一種從虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法
2023-05-10 04:24:16
專利名稱：一種從虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法
技術領域：
本發明涉及一種從虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法，屬於天然產物化學技術領域。
背景技術：
虎杖苷(polydatinl又名白藜蘆醇苷，其結構式如下
白藜蘆醇(resveratrol)，結構式如下
白藜蘆醇是從蓼科植物虎杖的根和根 莖及葡萄科葡萄的皮中提取出來的一種黃酮類物質。白藜蘆醇在虎杖藥材中主要以苷的形式存在，少量以游離的白藜蘆醇並存，是虎杖藥材中的主要活性成分。虎杖苷及白藜蘆醇具有多種生物活性。如抗氧化、抗腫瘤、改善微循環、降血脂、降血壓等。目前，從虎杖中提取白藜蘆醇的方法現主要包括利用藥材自身酶酶解後提取、外加酶酶解後提取或者先提取再加酶酶解等如專利CN1251361A、CN101698634A, CN101338327、CN1896255A等，提取溶劑大多為有機溶劑，這些方法都需經過酶解將虎杖苷轉化為白藜蘆醇。但酶解過程溫度需恆定，這樣才能保證酶解充分，且酶解佔用生產空間較大，酶解時間長，且發酵好的藥材如果不及時處理，就會導致發酵物中白藜蘆醇的含量降低，這就需要耗費較大的人力物力，勢必導致生產效率降低，成本增高。專利CN1513823 A公開了一種超臨界CO2提取白藜蘆醇的工藝，其採用超臨界CO2 萃取工藝，並用無水乙醇和2-丙醇混合溶劑作為改性劑。此法工藝簡單、生產周期短、溶劑用量減少、成本低、收率高，但是超臨界(X)2萃取技術目前用於規模化生產尚有一定難度，只能停留在實驗階段。專利CN1546503A公開了一種虎杖苷和白藜蘆醇的新製備方法和專利 CN101397242A公開一種從新鮮虎杖中提取、純化白藜蘆醇的工藝方法，由於虎杖中含有的白藜蘆醇含量很低，絕大部分是以苷的形式存在以虎杖中。此種製備方法因沒有把苷轉化出來，導致收率低，損失大。且前者用聚醯胺層析分離，但聚醯胺粒度較細，柱子易堵塞。
專利CN17M495A公開一種從中草藥植物虎杖中製備白藜蘆醇的方法，通過乙醇溶液提取，濃縮，乙酸乙酯萃取後用纖維素作為固定相進行柱層析，由於操作過程中需用超聲波來超聲溶解浸膏才能進行萃取，且乙酸乙酯萃取過程乳化現象很明顯，損失大。儘管首次將纖維素作為固定相，但是還是難於推廣使用。專利CN1962592A公開一種從中藥虎杖中分離純化白藜蘆醇苷和白藜蘆醇的方法。用乙醇提取，大孔吸附樹脂柱預分離，再進行高速逆流色譜法純化，這一方法有機溶劑用量大，耗時長，成本高。專利CN1513822A公開了一種從虎杖中提取白藜蘆醇的工藝，其首先採用加入專用微生物進行生物轉化提高虎杖白藜蘆醇含量，利用40 %乙醇與4-甲基-2-戊醇混合劑作為萃取溶劑，進行微波提取。本發明雖然簡化了工藝和操作流程，縮短生產周期，降低成本， 但是微波提取技術僅限於實驗室操作。專利CN101348805A公開了一種提取白藜蘆醇新工藝。鹼提取，提取液經過調pH 值、用絮凝劑、澄清劑處理、酶解、過濾，沉澱物乾燥後可得含量50%白藜蘆醇；進一步將其用稀鹼液洗，再用水洗至中性，然後溶於大量熱水中，將水液在室溫下放置，析出沉澱，過濾乾燥後即得到白藜蘆醇含量為98%的產品。