一株纖維素降解菌株lcb12的基因的製作方法

2023-04-26 13:37:46

專利名稱：一株纖維素降解菌株lcb12的基因的製作方法
技術領域：
本發明涉及一株纖維素降解菌株LCB12的基因，它為嗜麥芽寡養單胞菌 (沒e"o的j^omo"^ma/to;^7/fl) LCB12 CCTCC N:M 209098的16S r DNA基因。其中一株纖維 素降解菌株LCB12，為嗜麥芽寡養單胞菌(5fe"o/ro; /w附o"^附"/^7A沾")LCB12 CCTCC N:M 209098，已於2009年5月6日保藏於中國典型培養物保藏中心(簡稱CCTCC)，保藏號CCTCCN: M 209098。通過經典表型鑑定和16S rDNA核苷酸序列分析相結合的方法，對一株纖維素降 解菌株LCB12進行了生理生化和16S rDNA分子水平的鑑定，由此確定它為嗜麥芽寡養單胞 菌。
背景技術：
纖維素是自然界中最豐富的碳水化合物，是一類可再生的重要資源和能源。纖維素不 溶於水，在環境中結構穩定、難降解，並廣泛存在於農作物秸稈、城市固體廢物、畜禽養 殖廢棄物和造紙廢水中，是難降解汙染物之一。目前，從環境中分離和選育纖維素酶高產 菌株，挖掘纖維素酶產生菌的資源，利用微生物的酶解作用，解決環境汙染問題，甚至轉化 為能源已成為國內外研究熱點之一 。

發明內容
本發明的目的是提供一株纖維素降解菌株LCB12的基因，通過16S rDNA序列分析方法， 對一株纖維素降解菌株LCB12進行分子水平的鑑定，確定其為嗜麥芽寡養單胞菌。該菌株 具有良好的去除畜禽養殖廢水中纖維素的能力。
一株纖維素降解菌株LCB12的基因，其特徵在於為嗜麥芽寡養單胞菌 (沒e"o/rop/wmwKW wa/top/n7/a) LCB12 CCTCC N: M 209098的16S r DNA基因，其菌株的 16SrDNA全序列如下
CAGAGTGMCGCTGGCGGTAGGCCTAACACATGCMGTCGMCGGCAGCACAGGAGAGCT60
TGCTCTCTGGGTGACGAGTGGCGGACGGGTGAGGAATGCATCGGMTTTACTCTTTCGTG120
GGGGATMCGTAGGGAMCTTACGCTAATACCGCATACGACCTACGGGTG嵐GCCGGGG180
ACCTTCGGGCCTGGCGCGMTGMTGAGCCGATGCCCGATAGCTAGTTGGCGGGGTAAGA240
GCCCACCMGGCGACGATCGGTAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACACTGGMCTGA300
GACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGCMGC360
CTGATCCAGCCATACCGCGTGGGTGMGMGGCCTTCGGGTTGT嵐GCCCTTTTGTTGG420
GAMGAAAAGCAGTCGGTTAATACCCGATTGTTCTGACGGTACCCAAAGAATAAGCACCG480
GCTMCTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTMTACGMGGGTGCAAGCGTTACTCGGAATTACT540
GGGCGTAAAGCGTGCGTAGGTGGTTGTTTAAGTCTGTCGTGAMGCCCTGGGCTCMCCT600
GGGAATTGCGATGGAAACTGGGCGACTAGAGTGTGGCAGAGGATAGTGGAATTCCTGGTG660
TAGCAGTGMATGCGTAGAGATCAGGAGGAACATCCGTGGCGMGGCGACTGTCTGGGCC720
MCACTGACACTGAGGCACGAAAGCGTGGGGAGCAMCAGGATTAGATACCCTGGTAGTC780
CACGCCCTAAACGATGCGMCTGGATGTTGGGTGCAATTTGGCACGCAGTATCGAAGCTA840
ACGCGTTAAGTTCGCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCMGACTG嵐CTCAAAGGMTTGAC■GGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGTATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTAC960
CTGGCCTTGACATGCACGGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAACCGTGACA1020
CAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACG1080
AGCGCAACCCTTGTCCTTAGTTGCCAGCACGTAATGGTGGGAACTCTAAGGAGACCGCCG1140
GTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGGCCAGGGC1200
TACACACGTACTACAATGGTGGGGACAGAGGGCTGCAAGCCGGCGACGGTAAGTCAATCG1260
CAGAAACCCCATCTCAGTCCGTATTGGAGTCTGCAACTCGACTCCATGAAGTCGGAATCG1320
CTAGTAATCGCAGATCAGCATTGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGC1380
CCGTCACACCATGGGAGTTTGTTGCACCAGAAGCAGGTAGCTTAACCTTCGGGAGGGCGC1440
TGCAC1445
上述16S r DNA序列全長1445個核苷酸。 所述的畜禽主要有豬、牛、羊、驢、兔、雞、鴨、鵝等。
本發明的有益效果是本發明的一株纖維素降解菌株LCB12的基因，它是嗜麥芽寡養 單胞菌(Sfe"o的; /zo附wKWwa/topM/a) LCB12 CCTCC M 209098的16SrDNA基因，本發明 基因序列，通過提取細菌核DNA， 16S rRNA基因的PCR擴增，PCR產物的回收，以及16S rDNA 的全序列測定和分析而獲得。
本發明從畜禽養殖場排汙口的池底汙泥中篩選到一株在纖維素條件下具有一定生長能 力的新菌株。 一株纖維素降解菌株LCB12有良好的去除畜禽養殖廢水中纖維素的能力，該 菌株能使纖維素的去除效率提高8-12%，能在72小時之內去除畜禽養殖廢水中的纖維素 24-30mg/L。


圖1是纖維素降解菌株LCB12的PCR產物瓊脂糖電泳圖(1:核DNA， 2:擴增產物，3: Marker)。
圖2是纖維素降解菌株LCB12的掃描電鏡圖。 圖3是纖維素降解菌株LCB12的纖維素酶活數據圖。
具體實施例方式
一、 一株纖維素降解菌株LCB12的篩選方法
(一)、材料準備
1、 實驗廢水和池底汙泥取自湖北省鄂州市市郊某種豬養殖場排汙口。
2、 培養基
篩選培養基(g/L): Na2HP043.0， NH萬O. 8， MgS04 7H20 0. 1， CaCl20. 1， CMC-Na 2.0， 微晶纖維素粉l.O，濾紙2.0，稻草2.0， pH值7.0 7.2。
產酶培養基(g/L): Na2HP043. 0, ,030. 8， MgS04 7H20 0. 5， CaCl20.5， FeS04 7H20 0. 01， MnS04 H20 0. 01， ZnS04 0. 01， CMC-Na 10. 0 (或微晶纖維素粉5. 0或纖維二糖5. 0)， 蛋白腖1.0，酵母提取物O. 5， pH值7.0 7.2。
LB液體培養基(g/L)為蛋白腖10.0g，酵母提取物5.0g， NaC110.0g，蒸餾水 訓OmL， pH7.0。
LB固體培養基(g/L)為蛋白腖lO.Og，酵母提取物5.0g， NaC110.0g，蒸餾水 lOOOmL，瓊脂15g (固)，pH7.0。
LB斜面培養基(g/L)為蛋白腖lO.Og，酵母提取物5.0g， NaC110.0g，蒸餾水 lOOOmL，瓊脂20g (固),pH7.0。
