環磷醯胺脂質體及其製備方法

2023-04-27 00:36:11 1

專利名稱：環磷醯胺脂質體及其製備方法
技術領域：
本發明涉及醫藥技術領域，確切地說它是一種環磷醯胺脂質體(包括前體脂質體)及其製備方法。
背景技術：
環磷醯胺(cyclophosvnamide，CTX)為白色結晶、無臭、味微苦。不溶於乙醚、丙酮，可略溶於水，水溶液不穩定，微溶於乙酸。CTX是一種烷化劑，1958年首次人工合成，CTX為潛伏化型氮芥類藥物，體外無抗瘤活性，進入體內被肝臟或腫瘤組織內存在的過量磷醯胺酶或磷酸酶水解，釋放出氮芥基而起抗腫瘤作用。屬於細胞周期非特異性藥物，抗瘤譜較氮芥廣、而毒性低於氮芥。主要用於腫瘤免疫，對多種腫瘤有明顯的抑制作用，近年來因證實它有免疫抑制作用而用於多種自身免疫性疾病的治療，已取得明顯療效。主要用於系統性紅斑狼瘡，尤其有腎、腦受累者更應立即使用，而不要只想調整激素用量(需要時可與激素衝擊療法並用)。對不同系統性壞死性血管炎病、皮肌炎及多發性肌炎、硬皮病，都有很強指徵，即或臨床緩解後也宜長時間維持用藥。近年美國倡導衝擊用藥，劑量750-1000mg/m2體表面積，約每次800mg～1000mg～1200mg，靜脈點滴半小時內注入，每月一次直至病情緩解，以後改為每2個月一次，再過渡至每3個月一次維持。美國認為效果與口服或隔日注射法相同，但副作用明顯減少。加味當歸補血顆粒對環磷醯胺的骨髓抑制及荷瘤小鼠免疫功能的影響 田峰，張蕻，任連生 中國藥物與臨床2004年06期 比較加味當歸補血顆粒(JW)與當歸補血湯(DG)對環磷醯胺(CTX)所致小鼠的骨髓抑制及抑瘤作用，觀察JW對荷瘤小鼠紅細胞免疫功能的影響。方法清潔級KM小鼠隨機分為CTX組、荷瘤組及正常對照組。CTX組腹腔注射CTX，同時灌胃給予JW或DG，10d後檢測動物外周血象白細胞、紅細胞、血小板及骨髓有核細胞數，進行組間比較；荷瘤組常規接種H22(小鼠肝癌)造模後，灌胃給予JW，10d後檢測小鼠紅細胞免疫功能、紅細胞免疫複合物花環率(RBC-ICRR)及紅細胞C3b受體花環率(RBC-C3BRR)，同時測定對CTX抑瘤作用的影響。環磷醯胺在翼狀胬肉術後應用療效觀察 侯元友 實用醫技雜誌2004年05期 翼狀胬肉是常見的外眼病之一，臨床治療方法很多，但術後復發率較高。東阿縣人民醫院自1999年至2001年間對58例(60隻眼)行冀狀胬肉切除+結膜轉位術，術後一周滴1％環磷醯胺，收到顯著療效 紫杉醇與環磷醯胺分別聯合鉑類藥治療卵巢癌的對比研究 李從鑄，翟玉霞，黃萍，周莉，徐嵐，李燕 中國臨床藥理學與治療學2004年04期 比較紫杉醇聯合鉑類藥物(TP方案)與環磷醯胺加鉑類藥物(CP方案)治療III、IV期卵巢上皮癌的療效。方法化療方案每一療程採用2d療法，每種藥物d1或d2給藥，採用大劑量單次給藥。