收、貯存和排洩。已吸收的氯膦酸二鈉約20%吸附於骨，多分布於骨形成活躍部位， 吸附於骨上的氯膦酸二鈉半衰期較血中明顯延長。腎臟對該藥的清除率高，主要以超濾方式清除，口服或靜脈使用具有相似的血漿清除半衰期(2.44h和2. 31h)，用藥48h時有80%的藥物已由尿液排出。氯膦酸二鈉親脂性低，不能跨細胞轉運，口服生物利用度2%，吸收部位主要在小腸。P-C-P結構與骨質中的羥膦灰石呈高度親和力，並能與鈣、鐵等金屬離子結合，形成不可溶性複合物。目前上市銷售的氯膦酸二鈉劑型是採用普通的製劑製備技術製備而成的膠囊劑、注射液和粉針劑三種劑型，然而普通劑型存在長期放置穩定性較差，含量下降，生物利用度低等問題。脂質體(liposomes)最早是1965年被英國Banghan等作為研究生物膜的模型提出的。是指將藥物包封於類脂質雙分子形成的薄膜中間所製成的超微型球狀定向藥物載體製劑，屬於靶向給藥系統的一種新劑型。脂質體作為藥物載體，具有諸多優點如脂質體既能包封脂溶性藥物，又能包封水溶性藥物；減輕變態反應和免疫反應；延緩釋放，降低體內消除速度；能有效地保護被包裹藥物，提高生物利用度；改變藥物在體內的分布，並能靶向性釋藥，能降低藥物的毒副作用；適合多途徑給藥等。
人們通過研究發現，脂質體作為藥物的載體能夠控制藥物的釋放，提高藥物靶向性，減少藥物毒性和副作用，提高藥物療效。為了提高氯膦酸二鈉的生物利用度，本發明人對氯膦酸二鈉的脂質體注射劑進行研究，取得了預料不到的效果，克服現有的氯膦酸二鈉製劑存在的一系列問題，提高藥物的溶解性和穩定性，延長藥物在體內的保留時間，長久發揮藥效，提高生物利用度，降低毒副作用，降低不良反應的發生率，改進治療速度和治療效果。製備脂質體的挑戰在於選擇適當的脂質體組成成分和製法。由於脂質體的性質如穩定性、包封率、起效時間、在體內的循環時間、生物利用度和毒副作用等與脂質體的組成直接地密切相關，而脂質體的組成與所要包封的藥物性質直接地密切相關，因此，選擇什麼樣的成分形成具有良好品質的氯膦酸二鈉脂質體是首要解決的問題
發明內容
·為了形成品質優良的氯膦酸二鈉脂質體注射劑，重要的是尋找能與氯膦酸二鈉良好相容從而將其良好包封且不滲漏的成膜材料，以及尋找能使脂質體形成穩定注射劑的賦形劑成分。為了實現上述目的，本發明人進行的大量研究和試驗，發現特定重量配比的氯膦酸二鈉、二硬脂醯磷脂醯甘油、膽固醇、聚氧乙烯40氫化蓖麻油能製成品質優異的氯膦酸二鈉脂質體注射劑，其中，作為藥物活性成分的氯膦酸二鈉的包封率高，脂質體粒徑小且分布均勻，與現有技術中的氯膦酸二鈉注射劑相比，本發明製劑的藥物活性成分在體循環中的保留時間顯著延長，藥物的生物相容性高，生物利用度明顯提高，療效明顯提高。本發明中所述的氯膦酸二鈉脂質體注射劑，其單位劑量的氯膦酸二鈉的規格為5ml: O. 3g (注射液體積無水氯膦酸二鈉重量)和O. 3g(以無水氯膦酸二鈉計)。本發明提供的氯膦酸二鈉脂質體注射劑，主要由以下重量份數比的成分製成
氯鱗酸二鈉I修