3、 實驗儀器和設備 國華SHA-B恆溫振蕩器， S朋150G光照生物培養箱，臥式壓力蒸汽滅菌器------上海醫用核子儀器廠，
光學顯微鏡-----Olympus有限公司，
pH計等-----Hana有限公司，
超淨工作檯， 鼓風乾燥箱，
KYKY-1000B掃描電子顯微鏡， PTC200型PCR儀， 電泳儀及電泳槽， UVP凝膠紫外觀測儀，
微量生化鑑定管購自杭州微生物試劑廠，DNA提取試劑盒、PCR產物純化試劑盒購自 美國Promega公司、7bg酶、dNTP、 DNAMarker、 酶均購自日本Takara公司。
(二)、菌株的篩選分離與純化
1) 、初篩①稱取1克畜禽養殖場排汙口的池底汙泥樣品(樣品為池底汙泥，池底汙 泥取自湖北省鄂州市市郊某種豬養殖場排汙口 )，用20 mL無菌水水洗，8000，m離心5 min， 棄上清，再加20mL水，重懸土樣；重懸後再加20mL水離心(8000 rpm離心5 min)，棄 上清，重懸土樣，此步驟重複操作3次，得到泥水混合物，備用；
② 將泥水混合物轉入裝有lOOmL篩選培養基的500 mL錐形瓶中，3(TC恆溫靜至培養 至培養基渾濁，得到菌懸液A;
③ 取5 mL菌懸液A於裝100 mL新鮮的篩選培養基的500 mL錐形瓶中培養一周；將 培養一周後的菌懸液取5 mL於裝100 mL新鮮的篩選培養基的500 mL錐形瓶中培養一周， 重複操作5-6次，最後得到的菌懸液B;
④ 將最後得到的菌懸液B中取20叱於LB平板上塗布；置30。C下恆溫培養l-3天，挑 取長勢良好、菌落形態各不相同的菌落，經2-5次純化後{純化用無菌的接種環取培養物
(LB平板上的菌落)少許在平板上進行劃線；當接種環在LB固體培養基表面上往後移動時， 接種環上的菌液逐漸稀釋，最後在所劃的線上分散著單個細胞，經培養，每一個細胞長成 一個菌落，即得到純化後的單菌落K得到待鑑定的菌落，保種備用。
2) 、 二次篩選將待鑑定的菌落在LB液體培養基中隔夜培養後，點種到篩選培養基平
板上，30。C恆溫培養2~4 d，往培養皿中加入30mL的1 mg/mL的剛果紅溶液，染色1 h， 棄去染液，加入50mL的1 mol/L的NaCl溶液,洗滌1 h，若菌落的周圍會出現清晰的透明圈， 說明細菌產生纖維素酶，依據透明圈的直徑大小選擇直徑大的產酶菌株。
用接種針挑取直徑大的產酶菌株(在菌落特徵上有明顯差異的單菌)，對挑取的產酶菌 株在LB平板上進行劃線培養，直至獲得單一菌株，並於LB斜面培養基上劃線保種，得到 一株菌株LCB12，即纖維素降解菌株LCB12。
二、纖維素降解菌株LCB12的鑑定
1、對纖維素降解菌株LCB12的鑑定
對纖維素降解菌株LCB12進行了生理生化的鑑定以及16S rRNA分子的鑑定，從分子水
平確定纖維素降解菌株的種屬。
16S rRNA序列分析主要按照以下步驟 1)提取細菌核DNA，
a) 集菌用高壓滅菌的牙籤挑單菌落接種於LB液體培養基管內培養18小時，取其菌 懸液lmL於1. 5mL的離心管中8000rpm離心5min，棄上清液。
b) 加STE緩衝液lmL洗一次，振蕩重懸細菌，8000rpm離心5min，棄上清液。
c) 加600 pLTE緩衝液，劇烈振蕩重懸細菌，加入10%的SDS 65pL， 65。C水浴5-10min。d) 加等體積酚氯仿抽提三次。
e) 小心吸取上清液，加入等體積的異丙醇和1/10體積的3麗aAc， 12000 rpm離心10min。 徹底棄上清。
f) DNA沉澱用70%乙醇洗一次，風乾後溶於20|aL TE緩衝液備用。
TE緩衝液lO腿ol /L Tris-Cl (pH8. 0); lmmol /L EDTA-Na2 (p朋.0)， STE緩衝液0. lmol/L NaCl 10腿ol/L Tris-Cl (pH8.0) lmmol/L EDTA (pH8. 0)，
2) 16S rRNA基因的PCR擴增，
