作為β－分泌酶抑制劑用於治療阿爾茨海默氏病的次磷酸衍生物的製作方法

2023-04-26 17:12:41 1

專利名稱：作為β－分泌酶抑制劑用於治療阿爾茨海默氏病的次磷酸衍生物的製作方法
技術領域：
本發明涉及次磷酸衍生物、其製備方法、含有所述次磷酸衍生物的組合物以及它們在預防和治療疾病中的應用。
更具體地講，本發明涉及式I化合物及其藥學上可接受的鹽 其中R1為芳基或雜芳基；R2為(C1-C5)-烷基或苯基；R3為氫、(C1-C5)-烷基、O-(C1-C5)-烷基或苯基；R4為(C1-C6)-烷基、(C3-C6)-環烷基、苯基、吡啶基或吲哚基。
芳基的示例包括未取代的苯基或被選自下列的取代基所取代的苯基OH、滷素、(C1-C5)-烷基、O-(C1-C5)-烷基、吡咯烷酮基和C(O)NR5R6，其中R5為氫或(C1-C5)-烷基，且R6為未取代的(C1-C5)-烷基或被苯基取代的(C1-C5)-烷基。
雜芳基的示例包括吲哚基、喹啉基、異喹啉基和吡啶基。雜芳基可以是未取代的或被(C1-C5)-烷基所取代。
在此所用術語「烷基」代表含有1-6個碳原子的飽和的直鏈或支鏈烷基基團，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、2-丁基、叔丁基等。烷基可以是未取代的或者被選自下列的基團所取代苯基、COOH、COOCH3和S-(C1-C5)-烷基。
術語「環烷基」代表含有3-7個碳原子的飽和的碳環基團。示例包括環丙基、環丁基、環戊基和環己基。
滷素的實例包括氟、氯、碘和溴。
藥學上可接受的鹽可以，例如，採用鹼金屬鹽或銨鹽，它們可以通過，例如，用無機或有機鹼(如碳酸氫鈉或碳酸氫鉀)、氫氧化鈉或鉀的水溶液或者與氨或胺的水溶液(如三甲基胺或三乙基胺)滴定所述化合物來進行製備。
在本發明的一個實施方案中，提供了其中R1為下式(a)的式I化合物 其中R7為氫、(C1-C5)-烷基或O-(C1-C4)-烷基；R8為OH、吡咯烷酮基或-C(O)NR5R6，其中R5為氫或C1-C5)-烷基，且R6為(C1-C5)-烷基或被苯基所取代的(C1-C5)-烷基；且R9為氫或(C1-C5)-烷基。
在本發明的另一個實施方案中，提供了其中R1為式(a)基團的式I化合物，上述式(a)中R7為氫或(C1-C5)-烷基；R8為-C(O)NR5R6，其中R5為氫或(C1-C5)-烷基，且R6為(C1-C5)-烷基或-CH2苯基；且R9為氫。
在本發明的另一個實施方案中，提供了其中R1為式(a)基團的式I化合物，上述式(a)中R7為氫或(C1-C5)-烷基；R8為-C(O)NR5R6，其中R5和R6為(C1-C5)-烷基；且R9為氫。
在本發明的另一個實施方案中，提供了其中R1為式(a)基團的式I化合物，上述式(a)中R7為氫或O-(C1-C4)-烷基；R8為OH或吡咯烷酮基；且R9為氫或(C1-C5)-烷基。
在本發明的一個實施方案中，提供了其中R1為雜芳基的式I化合物。在本發明的另一個實施方案中，提供了其中R1為被(C1-C5)-烷基所取代的吲哚基或喹啉基的式I化合物。在本發明的另一個實施方案中，提供了其中R1為1-丁基-吲哚-6-基或喹啉-2-基的式I化合物。
在本發明的一個實施方案中，提供了其中R2為苯基的式I化合物，該苯基可以是未取代的或被氟所取代。在本發明的另一個實施方案中，提供了其中R2為(C1-C5)-烷基的式I化合物，該烷基可以是未取代的或被S-(C1-C5)-烷基所取代。
在本發明的一個實施方案中，提供了其中R3為氫、(C1-C5)-烷基或苯基的式I化合物。在本發明的另一個實施方案中，提供了其中R3為氫、(C1-C5)-烷基(可以是未取代的或被苯基、COOH或COOCH3取代)或苯基的式I化合物。在本發明的另一個實施方案中，提供了其中R3為氫、甲基、乙基、異丙基、苯基、苄基、CH2COOH或CH2COOCH3的式I化合物。在本發明的另一個實施方案中，提供了其中R3為甲基的式I化合物。
在本發明的一個實施方案中，提供了其中R4為未取代的(C1-C6)-烷基、被選自下列取代基取代的(C1-C6)-烷基的式I化合物，上述取代基選自滷素、N[(C1-C6)-烷基]2、(C3-C6)-環烷基、未取代的苯基、被一個或多個(C1-C5)-烷基取代的苯基和被一個或多個(C1-C5)-烷基取代的異唑基。在本發明的另一個實施方案中，提供了其中R4為未取代的(C1-C6)-烷基的式I化合物。在本發明的另一個實施方案中，提供了其中R4為異丙基、異丁基、異戊基或異己基的式I化合物。在本發明的另一個實施方案中，提供了其中R4為被一個或多個選自下列的取代基取代的(C1-C6)-烷基的式I化合物，所述取代基包括滷素、N[(C1-C6)-烷基]2、(C3-C6)-環烷基、未取代的苯基、被一個或多個(C1-C5)-烷基取代的苯基和被一個或多個(C1-C5)-烷基取代的異唑基。在本發明的另一個實施方案中，提供了式I化合物，其中R4為被苯基取代的甲基或被甲基取代的異唑基取代的甲基、被環己基、苯基或二甲基氨基取代的乙基、被苯基取代的丙基或被氟取代的丁基。
在本發明的一個實施方案中，提供了其中R4為環己基的式I化合物。
在本發明的一個實施方案中，提供了式I化合物，其中R4為未取代的苯基或被下列取代基所取代的的苯基，上述取代基包括OH、N[(C1-C6)-烷基]2、未取代的(C1-C6)-烷基、被滷素取代的(C1-C6)-烷基、O-(C1-C4)-烷基或COO(C1-C5)-烷基。
在本發明的另一個實施方案中，提供了其中R4為苯基的式I化合物。在本發明的另一個實施方案中，提供了式I化合物，其中R4為被下列取代基所取代的苯基，上述取代基包括OH、二甲基氨基、甲基、異丁基、三氟甲基、甲氧基、乙氧基或COO甲基。
在本發明的一個實施方案中，提供了式I化合物，其中R4為未取代的吡啶基或被甲基取代的吡啶基。
在本發明的一個實施方案中，提供了式I化合物，其中R1為式(a)基團，其中R7為氫、(C1-C5)-烷基或O-(C1-C4)-烷基；R8為OH、吡咯烷酮基或-C(O)NR5R6，其中R5為氫或(C1-C5)-烷基，R6為(C1-C5)-烷基或被苯基取代的(C1-C5)-烷基，且R9為氫或(C1-C5)-烷基；R2為未取代的或被氟取代的苯基或者為未取代的或被S-(C1-C5)-烷基取代的(C1-C5)-烷基；R3為氫、(C1-C5)-烷基或苯基；且R4為未取代的(C1-C6)-烷基、取代的(C1-C6)-烷基(被一個或多個下列取代基所取代滷素、N[(C1-C6)-烷基]2、(C3-C6)-環烷基、未取代的苯基、被一個或多個(C1-C5)-烷基取代的苯基和被一個或多個(C1-C5)-烷基取代的異唑基)、環己基、未取代的苯基或取代的苯基(被下列基團所取代OH、N[(C1-C6)-烷基]2、未取代的(C1-C6)-烷基、被滷素取代的(C1-C6)-烷基、O-(C1-C4)-烷基或COO(C1-C5)-烷基)、未取代的吡啶基或被甲基取代的吡啶基。
在本發明的一個實施方案中，提供了式I化合物，其中R1為式(a)基團，其中R7和R9為氫；且R8為-C(O)NR5R6，其中R5為氫或(C1-C5)-烷基，R6為(C1-C5)-烷基或被苯基取代的(C1-C5)-烷基；R2為苯基；R3為氫、(C1-C5)-烷基或苯基；且R4為未取代的(C1-C6)-烷基、取代的(C1-C6)-烷基(被一個或多個下列取代基所取代滷素、N[(C1-C6)-烷基]2、(C3-C6)-環烷基、未取代的苯基、被一個或多個(C1-C5)-烷基取代的苯基和被一個或多個(C1-C5)-烷基取代的異唑基)、環己基、未取代的苯基或取代的苯基(被下列基團所取代OH、N[(C1-C6)-烷基]2、未取代的(C1-C6)-烷基、被滷素取代的(C1-C6)-烷基、O-(C1-C4)-烷基或COO(C1-C5)-烷基)、未取代的吡啶基或被甲基取代的吡啶基。
在本發明的一個實施方案中，提供了式I化合物，其中R1為被(C1-C5)-烷基取代的吲哚基或喹啉基；R2為苯基；R3為(C1-C5)-烷基；且R4為苯基。