對24例III、IV期卵巢上皮癌給予TP方案化療紫杉醇劑量為135mg·m-2，溶於5％GS500ml中，靜滴，3h，d1；順鉑(DDP)75mg·m-2，d2(或卡鉑按AUC＝5計算所得的劑量)，前3～4個療程採用腹腔給藥，以後均靜脈給藥。30例對照組病人採用環磷醯胺加鉑類藥為主的CP方案。環磷醯胺(CTX)600mg·m-2，靜注，d1；阿黴素(ADM)40～60mg·m-2，靜注 周劑量紫杉醇聯合異環磷醯胺治療晚期非小細胞肺癌 23例 許紅霞，聶春蘭，洪專 中國肺癌雜誌2004年02期 評價周劑量紫杉醇與異環磷醯胺聯合化療治療晚期非小細胞肺癌的療效和安全性。方法紫杉醇50～65mg/m2靜脈滴注，第1、8、15天，異環磷醯胺1.3g/m2靜脈注射，第2～4天。每28天重複，2～3周期為一療程。使用紫杉醇前常規給予抗過敏等處理，異環磷醯胺使用後第0、4、8小時給予美安解毒。結果本組完全緩解1例，部分緩解8例，穩定11例，進展3例，總有效率為39.1％(9/23)，臨床受益率為87.0％(20/23)。化療後KPS評分顯著提高(P＜0.01)。隨防20例，中位生存期為8.9月，1年生存率為40％(8/20)。全組毒性反應主要為血液學毒性和消化道反應，其中白細胞降低發生率為69.6％ 卡莫氟與阿黴素和環磷醯胺聯合化療治療晚期乳腺癌 何雪娟，金小民，孫巖 中國腫瘤2003年05期觀察卡莫氟聯合阿黴素、環磷醯胺治療35例晚期乳腺癌的療效及副作用。而將環磷醯胺製成脂質體和前體脂質體未見推薦。

發明內容
本發明的目的是提供環磷醯胺脂質體和前體脂質體及其製備方法，以改善環磷醯胺難溶於水，口服吸收差，且生物利用度低。
本發明是由環磷醯胺與磷脂加膽固醇，也可不加膽固醇等輔料製備而成的(納米)脂質體。製備方法可以採用前體脂質體法、乙醇注入法、薄膜分散法、反相蒸發法、PH梯度法、擠出法、機械法等製備脂質體和納米脂質體的各種方法。機械法可為乳勻機、高壓乳勻機、納米機、勻漿機、高壓微射流等各種機械設備製備脂質體的方法。製備脂質體的磷脂，可以是大豆卵磷脂、氫化大豆磷脂，也可以是合成磷脂，由乙醇注入法、薄膜分散法、反相蒸發法、擠出法、機械法製備環磷醯胺脂質體，其組成包括環磷醯胺磷脂、膽固醇、VE等輔料。其中磷脂與環磷醯胺的重量比為0.1∶1～50∶1，膽固醇與磷脂的重量比為0～2∶1。
通過前體脂質體法製備脂質體的處方為環磷醯胺、支持劑、磷脂、膽固醇、VE等。磷脂與環磷醯胺的重量比為0.1∶1～50∶1，膽固醇與磷脂的重量比為0～2∶1，支持劑與磷脂的比例為0.01∶1～500∶1。支持劑可以是山梨醇、甘露醇、蔗糖、氯化鈉、水溶性澱粉、右旋糖苷、葡萄糖、乳糖等所用可用於凍幹支持劑的藥用材料或藥用輔料。製備前脂質體的方法，可以採用減壓旋轉薄膜法、噴霧乾燥法、流化床法或凍幹法等各種造粒方法和乾燥及包衣方法。前體脂質體使用前加水或緩衝液通過振搖、攪拌、超聲水化形成脂質體，或製備成膠囊劑、片劑、顆粒劑等。在消化道中遇水直接自發形成脂質體。