PCR擴增引物參照Weisburg等人的方法合成。 Pl:正向引物5' AGAGTTTGATCCTGGCTCAG3， P2:反向引物5' GGTTACCTTGTTACGACTT3， 在50nL反應體積中，加入lnL模板DNA (0. l(ag)， 0. 5pL Pl和P2 (終濃度為0. 5pM)， lpLdNTP (每種NTPO. 2 mM)， 0. 5pLTaq聚合酶(2 U)禾Q 5 IOXPCR緩衝液。PCR擴增 條件為94。C預變性5min;在94。C變性30s， 61-65。C退火30s， 72。C延伸lmin，循環30 次；最後72 °C終延伸10 min。
3) PCR產物的回收
將PCR產物以1%瓊脂糖凝膠進行電泳後，在紫外燈下切取含欲回收片段的凝膠，放 入1. 5mL離心管中加2倍體積TE， 65'C水浴10分鐘後加等體積水飽和酚抽提一次離心後取 上層水相再用酚-氯仿-異戊醇抽提一次，收集上清加0. 1倍體積的10mol/L乙酸銨和2倍 體積無水乙醇沉澱，離心，用濃度為70%乙醇洗沉澱一次，風乾後溶於適量滅菌雙蒸水。
4) 16S rDNA的全序列測定和分析
PCR測序用正反向引物參照Hiraishi等人方法合成。 P-f: CACGACGTTGTAAAACGACAGTTTGATCCTGGCTC; P-r: GGATAACAATTTCACACAGGAAGGAGGTGATCCAGCC 。 加入l)aL模板DNA (<0. l嗎)，PCR擴增30個循環(94 °C 1 min， 55 °C 30s， 72 。C 2min)。採用ABI PRISM測序試劑盒中染料終止劑終止反應。然後，在Applied Biosystem 373 A DNA測序儀上測序。測得的16S rDNA序列採用BLAST軟體與GenBank資料庫比較分析，
最終從分子水平上確定該菌的種屬。 2、 16S rRNA序列測定 本發明採用對16SrRNA序列測定和分析的方法對細菌進行分子水平的鑑定。以細菌的 核DNA為模板，以16S rRNA基因的PCR擴增的通用引物為引物，進行PCR擴增，得到長度 為1445bp的擴增帶(用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測)，如圖1所示。PCR產物經純化後，測定 其全序列。序列如下 <110〉 中國地質大學(武漢)
<120〉 一株纖維素降解菌株LCB12的基因
<160〉 1445
1 1445bp <212〉 DNA
<213〉 卩譽麥芽寡養單胞菌(5!fe"ofrcip/w附cway <400〉 1
6GCTGGCGGTAGGCCTAACACATGCAAGTCGAACGGCAGCACAGGAGAGCT60
TGCTCTCTGGGTGACGAGTGGCGGACGGGTGAGGAATGCATCGGAATTTACTCTTTCGTG120
GGGGATAACGTAGGGAAACTTACGCTMTACCGCATACGACCTACGGGTGMAGCCGGGG180
ACCTTCGGGCCTGGCGCGAATGMTGAGCCGATGCCCGATAGCTAGTTGGCGGGGTMGA240
GCCCACCAAGGCGACGATCGGTAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACACTGGMCTGA300
GACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGMTATTGGACMTGGGCGCMGC360
CTGATCCAGCCATACCGCGTGGGTGAAGMGGCCTTCGGGTTGTAAAGCCCTTTTGTTGG420
GAAAGAAAAGCAGTCGGTTAATACCCGATTGTTCTGACGGTACCC嵐GAATMGCACCG480
GCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTMTACGAAGGGTGCMGCGTTACTCGGAATTACT540
GGGCGTMAGCGTGCGTAGGTGGTTGTTTAAGTCTGTCGTGAMGCCCTGGGCTCMCCT600