二硬脂醜磷ΛΛ甘油0.5-2份
膽固醇0.2-1份
聚氧乙烯4O氫化蓖麻油O. 1-0. 5份優選地，根據本發明的氯膦酸二鈉脂質體注射劑主要由包括以下重量配比的成分製成
氯膦酸二鈉I份
二硬脂酸磷《醯甘油0.5-1.5翁
膽固醇0.3-0.8份
聚氣乙烯4O氫化蓖麻油0.2-0.4份作為用於形成脂質體的磷脂，可以使用天然磷脂和合成磷脂。天然磷脂包括磷脂醯乙醇胺、蛋黃卵磷脂、氫化蛋黃磷脂、蛋黃磷脂醯甘油、蛋黃磷脂醯絲氨酸、蛋黃磷脂醯肌醇、大豆卵磷脂、氫化大豆磷脂、大豆磷脂醯甘油、大豆磷脂醯絲氨酸、和大豆磷脂醯肌醇等。合成磷脂為二油醯磷脂醯膽鹼、二硬脂酸磷脂醯膽鹼、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼、二豆蘧醯磷脂醯膽鹼、二月桂醯磷脂醯膽鹼、二油醯磷脂醯甘油、二硬脂醯磷脂醯甘油、二棕櫚醯磷脂醯甘油、二肉豆蘧醯磷脂醯甘油、二月桂醯磷脂醯甘油等。本發明中，根據氯膦酸二鈉的特點，發現二硬脂醯磷脂醯甘油特別適於作為基礎磷脂成膜材料。大豆磷脂醯絲氨作為一種天然磷脂，其含量非常高，容易獲得，價格低廉。二硬脂酸磷脂醯膽鹼的相變溫度較高，易於形成穩定的脂質體膜。當使用其他磷脂時，難以形成品質優良的脂質體，脂質體的包封率、穩定性和滲漏
率等性質差。為了改善脂質體的穩定性，所用二硬脂醯磷脂醯甘油的純度為98%以上，優選99%以上。在本發明的氯膦酸二鈉脂質體注射劑中，相對於I重量份的氯膦酸二鈉而言，二硬脂醯磷脂醯甘油的用量為1-2重量份。如果二硬脂醯磷脂醯甘油的用量低於I重量份，則無法形成穩定的脂質體；反之，如果二硬脂醯磷脂醯甘油的用量的用量高於2重量份，則作為藥物活性成分的氯膦酸二鈉的包封率下降，注射劑的品質以及療效降低。在本發明的氯膦酸二鈉脂 質體注射劑中，膽固醇和聚氧乙烯40氫化蓖麻油用於調節脂質體的膜穩定性。膽固醇是一種雙親性分子，與二硬脂醯磷脂醯甘油相結合，阻止其凝聚成晶體結構。膽固醇摻入二硬脂醯磷脂醯甘油雙層，類似於「緩衝劑」一樣起到調節膜結構「流動性」的作用。當低於相變溫度時，膽固醇可以使膜減少有序排列，增加流動性；當高於相變溫度時，膽固醇可以增加膜的有序排列，從而降低膜的流動性。膽固醇能使脂質體雙分子層膜固化，從而減少自由基的生成，降低氧化水平，使脂質體穩定性顯著增強。研究表明，脂質體的穩定性與生物利用度有密切的對應關係。穩定性越高，生物利用度越高。因此，本發明的氯膦酸二鈉脂質體注射劑的穩定性高，是導致藥物生物利用度高的因素之一。另一方面，本發明人研究發現，在本發明的氯膦酸二鈉脂質體注射劑中，相對於I重量份的氯膦酸二鈉而言，二硬脂醯磷脂醯甘油的用量為1-2重量份，膽固醇為O. 2-1重量份時，所形成的氯膦酸二鈉脂質體注射劑的包封率高。在本發明的氯膦酸二鈉脂質體注射劑中，使用聚氧乙烯40氫化蓖麻油來進一步改進脂質體膜的穩定性。當聚氧乙烯40氫化蓖麻油用於二硬脂酸磷脂醯膽鹼雙層膜中時，能提聞該雙層I旲之間的化學能，從而提聞脂質體在水性液體中的化學穩定性，進而提聞氣膦酸二鈉脂質體注射劑的穩定性。