8-乙醯基色滿酮類化合物及其類似物和醫藥用途的製作方法

2023-04-26 16:47:36 1

專利名稱：8-乙醯基色滿酮類化合物及其類似物和醫藥用途的製作方法
技術領域：
本發明屬於醫藥技術領域，涉及8-乙醯基色滿酮類化合物及其類似物 和醫藥用途，該化合物為一類新穎的抗血小板聚集的化合物。
背景技術：
血栓形成可導致急性心肌梗塞，中風，肺栓塞等心，腦，肺循環疾病， 也是外科手術中常見的併發症以及介入性血管成形術後再閉塞的因素。由 於血小板聚集在血栓形成方面起重要作用，抗血小板藥物已成為防治這些 疾病的主要藥物。抗血小板藥又稱血小板功能抑制劑(platelet function inhibitors),這類藥物可以抑制血小板的粘附，聚集和釋放功能，阻抑血栓 形成，並可延長血栓性疾病患者縮短了的血小板生存期。作為抗血小板藥， 應要求在臨床應用劑量下對機體出血凝血過程無明顯影響，即不引起出血 等不良反應。
目前發現色酮，色滿酮及色滿類化合物在抗血小板聚集方面具有一定的 活性，如2-氨基-4-色酮,3-二甲氨基甲基-4-色酮，3-氨基甲基-4-色滿酮等。 在此基礎上，我們得到了本發明化合物，其具有較強的抗血小板聚集活性。

發明內容
本發明的目的是提供一類新穎的取代醚類色滿酮衍生物及其製備方法。 本發明包括一種組合物，用於抑制哺乳動物血小板的損失，抑制血小板 聚集物的形成，抑制纖維蛋白的形成，抑制血栓形成，和抑制栓塞物形成， 該組合物包括本發明的化合物和在藥學上可接受的載體。這些組合物可選 的可以包括抗凝劑，抗血小板劑和溶栓劑。該組合物可以加入到血液，血 液製品或哺乳動物器官中，以達到所需的抑制作用。
本發明也提供了抑制或治療異常蛋白水解的方法，和用於治療下述疾病 的方法心肌梗塞；不穩定的絞痛；中風；再狹窄；深靜脈血栓；由創傷， 膿毒症或腫瘤轉移導致的播散性血管內凝血；血液透析；心肺旁路術；成 人呼吸窘迫症；內毒素性休克；類風溼性關節炎；潰瘍性結腸炎；硬結； 轉移；化療過程中的凝固性過高；阿森海默氏症；道恩氏綜合症；眼內纖 維蛋白形成；和傷口癒合。本發明化合物的其他用途是作為抗凝劑，包埋 在或者物理連接於用於裝置製造的材料中，該裝置用於血液釆集，血液循 環和血液貯存，例如導管，血液透析器，血液採集注射器與試管，血線與 斯騰特氏印模。
本發明也包括用於減少哺乳動物表面血栓形成的方法，是將本發明化合 物以共價或非共價方式結合在該表面上。
另一方面，本發明包括可用於哺乳動物體內血栓成像的組合物，該組合 物包括能夠在體外被檢測的本發明化合物。優選的組合物包含本發明化合 物和 一 種可檢測的標記，例如放射性或順磁性原子。
另一方面，本發明提供可用於哺乳動物體內血栓成像的診斷組合物，該 組合物包含藥學上可接受的載體和診斷學上有效量的本發明化合物或組合
4另一方面，本發明包括可用於哺乳動物體內血栓成像的方法。本發明包括立體異構體以及旋光異構體,例如對映體混合物以及各對映體和非對映體，其產生的原因是所選擇的該系列化合物中的結構不對稱性。
本發明化合物也可以具有多晶型，所有多晶型也都包括在本發明內。
本發明化合物也可以是溶劑化物的形式，尤其是水合物。水合可以發生在化合物或包含化合物的組合物的生產過程中，或者由於化合物的吸溼性，經過一定時間可發生水合。
本發明化合物的某些化合物是被稱之為藥物前體的衍生物。本發明化合物的藥學上可接受的鹽(以水溶性或油溶性產物或可分散的產物的形式)包括常規的非毒性鹽或季銨鹽，它們例如是從無機或有機酸或鹼生成的。酸加成鹽的實例包括醋酸鹽，己二酸鹽，藻酸鹽，天冬氨酸鹽，苯甲酸鹽，苯磺酸鹽，硫酸氫鹽，丁酸鹽，檸檬酸鹽，樟腦酸鹽，樟腦磺酸鹽，環戊丙酸鹽，二葡萄糖酸鹽，十二烷基硫酸鹽，乙磺酸鹽，富馬酸鹽，葡庚糖酸鹽，甘油磷酸鹽，半硫酸鹽，庚酸鹽，己酸鹽，氫氯酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，2-羥基乙磺酸鹽，乳酸鹽，馬來酸鹽，甲磺酸鹽，
2- 萘磺酸鹽，煙酸鹽，硝酸鹽，草酸鹽，撲酸鹽，果膠酯酸鹽，過硫酸鹽，
3- 苯基丙酸鹽，苦味酸鹽，新戊酸鹽，丙酸鹽，琥珀酸鹽，硫酸鹽，酒石
酸鹽，硫氰酸鹽，甲苯磺酸鹽和十一酸鹽。鹼鹽包括銨鹽，鹼金屬鹽，例如鈉和鉀鹽，鹼土金屬鹽，例如鉤和鎂鹽，有機鹼的鹽，例如二環己胺鹽，
N-甲基-D-葡糖胺鹽，和胺基酸的鹽，例如精氨酸，賴氨酸等，而且，鹼性含氮基團可以用這樣的試劑季銨化，例如低級烷基滷化物，如甲基，乙基，丙基和丁基的氯，溴和碘化物；硫酸二烷基酯，如硫酸二甲酯，二乙酯，二丁酯和二戊酯；長鏈滷化物，如癸基，月桂基，肉豆蔻基和硬脂醯
基的氯，溴和碘化物；芳烷基卣化物，如節基和苯乙基的溴化物等。優選用於生成酸加成鹽的酸包括鹽酸和醋酸。
對它們的應用來說，本發明化合物的酶抑制特性的效力和其他生化參數是按照本領域熟知的標準生化工藝加以確定的。應用的實際劑量範圍取決於所治療的患者或動物疾病狀態的性質和嚴重性，這些是由隨訪的診斷醫師加以決定的。有效劑量範圍約0.01-10mg/kg每天，即可達到有效的治療效果。
本發明化合物可以用於多種治療目的。本發明化合物可以用於以異常靜脈或動脈血栓形成為特徵狀態的治療或預防，這些狀態涉及凝血酶的產生或作用，包括但不限於深靜脈血栓；發生在膿毒性休克，病毒感染和癌症過程中的播散性血管內凝血；心肌梗塞；中風；冠狀動脈旁路；眼內纖維蛋白形成；髖部復位；由溶栓療法或經皮經腔冠狀血管成形術導致的血栓形成。其他用途包括作為抗凝劑的用途，包埋在或者物理連接於用於裝置製造的材料中，該裝置用於血液採集，血液循環和血液貯存，例如導管，血液透析儀，血液釆集注射器與試管和血線。本發明化合物也可以在體外血液循環中用作抗凝劑。
5金屬斯騰特氏印模顯示出減少再狹窄的作用，但是也有形成血栓的作用。減少斯騰特氏印模形成血栓的一個策略是在斯騰特氏印模表面上塗覆,包埋，吸附或共價凝血酶抑制劑。本發明化合物可用於該目的。本發明化合物可以結合或包埋在可溶性和/或可生物降解的聚合物內，然後塗在斯騰特氏印模材料上。這樣的聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮，聚羥基-丙基異丁烯醯胺-苯酚，聚羥乙基-天冬氨醯胺-苯酚，被棕櫚醯殘基取代的聚環氧乙烷-聚賴氨酸，聚乳酸，聚乙醇酸，聚乳酸與聚乙醇酸的共聚物，聚S己內酯，聚羥基丁酸，聚原酯，聚縮醛，聚二氫吡喃，聚氰基丙烯酸酯，和水凝膠的交聯或兩親嵌段共聚物。
憑藉血小板對平滑肌細胞，內皮細胞和嗜中性白細胞等宿主細胞類型的
作用，發現了本發明化合物的另外用途，用於成人呼吸窘迫綜合症；炎性反應；傷口癒合；再灌注損傷；動脈粥樣硬化；和氣囊血管成形術，atherectomy和動脈斯騰特氏印模放置等損傷後繼發的再狹窄的治療或預防。
當用作血小板聚集抑制劑時，本發明化合物給藥的有效量可以在約0.1-500mg/kg體重的劑量範圍內，優選為0.1-10mg/kg體重範圍，給藥方案為每日 一次或2-4次。
當用作血小板聚集抑制劑時，本發明化合物可以與溶栓劑聯合使用，例如組織纖溶酶原激活物，鏈激酶和尿激酶。另外，本發明化合物可以與其他抗血栓形成藥或抗凝藥聯合使用，例如但不限於纖維蛋白原拮抗劑和凝血惡烷受體拮抗劑。
血小板聚集抑制劑可以與可溶性聚合物偶合,後者作為可定向的藥物載體。這樣的聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮，吡喃共聚物，聚羥基-丙基異丁烯醯胺-苯酚，聚羥乙基-天冬氨醯胺-苯酚，或被棕櫚醯殘基取代的聚環氧乙烷-聚賴氨酸。而且，凝血酶抑制劑可以與一類可生物降解的聚合物偶合，後者可用於實現藥物的控制釋放，例如聚乳酸，聚乙醇酸，聚乳酸和聚乙醇酸的共聚物，聚e己內酯，聚羥基丁酸，聚原酯，聚縮醛，聚二氫吡喃，聚氰基丙烯酸酯，和水凝膠的交聯或兩親嵌段共聚物。
本發明的藥物組合物能夠通過任意方式給藥。例如，給藥可以通過腸胃外，皮下，靜脈內，肌內，腹膜內，透皮，頰部或眼部途徑。或者，可以通過口服途徑並行給藥。給藥劑量將取決於受治療者的年齡，健康狀況和體重，並行治療的種類(若有的話)，治療頻率，和所需效果的性質。
除了藥學上的活性化合物以外，該藥物製劑還可含有適合的藥學上可接受的載體，包括有利於將活性化合物加工成能夠藥用的製劑的賦形劑和助劑。
本發明的藥物製劑是通過常規的混合，造粒，成丸，溶解，或凍幹過程。因此，通過將活性化合物與固體賦形劑混合可以得到口服藥物製劑，可加入適合的助劑，然後研磨所得混合物，將顆粒混合物加工成片劑或錠劑芯。