GGGMTTGCGATGGAMCTGGGCGACTAGAGTGTGGCAGAGGATAGTGGAATTCCTGGTG660
TAGCAGTGAAATGCGTAGAGATCAGGAGGAACATCCGTGGCGMGGCGACTGTCTGGGCC720
AACACTGACACTGAGGCACGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTC780
CACGCCCTAAACGATGCGAACTGGATGTTGGGTGCAATTTGGCACGCAGTATCGAAGCTA840
ACGCGTTAAGTTCGCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCMGACTGAMCTCMAGGAATTGAC■
GGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGTATGTGGTTTMTTCGATGCAACGCGAAGMCCTTAC960
CTGGCCTTGACATGCACGGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAACCGTGACA1020
CAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCMCG1080
AGCGCMCCCTTGTCCTTAGTTGCCAGCACGTAATGGTGGGMCTCTAAGGAGACCGCCG1140
GTGACAMCCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGGCCAGGGC1200
TACACACGTACTACAATGGTGGGGACAGAGGGCTGCAAGCCGGCGACGGTAAGTCAATCG1260
CAGAAACCCCATCTCAGTCCGTATTGGAGTCTGCMCTCGACTCCATGMGTCGGAATCG1320
CTAGTMTCGCAGATCAGCATTGCTGCGGTGMTACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGC1380
CCGTCACACCATGGGAGTTTGTTGCACCAGMGCAGGTAGCTTAACCTTCGGGAGGGCGC1440
TGCAC1445
三、 菌落形態特徵以及生理生化特性
菌株LCB12的菌落形態菌落呈橘紅色、不透明、圓形、表面光滑，中心凸出、邊緣 整齊；生理特徵細菌呈規則的直杆狀，單個或成對排列，常呈V形排列，革蘭氏陰性， 運動，兼性厭氧，不產生氧化酶和接觸酶；最適生長pH值6.5 7.5，最適生長溫度25-35 °C，不能在6(TC生長。同時對菌表觀也做了掃描電鏡觀察，結果見圖2。
四、 菌株LCB12為新的菌株
採用BLAST分析法對菌株LCB12的16S rRNA基因序列與GenBank資料庫比較分析發現， 菌株LCB12與嗜麥芽寡養單胞菌(5fe"o加如omoH^ wato;7/ 7/a)的同源性高達99.0%。
綜合菌株的生理生化以及分子鑑定結果，菌株LCB12命名為嗜麥芽寡養單胞菌 (&e"o/ro;j/2o附oMasmfl/top/2z7/fl) LCB12。查閱有關資料，尚嗜麥芽寡養單胞菌屬有關畜禽養 殖廢水中降解纖維素能力研究的報導。嗜麥芽寡養單胞菌(Sfe"0加少/20附朋a;y ma/topMfa) LCB12為新的菌株，已於2009年5月6日保藏於中國典型培養物保藏中心(簡稱CCTCC)， 保藏號CCTCC N:M 209098。
本發明從自湖北省鄂州市郊某種豬養殖場排汙口的池底汙泥(沉積底泥)篩選分離出 這一株細菌，並發現其有較好降解纖維素養殖廢水的功能。這拓寬了人們對嗜麥芽寡養單 胞菌(5te"o加; /2omomy膨/啤M&)在其功能方面的應用研究思路，並為降解含纖維素畜 禽養殖廢水提供了有用的菌源和技術，具有較強的實際應用價值。
7五、菌株LCB12的應用