在本發明的一個實施方案中，提供了選自下列的式I化合物{(R)-1-[3-(甲基-丙基-氨基甲醯基)-苯甲醯基氨基]-2-苯基-乙基}-(2-苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸，{(R)-1-[3-(甲基-戊基-氨基甲醯基)-苯甲醯基氨基]-2-苯基-乙基}-(2-苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二戊基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-5-甲基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸，{(R)-1-[3-(2-氧代-吡咯烷-1-基)-5-丙氧基-苯甲醯基氨基]-2-苯基-乙基}-(2-苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸，{(R)-1-[(1-丁基-1H-吲哚-6-羰基)-氨基]-2-苯基-乙基}-(2-苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸，[1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-對-甲苯基氨基甲醯基-丁基)-次磷酸，[1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(3-甲基-2-對-甲苯基氨基甲醯基-丁基)-次磷酸，[1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯基-2-對-甲苯基氨基甲醯基-乙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸，-((S)-2-苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-對-甲苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-((S)-2-對-甲苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-((R)-2-對-甲苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-異丁基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(3-甲基-丁基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸，[2-(3，3-二甲基-丁基氨基甲醯基)-丙基]-[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(4，4，4-三氟-丁基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(3，3，4，4-四氟-丁基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(2，2，3，3，4，4，4-七氟-丁基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸，(2-環己基氨基甲醯基-丙基)-[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸，[2-(2-環己基-乙基氨基甲醯基)-丙基]-[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(4-羥基-苯基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(4-甲氧基-苯基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(吡啶-2-基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(5-甲基-吡啶-2-基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸和(2-苄基氨基甲醯基-丙基)-[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸。
本發明的另一個目的為所有形式的式I化合物的光學純對映異構體或非對映異構體的混合物。
本發明的另一個實施方案提供了式I化合物的製備方法，該方法包括將式II化合物 其中R2為(C1-C5)-烷基或苯基；R3為氫、(C1-C5)-烷基、O-(C1-C5)-烷基或苯基；且R4為(C1-C6)-烷基、(C3-C6)-環烷基、苯基、吡啶基或吲哚基；與式III化合物反應R1-COR10(III)其中R1為芳基或雜芳基；且R10為滷素或OH；如果需要，將所得化合物轉化為藥學上可接受的鹽。
反應可以在活化劑和添加劑存在下進行。活化劑的實例包括二環己基碳二亞胺和N-(3-二甲基氨基丙基)-N』-乙基碳二亞胺鹽酸鹽。添加劑的實例包括1-羥基-苯並三唑。也可以有鹼存在，例如，三烷基胺如三乙基胺。反應也可以在溶劑存在下進行，例如醚，如四氫呋喃。溫度可以在20℃-60℃的範圍內，或者在20℃-40℃範圍內。
式IH化合物可以購自商業，或者根據普通技術人員所已知的方法製備，例如，根據公開於Taylor和Spooner，J.of Agricultural and FoodChemistry，381422-1427(1990)的方法製備N-甲基-N-丙基-間苯二甲氨酸、N，N-二丙基-間苯二甲氨酸、5-甲基-N，N-二丙基-間苯二甲氨酸、N-戊基-N-丙基-間苯二甲氨酸和N，N-二戊基-間苯二甲氨酸，根據公開於WO03/045,913的方法製備3-(2-氧代-吡咯烷-1-基)-5-丙氧基-苯甲酸，根據公開於WO 03/040,096的方法製備1-丁基-吲哚-6-甲酸。
式II化合物是新化合物，也是本發明的實施方案。它們可以根據下列方法製備在溶劑如CH2Cl2中，於20℃-100℃的溫度下，或於20℃，將式IV化合物 其中R11為保護基團如Boc，R2、R3和R4如上所定義，與強無機酸如HI、HCl或HBr的水溶液反應，或者與如三氟乙酸反應，製備式II化合物。
式IV化合物是新化合物，也是本發明的實施方案。它們可以根據下列方法製備將式V化合物 其中R11和R2如上所定義，與式VI化合物反應製備 其中R3和R4如上所定義。
可以在六甲基二矽胺烷存在下、於20℃-150℃的溫度範圍內，或者於如110℃，使次磷酸即式V化合物與式VI的丙烯醯胺(Liu等，J.Organomet.Chem.646212(2002))進行Michael加成反應。
式VI化合物為已知的或者根據本領域已知的方法製備，例如，通過用甲醛和HN(Et)2(Liu等同上)處理式VII的丙二酸 ，然後將丙烯酸轉化為丙烯醯胺製備。
式V化合物可以通過下列方法製備在溶劑CH2Cl2或MeOH中、於0℃-50℃的溫度範圍內(如22℃)，將式VIII化合物 與式R11-O-R11化合物(其中R11為保護基團如Boc)，例如與(Boc)2O(Sampson和Bartlett，Biochemistry 302255(1991))和鹼例如烷基氨(如NEt3)反應，製備式V化合物。在溶劑混合物例如酮和醇(如甲基乙基酮和甲醇)中，用手性胺(Sampson和Bartlett，Biochemistry 302255(1991))如α-(+)-甲基-苄基胺拆分式V化合物可以得到相應的鹽，它也可以自如上所述相同的溶劑混合物中重結晶。脫鹽得到式V化合物的光學對映異構體純(＞95％)的(R)-對映異構體。新的式V化合物，例如下面的V-2和V-5化合物，也是本發明的具體實施方案。