適合的賦形劑特別是填充劑，例如糖類，如乳糖或蔗糖，甘露糖醇或山梨糖醇，纖維素製劑和/或磷酸鉤，如磷酸三鉤或磷酸氫鈣，以及粘合劑，例如澱粉糊，如玉米澱粉，小麥澱粉，稻米澱粉，馬鈴薯澱粉，明膠，黃芪膠，甲基纖維素，羥丙基甲基纖維素，羧甲基纖維素鈉，和/或聚乙烯吡咯烷酮。還可以加入崩解劑，例如上述的澱粉和羧甲基澱粉，交聯聚乙烯吡咯烷酮，瓊脂，海藻酸或其鹽，例如藻酸鈉。助劑尤其是助流劑和潤滑劑，例如矽石，滑石，硬脂酸或其鹽，如硬脂酸鎂或硬脂酸鈞，和/或聚乙二醇。可以選擇含有阿拉伯膠，滑石，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇和/或二氧化鈦，漆用溶液和適合的有機溶劑或溶劑混合物。為了形成耐受胃酸的包衣，使用適合的纖維素製劑的溶液，例如鄰苯二甲酸乙酸纖維素或鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素。可以向片劑或糖衣丸劑的包衣中加入染料或顏料，例如，用於鑑別或為了描繪各劑活性化合物的組合。
其他可以口服使用的藥物製劑包括由明膠製成的膠囊，以及由明膠和甘油或山梨糖醇等增塑劑製成的軟膠囊。膠囊可以含有顆粒形式的活性化合物，它們可以與乳糖等填充劑，澱粉等粘合劑和/或滑石或硬脂酸鎂等潤滑劑以及可選的穩定劑混合。在軟膠囊中，活性化合物優選溶解或懸浮在適宜的液體中，例如脂肪油或液體石蠟。另外，也可以加入穩定劑。
適合於腸胃外給藥的製劑包括水溶性活性化合物的水溶液，例如水溶性鹽，鹼性溶液和環糊精包合的絡合物。尤其是優選的鹼式鹽是銨鹽，例如
是用Tris,氫氧化膽鹼，Bis-Tris丙垸，N-甲基葡糖胺或精氨酸製備的。可以使用一種或多種改性或未改性的環糊精來穩定和增加本發明化合物的水溶性。
另外，活性化合物可以作為適當的油性注射用懸浮液給藥。適合的親脂性溶劑或載體包括脂肪油，如芝麻油，或合成的脂肪酸酯，如油酸乙酯或甘油三酯或聚乙二醇-400 (化合物可溶於PEG-400)。水性注射用懸浮液可以含有增加懸浮液粘度的物質，例如羧甲基纖維素鈉，山梨糖醇和/或葡聚糖。可選的，懸浮液也可以含有穩定劑。
利用交換反應，本發明化合物可以用放射性碘進行標記。如本領域熟知的用熱碘交換冷碘。
本發明也包括可用於體內血栓成像的組合物，其中該組合物是由與放射性原子絡合的本發明化合物組成的，或者是由與順磁性原子絡合的本發明發明化合物組成的。使用本領域熟知的絡合技術得到。
本發明也包括可用於體內血栓成像的診斷組合物，該組合物包含藥學上可接受的載體和診斷學上有效量的本發明化合物的組合物。
每劑所需的"診斷學上有效量"的組合物將取決於給藥途徑，所治療的類型和所考慮的具體的體格特徵。這些因素及其與確定劑量之間的關係是醫學診斷領域技術人員所熟知的。而且可以調整診斷學上的有效量和給藥方法，使其達到最佳療效，不過也取決於諸多因素，例如體重，飲食，並行的藥物治療和醫學領域技術人員將要考慮的其他因素。在任何方面，用於成像的劑量應當足以檢測所針對血栓部位中的成像劑的存在。通常，放射成像要求本發明藥物組合物所提供的劑量為約5-20pCi，優選為約10pCi。磁共振成像要求所提供的劑量為約0.001-5mmol/kg ,優選為約0.005-0.5mmol/kg與順磁原子絡合的本發明化合物。在兩種情況下，本領域
7已知實際劑量將取決於血栓的位置。
用於體內的"藥學上可接受的載體"是藥學領域所熟知的。本發明的藥物組合物可以用藥學上可接受的載體配製成用於注射給藥的無菌溶液或懸浮液，適合於在注射前溶解或懸浮在液體中的固體形式，或是乳液。適合的賦形劑例如水，鹽水，葡萄糖，甘露糖醇，乳糖，卵磷脂，白蛋白，穀氨酸鈉，鹽酸半胱氨酸等。可注射的藥物組合物還可以含有少量無毒的輔助物質，例如潤溼劑，pH緩衝劑等。如果需要的話，可以使用促進吸收的製劑(例如脂質體)。
本發明也涵蓋為貯存或給藥而製備的診斷組合物，它們另外含有防腐劑，穩定劑和染劑。例如，作為防腐劑可以加入苯甲酸鈉，山梨酸和對羥基苯甲酸的酯。另外，可以使用抗氧化劑和懸浮劑。
本發明的體內成像方法也提供了若干優於以前的成像工藝的優點，這些成像工藝用於檢測或監測血栓的存在，大小，消退或增加。特別是本發明所提供的化合物，組合物和診斷組合物已經被設計成與凝血酶極為緊密的結合，凝血酶是與血栓相關聯的，從而減少由未結合的成像劑產生的循環放射性或順磁性"背景"。而且，通過冠脈內注射本發明化合物，組合物或診斷組合物而進行的體內成像預期幾乎是瞬時的，這是由於這些成像劑會立即飽和與血栓結合的凝血酶。
因此，本發明也包括用於體內血栓成像的方法，該方法包括下列步驟1,將診斷學上可接受的量的本發明化合物，組合物或診斷組合物給藥，和2,檢測血管內的血栓。用於監測血栓大小，位置和數量以及血栓溶解或生長的方法。該方法在體內使用化合物，組合物或診斷組合物時，"給藥"是通過胃腸外途徑實現的，以全身或局部定向的方式均可。實現全身給藥的方法是將本發明化合物，組合物或診斷組合物注射到適宜和可用的靜脈或動脈內。實現局部定向給藥的方法是將本發明化合物，組合物或診斷組合物以接近血流的速度注射到被懷疑在遠離注射部位含有血栓的靜脈或動脈內。這包括但不限於直接注射到冠狀動脈脈管系統內，使冠脈血栓成像，直接注射到頸動脈內，使腦脈管系統中的血栓成像，或者直接注射到足靜脈內，使腿部深靜脈血栓成像。
本發明組合物向血栓部位的釋放方式也在術語"給藥"所考慮的範圍內。例如，可以將連接有螯合單元的化合物注射到體內，稍後注入放射性原子，從而在血栓部位體內形成包含與放射性原子絡合的化合物的組合物。或者，可以將包含與放射性原子絡合的化合物的組合物注射到體內。
如前所述，用在本發明方法中的化合物，組合物或診斷組合物的"診斷學上有效的量"將取決於給藥途徑，所治療的類型和所治療的具體體格特徵。這些因素及其與確定劑量之間的關係是醫學診斷領域技術人員所熟知的。在任何方面，用於體內成像的劑量應當足以檢測所針對血栓部位中的成像劑量的存在。通常，放射成像要求本發明藥物組合物所提供的劑量為約5-20pCi，優選為約10pCi。磁共振成像要求所提供的劑量為約0.00卜5mmol/kg,優選為約0.005-0.5mmol/kg與順磁原子絡合的本發明化合物。在兩種情況下，本領域已知實際劑量將取決於血栓的位置。
本發明的新化合物作為有效的抗血小板藥物方面的應用，尤其是應用 於製備預防或治療因血小板聚集而引起的冠狀動脈綜合症，心肌梗塞，心 肌缺血，心腦血管病症藥物，和治療血栓形成，局部缺血，中風，再狹窄 或炎症的方法，也就是將有效量的本發明化合物給藥。
具體實施例方式
下列實施例闡述而非限制本發明的方法和組合物。不同條件和參數的其 他適當修改和調整也是正常的，對本領域技術人員來說，顯然也在本發明 的範圍之內。
如下概括了製備本發明化合物的合成步驟。
0 o
實施例1: 8-乙醯基-7-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-4-色滿酮
將3 mmol 2-氯乙基二甲胺鹽酸鹽、3 mmol 7-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、 30mmol碳酸鉀、0.3mmol碘化鉀、50mL乾燥丙酮混合。加熱回流12h。 冷卻後抽濾，濃縮濾液，經柱層析分離(石油醚:乙酸乙酯=1:1)，得8-乙醯基 -7-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-4-色滿酮白色固體，收率53%。 MS m/z (M) 277.32。'服MR(CDCl3): 52.27(6H，s)， 2.55(3H，s), 2.78(2H,m), 2.97(2H,m)， 4.04 (2H,m)， 4.13(2H,m), 6.52(1 H,d), 7.86(1 H，d)。 實施例2: 8-乙醯基-7-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-4-色滿酮
按照實施例l方法，由7-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、2-氯乙基二乙胺鹽酸 鹽反應，得8-乙醯基-7-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-4-色滿酮白色固體，收率 50%。 MS m/z (M) 305.37 。 iHNMR(CDCl3): 51.00(6H,t)， 2.40(4H,m)， 2.55(3H，s)， 2.78(2H，m)， 2.97(2H，m)，楊(2H，m)， 4.13(2H，m), 6.52(1H，d), 7.86(1H,d)。
實施例3: 8-乙醯基-7-[2-(l-吡咯烷基)乙氧基]-4-色滿酮