(一)、挑取嗜麥芽寡養單胞菌(5te"ofrop/wmo"oy watop/n7/a) LCB12單菌落，於LB 固體培養基中培養過夜，按培養後的嗜麥芽寡養單胞菌(5fe"Wra; /zomo"w ma/to; /z///a) LCB12:含纖維素廢水(如畜禽養殖廢水，即實驗廢水，取自湖北省鄂州市市郊某種豬養殖 場排汙口)的體積比為0.5-2: 100接種，30-35'C恆溫培養，pH值為6_8，反應48_72小 時。
所述的LB固體培養基為蛋白腖10.0g，酵母提取物5.0g， NaC110.0g，蒸餾水 1000raL，瓊脂15g (固)，pH7. 0。
(二)、菌株LCB12產纖維素酶的能力
纖維素是大分子的聚集，由結晶區和無定形區交錯而成。將天然纖維素分解，必須依 靠內切型葡聚糖酶(EG)、外切性葡聚糖酶(CBG)和纖維二糖酶(BG)三種酶協同作用 才能完成。為了考察菌株對纖維素的降解能力，研究了在產酶培養基中，細菌生產三種酶 的能力。取產酶培養基100mL加入250mL的錐形瓶中，加入菌株LCB12的菌懸液(用接種 環挑取LCB12菌落於10mL LB液體培養基中，30。C震搖培養12小時)lmL，加入含纖維素 廢水(實驗廢水，取自湖北省鄂州市市郊某種豬養殖場排汙口) 100mL (纖維素的濃度為 300-500mg/L)， 30°C、震搖培養一周，檢測各種酶活(見圖3)。結果表明，該菌株LCB12 在一周內產生的內切型葡聚糖酶(EG)、外切性葡聚糖酶(CBG)和纖維二糖酶(BG)三 種酶酶活可分別達到13.9， 6.2， 15.2U/mL。
為了考察該菌株(菌株LCB12)在實際處理畜禽養殖廢水的中降解纖維素的能力，研究 了該菌株投加到畜禽養殖廢水厭氧反應器中(實驗廢水，取自湖北省鄂州市市郊某種豬養 殖場排汙口)，纖維素的降解效率。在長期(穩定運行三個月以上)穩定運行的反應器中加 入菌株LCB12的菌懸液(用接種環挑取LCB12菌落於10mL LB液體培養基中，3(TC震搖培 養12小時)10m L，反應器中含纖維素廢水(實驗廢水，取自湖北省鄂州市市郊某種豬養 殖場排汙口)為1000mL (纖維素的濃度為300-500mg/L)， 3CTC、靜止一周，再穩定運行30 天，在反應器穩定運行期間定期檢測纖維素的去除效率，與未投加該菌株的對照反應器對 比，結果表明，該菌株能在72小時之內去除畜禽養殖廢水中的纖維素24-30mg/L;該菌株 能使該反應器處理纖維素的去除效率提高8-12% (原始處理率為65-70°/。，加入菌株LCB12 後處理率為75-80%)。
權利要求
1.一株纖維素降解菌株LCB12的基因，其特徵在於為嗜麥芽寡養單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)LCB12 CCTCC NM 209098的16S r DNA基因，其菌株的16S r DNA全序列如下CAGAGTGAAC GCTGGCGGTA GGCCTAACAC ATGCAAGTCG AACGGCAGCA CAGGAGAGCT60TGCTCTCTGG GTGACGAGTG GCGGACGGGT GAGGAATGCA TCGGAATTTA CTCTTTCGTG120GGGGATAACG TAGGGAAACT TACGCTAATA CCGCATACGA CCTACGGGTG AAAGCCGGGG180ACCTTCGGGC CTGGCGCGAA TGAATGAGCC GATGCCCGAT AGCTAGTTGG CGGGGTAAGA240GCCCACCAAG GCGACGATCG GTAGCTGGTC TGAGAGGATG ATCAGCCACA CTGGAACTGA300GACACGGTCC AGACTCCTAC GGGAGGCAGC AGTGGGGAAT ATTGGACAAT GGGCGCAAGC360CTGATCCAGC CATACCGCGT GGGTGAAGAA GGCCTTCGGG TTGTAAAGCC CTTTTGTTGG420GAAAGAAAAG CAGTCGGTTA ATACCCGATT GTTCTGACGG TACCCAAAGA ATAAGCACCG480GCTAACTTCG TGCCAGCAGC CGCGGTAATA