式VIII化合物可以如下製備於50℃-100℃的溫度範圍內(如，於100℃或105℃)，將式IX化合物 其中R12為二苯基甲基，與強無機酸例如HI、HC或HBr(如HBr水溶液)反應，製備式VIII化合物。新的式VIII化合物，例如下面的VIII-2和VIII-4化合物，也是本發明的實施方案。
式IX化合物可以如下製備在溶劑例如水或二氧六環(如水)中，於50℃-100℃(如100℃)的溫度範圍內，將式X化合物 與保護的胺(如二苯基甲基胺鹽酸鹽)和次磷酸(如50％次磷酸水溶液)(Baylis等，J.Chem.Soc.，Perkin Trans.12845(1984))反應，製備式IX化合物。新的式IX化合物，如下面的IX-2和IX-4化合物，也是本發明的在本發明的另一個實施方案中，提供了式I化合物的製備方法，它包括將式XI化合物 其中R1為芳基或雜芳基；R2為(C1-C5)-烷基或苯基；R3為氫、(C1-C5)-烷基、O-(C1-C5)-烷氧基或苯基；與式XII化合物反應H2N-R4(XII)其中R4為(C1-C6)-烷基、(C3-C6)-環烷基、苯基、吡啶基或吲哚基，並且，如果需要，將所得化合物轉化為藥學上可接受的鹽。
本反應可以在活化劑和添加劑存在下進行。活化劑的實例包括二環己基碳二亞胺和N-(3-二甲基氨基丙基)-N』-乙基-碳二亞胺鹽酸鹽。添加劑的實例包括1-羥基-苯並三唑。也可以有鹼存在，例如，三烷基胺如三乙基胺。反應也可以在溶劑存在下進行，例如醚，如四氫呋喃。溫度可以在20℃-60℃的範圍內，或者在20℃-40℃範圍內。
式XII化合物可以購自商業，或者根據普通技術人員所已知的方法製備，例如，根據Dijols等，Biochemistry 419286-9292(2002)的方法製備H2N(CH2)3CF3，根據Jacobs等，J.Med.Chem.371282(1994)，通過苯鄰二甲醯亞胺方法自相應的溴化物製備H2N(CH2)2CF2CHF2，根據Bailey等，Can.J.of Chem.493143-51(1971)的方法製備苯乙基胺衍生物，根據WO03/072,535的方法製備異唑衍生物。
式XI化合物為新化合物，也是本發明的實施方案。它們可以通過水解式XIII化合物製備 其中R13為(C1-C4)-烷基，上述反應可以在鹼如KOH、NaOH或LiOH存在下、在溶劑如甲醇或水或兩者的混合物中、於溫度0℃-60℃的範圍如20℃時進行。
式XIII化合物為新化合物，也是本發明的實施方案。它們可以通過如下方法製備在活化劑如二環己基碳二亞胺或N-(3-二甲基氨基丙基)-N』-乙基-碳二亞胺鹽酸鹽和添加劑如1-羥基-苯並三唑以及鹼如三烷基胺如N(Et)3存在下，在溶劑如醚(如四氫呋喃)中，於20℃-60℃的範圍內(如自20℃-40℃)，將式XIV化合物 與式III化合物反應，製備式XIII化合物。
式XIV化合物是新化合物，也是本發明的實施方案。它們可以通過如下方法製備在溶劑如CH2Cl2中，於20℃-100℃的溫度範圍內(如20℃)，將式XV化合物 其中R11保護基團如Boc，與強無機酸如HI、HCl或HBr水溶液，或者與如三氟乙酸反應，製備式XIV化合物。
式XV化合物為新化合物，也是本發明實施方案。它們可以通過如下方法製備在例如六甲基二矽胺烷存在下，於20℃-150℃的溫度範圍內，如110℃時，將式V化合物與式XVI化合物反應(Michael加成，Liu等，同上) 實施例概要在系統名稱中給出立體標記R和S(根據CIP-規則)。如果沒有給出立體標記，那麼表明得到的是異構體的混合物。使用下列簡稱Boc叔丁氧基羰基；TFA三氟乙酸。
實施例SI起始式V化合物的製備(a)式IX化合物的製備向36.3g的二苯基甲基胺鹽酸鹽的80ml水的懸浮液中加入180ml的50％H3PO2水溶液。將混合物加熱至回流溫度，並用200mmol的適當的式X化合物的30ml二氧六環溶液處理10分鐘以上，繼續攪拌10分鐘。將懸浮液冷卻至65℃，過濾，用水洗滌固體一次。溼的固體於0℃用180ml丙酮攪拌10分鐘，過濾懸浮液，用冷的丙酮洗滌固體一次，乾燥得到目標式IX化合物，收率50-70％。
編號式IX化合物MSIX-1[1-(二苯甲基-氨基)-3-甲基-丁基]-次磷酸316.3(M-H)-IX-2[1-(二苯甲基-氨基)-3-甲基硫烷基-丁基]-次磷酸 348.3(M-H)-IX-3[1-(二苯甲基-氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸350.3(M-H)-IX-41) [1-(二苯甲基-氨基)-2-(3，5-二氟-苯基)-乙基]-次磷酸386.2(M-H)-1)起始醛如下法製備將5.3g的3，5-二氟苯基乙酸的40ml甲醇和3ml的BF3·Et2O溶液於50℃溫熱1小時。將上述溶液蒸發，殘留物在Et2O和NaHCO3水溶液之間分配，水洗滌有機層，乾燥並蒸發。將剩餘的甲基酯(5.6g)溶於240ml無水甲苯中，冷卻至-78℃，並用45ml的1M二異丁基氫化鋁的CH2Cl2處理，於-78℃繼續攪拌1小時。用30ml的MeOH和100ml的50％酒石酸鈉-鉀水溶液使反應混合物淬滅，並用Et2O萃取。鹽水洗滌有機層，乾燥並蒸發得到4.5g的(3，5-二氟-苯基)-乙醛。
(b)式VIII化合物的製備將77.4mmol的適當的式IX化合物和210ml的48％HBr水溶液的懸浮液於105℃加熱1小時。用Et2O洗滌上述混合物數次，將水溶液蒸發至幹。將所得固體溶於465ml的乙醇中。用29ml的氧化丙烯處理上述溶液，將所得懸浮液於20℃攪拌過夜。過濾懸浮液，用冷的乙醇洗滌固體，乾燥得到目標式VIII化合物，收率70-95％。
編號 式VIII化合物 MSVIII-1(1-氨基-3-甲基-丁基)-次磷酸150.1(M-H)-VIII-2(1-氨基-3-甲基硫烷基-丁基)-次磷酸 184.1(M+H)+
VIII-3(1-氨基-2-苯基-乙基)-次磷酸185.9(M+H)+VIII-4[1-氨基-2-(3，5-二氟-苯基)-乙基]-次磷酸220.1(M-H)-(c)式V化合物的製備於20℃，向2.0mmol適當的式VIII化合物的10ml甲醇溶液中加入2.2mmol的(Boc)2O的2ml甲醇溶液，持續攪拌4小時。將混合物蒸發，殘留物在AcOEt和KHSO4(10％)水溶液之間分配。鹽水洗滌有機層，乾燥並蒸發得到粗品目標式V化合物，收率80-90％。通過2mmol的式V化合物和2.2mmol的α-(+)-甲基苄基胺的40ml甲基乙基酮溶液結晶，然後再重結晶，將外消旋物拆分。所得鹽在鹽酸水溶液和AcOEt之間分配得到式V化合物的(R)-對映異構體，收率為30-40％，光學純度為95％。
編號 式V化合物 MS/α[D]*V-1(1-叔-丁氧基羰基氨基-3-甲基-丁基)-次磷酸250.1(M-H)-V-2(1-叔-丁氧基羰基氨基-3-甲基硫烷基-丁基)-次磷酸 282.1(M-H)-V-3(1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-次磷酸284.4(M-H)-V-4((R)-1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-次磷酸284.1(M-H)-α[D]-29.4°V-5[1-叔-丁氧基羰基氨基-2-(3，5-二氟-苯基)-乙基]-次磷酸320.4(M-H)-*.α[D](1％，EtOH)實施例S2式VI化合物的製備將28mmol適當的式VII化合物和2.9ml二乙基胺的混合物用11ml福馬林處理，於回流溫度下加熱1-3小時。將溶液冷卻至20℃，用CH2Cl2稀釋，用NaHCO3洗滌。水層用稀鹽酸酸化至pH＝1，用CH2Cl2萃取。將合併的有機層乾燥並蒸發得到相應的粗品丙烯酸，收率為70-80％。向4.3mmol丙烯酸的7ml四氫呋喃溶液中依次加入560mg的對-甲苯胺、1.8ml的NEt3、950mg的1-羥基苯並三唑和1.28g的N-(3-二甲基氨基丙基)-N』-乙基-碳二亞胺鹽酸鹽，將上述懸浮液於20℃攪拌1-3小時。混合物在飽和的NH4Cl水溶液和AcOEt之間分配，用0.5N的NaOH水溶液洗滌有機層，乾燥並蒸發。粗品產物經矽膠色譜層析，採用正庚烷/AcOEt洗脫，得到目標式VI化合物，收率為50-70％。