按照實施例l方法，由7-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、N-(2-氯乙基)P比咯反 應，得8-乙醯基-7-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]-4-色滿酮白色固體，收率54%。 MS m/z (M) 303.35。 'HN證(CDCl3): 51.59(4H，m)， 2-25(4H,t), 2.55(3H，s)， 2.78(2H,m)， 2.97(2H,m)， 4.04(2H,m)， 4.13(2H,m), 6.52(1H，d)， 7.86(1H,d)。 實施例4: 8-乙醯基-7-[2-(l-哌啶基)乙氧基]-4-色滿酮
按照實施例l方法，由7-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、N-(2-氯乙基)哌啶反 應，得8-乙醯基-7-[2-(l-哌啶基)乙氧基]-4-色滿酮白色固體，收率52%。 MS m/z (M) 317.38。 WMR(CDQ3): S1.50(6H，m)， 2.24(4H，t), 2.55(3H，s)， 2.78 (2H，m)， 2.97(2H,m), 4.04(2H,m)， 4.13(2H，m), 6.52(1H，d)， 7.86(1H,d)。 實施例5: 8-乙醯基-7-[2-(4-嗎啉基)乙氧基]-4-色滿酮
9按照實施例l方法，由7-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、N-(2-氯乙基)嗎啉反 應，得8-乙醯基-7-[2-(4-嗎啉基)乙氧基]-4-色滿酮白色固體，收率51%。 MS m/z (M) 319.35。 i腿證(CDCl3): S2.37(4H，t)， 2,55(3H，s)， 2.78(2H，m)， 2.97(2H， m), 3.67(4H,t)， 4.04(2H,m)， 4.13(2H，m), 6.52(1H，d)， 7.86(1H,d)。 實施例6: 8-乙醯基-7-(二甲胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮
按照實施例l方法，由7-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、氯乙醯二甲胺反應， 得8-乙醯基-7-(二甲胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮白色固體，收率61%。 MS m/z (M) 291.3 。
i麗MR(CDCl3):52.55(3H,s), 2.卯(6H,s), 2.97(2H,m), 4.13(2H，s), 4.83(2H,m)， 6.52(1H，d), 7.86(1H，d)。 實施例7: 8-乙醯基-7-(二乙胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮
按照實施例l方法，由7-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、氯乙醯二乙胺反應， 得8-乙醯基-7-(二乙胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮白色固體，收率60%。 MS m/z (M) 319.35。 toMR(CDCl3):S1.20(6H,t)， 2.55(3H，s), 2.97(2H，m), 3.24(4H, m), 4.13(2H,s), 4.83(2H，m)， 6.52(1H，d), 7.86(1H，d)。 實施例8: 8-乙醯基-7-(l-吡咯基)甲醯甲氧基-4-色滿酮
按照實施例1方法，由7-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、N-氯乙醯基吡咯反應， 得8-乙醯基-7-(l-吡咯基)甲醯甲氧基-4-色滿酮白色固體，收率54%。MSm/z (M) 317.34。 'HNMR(CDCl3): S1.97(4H，m), 2.55(3H,s)， 2.97(2H,m)， 3.46(4H，t)， 4.13(2H,s)， 4.83(2H，m), 6.52(1H，d)， 7.86(1H，d)。 實施例9: 8-乙醯基-7-(l-哌嚏基)甲醯甲氧基-4-色滿酮
按照實施例1方法，由7-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、N-氯乙醯基哌啶反應， 得8-乙醯基-7-(1-哌啶基)甲醯甲氧基-4-色滿酮白色固體，收率58%。 MS m/z (M) 331.36。 ！HNMR(CDCl3): S1.50(6H，m), 2.55(3H，s)， 2.97(2H,m)， 3.34(4H,t), 4.13(2H,s),4.83(2H,m),6.52(lH，d)，7.86(lH,d)。 實施例10: 8-乙醯基-7-(4-嗎啉基)甲醯甲氧基-4-色滿酮
按照實施例1方法，由7-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、N-氯乙醯基嗎啉反應， 得8-乙醯基-7-(4-嗎啉基)甲醯甲氧基-4-色滿酮白色固體，收率55%。MSm/z (M) 333.34。'HNMR(CDCl3):52.55(3H，s),2.97(2H，m),3.47(4H，t),3.67(4H,t),4.13 (2H,s),4.83(2H,m)，6.52(lH,d)，7.86(lH,d)。 實施例11: 8-乙醯基-7-(苯基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮
按照實施例l方法，由7-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、氯乙醯苯胺反應，得 8-乙醯基-7-(苯基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮白色固體，收率53%。 MS m/z (M) 339.34 。 toMR(CDCl3):52.55(3H,s),2.97(2H，m)，4.13(2H，s),4.88(2H,m)，6.52 (lH,d)，7.00(lH,m)，7.24(2H，m)，7.64(2H，m)，7.86(lH，d)。 實施例12: 8-乙醯基-7-(節基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮
按照實施例l方法，由7-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、氯乙醯苄胺反應，得 8-乙醯基-7-(苄基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮白色固體，收率57°/。。 MS m/z (M) 353.37 。'麗MR(CDCl3):S2.55(3H，s)，2.97(2H，m),4.13(2H,s),4.46(2H，s),4.88 (2H,m),6.52(lH，d)，7.07(3H，m),7.14(2H，m)，7.86(m,d)。 實施例13: 8-乙醯基-7-[(2-氯沐基胺基]甲醯甲氧基-4-色滿酮
10按照實施例1方法，由7-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、氯乙醯-2'-氯苯胺反 應，得8-乙醯基-7-[(2-氯)苯基胺基]甲醯甲氧基-4-色滿酮白色固體，收率 50%。 MS m/z (M) 373.79。 iHNMR(CDCl3):52.55(3H，s),2.97(2H，m)，4.13(2H,s)， 4,88(2H,m),6.52(lH，d)，6.94(lH，m)，7.12(lH，m)，7.25(lH,m)，7.58(lH,m)，7.86(1 H，d)。
實施例14: 8-乙醯基-6-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-4-色滿酮