CGAAGGGTGC AAGCGTTACT CGGAATTACT540GGGCGTAAAG CGTGCGTAGG TGGTTGTTTA AGTCTGTCGT GAAAGCCCTG GGCTCAACCT600GGGAATTGCG ATGGAAACTG GGCGACTAGA GTGTGGCAGA GGATAGTGGA ATTCCTGGTG660TAGCAGTGAA ATGCGTAGAG ATCAGGAGGA ACATCCGTGG CGAAGGCGAC TGTCTGGGCC720AACACTGACA CTGAGGCACG AAAGCGTGGG GAGCAAACAG GATTAGATAC CCTGGTAGTC780CACGCCCTAA ACGATGCGAA CTGGATGTTG GGTGCAATTT GGCACGCAGT ATCGAAGCTA840ACGCGTTAAG TTCGCCGCCT GGGGAGTACG GTCGCAAGAC TGAAACTCAA AGGAATTGAC900GGGGGCCCGC ACAAGCGGTG GAGTATGTGG TTTAATTCGA TGCAACGCGA AGAACCTTAC960CTGGCCTTGA CATGCACGGA ACTTTCCAGA GATGGATTGG TGCCTTCGGG AACCGTGACA1020CAGGTGCTGC ATGGCTGTCG TCAGCTCGTG TCGTGAGATG TTGGGTTAAG TCCCGCAACG1080AGCGCAACCC TTGTCCTTAG TTGCCAGCAC GTAATGGTGG GAACTCTAAG GAGACCGCCG1140GTGACAAACC GGAGGAAGGT GGGGATGACG TCAAGTCATC ATGGCCCTTA CGGCCAGGGC1200TACACACGTA CTACAATGGT GGGGACAGAG GGCTGCAAGC CGGCGACGGT AAGTCAATCG1260CAGAAACCCC ATCTCAGTCC GTATTGGAGT CTGCAACTCG ACTCCATGAA GTCGGAATCG1320CTAGTAATCG CAGATCAGCA TTGCTGCGGT GAATACGTTC CCGGGCCTTG TACACACCGC1380CCGTCACACC ATGGGAGTTT GTTGCACCAG AAGCAGGTAG CTTAACCTTC GGGAGGGCGC1440TGCAC1445上述16S r DNA序列全長1445個核苷酸。
2.根據權利要求1所述的一株纖維素降解菌株LCB12的基因，其特徵在於:採用BLAST 分析法，對嗜麥芽寡養單胞菌(S^wWrap/wwomw wa/top/n7fa) LCB12 CCTCC N:M 209098 的16S rRNA基因序列與GenBank資料庫比較分析發現，嗜麥芽寡養單胞菌(5fe"Wra; /K>wo"ffif wa/top/ 7/a ) LCB12 CCTCC N:M 209098與嗜麥芽寡養單胞菌(iSewWrap/wmoway ma/to; /n7/a)的同源性高達99 0% 。
全文摘要
本發明涉及一株纖維素降解菌株LCB12的基因。一株纖維素降解菌株LCB12的基因，其特徵是它是嗜麥芽寡養單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)LCB12 CCTCC NM 209098的16S r DNA基因。本發明基因序列，通過提取細菌核DNA，16S rRNA基因的PCR擴增，PCR產物的回收，以及16S rDNA的全序列測定和分析而獲得。本發明從畜禽養殖場排汙口的池底汙泥中篩選到一株在纖維素條件下具有一定生長能力的新菌株，它有良好的去除畜禽養殖廢水中纖維素的能力。
文檔編號C12N15/31GK101665790SQ20091006306
公開日2010年3月10日 申請日期2009年7月6日 優先權日2009年7月6日
發明者珩 劉, 琨 劉, 平 李, 王焰新, 王豔紅, 蕾 童 申請人:中國地質大學(武漢)