編號 式VI化合物MSVI-1 N-苯基甲丙烯醯胺VI-2 2-亞甲基-N-對-甲苯基-丁醯胺 190.3(M+H)+VI-3 3-甲基-2-亞甲基-N-對-甲苯基-丁醯胺204.1(M+H)+VI-4 2-苄基-N-對-甲苯基-丙烯醯胺 252.1(M+H)+VI-5 3-苯基氨基甲醯基-丁-3-烯酸甲酯219.7(M)+VI-6 N-(3-乙氧基-苯基)-丙烯醯胺VI-7 N-(3-三氟甲基-苯基)-丙烯醯胺VI-8 N-(5-甲基-吡啶-2-基)-丙烯醯胺VI-9 N-(4-叔-丁基-苯基)-丙烯醯胺VI-10 N-(4-二甲基氨基-苯基)-丙烯醯胺VI-11 N-(4-羥基-苯基)-丙烯醯胺VI-12 4-丙烯醯基氨基-苯甲酸甲酯VI-13 N-(3，4-二甲氧基-苯基)-丙烯醯胺VI-14 N-(3，5-二甲氧基-苯基)-丙烯醯胺VI-15 N-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙烯醯胺VI-16 N-(α-苯基乙基)-丙烯醯胺VI-17 N-(2-二甲基氨基-乙基)-丙烯醯胺實施例S3N，N-二丙基-間苯二甲氨酸氯化物的製備將1.30g的N，N-二丙基-間苯二甲氨酸和1.9ml的SOCl2的5ml苯的溶液加熱至回流直到氣體釋放停止(30分鐘)。將溶液蒸發，殘留物與甲苯共蒸餾得到1.41g的N，N-二丙基-間苯二甲氨酸氯化物。
實施例S4式XI化合物的製備，即3-{[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-羥基-膦醯基}-2-甲基-丙酸的製備(a)3-[((R)-1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-羥基-膦醯基]-2-甲基-丙酸甲酯的製備將5.00g的((R)-1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-次磷酸和18.3ml的HN(TMS)2的混合物加熱至110℃1小時。向溶液中加入2.5ml甲基丙烯酸甲酯，於110℃繼續加熱2小時。將上述溶液冷卻至70℃，用10ml的EtOH緩慢稀釋，並蒸發。殘留物經矽膠色譜純化，採用CH2Cl2/MeOH(9∶1)→CH2Cl2/MeOH/AcOH(10∶1∶0.3)梯度洗脫，得到4.10的目標化合物。MS386.5(M+H)+。
(b)3-[((R)-1-氨基-2-苯基-乙基)-羥基-膦醯基]-2-甲基-丙酸甲酯，三氟乙酸鹽的製備將1.75g的3-[((R)-1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-羥基-膦醯基]-2-甲基-丙酸甲酯和3.40ml的CF3COOH的20ml的CH2Cl2溶液於20℃攪拌16小時，蒸發得到2.23g的粗品目標化合物。
(c)3-{[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-羥基-膦醯基}-2-甲基-丙酸甲酯的製備於0℃，向2.23g粗品胺TFA鹽(式XIV化合物)的15ml的二氧六環溶液中，依次加入1.9ml的NEt3和1.47g的N，N-二丙基-間苯二甲氨酸氯化物的2ml二氧六環溶液，並於20℃繼續攪拌3小時。將混合物在AcOEt和鹽水之間分配，用鹽酸將pH調節至2。鹽水洗滌有機層，乾燥並蒸發。殘留物經矽膠色譜純化，採用CH2Cl2→CH2Cl2/MeOH/AcOH(10∶1∶0.5)梯度洗脫，得到2.15目標化合物。MS515.3(M-H)-。
(d)3-{[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-羥基-膦醯基}-2-甲基-丙酸的製備將2.11g的3-{[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-羥基-膦醯基}-2-甲基-丙酸甲酯的8ml甲醇溶液用865mg的LiOH·H2O的2ml水溶液處理，所得渾濁溶液於20℃攪拌1.5小時。將混合物蒸發，殘留物在HCl水溶液(pH＝2)和AcOEt之間分配。鹽水洗滌有機層，乾燥並蒸發，得到1.54g目標化合物。MS501.4(M-H)-。
實施例1自式II和式III化合物起始製備式I化合物(a)將0.4mmol的適當的式V化合物和0.6ml的HN(TMS)2混合物於110℃加熱1小時。向上述溶液中加入0.6mmol的適當的式VI化合物，並繼續於110℃加熱1-4小時。將上述溶液冷卻至20℃，用1ml的EtOH稀釋並蒸發。殘留物經矽膠色譜純化，採用CH2Cl2/MeOH(9∶1)→CH2Cl2/MeOH/AcOH(10∶1∶0.5)梯度洗脫，得到目標式IV化合物，收率為30-70％。
編號式 IV化合物 MSIV-1(1-叔-丁氧基羰基氨基-3-甲基-丁基)-(2-苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷411.5(M-H)-酸IV-2(1-叔-丁氧基羰基氨基-3-甲基硫烷基-丁基)-(2-苯基氨基甲醯基-丙 443.4(M-H)-基)-次磷酸IV-3(1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-(2-對-甲苯基氨基甲醯基-丙基)- 459.1(M-H)-次磷酸IV-4((R)-1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-(2-對-甲苯基氨基甲醯基-丙 459.1(M-H)-基)-次磷酸IV-5(1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-(2-對-甲苯基氨基甲醯基-丁基)- 475.3次磷酸(M+H)+IV-6(1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-(3-甲基-2-對-甲苯基氨基甲醯基 489.1-丁基)-次磷酸 (M+H)+IV-71)(1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-(2-苯基-2-對-甲苯基氨基甲醯基 522.3(M)+-乙基)-次磷酸IV-8(1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-(3-苯基-2-對-甲苯基氨基甲醯基 537.4-丙基)-次磷酸 (M+H)+IV-93-[(1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-羥基-膦醯基甲基]-N-苯基-琥 505.3珀酸甲酯 (M+H)+IV-10 [1-叔-丁氧基羰基氨基-2-(3，5-二氟-苯基)-乙基]-(2-苯基氨基甲醯基- 481.8(M-H)-丙基)-次磷酸1)通過相反順序的反應製備化合物IV-7，即將相應的式V化合物與2-苯基丙烯酸反應得到3-[(1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-羥基-膦醯基]-2-苯基-丙酸(MS432.4(M-H)-)，再與p-甲苯胺反應得到(1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-(2-苯基-2-對-甲苯基氨基甲醯基-乙基)-次磷酸。