在本發明的氯膦酸二鈉脂質體注射劑中，相對於I重量份的氯膦酸二鈉而言，聚氧乙烯40氫化蓖麻油的用量為O. 1-0. 5重量份。如果聚氧乙烯40氫化蓖麻油的用量低於O.1重量份，則由於其用量過低導致對氯膦酸二鈉脂質體注射劑的穩定性改進不夠，反之，如果聚氧乙烯40氫化蓖麻油的用量高於O. 5重量份，則由於其用量過高而導致脂質體膜易於洩露。研究發現，當使用上述特定量的氯膦酸二鈉、二硬脂醯磷脂醯甘油、膽固醇和聚氧乙烯40氫化蓖麻油時，可以得到品質優良的氯膦酸二鈉脂質體，其包封率和穩定性都很高，毒性低，生物利用度高。
本發明的氯膦酸二鈉脂質體注射劑，其中單位劑量的氯膦酸二鈉的規格為5ml: O. 3g (注射液體積無水氯膦酸二鈉重量)和O. 3g(以無水氯膦酸二鈉計)。另一方面，本發明還提供一種氯膦酸二鈉脂質體注射劑的製備方法，具體包括如下製備步驟(1)將二硬脂醯磷脂醯甘油、膽固醇和聚氧乙烯40氫化蓖麻油溶於有機溶劑中，混合均勻，於旋轉薄膜蒸發器上減壓除去有機溶劑，得到類脂膜；(2)將氯膦酸二鈉溶於適量的緩衝鹽溶液中，然後加入上述類脂膜中，振搖，攪拌20分鐘，轉速為500-1000r/min，使磷脂膜完全水化，用組織搗碎機高速勻質乳化5_10分鐘，轉速10000r/min,用O. 45 μ m微孔濾膜過濾,製得脂質體混懸液；(3)用注射用水定容，O. 45 μ m微孔濾膜過濾，灌裝，熔封，滅菌；或用注射用水定容，O. 45 μ m微孔濾膜過濾，分裝，冷凍乾燥，軋蓋。即得氯膦酸二鈉脂質體注射劑。上述所述的製備方法，其中所述的有機溶劑選自乙醇、甲醇、叔丁醇、正丁醇、異丙醇、丙酮、乙腈、苯甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、正己烷和二氯甲烷中的一種或幾種，優選為氯仿。上述所述的製備方法，其中所述的緩衝鹽溶液選自磷酸鹽緩衝溶液、枸櫞酸鹽緩衝溶液、硼酸鹽緩衝溶液中的一種。上述所述的製備方法，其中所述的緩衝鹽溶液為pH為6. 4的枸櫞酸鹽緩衝溶液。製備脂質體的挑戰在於如何使脂質體膜形成適當大小、適當結構材料的包封率高的囊泡。而且這些材料在形成脂質體不漏出。本發明人通過選擇適當的材料成分、採用合適的製備工藝，獲得了品質優良的氯膦酸二鈉脂質體注射劑，脂質體粒徑小，粒徑分布均勻，包封率高，穩定性高。研究發現，脂質體的大小是影響脂質體在體內分布和停留時間的主要因素，脂質體的粒徑越小，體內停留時間越長。通過本發明方法製備的氯膦酸二鈉脂質體顆粒小，粒徑大小分布均勻，這是其在體內代謝率低、生物利用度高的因素之一。