鹼提取液粘度大，過濾時間長，濾液損失大，能耗高，周期長，操作繁瑣。專利CN1621401A公開一種從虎杖中提取高純度白藜蘆醇的方法，是通過不同極性的溶劑經過多次回流提取而得，這種方法工藝複雜，溶劑量消耗大，生產周期長，溶劑回收困難。專利CN1384088A公開了一種從虎杖植物中提取白藜蘆醇的製備方法，通過有機溶劑提取出虎杖中的虎杖甙、經有機合成手段使其水解富集，將其與複合填充料按其配比、 在專用的高壓層析柱設備中加壓後、利用高效液相色譜原理進行高壓柱層析分離，用氯仿及乙酸乙酯梯度洗脫。本法操作繁瑣，生產周期長，且洗脫過程使用毒性極大的氯仿。專利CN1760166A公開一種從虎杖中提取純化白藜蘆醇的新方法，該方法採用水提取，再將提取物中白藜蘆醇甙通過酸催化水解反應富集出來，而後將富集產物以一定配比上預先處理好的大孔吸附樹脂柱進行分離純化，用水和乙醇洗脫。虎杖苷微溶於水，白藜蘆醇難溶於水，用水做為溶劑提取，虎杖苷提取不完全，且原料中的白藜蘆醇未能提取出來。近年來，有專利報導，用鹼溶液進行提取，其缺點就是鹼提取液黏度大，過濾速度很慢，易堵塞，過濾耗時長。專利CN101811939A公開一種罐組動態逆流提取白藜蘆醇的工藝，採用鹼提酸水解再醇沉、活性碳脫色出去部分雜質，在過樹脂柱和矽膠柱。本發明由於採用罐組提取，設備佔用空間大，提取溶劑為鹼水，鹼提液黏度較大，過濾困難，且水解後量大，後續處理設備壓力大，能耗高。Cm01805755A公開一種從虎杖中提取純化白藜蘆醇的工藝，其方法是利用虎杖的自身酶進行酶解後，發酵物經鹼提酸沉，過柱。其工藝存在酶解時間長，酶解不充分，鹼提液難於過濾的缺點。為解決上述存在的問題，本發明提供了一種從植物虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法，該方法不需酶解，柱層析，直接用醇提取得到虎杖苷和白藜蘆醇，然後加酸把虎杖苷上的糖苷鍵分解，再加鹼中和多餘的酸，放置析晶。此法操作簡單，溶劑消耗小，生產周期短，成本低，收率高，適用於工業化大生產。
發明內容
本發明所述的方法是以植物虎杖根莖為原料，經提取、濃縮、水解、析晶、過濾、乾燥而製得。操作步驟如下
a.將虎杖根莖粉碎。b.按1 :8 1 :20 (m/v)虎杖粗粉與60 90%甲醇(乙醇)的比例對虎杖進行回
流提取。c.濃縮至無醇味。d.濃縮液中加酸和穩定劑進行攪拌水解。e.調節水解液pH至中性。f.靜置析晶，過濾，乾燥晶體。其中步驟a中粉碎粒度過10目篩，得粗粉。其中步驟b中回流提取時間為1 3h、0. 5 2h、0. 5 lh，提取三次，提取溫度控制在50°C 85°C之間。其中步驟d所用的酸為硫酸、鹽酸、乙酸、磷酸中的任一種，穩定劑為檸檬酸鈉，水解溫度為50°C 80°C之間，水解時間0. 5 3小時。濃縮液酸穩定劑=100 :0. 5 5 1
其中步驟e中調PH所用的試劑為氫氧化鈉、碳酸氫鈉和碳酸鈉、氧化鈣、氫氧化鈣的固體或溶液。
具體實施例方式