(b)將0.20mmol的適當的式IV化合物和0.23ml的CF3COOH的2.0ml CH2Cl2溶液於20℃攪拌1.5小時，並蒸發。所得粗品式II化合物(TFA鹽)溶於1ml四氫呋喃，隨後依次用0.22mmol適當的式III化合物、0.70mmol的NEt3、0.24mmol的1-羥基苯並三唑和0.26mmol的N-(3-二甲基-氨基丙基)-N』-乙基-碳二亞胺鹽酸鹽處理，將上述懸浮液於20℃攪拌1.5小時。將混合物在飽和的NH4Cl水溶液和AcOEt之間分配，鹽水洗滌有機層，乾燥並蒸發。粗品產物經HPLC(RP-18柱)純化，採用CH3CN∶H2O(20∶80)→CH3CN∶H2O(95∶5)梯度洗脫，得到目標式I化合物，收率為30-40％。
根據上述實施例製備下列化合物編號 式I化合物 MSI-1{(R)-1-[3-(甲基-丙基-氨基甲醯基)-苯甲醯基氨基]-2-苯基-乙基}-(2- 550.3(M+H)+苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸I-2{(R)-1-[3-(甲基-戊基-氨基甲醯基)-苯甲醯基氨基]-2-苯基-乙基}-(2- 578.3(M+H)+苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸I-3[(R)-1-(3-二戊基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯基 634.3(M+H)+氨基甲醯基-丙基)-次磷酸I-4[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-5-甲基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙 592.0(M+H)+基]-(2-苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸I-5{(R)-1-[3-(2-氧代-吡咯烷-1-基)-5-丙氧基-苯甲醯基氨基]-2-苯基-乙 592.0(M+H)+基}-(2-苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸I-6{(R)-1-[(1-丁基-1H-吲哚-6-羰基)-氨基]-2-苯基-乙基}-(2-苯基氨基546.2(M+H)+甲醯基-丙基)-次磷酸I-7(2-苯基氨基甲醯基-丙基)-{(R)-2-苯基-1-[(喹啉-2-羰基)-氨基]-乙 502.0(M+H)+基}-次磷酸I-8[(R)-1-(3-羥基-2-甲基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯基氨基甲481.0(M+H)+醯基-丙基)-次磷酸I-9[1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-3-甲基-丁基]-(2-苯基氨基 542.5(M-H)-甲醯基-丙基)-次磷酸I-10 [1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-3-甲基硫烷基-丁基]-(2-苯 574.8(M-H)-基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸I-11 [2-(3，5-二氟-苯基)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-乙612.5(M-H)-基]-(2-苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸I-12 [1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-對-甲苯 578.4(M+H)+基氨基甲醯基-乙基)-次磷酸I-13 [1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-對-甲苯 606.1(M+H)+基氨基甲醯基-丁基)-次磷酸I-14 [1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(3-甲基-2-對620.2(M+H)+-甲苯基氨基甲醯基-丁基)-次磷酸I-15 [1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯基-2-對652.5(M-H)--甲苯基氨基甲醯基-乙基)-次磷酸I-16 [1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(3-苯基-2-對668.2(M+H)+-甲苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸I-17 3-{[1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-羥基-膦 636.1(M+H)+
醯基甲基}-N-苯基-琥珀酸甲酯實施例2自式XI和式XII化合物起始製備式I化合物將粗品3-{[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-羥基-膦醯基}-2-甲基-丙酸(0.10mmol)溶於0.7ml的四氫呋喃中，隨後依次用0.16mmol的適當的式XII化合物、0.40mmol的NEt3、0.16mmol的1-羥基苯並三唑和0.26mmol的N-(3-二甲基氨基丙基)-N』-乙基-碳二亞胺鹽酸鹽處理，將懸浮液於45℃攪拌3小時。上述混合物在飽和的NH4Cl水溶液和AcOEt之間分配，有機層用鹽水洗滌，乾燥並蒸發。粗品產物經HPLC(RP-18柱)純化，採用CH3CN∶H2O(20∶80)→CH3CN∶H2O(95∶5)梯度洗脫，得到目標式I化合物，收率為10-60％，為異構體混合物。通過薄層色譜，採用CH2Cl2/MeOH/AcOH 9∶1∶0.25展開，進行異構體混合物的分離。較低位置的薄層點代表1(R)，2(S)-立體異構體。
根據上述實施例的方法製備下列化合物編號式I化合物MSI-18[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯基576.6(M-H)-氨基甲醯基-丙基)-次磷酸I-19[(R)-I-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-((S)-2-576.6(M-H)-苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸I-20[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-對- 592.2(M-H)-甲苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸I-21[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-((S)-2-590.8(M-H)-對-甲苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸I-22[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-((R)-2-590.5(M-H)-對-甲苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸I-23[1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(3-乙氧 608.2(M+H)+基-苯基氨基甲醯基)-乙基]-次磷酸I-24[1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(3-三氟 632.3(M+H)+甲基-苯基氨基甲醯基)-乙基]-次磷酸I-25[1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(5-甲基-579.2(M+H)+吡啶-2-基氨基甲醯基)-乙基]-次磷酸I-26[2-(4-叔-丁基-苯基氨基甲醯基)-乙基]-[1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯618.6(M-H)-甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸
I-27[2-(4-二甲基氨基-苯基氨基甲醯基)-乙基]-[1-(3-二丙基氨基甲醯基607.2(M+H)+-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸I-28[1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(4-羥基-580.2(M+H)+苯基氨基甲醯基)-乙基]-次磷酸I-294-(3-{[1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-羥基-622.3(M+H)+膦醯基}-丙醯基氨基)-苯甲酸甲酯I-30[2-(3，4-二甲氧基-苯基氨基甲醯基)-乙基]-[1-(3-二丙基氨基甲醯基 624.2(M+H)+-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸I-31[2-(3，5-二甲氧基-苯基氨基甲醯基)-乙基]-[1-(3-二丙基氨基甲醯基 622.8(M-H)--苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸I-32[1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(3，4，5-三 654.2(M+H)+甲氧基-苯基氨基甲醯基)-乙基]-次磷酸I-33[1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(1(S)-苯590.4(M-H)-基-乙基氨基甲醯基)-乙基]-次磷酸I-34[2-(2-二甲基氨基-乙基氨基甲醯基)-乙基]-[1-(3-二丙基氨基甲醯基559.2(M+H)+-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸I-35[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-異丙542.5(M-H)-基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸I-36[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-異丁556.5(M-H)-基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸I-37[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(3-甲 570.5(M-H)-基-丁基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸I-38[2-(3，3-二甲基-丁基氨基甲醯基)-丙基]-[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯 584.5(M-H)-基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸I-39[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙 610.4(M-H)-基]-[2-(4，4，4-三氟-丁基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸I-40[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙 628.5(M-H)-基]-[2-(3，3，4，4-四氟-丁基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸I-41[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙 682.2(M-H)-基]-[2-(2，2，3，3，4，4，4-七氟-丁基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸I-42(2-環己基氨基甲醯基-丙基)-[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯 582.5(M-H)-基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸I-43[2-(2-環己基-乙基氨基甲醯基)-丙基]-[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基610.4(M-H)--苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸I-44[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(4-羥 592.5(M-H)-基-苯基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸
I-45[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(4-甲606.5(M-H)-氧基-苯基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸I-46[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(吡 577.6(M-H)-啶-2-基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸I-47[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(5-甲591.5(M-H)-基-吡啶-2-基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸I-48(2-苄基氨基甲醯基-丙基)-[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基 590.5(M-H)-氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸I-49{2-[(3，5-二甲基-異唑-4-基甲基)-氨基甲醯基]-丙基}-[(R)-1-(3-609.5(M-H)-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸I-50[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯乙 604.7(M-H)-基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸I-51[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(1-甲618.6(M-H)-基-2-苯基-乙基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸I-52{2-[2-(2，4-二甲基-苯基)-1-甲基-乙基氨基甲醯基]-丙基}-[(R)-1-(3- 646.5(M-H)-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸給出例如，兩個化合物，即化合物I-18和I-37的NMR數據[1H-NMR(300MHz，內標為TMS，J值單位為Hz，CD3OD)]化合物I-187.77(m，1H)，7.67-7.47(m，5H)，7.40-7.07(m，8H)，4.80(m，1H)，3.60-2.95(m，7H)，2.55-2.27(m，1H)，2.05-1.80(m，1H)，1.80-1.45(m，4H)，1.42和1.39(均為d，每一個J＝6，比例3∶2，共3H)，1.04(m，3H)，0.70(m，3H)。