用環磷醯胺脂質體(或前體脂體)可以製成片劑、口服液、口服乳、膠囊劑、顆粒劑、注射液、凍乾粉針、輸液乳劑、微乳劑、粉針劑等劑型。
本發明的優點是改善環磷醯胺口服吸收差，生物利用度低的不足，利用磷脂作膜材，將環磷醯胺製成脂質體，磷脂能與環磷醯胺發揮協同和輔助作用，提高環磷醯胺的療效。
具體實施例方式本發明的具體製備方法，由下列實施實例舉例說明，但本發明的保護範圍，不局限於此。
實施例1乙醇注入法製備環磷醯胺脂質體取大豆磷脂，膽固醇，VE加無水乙醇溶解後注入環磷醯胺水溶液中，恆溫高速攪拌，減壓蒸發除去乙醇，過微孔濾膜整粒，即得環磷醯胺脂質體，包封率可達66.8％。
實施例2薄膜分散法製備環磷醯胺脂質體取大豆磷脂，膽固醇，VE用15ml氯仿溶解於150ml茄形瓶中，在旋轉薄膜蒸發器上減壓成膜並除盡有機溶劑，加10ml環磷醯胺水溶液水化，過微孔濾膜整粒，得環磷醯胺脂質體，包封率可達63.1％。
實施例3反相蒸發法製備環磷醯胺脂質體稱取大豆磷脂、膽固醇、VE加5ml氯仿使溶解，再加入10ml乙醚，然後加入15ml環磷醯胺的磷酸鹽緩衝液中，浴式超聲使形成均一單相體系，減壓蒸發去除氯仿乙醚至凝膠形成，繼續減壓蒸發5～10分鐘，渦旋振蕩至水性懸濁液即脂質體形成。包封率可達33.5％。
實施例4減壓旋轉薄膜法製備環磷醯胺前體脂質體取山梨醇和環磷醯胺以等量遞加法混合均勻後置於100ml茄形瓶中，於一經改良的旋轉蒸發儀上減壓預熱30分鐘，取大豆磷脂、膽固醇、VE適量溶於乙醇液，真空旋轉蒸發。在乙醇液全部加完後繼續減壓蒸發30～40分鐘，將粉末取出置於乾燥器中過夜後過篩(40目，450μm)，即得環磷醯胺前體脂質體。包封率可達32.8％。
實施例5流化床法製備環磷醯胺前體脂質體山梨醇和環磷醯胺以等量遞加法混合均勻後置於流化床中，取大豆磷脂、膽固醇、VE適量溶於無水乙醇中，通過流化床沸騰一步制粒，過篩，即得環磷醯胺前體脂質體。
實施例6流化床法製備環磷醯胺前體脂質體環磷醯胺加蒸餾水，再加0.1N NaOH調PH使溶解，用蒸餾水調整體積(A液)；另取大豆磷脂、膽固醇、VE溶於無水乙醇中，通過流化床沸騰一步制粒，過20目和60目篩，即得環磷醯胺前體脂質體顆粒。
實施例7噴霧乾燥法製備環磷醯胺前體脂質體環磷醯胺加水，0.1N NaOH調PH使溶解，加入乳糖和EDTA並使溶解(A液)。另取大豆磷脂、膽固醇、VE溶於100ml無水乙醇中(B液)。將B液在攪拌下緩慢加入A液中，噴霧乾燥制粒，過篩，即得環磷醯胺脂質體。
實施例8乙醇注入法、薄膜分散法製備的脂質體，噴霧乾燥，即得環磷醯胺前體脂質體。
實施例9由前體脂質體製備環磷醯胺脂質體。取實施例7製得的前體脂質體2g，，加水10ml振搖10分鐘並水化，即得環磷醯胺脂質體，顯微鏡放大1000倍觀察可看到脂質體。
實施例10冷凍乾燥法製備環磷醯胺前體脂質體大豆磷脂、膽固醇、適量VE加無水乙醇溶解後在高速攪拌緩慢注入環磷醯胺水溶液中，減壓蒸發除去乙醇。冷凍乾燥24小時，得環磷醯胺前體脂質體。