以下，結合附圖來詳細說明本發明的實施方案。圖1是氯膦酸二鈉脂質體注射劑的血藥濃度-時間曲線。表示實施例1-3中製備的氯膦酸二鈉脂質體注射劑、對比例1-3中製備的氯膦酸二鈉脂質體注射劑和市售氯膦酸二鈉注射劑的血藥濃度與時間的關係曲線。其中_11市例_ _實施例1 實施例2___實施例3對比例I 對比例2 對比例具體實施例方式以下實施例是對本發明的進一步說明，但絕不是對本發明範圍的限制。下面參照實施例進一步詳細闡述本發明，但是本領域技術人員應當理解，本發明並不限於這些實施例以及使用的製備方法。而且，本領域技術人員根據本發明的描述可以對本發明進行等同替換、組合、改良或修飾，但這些都將包括在本發明的範圍內。實施例1氯膦酸二鈉脂質體凍乾粉針劑
處方
氯膦酸二德300g
二硬脂跣磷脂醯甘油600g
膽固醇150g
聚氧乙烯4 O氫化蓖麻油15 Og製備工藝(I)將600g 二硬脂醯磷脂醯甘油、150g膽固醇和150g聚氧乙烯40氫化蓖麻油溶於2000ml三氯甲烷中，混合均勻，於旋轉薄膜蒸發器上減壓除去三氯甲烷，得到類脂膜；(2)將300g氯膦酸二鈉溶於IOOOmlpH為6. 4的枸櫞酸鹽緩衝溶液中，然後加入上述類脂膜中，振搖，攪拌20分鐘，轉速為500-1000r/min，使磷脂膜完全水化，用組織搗碎機高速勻質乳化5-10分鐘,轉速10000r/min,用O. 45 μ m微孔濾膜過濾,製得脂質體混懸液；(3)用注射用水定容至2000ml, O. 45 μ m微孔濾膜過濾,分裝，每瓶2ml,冷凍乾燥，軋蓋，即得氯膦酸二鈉脂質體凍乾粉針劑。實施例2氯膦酸二鈉脂質體注射液處方

氯膦酸二納300g
二硬I旨醜磷騰釀甘油〗50g
膽固醇3 OOg
聚氧乙烯40氮化霞麻油30g製備工藝(I)將150g 二硬脂醯磷脂醯甘油、300g膽固醇和30g聚氧乙烯40氫化蓖麻油溶於2000ml三氯甲烷中，混合均勻，於旋轉薄膜蒸發器上減壓除去三氯甲烷，得到類脂膜；(2)將300g氯膦酸二鈉溶於IOOOmlpH為6. 4的枸櫞酸鹽緩衝溶液中，然後加入上述類脂膜中，振搖，攪拌20分鐘，轉速為500-1000r/min，使磷脂膜完全水化，用組織搗碎機高速勻質乳化5-10分鐘,轉速10000r/min,用0. 45 μ m微孔濾膜過濾,製得脂質體混懸液；(3)用注射用水定容至5000ml, 0. 45 μ m微孔濾膜過濾,灌裝,每支5ml,熔封,滅菌，即得氯膦酸二鈉脂質體注射液。實施例3氯膦酸二鈉脂質體注射液處方
氯膦酸二納300g
二硬脂酖磷脂醜甘油300g
膽固醇60g
聚氧乙烯4 O氫化蓖麻油6 Og製備工藝(I)將300g 二硬脂醯磷脂醯甘油、60g膽固醇和60g聚氧乙烯40氫化蓖麻油溶於2000ml三氯甲烷中，混合均勻，於旋轉薄膜蒸發器上減壓除去三氯甲烷，得到類脂膜；(2)將300g氯膦酸二鈉溶於IOOOmlpH為6. 4的枸櫞酸鹽緩衝溶液中，然後加入上述類脂膜中，振搖，攪拌20分鐘，轉速為500-1000r/min，使磷脂膜完全水化，用組織搗碎機高速勻質乳化5-10分鐘,轉速10000r/min,用O. 45 μ m微孔濾膜過濾,製得脂質體混懸液；(3)用注射用水定容至5000ml, O. 45 μ m微孔濾膜過濾,灌裝,每支5ml,熔封,滅菌，即得氯膦酸二鈉脂質體注射液。對比例1-3氯膦酸二鈉脂質體注射劑的製備分別採用與實施例1-3相同的生產工藝，將如下表1-3中所示的對比例1-3中的成分分別製成氯膦酸二鈉脂質體注射劑表I對比例1-3中所用成分