將3 mmol 2-氯乙基二甲胺鹽酸鹽、3 mmol 6-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、 30mmol碳酸鉀、0.3mmol碘化鉀、50mL乾燥丙酮混合。加熱回流12h。 冷卻後抽濾，濃縮濾液，經柱層析分離(石油醚:乙酸乙酯=1:1),得8-乙醯基 -6-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-4-色滿酮白色固體，收率47%。 MS m/z (M) 277.32 。 ！HNMR(CDCl3):S2.27(6H,s),2.55(3H，s)，2.78(2H，t),2.97(2H，m)，4.04 (2H，t)，4.13(2H，m),7.44(lH，s)，7.48(lH,s)。 實施例15: 8-乙醯基-6-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-4-色滿酮
按照實施例14方法，由6-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、2-氯乙基二乙胺鹽 酸鹽反應，得8-乙醯基-6-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-4-色滿酮白色固體，收率 43%。 MS m/z (M) 305.37。 i麗MR(CDCl3): S1.00(6H，t)，2.40(4H，m)，2.55(3H,s)， 2.78(2H,t)，2.97(2H,m),4.04(2H，t)，4.13(2H,m),7.44( 1 H，s)，7.48( 1 H,s)。 實施例16: 8-乙醯基-6-[2-(l-吡咯烷基)乙氧基]-4-色滿酮
按照實施例14方法，由6-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、N-(2-氯乙基)吡咯反 應，得8-乙醯基-6-[2-(l-吡咯烷基)乙氧基卜4-色滿酮白色固體，收率50%。 MS m/z (M) 303.35 。 iHNMR(CDCl3):S1.59(4H,m)，2.25(4H,t)，2.55(3H，s)， 2.78(2H,t)，2.97(2H,m)，4.04(2H，t),4.13(2H,m)，7.44(lH，s),7.48(lH，s)。 實施例17: 8-乙醯基-6-[2-(l-哌啶基)乙氧基]-4-色滿酮
按照實施例14方法，由6-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、N-(2-氯乙基)哌啶反 應，得8_乙醯基-6-[2-(1-哌啶基)乙氧基]鬥色滿酮白色固體，收率52%。 MS m/z (M) 317.38 。 'HNMR(CDCl3):S1.50(6H，m),2.25(4H，t)，2.55(3H，s)， 2.78(2H，t),2.97(2H，m),4.04(2H，t)，4.13(2H,m)，7.44(lH,s),7.48(lH，s)。 實施例18: 8_乙醯基-6-[2-(4-嗎啉基)乙氧基]-4-色滿酮
按照實施例14方法，由6-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、N-(2-氯乙基)嗎啉反 應，得8-乙醯基-6-[2-(4-嗎啉基)乙氧基]-4-色滿酮白色固體，收率55%。 MS m/z (M) 319.35 。 iHNMR(CDCl3):S2.37(4H，t),2.55(3H，s)，2.78(2H,t), 2.97(2H,m)，3.67(4H，t),4.04(2H，t)，4.13(2H,m),7.44(lH,s),7.48(lH，s)。 實施例19: 8-乙醯基-6-(二甲胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮
按照實施例14方法，由6-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、氯乙醯二甲胺反應， 得8-乙醯基-6-(二甲胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮白色固體，收率59%。 MS m/z (M) 291.3 。 ！HNMR(CDCl3):52.55(3H，s)，2.90(6H,s),2.97(2H，m),4.13(2H,s)， 4.83(2H,m)，7.44(lH，s),7.48(lH，s)。
實施例20: 8-乙醯基-6-(二乙胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮
按照實施例14方法，由6-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、氯乙醯二乙胺反應， 得8-乙醯基-6-(二乙胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮白色固體，收率54%。 MS m/z(M) 319.35 。 'HNMR(CDCl3):51.20(6H,t),2.55(3H,s)，2.97(2H,m)，3.24(4H,m),
4.13(2H,s)，4.83(2H,m)，7.44(lH，s),7.48(lH，s)。
實施例21: 8-乙醯基-6-(l-吡咯基)甲醯甲氧基-4-色滿酮
按照實施例14方法，由6-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、N-氯乙醯基吡咯反 應，得8-乙醯基-6-(l-吡咯基)甲醯甲氧基-4-色滿酮白色固體，收率53%。 MS m/z (M) 317.34。 'HNMR(CDCl3):S1.97(4H,m),2.55(3H，s)，2.97(2H，m)， 3.46(4H,t)，4.13(2H,s),4.83(2H,m)，7.44(lH，s)，7.48(lH,s)。 實施例22: 8-乙醯基-6-(l-哌嗖基)甲醯甲氧基-4-色滿酮
按照實施例14方法，由6-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、N-氯乙醯基哌啶反 應，得8-乙醯基-6-(1-哌啶基)甲醯甲氧基-4-色滿酮白色固體，收率58%。 MS m/z (M) 331.36 。 lNMR(CDCl3):1.50(6H,m)，2.55(3H，s)，2.97(2H,m), 3.34(4H,t),4.13 (2H，s),4.83(2H,m)，7.44(1 H,s)，7.48(1 H，s)。 實施例23: 8-乙醯基-6-(4-嗎啉基)甲醯甲氧基-4-色滿酮
按照實施例14方法，由6-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、N-氯乙醯基嗎啉反 應，得8-乙醯基-6-(4-嗎啉基)甲醯甲氧基-4-色滿酮白色固體，收率62%。 MS m/z (M) 333.34。 i麗MR(CDCl3):S2.55(3H,s)，2.97(2H,m),3.47(4H，t),3.67 (4H，t)，4.83(2H，s),4,13(2H，m),7.44(lH，s)，7.48(lH，s)。 實施例24: 8-乙醯基-6-(苯基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮
按照實施例14方法，由6-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、氯乙醯苯胺反應， 得8-乙醯基-6-(苯基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮白色固體，收率56%。MSm/z (M) 339.34 。麗MR(CDCl3):S2.55(3H，s)，2.97(2H，m)，4.13(2H，s)，4.88(2H,m), 7.00(1H,m)，7.24(2H,m)，7.44(lH,s)，7.48(lH，s)7.64(2H，m)。 實施例25: 8-乙醯基-6-(節基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮
按照實施例14方法，由6-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、氯乙醯苄胺反應， 得8-乙醯基-6-(節基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮白色固體，收率66%。 MS m/z (M) 353.37 。 iHN證(CDCl3):S2.55(3H,s)，2.97(2H，m)，4.13(2H,s),4.46(2H，s), 4.88(2H,m),7.07(3H，m)，7.14(2H，m),7.44(lH，s),7.48(lH，s)。 實施例26: 8-乙醯基-6-[(2-氯)苯基胺基]甲醯甲氧基-4-色滿酮