化合物I-377.74(m，1H)，7.60(s，1H)，7.50(m，2H)，7.30-7.10(m，5H)，4.72(m，1H)，3.50-2.75(m，9H)，2.35-2.10(m 1H)，1.90-1.30(m 8H)，1.26and 1.24(均為d，每一個J＝6，比例為3∶2，共3H)，1.00(m，3H)，0.91 and0.89(均為d，每一個J＝6，比例為2∶3共6H)，0.70(m，3H)。
實施例3自另一個式I化合物起始製備式I化合物將14mg的3-{[1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-羥基-膦醯基甲基}-N-苯基-琥珀酸甲酯(化合物I-17)的1ml甲醇和3mg的NaOH的溶液溫熱至45℃3小時。將溶液蒸發，殘留物在1N鹽酸水溶液和CH2Cl2之間分配，有機層用水洗滌，乾燥並蒸發得到11mg的3-{[1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-羥基-膦醯基甲基}-N-苯基-琥珀酸(化合物I-53)。
編號式I化合物 MSI-533-{[1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-羥620.3(M-H)-基-膦醯基甲基}-N-苯基-琥珀酸本發明化合物及其藥學上適當的鹽(以下稱藥用化合物)具有藥理學活性，因而可以用作藥品。更具體地講，藥用化合物具有β-分泌酶抑制活性。
A-β產生的抑制劑的細胞篩選方法、A-β產生的體內抑制實驗方法、用於測定分泌酶活性的膜或細胞提取物的分析方法都是本領域中已知的，且已經公開在許多出版物中，包括WO 98/22493、US 5,703,129、US 5,593,846和GB 2,395,124，所有這些文獻的全部內容都被引入本文作為參考。β-分泌酶在幾種出版物中已經被描述，包括EP 855,444、WO 00/17,369、WO00/58,479、WO 00/47,618、WO 01/00,663和WO 01/00,665。
例如，藥用化合物對β-分泌酶的抑制可以通過它們例如抑制螢光肽底物的裂解(例如，在如Grueninger-Leitch等所述的FRET分析中)，或者通過它們例如對β-分泌酶活性結合位點的肽β-分泌酶抑制劑的置換加以證明，如，根據下面的實驗方法加以證明。
競爭性放射配體結合分析(RLBA)用純化的BACE蛋白質(參見，如GB 2,385,124實施例1和2)將96孔微板(Optiplate Packard)包被，用pH 5.5的30mM檸檬酸鈉緩衝液將濃度調節至為1μg/ml。通過於4℃時、於100μl/孔下溫育1-3天進行包被。然後用pH為4.1的10mM檸檬酸鹽以300μl/孔洗滌微板兩次。向每一個孔中加入100μl結合緩衝液(30mM檸檬酸鹽，100mM NaCl，0.1％BSA，pH 4.1)。加入5μl實驗化合物的DMSO儲備溶液或適當稀釋的溶液。向其中以10μl/孔加入示蹤物(氚標記的化合物A，參見GB 2,385,124實施例4)在結合緩衝液中的10μCi/ml儲備溶液。在溼潤箱中、於室溫下溫育1.5-2小時後，用水以300μl/孔洗滌微板2次，用幹毛巾拍幹。然後以50μl/孔加入MicroScint20(Packard)，密封微板並振搖5秒鐘。在Topcount(Packard)上計數結合的放射活性。主要取決於BACE蛋白質的純度和濃度，總結合一般在2000-10000cpm/孔之間。通過與＞1μM肽抑制劑(Bachem#H-4848)競爭測定的非特異性結合一般在30-300cpm/孔之間。IC50值通過Microsoft Excel FIT進行計算。
優選的化合物的IC50＜1.0μM。下面表中給出了β-分泌酶抑制的某些示例性數據。
因此，藥用化合物可以用作β-分泌酶抑制劑，如，用於治療其中β-分泌酶活性起作用或參與的疾病。此類疾病包括特別是阿爾茨海默氏病和腦澱粉樣血管病。
β-分泌酶抑制劑可以進一步從活性上進行優化以抑制本領域眾所周知的細胞培養體系中A-β分泌。例如，A-β產生可以通過在細胞培養物上清液中的HEK293細胞的免疫分析進行測定，該細胞能夠通過轉染澱粉樣前體蛋白(APP)過度表達。A-β產生也可以在人類成神經細胞瘤細胞系上清液中測定，所述細胞系可以表達內源性APP。另外，β-分泌酶抑制劑可以在阿爾茨海默氏病轉基因鼠模型中進行效能優化，所述模型在受影響的小鼠的CNS中產生含有阿爾茨海默氏樣斑塊的A-β。最終，β-分泌酶抑制劑有希望降低患有阿爾茨海默氏病的患者腦中和腦脊液中的A-β濃度，也可以降低還沒有形成A-β斑塊的健康人群的A-β濃度。
生物化學和免疫學研究揭示在患有阿爾茨海默氏病的個體的腦皮質中出現的澱粉樣斑塊的主要蛋白類成分是大約39-43個胺基酸的約為4.2千道爾頓(kD)的蛋白質。該蛋白質被稱為A-β澱粉樣肽，有時為β/A4，在此是指A-β。A-β除了在澱粉樣斑塊上沉積外，在腦膜和實質小動脈壁、小動脈、毛細血管和有時在小靜脈上也發現有A-β。因為有強烈跡象表明A-β與AD是有因果關係的，所以希望通過抑制A-β在體內的形成來預防和減輕神經性變性，該目的可通過控制澱粉樣斑塊的形成、減輕神經中毒性和通常是調解與A-β產生有關的病理學來達到。
A-β似乎是一種源自1型膜內在蛋白(術語為β澱粉樣前體蛋白(APP))的內源性多肽。APP正常是由多種細胞產生的，這些細胞可以是體內也可以是培養的細胞，源自各種動物和人類。A-β源自酶(蛋白酶)系統對APP的裂解(產生A-β的N-末端)，所述酶系統統稱為分泌酶，包括β-分泌酶。
在另一個實施方案中，本發明提供了式I化合物及其藥學上可接受的鹽的用途，用於生產治療與β-分泌酶抑制有關的疾病的藥物。本發明的另一個實施方案提供了式I化合物及其藥學上可接受的鹽的用途，用於生產預防或治療阿爾茨海默氏病的藥物。
藥用化合物可用作藥物，例如，以藥物製劑的形式。藥物製劑可以口服給藥，例如以下列形式給藥片劑、包衣片劑、糖丸、硬和軟明膠膠囊、溶液劑、乳劑或混懸液。然而，給藥也可以通過直腸進行，例如，以栓劑形式，或者通過胃腸外進行，例如，以注射液的形式。
可以將藥用化合物與藥學上惰性、無機或有機載體一起加工處理來生產藥物製劑。乳糖、玉米澱粉或其衍生物、滑石粉、硬脂酸或其鹽等可以用作例如片劑、包衣片劑、糖丸和硬明膠膠囊的載體。軟明膠膠囊的適當的載體為例如植物油、石蠟、脂肪、半固體和液體多元醇等。根據活性物質的性質，在軟明膠膠囊中，通常可以不加入載體。用於生產溶液劑和糖漿劑的適當的載體為例如水、多元醇、植物油等。用於生產栓劑的適當的載體為例如天然或硬化油、石蠟、脂肪、半固體或液體多元醇等。
此外，藥物製劑也可以含有防腐劑、增溶劑、穩定劑、潤溼劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、香料、調整滲透壓的鹽、緩衝劑、掩蔽劑或抗氧劑。它們也可以含有其它有治療價值的物質。
含有藥用化合物和治療上惰性的載體的藥物也是本發明的目標，還包括它們的生產方法，上述方法包括將藥用化合物和(如果需要)一種或多種其它有治療價值的物質與一種或多種治療上惰性的載體一起製成給藥形式。
劑量可以在較寬的限度內變化，當然，對每一個具體患者而言，應根據個體需要進行調節。在口服給藥的情況下，藥用化合物的成人劑量範圍在每天約0.01mg到約1000mg。日劑量可以以單劑量給藥或分劑量給藥，另外，如果確有需要，也可以突破上限。