權利要求
1.一種氯膦酸二鈉脂質體注射劑，其特徵在於主要由氯膦酸二鈉、二硬脂醯磷脂醯甘油、膽固醇和聚氧乙烯40氫化蓖麻油製成。
2.根據權利要求1所述的氯膦酸二鈉脂質體注射劑，其特徵在於單位劑量的氯膦酸二鈉的規格為5ml:0. 3g(注射液體積無水氯膦酸二鈉重量)和O. 3g(以無水氯膦酸二鈉計)。
3.根據權利要求1或2任一所述的氯膦酸二鈉脂質體注射劑，其特徵在於由下列重量份數比的成分製成氯膦酸二鈉I份二硬脂醯磷脂Λ甘油0.5-2翁 膽固醇0.2-1僚聚氣乙締40氫化蓖麻油O. 1-0, 5份，
4.根據權利要求1-3任一所述的氯膦酸二鈉脂質體注射劑，其特徵在於由下列重量份數比的成分製成氯膦酸二銷I份二硬脂醯磷脂醯甘油0.5-1.5份膽固醇0.3-0.8份聚氧乙烯40氫化蓖麻油0.2-0.4份￡
5.一種製備氯膦酸二鈉脂質體注射劑的方法，其特徵在於包括如下步驟 (1)將二硬脂醯磷脂醯甘油、膽固醇和聚氧乙烯40氫化蓖麻油溶於有機溶劑中，混合均勻，於旋轉薄膜蒸發器上減壓除去有機溶劑，得到類脂膜； (2)將氯膦酸二鈉溶於適量的緩衝鹽溶液中，然後加入上述類脂膜中，振搖，攪拌20分鐘，轉速為500-1000r/min，使磷脂膜完全水化，用組織搗碎機高速勻質乳化5_10分鐘，轉速10000r/min,用O. 45 μ m微孔濾膜過濾,製得脂質體混懸液； (3)用注射用水定容,O.45 μ m微孔濾膜過濾，灌裝，熔封，滅菌；或用注射用水定容，O.45 μ m微孔濾膜過濾，分裝，冷凍乾燥，軋蓋，即得氯膦酸二鈉脂質體注射劑。
6.根據權利要求5所述的製備方法，其特徵在於所述的有機溶劑選自乙醇、甲醇、叔丁醇、正丁醇、異丙醇、丙酮、乙腈、苯甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、正己烷和二氯甲烷中的一種或幾種，優選為氯仿。
7.根據權利要求5所述的製備方法，其特徵在於所述的緩衝鹽溶液選自磷酸鹽緩衝溶液、枸櫞酸鹽緩衝溶液、硼酸鹽緩衝溶液中的一種。
8.根據權利要求5所述的製備方法，其特徵在於所述的緩衝鹽溶液為pH為6.4的枸櫞酸鹽緩衝溶液。
全文摘要
本發明公開了一種氯膦酸二鈉脂質體注射劑及其製法。通過選用特定重量配比的氯膦酸二鈉、二硬脂醯磷脂醯甘油、膽固醇、聚氧乙烯40氫化蓖麻油製成品質優異的氯膦酸二鈉脂質體注射劑。與現有製劑相比，本發明的製劑大大提高了製劑的穩定性和生物利用度，釋藥平穩，提高了製劑產品的質量，減少了毒副作用，療效更顯著。
文檔編號A61K33/42GK103040863SQ20121054784
公開日2013年4月17日 申請日期2012年12月17日 優先權日2012年12月17日
發明者王平 申請人:海南百思特醫藥科技有限公司