按照實施例14方法，由6-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、氯乙醯-2'-氯苯胺反 應，得8-乙醯基-6-[(2-氯)苯基胺基]甲醯甲氧基-4-色滿酮白色固體，收率 52%。 MS m/z (M) 373.79。 i麗MR(CDCl3):S2.55(3H,s),2.97(2H,m)，4.13(2H，s)， 4.88(2H,m)，6.94(lH,m),7.12(lH,m),7.25(lH,m)，7.44(lH，s),7.48(lH，s),7.58(lH， m)。
實施例27: 8-乙醯基-5-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-4-色滿酮
將3 mmol 2-氯乙基二甲胺鹽酸鹽、3 mmol 5-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、 30mmol碳酸鉀、0.3mmol碘化鉀、50mL乾燥丙酮混合。加熱回流12h。 冷卻後抽濾，濃縮濾液，經柱層析分離(石油醚:乙酸乙酯=1:1)，得8-乙醯基 -5-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-4-色滿酮白色固體，收率49%。 MS m/z (M) 277.32 。 ！麗MR(CDCl3):52.27(6H，s)，2.55(3H，s),2.78(2H，m)，2.97(2H,m),4.04 (2H,m),4.13(2H,m)，6.52(lH，d)，7.82(lH,d)。
12實施例28: 8-乙醯基-5-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-4-色滿酮
按照實施例27方法，由5-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、2-氯乙基二乙胺鹽 酸鹽反應，得8-乙醯基-5-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-4-色滿酮白色固體，收率 48%。 MS m/z (M) 305.37。麗MR(CDCl3》S1.00(6H,t),2.40(4H,m)，2.55(3H,s), 2.78(2H,m)，2.97(2H，m)，4.04(2H，m)，4.13(2H，m)，6.52( 1 H，d),7.86( 1 H，d)。 實施例29: 8-乙醯基-5-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]-4-色滿酮
按照實施例27方法，由5-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、N-(2-氯乙基)P比咯反 應，得8-乙醯基-5-[2-(l-吡咯烷基)乙氧基]-4-色滿酮白色固體，收率55%。 MS m/z (M) 303.35 。 ！麗匿(CDCl3):51.59(4H,m),2.25(4H，t)，2.55(3H，s)， 2.78(2H,m)，2.97(2H，m)，4.04(2H，m)，4.13(2H，m)，6.52(lH,d),7.86(lH，d)。 實施例30: 8-乙醯基-5-[2-(l-哌啶基)乙氧基]-4-色滿酮
按照實施例27方法，由5-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、N-(2-氯乙基)哌啶反 應，得8-乙醯基-5-[2-(l-哌啶基)乙氧基]-4-色滿酮白色固體，收率53%。 MS m/z (M) 317.38。
'HNMR(CDCl3):51.50(6H,m),2.24(4H,t),2.55(3H,s), 2.78(2H，m)，2.97(2H，m),4.04(2H,m)，4.13(2H，m)，6.52(lH,d)，7.86(lH，d)。 實施例31: 8-乙醯基-5-[2-(4-嗎啉基)乙氧基]-4-色滿酮
按照實施例27方法，由5-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、N-(2-氯乙基)嗎啉反 應，得8-乙醯基-5-[2-(4-嗎啉基)乙氧基]-4-色滿酮白色固體，收率58%。 MS m/z (M) 319.35。 i腦證(CDCl3):52.37(4H，t)，2.55(3H,s)，2.78(2H，m),2.97(2H, m)，3.67(4H,t),4.04(2H，m),4.13(2H,m),6.52(lH,d)，7.86(lH,d)。 實施例32: 8-乙醯基-5-(二甲胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮
按照實施例27方法，由5-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、氯乙醯二甲胺反應， 得8-乙醯基-5-(二甲胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮白色固體，收率60%。 MS m/z (M) 291.3。 iHNMR(CDCl3):S2.55(3H，s)， 2.90(6H，s), 2.97(2H，m), 4.13(2H,s), 4.83(2H，m)， 6.52(1H，d), 7.86(1H，d)。 實施例33: 8-乙醯基-5-(二乙胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮
按照實施例27方法，由5-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、氯乙醯二乙胺反應， 得8-乙醯基-5-(二乙胺基)甲醯甲氧基4-色滿酮白色固體，收率62%。 MS m/z (M) 319.35。 'HNMR(CDCl3):5L20(6H，t)， 2.55(3H,s)， 2.97(2H，m)， 3.24(4H，m), 4.13(2H，s)， 4.83(2H，m), 6.52(1H,d)， 7.86(1H,d)。 實施例34: 8-乙醯基-5-(l-吡咯基)甲醯甲氧基-4-色滿酮
按照實施例27方法，由5-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、N-氯乙醯基吡咯反 應，得8-乙醯基-5-(l-吡咯基)甲醯甲氧基-4-色滿酮白色固體，收率59%。 MS m/z (M) 317.34。 iHNMR(CDCl3):51.97(4H，m)，2.55(3H，s),2.97(2H，m), 3.46(4H,t),4.13(2H，s)，4.83(2H,m)，6.52(lH,d),7.86(lH，d)。 實施例35: 8-乙醯基-5-(l-哌啶基)甲醯甲氧基-4-色滿酮
按照實施例27方法，由5-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、N-氯乙醯基哌啶反 應，得8-乙醯基-5-(l-哌啶基)甲醯甲氧基-4-色滿酮白色固體，收率63%。 MS m/z (M) 331.36 。 lNMR(CDCl3):1.50(6H,m)，2.55(3H,s),2.97(2H，m)， 3.34(4H,t),4.13(2H,s),4.83(2H，m),6.52(m，d)，7.86(lH,d)。實施例36: 8-乙醯基-5-(4-嗎啉基)甲醯甲氧基-4-色滿酮
按照實施例27方法，由5-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、N-氯乙醯基嗎啉反 應，得8-乙醯基-5-(4-嗎啉基)甲醯甲氧基-4-色滿酮白色固體，收率65%。 MS m/z (M) 333.34 。 ！HNMR(CDCl3):S2.55(3H，s)，2.97(2H，m),3.47(4H,t)， 3.67(4H，t)，4.13(2H,s)，4.83(2H，m),6.52(lH,d)，7.86(lH,d)。 實施例37:8-乙醯基-5-(苯基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮
按照實施例27方法，由5-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、氯乙醯苯胺反應， 得8-乙醯基-5-(苯基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮白色固體，收率55%。MS m/z (M) 339.34 。 1HNMR(CDCl3):S2.55(3H,s),2.97(2H,m)，4.13(2H，s)，4.88(2H,m)， 6.52(1H，d)，7.00(lH,m),7.24(2H,m),7.64(2H，m),7.86(lH,d)。 實施例38: 8-乙醯基-5-(節基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮
按照實施例27方法，由5-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、氯乙醯節胺反應， 得8-乙醯基-5-(,基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮白色固體，收率59%。MS m/z (M) 353.37 。 'HNMR(CDCl3):S2.55(3H，s)，2.97(2H，m),4.13(2H，s),4.46(2H,s)， 4.88(2H，m),6.52(lH，d)，7.07(3H,m),7.14(2H,m),7.86(lH,d)。 實施例39: 8-乙醯基-5-[(2-氯)苯基胺基]甲醯甲氧基-4-色滿酮
按照實施例27方法，由5-羥基-8-乙醯基-4-色滿酮、氯乙醯-2'-氯苯胺反 應，得8-乙醯基-5-[ (2-氯沐基胺基]甲醯甲氧基-4-色滿酮白色固體，收率 57%。 MS m/z (M) 373.79。 iHNMR(CDCl3):S2.55(3H，s),2.97(2H，m)，4.13(2H,s), 4.88(2H，m),6.52(lH，d),6.94(lH,m),7.12(lH，m)，7.25(lH,m),7.58(lH，m)，7.86(1 H，d)。
實施例40:片劑
組分
活性組分 微晶纖維素 二氧化矽 硬脂酸
質量(mg/片)
2.5-1000
200-650
10-650
5-15
再加入二氧化矽和硬脂酸，
將活性組分等量遞加地與微晶纖維素混勻 混句，直接壓片。 實施例41:片劑
組分
活性組分 澱粉
微晶纖維素
聚乙烯吡咯烷酮(為10%水溶液) 羧甲基纖維素鈉 硬脂酸鎂 滑石
將活性組分，澱粉和纖維素通過45目U.S.篩並充分混合，將所得粉末 與聚乙烯吡咯烷酮混合，然後通過14目U.S.篩，將這樣得到的顆粒在
質量(mg/片)
25-1000
45
35
4
4.5 0.5 1
1450-6(TC乾燥並通過18目U.S.篩。將羧甲基纖維素鈉，硬脂酸鎂和滑石，先 通過60目U.S.篩，然後加入至上述顆粒中，混合後，在壓片機上壓製成片
實施例42:懸浮劑
組分 質量(mg/5mL)
活性組分 0.1-1000mg 羧甲基纖維素鈉50mg
糖漿
苯甲酸溶液 矯味劑 著色劑 加純水至
1.25mg 0.1 mL
5mL
將藥物通過45目U.S.篩並與羧甲基纖維素鈉及糖漿混合以形成均勻糊 狀物，將苯甲酸溶液，矯味劑，和著色劑用一些水稀釋，並邊攪拌邊加入, 然後加入足夠量水以達到所需的體積。 實施例43:氣溶膠
組分 質量(重量％)
活性組分 0.25
乙醇 25.75
拋射劑22(氯二氟甲烷)70 將活性成分與乙醇混合，並將所得混合物加入至部分的拋射劑22中， 冷卻至3(TC,並轉移至容器中。然後將所需量加入至不鏽鋼容器中並用剩 餘噴射劑稀釋，然後安裝閥門裝置。 實施例44:栓劑
組分 質量(mg/栓劑) 活性組分 250 飽和脂肪酸甘油酯類2000 將活性組分通過60目U.S.篩並將其懸浮於預先熔化的飽和脂肪酸甘油 酯類化合物中，然後將混合物傾入至標準的2g腔栓劑模中並冷卻。
實施例45:可注射製劑
組分 質量 活性成分 50mg 等滲鹽溶液1000mL 將以上溶液靜脈內注射給藥至患者，速度約lmL每分鐘,， 實施例46:生物活性實驗——純化酶的體外抑制作用
試劑所有緩衝鹽從Sigma公司獲得，為最高純度。酶解物是N苯甲醯 -Phe-Val-Arg-對硝基N-醯苯胺(Sigma B7632),鹽酸N-苯甲醯 -Ile-Glu-Gly-Arg-對硝基N-醯苯胺(Sigma B2291) ， N-對甲苯磺醯 -Gly-Pro-Lys-對硝基N-醯苯胺(SigmaT6140), N-琥珀組-Ala-Ala-Pro-Phe-對
15硝基N-醯苯胺(Sigma S7388)和N-CBZ-Val-Gly-Arg-對硝基N-醯苯胺(Sigma C7271),購自Sigma。N-琥珀醯-Ala-Ala-Pro-Arg-對硝基N-醯苯胺(BACHEM L-1720)和N-琥J白醯-Ala-Ala-Pro-Val-對硝基N-醯苯胺(BACHEM L-1770)購 自BACHEM。
人a-凝血酶，人Xa因子和人纖溶酶購自 Enzyme Research Laboratories(South Bend， Indiana)。
Ki測定全部測定都是以供試化合物抑制酶催化的肽對硝基N-醯苯胺 酶解物的水解作用的能力為基礎的。在典型的Ki測定中，酶解物是在DMSO 中製備的，#稀釋在測定緩衝液中，後者由50mMHEPES,200mMNaCl組 成，pH7.5。每種酶解物的最終濃度列在下面。 一般說來，酶解物的濃度低 於用實驗方法測定的Km值。將供試化合物製成1.0mg/ml的DMSO溶液。 製備3種最終濃度的DMSO稀釋液，濃度跨度達200倍。在測定緩衝液中 製備酶溶液，濃度如下。
在典型的Ki測定中，向96孔板的每孔中吸移280mL酶解物溶液，10mL 供試化合物溶液，將板在37度分子裝置板讀數器中熱平衡超過15分鐘。 加入10mL等分試樣的酶引發反應，在405nm下記錄15分鐘內的吸光度增 加值。對應於不到10%總酶解物水解的數據用於計算。不含供試化合物的 樣本速度比率(吸光度的變化速率，為時間的函數)除以含有供試化合物的樣 本速度，以供試化合物嘗試的函數作圖。對數據進行線性回歸處理，計算 直線的斜率值。斜率的倒數是用實驗方法測定的Ki值。
凝血酶評價凝血酶活性的標準是水解酶解物N-琥祐醯 -Ala-Ala-Pro-Arg-對硝基N-醯苯胺的能力。在測定緩衝液中製備酶解物溶 液，濃度為32Mm(32mM遠小於Km 180mM)。最終的DMSO濃度是4.3°/。。 將純化的人a-凝血酶在測定緩衝液中稀釋至濃度為15nM。最終的試劑濃度 是(凝血酶"0.5nM，(酶解萃勿N-琥珀醯-Ala-Ala-Pro-Arg-對硝基N-醯苯 胺)32mM。
X因子(FXa):評價FXa活性的標準是水解酶解物鹽酸N-苯甲醯 -Ile-Glu-Gly-Arg-對硝基N-醯苯胺的能力。在測定緩衝液中製備酶解物溶液， 濃度為51Mm(遠小於Km=1.3mM)。最終的DMSO濃度是4.3%。將純化的 活化的X因子在測定緩衝液中稀釋至濃度為300nM。最終的試劑濃度是 (FXa)=10nM,(鹽酸N-苯曱醯-Ile-Glu-Gly-Arg-對硝基N-醯苯胺)-51nM。
纖溶酶評價纖溶酶活性的標準是水解N-對甲苯磺醯-Gly-Pro-Lys-對硝 基N-醯苯胺的能力。在測定緩衝液中製備酶解物溶液，濃度為37mM(遠小 fKm=243mM)。最終的DMSO濃度是4.3%。將純化的人纖溶酶在測定緩 衝液中稀釋至濃度為240nM。最終的試劑濃度是(纖溶酶"8nM, (N-對甲 苯磺醯-Gly-Pro-Lys-對硝基N-醯苯胺"37mM。
結果表明，本發明化合物是凝血酶的有效抑制劑。部分樣品抑制率列表 如下^_
樣品名 _Ki(M)_
凝血酶 X因子 纖溶,8-乙醯基-7-[2-(l-哌啶基)乙氧基]-4-色滿酮1.7xlCT51.9xl0-66.5x10-6
8-乙醯基-7-(節基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮鬥 1.5xlO陽4.2x
8-乙醯基-7-(4-嗎啉基)甲醯甲氧基-4-色滿酮1.9xl(T42.1xl(T53.5x10-3
8-乙醯基-7-(二甲胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮1.5x10-63.7xlCT52.3x10-4
8-乙醯基-7-(苄基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮2.1x10-4鬥1.4x10-4
8-乙醯基-7-(節基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮3.8xl(T31.8x