實施例11將環磷醯胺脂質體過0.22μm微孔濾膜滅菌，充氮氣，灌封，得環磷醯胺脂質體注射液。
實施例12將環磷醯胺脂質體加入10％蔗糖，過0.22μm微孔濾膜滅菌，分裝，冷凍乾燥，得粉針劑。
實施例13將環磷醯胺前體脂質體過篩，分裝，得環磷醯胺脂質體顆粒劑。
實施例14將環磷醯胺前體脂質體過篩，裝膠囊，得環磷醯胺脂質體膠囊劑。
實施例15將環磷醯胺前體脂質體過篩，壓片，得環磷醯胺脂質體片劑。
本發明不限於以上所述的實施例。
權利要求
1.環磷醯胺脂質體及其製備方法，其特徵在於由環磷醯胺與磷脂等輔料製備而成的脂質體或前體脂質體。
2.根據權利要求1所述的環磷醯胺脂質體，其特徵在於其中可以加入膽固醇和支持劑。
3.根據權利要求1所述的環磷醯胺脂質體或前體脂質體，其特徵在於膜材磷脂可以採用天然磷脂，也可以是採用氫化大豆磷脂和合成磷脂等。
4.根據權利要求1所述的環磷醯胺脂質體或前體脂質體，其特徵在於磷脂與藥物的重量比為0.1∶1～50∶1。
5.根據權利要求2述的環磷醯胺脂質體或前體脂質體，其特徵在於支持劑可以山梨醇、甘露醇、蔗糖、氯化鈉、水溶性澱粉、右旋糖苷、甜菊糖、葡萄糖、乳糖等，其中支持劑與磷脂的比例為0.01∶1～500∶1。
6.根據權利要求1所述的環磷醯胺脂質體或前體脂質體，其特徵在於用該脂質體或前體脂質體可製得膠囊劑、片劑、顆粒劑、注射液、口服液、凍乾粉針、輸液等劑型。
7.一種如權利要求1所述的環磷醯胺脂質體的製備方法，其特徵在於製備方法可以採用前體脂質體法、乙醇注入法、薄膜分散法、反相蒸發法、擠出儀、機械法，PH梯度法等；機械法包括使用均質機、乳勻機、擠出機、納米機、勻漿機、高壓微射流等各種機械設備製備脂質體的方法。
8.一種如權利要求7所述的環磷醯胺前體脂質體的製備方法，其特徵在於採用前體脂質體法製備環磷醯胺脂質體，先製備前體脂質體，由製備的前體脂質體在使用前形成脂質體，或前體脂質體製備成膠囊劑、片劑、顆粒劑等，在消化道中遇水直接自發形成脂質體。
全文摘要
本發明是環磷醯胺脂質體及其製備方法，它克服了環磷醯胺口服吸收差，生物利用度低的缺點，提高了製劑的穩定性。由環磷醯胺與磷脂、膽固醇等輔料製備而成的脂質體或前體脂質體，其中還可加入支持劑等輔料。膜材磷脂可以採用天然磷脂或合成磷脂，磷脂與藥物的重量比為0.1∶1～ 50∶1。製備方法可以採用乙醇注入法、薄膜分散法、反相蒸發法、擠出法、機械法，支持劑可以是山梨醇、甘露醇、蔗糖、氯化鈉、水溶性澱粉、右旋糖苷、葡萄糖、乳糖等。支持劑與磷脂的比例為0.01∶1～500∶1。CTX為潛伏化型氮芥類藥物，體外無抗瘤活性，進入體內被肝臟或腫瘤組織內存在的過量磷醯胺酶或磷酸酶水解，釋放出氮芥基而起抗腫瘤作用。
文檔編號A61P35/00GK1775218SQ20041009082
公開日2006年5月24日 申請日期2004年11月15日 優先權日2004年11月15日
發明者胡才忠 申請人:胡才忠