片劑配方(溼法制粒)
將1、2、3和4項混和並用純水制粒。於50℃乾燥顆粒。將顆粒經過適當的粉碎設備。加入第5項並混和三分鐘，在適當的壓片機上壓製成片劑。
膠囊配方
將1、2、和3項在適當的攪拌機中混和30分鐘。加入4和5項並混和3分鐘。填充到適當的膠囊中。
權利要求
1.式I化合物及其藥學上可接受的鹽 其中R1為芳基或雜芳基；R2為(C1-C5)-烷基或苯基；R3為氫、(C1-C5)-烷基、O-(C1-C5)-烷基或苯基；R4為(C1-C6)-烷基、(C3-C6)-環烷基、苯基、吡啶基或吲哚基。
2.權利要求1的式I化合物，其中R1為式(a)基團 其中R7為氫、(C1-C5)-烷基或O-(C1-C4)-烷基；R8為OH、吡咯烷酮基或-C(O)NR5R6，其中R5為氫或(C1-C5)-烷基，R6為(C1-C5)-烷基或苯基取代的(C1-C5)-烷基，且R9為氫或(C1-C5)-烷基；或者R1為(C1-C5)-烷基取代的吲哚基或喹啉基。
3.權利要求1的式I化合物，其中R2為未取代的苯基或被氟取代的苯基。
4.權利要求1的式I化合物，其中R3為氫、(C1-C5)-烷基或苯基。
5.權利要求1的式I化合物，其中R4為未取代的(C1-C6)-烷基；被一個或多個選自下列的取代基所取代的(C1-C6)-烷基滷素、N[(C1-C6)-烷基]2、(C3-C6)-環烷基、未取代的苯基、被一個或多個(C1-C5)-烷基取代的苯基、被一個或多個(C1-C5)-烷基取代的異唑基；環己基；或未取代的苯基或被OH、N[(C1-C6)-烷基]2、未取代的(C1-C6)-烷基、被滷素取代的(C1-C6)-烷基、O-(C1-C4)-烷基或COO(C1-C5)-烷基所取代的苯基；或未取代的吡啶基或被甲基取代的吡啶基。
6.權利要求1的式I化合物，選自{(R)-1-[3-(甲基-丙基-氨基甲醯基)-苯甲醯基氨基]-2-苯基-乙基}-(2-苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸，{(R)-1-[3-(甲基-戊基-氨基甲醯基)-苯甲醯基氨基]-2-苯基-乙基}-(2-苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二戊基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-5-甲基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸，{(R)-1-[3-(2-氧代-吡咯烷-1-基)-5-丙氧基-苯甲醯基氨基]-2-苯基-乙基}-(2-苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸，{(R)-1-[(1-丁基-1H-吲哚-6-羰基)-氨基]-2-苯基-乙基}-(2-苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸，[1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-對-甲苯基氨基甲醯基-丁基)-次磷酸，[1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(3-甲基-2-對-甲苯基氨基甲醯基-丁基)-次磷酸，[1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯基-2-對-甲苯基氨基甲醯基-乙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-((S)-2-苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-對-甲苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-((S)-2-對-甲苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-((R)-2-對-甲苯基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-異丁基氨基甲醯基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(3-甲基-丁基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸，[2-(3，3-二甲基-丁基氨基甲醯基)-丙基]-[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(4，4，4-三氟-丁基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(3，3，4，4-四氟-丁基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(2，2，3，3，4，4，4-七氟-丁基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸，(2-環己基氨基甲醯基-丙基)-[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸，[2-(2-環己基-乙基氨基甲醯基)-丙基]-[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(4-羥基-苯基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(4-甲氧基-苯基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(吡啶-2-基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(5-甲基-吡啶-2-基氨基甲醯基)-丙基]-次磷酸和(2-苄基氨基甲醯基-丙基)-[(R)-1-(3-二丙基氨基甲醯基-苯甲醯基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸。
7.製備權利要求1的式I化合物的方法，該方法包括將式II化合物 其中R2為(C1-C5)-烷基或苯基；R3為氫、(C1-C5)-烷基、O-(C1-C5)-烷基或苯基；且R4為(C1-C6)-烷基、(C3-C6)-環烷基、苯基、吡啶基或吲哚基；與式III化合物反應R1-COR10(III)其中R1為芳基或雜芳基；且R10為滷素或OH；並且，如果需要，將所得化合物轉化為藥學上可接受的鹽；或者將式XI化合物 其中R1為芳基或雜芳基；R2為(C1-C5)-烷基或苯基；R3為氫、(C1-C5)-烷基、O-(C1-C5)-烷氧基或苯基；與式XII化合物反應H2N-R4(XII)其中R4為(C1-C6)-烷基、(C3-C6)-環烷基、苯基、吡啶基或吲哚基，並且，如果需要，將所得化合物轉化為藥學上可接受的鹽。
8.權利要求1的式I化合物或其藥學上可接受的鹽，是根據權利要求7的方法製備的。
9.權利要求1的式I化合物或其藥學上可接受的鹽在製備用於治療與β-分泌酶抑制有關的疾病的藥物中的用途。
10.藥用組合物，該藥用組合物含有權利要求1的式I化合物或其藥學上可接受的鹽以及藥學上可接受的輔形劑。
11.權利要求10的藥用組合物，用於治療阿爾茨海默氏病。
12.以上所描述的本發明。
全文摘要
本發明涉及式(I)的次磷酸衍生物或其藥學上可接受的鹽，在式(I)中，R
文檔編號C07F9/60GK1878781SQ200480033230
公開日2006年12月13日 申請日期2004年11月2日 優先權日2003年11月11日
發明者H·海爾伯特, R·胡姆, D·克諾普, P·維斯 申請人:弗·哈夫曼-拉羅切有限公司