8-乙醯基-7-(節基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮2,5 x10-43.1xl(T3l.Ox鬥
8-乙醯基-7-(節基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮1.9xl0-68-乙醯基-7-(4-嗎啉基)甲醯甲氧基-4-色滿酮1.5x10-4
8-乙醯基-6-[2-(二甲基胺萄乙氧基]-4-色滿酮4.5X10-62Jx10-7
8-乙醯基-6-[2-(l-吡咯烷基)乙氧基]-4-色滿酮1.7x10;3.1xKT4
8-乙醯基-6-[2-(l-哌啶基)乙氧基]-4-色滿酮i.oxicr31.9x10"6.5x
阿斯匹林S.9xl0-27.8xl(T26.9xio-2
實施例47:大鼠體內血小板聚集抑制作用
藥品及製劑本發明化合物，以0.5。/。CMC配成混懸液供動物給藥用； 二磷酸腺苷(ADP)(Sigma )。
儀器PK121R型離心機，SPA-3型PPP血小板聚集儀。 試驗方法雄性Wistar大鼠，體重300克左右，經口灌胃給予硫酸氯 吡格雷及本發明化合物，劑量均為10mg/kg,給藥體積為10mL/kg, 2小時 後，乙醚麻醉，腹主動脈釆血，3.8%枸櫞酸鈉抗凝，全血與抗凝劑之比為9: 1， 1000rpm離心7分鐘，製備富血小板血漿(PPP)。以PPP調PRP,使其血 小板計數保持在2X106個/mL。取PRP加入測試杯，37度溫孵10分鐘。以 PRP調零，PPP調100。/。，以ADP(終濃度為5fiM)為誘導劑，按Borns比濁 法用SPA-3型PPP血小板聚集儀測定血小板聚集百分數，以t-檢驗進行統 計學比較。
體外ADP，膠原和凝血酶誘導的血小板聚集的抑制實驗 血小板分離從接到通知的健康志願者獲得人血。在1/6體積的ACD 中收集血液(2.5g檸檬酸鈉，1.5g檸檬酸和2.5g葡萄糖的100mLdH20)。室 溫下800xg離心15分鐘，去除富含血小板的血漿，在lmM乙醯水楊酸存 在下37度保溫60分鐘，並在室溫下1000xg離心10分鐘。將血小板沉澱 以2X108細胞/mL的密度用HEPES-緩衝的Tyrodes溶液(137mM NaCl， 2.7mMKCl， lmMMgC12, 3mMNaH2P04, 5mM葡萄糖，lOmMHEPES Ph7.4, 0.2%牛血清清蛋白和0.05U/mL三磷酸腺苷雙磷酸酶)重懸浮。
聚集研究通過測量37度下光集合度計中0.5mL攪拌的(900rpm)阿司 匹林處理的洗滌血小板，測定ADP誘導的血小板聚集。用0.5mL Hepes緩 衝的Tyrode緩衝液設定儀器基線。在聚集測定前，用2mM CaC12和lmg/mL 纖維蛋白原補充血小板懸浮液。加入指定濃度的ADP或其它激動劑，引發 血小板聚集，連續記錄至少8分鐘的光透射。當測試血小板聚集的抑制劑 時，在指定濃度的抑制劑中保溫血小板3-6分鐘，然後加入ADP或其它激 動劑，連續記錄至少8分鐘的反應。將數據擬合到四參數對數等式，從兩
17種聚集速率和各測定的最大聚集程度計算血小板聚集的激動劑和抑制劑的 能力。
結果可知，本發明的化合物能顯著抑制ADP,膠原或凝血酶誘導的血小 板聚集。因此，它們可以用來預防或治療因血小板聚集而引起的冠狀動脈 綜合症，心肌梗塞，心肌缺血等心腦血管疾病。部分樣品抑制ICs。列表如
下
樣品名IC5U(M)
ADP膠原凝血,
8-乙醯基陽7-[2-(l-哌啶基)乙氧基]-4-色滿酮2.3xl0-31.8xl0-43.4x|0—
8-乙醯基-7-(苄基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮3.5x10-3鬥
8-乙醯基-7-(4-嗎啉基)甲醯甲氧基-4-色滿酮鬥6.5 xl。-44.6x0-4
8-乙醯基-7-('-甲胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮4.2xl(T47.8,-4
8-乙醯基-7-(苄基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮鬥鬥1.8xl(T4
8-乙醯基-7-(苄基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮鬥 1.0x10—4鬥
8-乙醯基-7-(苄基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮6.5x1 (T41.9xl0-46.5xl0-4
8-乙醯基-7-(苄基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮1.5x10"4.2"0-4
8-乙醯基-7-〔4-嗎啉基)甲醯甲氧基-4-色滿酮3.5曙5鬥3.5xl(T3
8-乙醯基-6-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-4-色滿酮3.4x10"鬥 3.7xlO-2.3xl(T4
8-乙醯基-6-[2-(l-吡咯烷基)乙氧萄-4-色滿酮1.9x10-4鬥 2.5x10.1,4xl0-4
8-乙醯基-6-[2-(l-哌啶基)乙氧基]-4-色滿酮
8-乙醯基-6-[2-(4-嗎啉基)乙氧基]-4-色滿酮l.OxlO—4
8-乙醯基-6-[2-(l-哌啶基)乙氧基]-4-色滿酮1.8x10—41.9xl0-4
8-乙醯基-6-[2-(l-吡咯烷基)乙氧基]-4-色滿酮3.3xlOJ
8-乙醯基-5-〔苯基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮鬥4.5" O-3
8-乙醯基-5-[(2-氯)苯基胺基]甲醯甲氧基-4-色滿酮Uxl(T4鬥鬥
阿斯匹林2.1X1034.2xlCT26.8xl(T2
實施例48:對血小板粘附性的影響(膠原粘附法)
將25隻家兔隨機均分為5組，設空白對照組，本發明化合物的3個劑量 組及鹽酸噻氯匹定104mg/kg組。受試動物按上述劑量ig給藥每天1次，連 續3天，於末次給藥後1.5小時，常規在耳緣靜脈取血，製備PRP， PPP及 酸溶性膠原，在血小板聚集儀測定矽化比濁管內加入膠原前(膠原終濃度為 0.05mg/mL)後血小板數(以 PPP調節PRP使血小板數為 100，000-500，000/^iL)，以血小板粘附率為觀察指標，各給藥組與對照組進行 組間比較，t檢驗。
試驗結果表明，本發明化合物在所選擇劑量範圍內對家兔體外血小板粘 附性有明顯抑制作用。部分樣品血小板粘附率列表如下
樣品名抑制率(％)
8-乙醯基-7-[2-(l-哌啶基)乙氧基]-4-色滿酮30.878-乙醯基-7-(苄基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮38.32
8-乙醯基-7-(4-嗎啉基)甲醯甲氧基-4-色滿酮37.67
8-乙醯基-7-(二甲胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮31.56
8-乙醯基-7-(節基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮35.66
8-乙醯基-7-(節基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮30.47
8-乙醯基-7-(苄基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮45.09
8-乙醯基-7-(節基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮24.35
8-乙醯基-7-(4-嗎啉基)甲醯甲氧基-4-色滿酮44.73
8-乙醯基-6-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-4-色滿酮30.87
8-乙醯基-6-[2-(l-吡咯烷基)乙氧基]-4-色滿酮38.32
8-乙醯基-6-[2-(l-哌啶基)乙氧萄-4-色滿酮38.67
8-乙醯基-6-[2-(4—嗎啉基)乙氧基]-4-色滿酮42.56
8隱乙醯基-6-[2-(l-哌啶基)乙氧基]-4-色滿酮55.66
8-乙醯基隱6-[2-(l-吡咯烷基)乙氧基]-4-色滿酮51.97
8-乙醯基-5-〔苯基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮45.09
鹽酸噻氯匹定70.23
實施例49:在血栓性疾病中的應用
應用本發明化合物進行抗血栓作用實驗，證實其在血栓性疾病的防治中 有良好的作用，與肝素相比，其應用劑量小，效果更為明顯。 (1)抑制靜脈血栓形成
結紮大鼠下腔靜脈誘發靜脈血栓形成。模型形成2小時後靜脈注射給 藥。陰性對照組給予生理鹽水，陽性對照組給予肝素200-40(Vg/kg,治療組 給予本發明化合物10-200嗎/kg。給藥4小時後取出血栓，稱重。結果顯示 本發明化合物可明顯抑制靜脈血栓的形成，與肝素相比所需劑量更低。
名稱重量(mg)降低百分率(％)
模型組18.8
肝素14.721.8
8-乙醯基-6-[2-(l-哌啶基)乙氧基]-4-色滿酮7.957.9
8-乙醯基-6-[2-(l-吡咯垸基)乙氧基]-4-色滿酮7.560.1
8-乙醯基-5-沐基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮10.345.2
(2)抑制動脈血栓形成 用氣囊導管損傷家兔股動脈內皮細胞，並結紮損傷部位的血管，使局 部血流阻滯而誘發動脈血栓的形成。陰性對照組給予生理鹽水，陽性對照 組給予肝素200-100(Vg/kg,治療組給予本發明化合物10-200jig/kg。實驗結 果表明，本發明化合物可使動脈血栓形成率下降，並呈劑量相關性。
名稱重量(mg)降低白分率(％)
模型組16.8
19肝素 13.7 18.5
8-乙醯基-6-[2-(卜哌啶基)乙氧基]-4-色滿酮 8 9 47 9
8-乙醯基-6-[2-(]-吡咯烷基)乙氧基]-4-色滿酮 6.5 61.3
8-乙醜基-5-(苯基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮 u.3 32,7
(3)防治彌散性血管內凝血(DIC)
給家兔注射內毒素誘發DIC形成。靜脈注射本發明化合物可使血小板 計數降低，與對照組(生理鹽水)相比，具有顯著統計學差異。
名稱降低百分率(％)
8-乙醯基-7-(苄基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮55.7
8-乙醯基-7-(苄基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮]8.5
8-乙醯基-6-[2-(l-哌啶基)乙氧基]-4-色滿酮47.9
8-乙醯基-6-[2-(l-吡咯烷基)乙氧基]-4-色滿酮63.3
8-乙醯基-5-(苯基胺基)甲醯甲氧基-4-色滿酮37.7
對照組11.8
(4)冠狀動脈成形術(PTCA)後再栓塞的防治
損傷狗的左冠狀動脈前降支內皮細胞，誘發阻塞性冠脈血栓形成。應用 本發明化合物作為鏈激酶的附加用藥，能促進冠脈再通，抑制再栓塞，減 少殘餘血栓的重量，並呈劑量依賴性。與肝素相比，其再通率高，發生再 通的時間較短，再灌注的持續時間較長，且殘留的血栓重量較輕。
斜爾_重量(mg) 降低百分率(％)
模型糹且 肝素
8-乙醯基-6-[2-(l-哌啶基)乙氧基]-4-色滿酮(小劑量) 8-乙醯基-6-[2-(l-哌啶基)乙氧基]-4-色滿酮(中劑量) 8-乙醯基-6-[2-(l-哌啶基)乙氧基]-4-色滿酮(大劑量)
16.6
13.7 12.9 9.3
17.5 22.3 44.0 54.8
(5)小鼠肺血栓形成試驗 將100隻小鼠隨機均分5組，設空白對照組，本發明化合物的3個劑量
組及鹽酸噻氯匹定100mg/kg組。灌胃給藥，每天l次，連續3天，於末次 給藥後1.5小時，將小鼠尾靜脈注射膠原和腎上腺素強複合誘導劑 5.0mL/kg(膠原2.5mg/kg+腎上腺素2mg/kg),注射速度為O.lmL/5秒，觀察
小鼠3分鐘內死亡情況，以每組死亡動物數及保護率為觀察指標。試驗結 果經X2檢驗，表明在選擇劑量範圍內本發明化合物對膠原和腎上腺素誘導 小鼠肺血栓致死呈明顯保護作用。
名稱死亡只數保護率(％)
空A組16
鹽酸噻氯匹定1225.08-乙醯基-6-[2-(l-哌啶基)乙氧基]-4-色滿酮(小劑量)u 312 8-乙醯基-6-[2-(l-哌啶基)乙氧基]-4-色滿酮(中劑量)9 43.7 8-乙醯基-6-[2-(l-哌啶基)乙氧基]-4-色滿酮(大劑量)7 56.3
2權利要求
1. 由下列通式表示的芳環上取代8-乙醯基-4-色滿酮類化合物，其藥用鹽或其立體異構體和前藥其中X可以選自CH2或者C＝O；當X為CH2時，R1R2獨立的選自氫，甲基或乙基，或R1，R2與它們相連的氮原子一起組成吡咯烷基，甲基吡咯烷基，二甲基吡咯烷基，哌啶基，嗎啉基，或六亞甲基亞胺基環；當X為C＝O時，R1R2獨立的選自氫，甲基或乙基，或R1，R2與它們相連的氮原子一起組成吡咯烷基，甲基吡咯烷基，二甲基吡咯烷基，哌啶基，嗎啉基，或六亞甲基亞胺基環；從一至四個碳原子的烷基基團；和取代或未取代的芳香基團。
2. —種藥物組合物，其中含有權利要求1的化合物以及藥學可接受載體 或稀釋劑。
3. 權利要求1所述的化合物在製備預防或治療與血小板聚集有關的疾病 的藥物中的應用。
4. 根據權利要求1所述的化合物，其特徵在於以有效量的該結構式的 化合物接觸血小板來抑制血小板聚集。
5. 如權利要求3所述的應用，其特徵在於所述的與血小板聚集有關的 疾病包括血栓形成，動脈硬化疾病的原發性動脈血栓併發症，動脈粥 樣硬化疾病幹預的血栓併發症，手術或機械損傷的血栓併發症，機械 性誘導的血小板活化，分流堵塞，血管損傷和炎症繼發性的血栓形成， 彌散性血栓/血小板消耗性成分的適應症，靜脈血栓形成，冠狀動脈血 栓形成，動脈粥樣硬化和動脈硬化的病理作用，血液和血產品在儲藏 過程中的血小板聚集和凝塊形成，超聚集性質的慢性或急性狀態，動 脈或靜脈在溶纖維蛋白治療後的重新阻塞，與體外循環有關的血小板 粘附，與溶栓治療有關的血栓併發症，與冠狀和其它血管成形術有關 的血栓併發症，或與冠狀動脈分流術有關的血栓併發症。
6. 如權利要求5所述的應用，其特徵在於所述的血栓形成是不穩定性 心絞痛，冠狀動脈血管成形術和心肌梗塞；所述動脈硬化疾病的原發 性動脈血栓併發症是血栓性中風，周圍血管疾病和沒有血栓溶解的心 肌梗塞；所述動脈粥樣硬化疾病幹預的血栓併發症是血管成形術，動 脈內膜切除術，支架旋轉，冠狀和其它血管移植手術；所述手術或機 械損傷的血栓併發症是手術或偶然創傷後的組織補救；所述機械性誘 導的血小板活化是導致微血栓的心肺分流術和血製品儲藏；所述分流 堵塞是腎透析和血漿置換；所述血管損傷和炎症繼發性的血栓形成是 血管炎，動脈炎，腎小球腎炎和器官移植排斥；所述彌散性血栓/血小 板消耗性成分的適應症是播散性血管內凝結，血栓性血小板減小性紫癜，溶血性尿毒症綜合症，肝素誘導的血小板減少症和先兆子癇/子癇；所述靜脈血栓形成是深靜脈血栓，靜脈栓塞疾病，血液學病況以及偏頭痛；和所述冠狀動脈血栓形成是與不穩定性心絞痛，冠狀動脈血管 成形術和急性心肌梗塞有關。
7. 如權利要求6所述的應用，其特徵在於，所述血液學病況是血小板增 多症和紅細胞增多症。
8. 如權利要求7所述的應用，其特徵在於，所述動脈硬化和動脈粥樣硬化的所述病理作用是動脈粥樣硬化，急性中風和慢性不穩定性心絞痛， 不穩定性心絞痛，短暫性局部缺血發作和中風，周圍血管疾病，動脈 血栓形成，先兆了癇，栓塞，血管成形術，頸動脈內膜切除術和血管移植吻合術後的再狹窄或突然閉合；所述超聚集性的慢性或急性狀態 是由於DIC，敗血症，手術或感染性休克，手術後和產後創傷，心肺 分流術，不兼容輸血，胎盤早期脫離，血栓性血小板減少性紫癜，蛇 毒和免疫疾病導致的；和通過體內施用所述化合物和纖維蛋白溶解劑 抑制所述纖維蛋白溶解治療後動脈或靜脈的重新阻塞。
全文摘要
本發明屬於醫藥技術領域，涉及8-乙醯基色滿酮類化合物及其類似物的醫藥用途。8-乙醯基色滿酮類化合物及其類似物和藥學上適用的酸加成的鹽作為血小板聚集抑制劑，其結構通式如(I)所示。在結構式中，其中X可以選自CH2或者C＝O；當X為CH2時，R1R2獨立的選自氫，甲基或乙基，或R1R2與它們相連的氮原子一起組成吡咯烷基，甲基吡咯烷基，二甲基吡咯烷基，哌啶基，嗎啉基，或六亞甲基亞胺基環；當X為C＝O時，R1R2獨立的選自氫，甲基或乙基，或R1，R2與它們相連的氮原子一起組成吡咯烷基，甲基吡咯烷基，二甲基吡咯烷基，哌啶基，嗎啉基，或六亞甲基亞胺基環；從一至四個碳原子的烷基基團；和取代或未取代的芳香基團。
文檔編號C07D311/22GK101486700SQ200910010318
公開日2009年7月22日 申請日期2009年2月9日 優先權日2009年2月9日
發明者劉曉平, 劉玉蘭, 宋愛華, 張麗娟, 穎 王, 春 胡, 董婷霞, 詹華強, 金麗萍, 黃二芳 申請人:瀋陽藥科大學