以下實施例用於進一步說明本發明，但本發明不限於下列實施例所包含的內容。實施例一取虎杖粗粉500g，加入65%的甲醇5000ml，在80°C 85°C回流提取3 小時，過濾，收集第一次提取液。濾渣中加入65%的甲醇5000ml，在80°C 85°C回流提取2 小時，過濾，收集第二次提取液。濾渣中加入65%的甲醇5000ml，在80°C 85°C回流提取 1小時，過濾，收集第三次提取液。合併三次提取液，減壓濃縮至無醇味。按濃縮液、鹽酸與檸檬酸鈉的體積比100 3 1的比例加入鹽酸和檸檬酸鈉，在75 80°C水浴中攪拌水解1 小時，放冷，加10%氫氧化鈉溶液調節pH至中性，放置過夜結晶，過濾，收集晶體進行減壓乾燥，得白藜蘆醇8. Ig0 HPLC測定含量為51. 18%。實施例二 取虎杖粗粉500g，加入70%的甲醇4000ml，在80°C 85°C回流提取2 小時，過濾，收集第一次提取液。濾渣中加入70%的甲醇4000ml，在80°C 85°C回流提取2 小時，過濾，收集第二次提取液。濾渣中加入70%的甲醇4000ml，在80°C 85°C回流提取1 小時，過濾，收集第三次提取液。合併三次提取液，減壓濃縮至無醇味。按濃縮液、硫酸與檸檬酸鈉的體積比100 2 1的比例加入硫酸和檸檬酸鈉，在70 80°C水浴中攪拌水解2小時，放冷，加5%氫氧化鈉溶液調節pH至中性，放置過夜結晶，過濾，收集晶體進行減壓乾燥， 得白藜蘆醇8. lg, HPLC測定含量為51. 34%。實施例三取虎杖粗粉500g，加入80%的甲醇9000ml，在80°C 85°C回流提取2 小時，過濾，收集第一次提取液。濾渣中加入80%的甲醇9000ml，在80°C 85°C回流提取2 小時，過濾，收集第二次提取液。濾渣中加入80%的甲醇9000ml，在80°C 85°C回流提取1 小時，過濾，收集第三次提取液。合併三次提取液，減壓濃縮至無醇味。按濃縮液、鹽酸與檸檬酸鈉的體積比100 3 1的比例加入鹽酸和檸檬酸鈉，在70 80°C水浴中攪拌水解2小時，放冷，加氫氧化鈉固體調節PH至中性，放置過夜結晶，過濾，收集晶體進行減壓乾燥，得白藜蘆醇8. 5g，HPLC測定含量為51. 75%。實施例四虎杖粗粉500g，加入85%的甲醇7000ml，在80°C 85°C回流提取2小時，過濾，收集第一次提取液。濾渣中加入85%的甲醇7000ml，在80°C 85°C回流提取2小時，過濾，收集第二次提取液。濾渣中加入85%的甲醇7000ml，在80°C 85°C回流提取1小時，過濾，收集第三次提取液。合併三次提取液，減壓濃縮至無醇味。按濃縮液、磷酸與檸檬酸鈉的體積比100 3 1的比例加入磷酸和檸檬酸鈉，在70 80°C水浴中攪拌水解2小時， 放冷，加5%碳酸氫鈉溶液調節pH至中性，放置過夜結晶，過濾，收集晶體進行減壓乾燥，得白藜蘆醇8. 7g，用HPLC測定含量為50. 46%。實施例五虎杖粗粉^g，加入85%的甲醇50L，在80°C 85°C回流提取2小時， 過濾，收集第一次提取液。濾渣中加入85%的甲醇50L，在80°C 85°C回流提取2小時，過濾，收集第二次提取液。濾渣中加入85%的甲醇50L，在80°C 85°C回流提取1小時，過濾， 收集第三次提取液。合併三次提取液，減壓濃縮至無醇味。按濃縮液、鹽酸與檸檬酸鈉的體積比100 4 1的比例加入鹽酸和檸檬酸鈉，，在70 80°C攪拌水解2小時，放冷，加5%氫氧化鈉溶液調節PH至中性，放置過夜結晶，過濾，收集晶體進行減壓乾燥，得白藜蘆醇91g， 用HPLC測定含量為51. 27%。實施例六虎杖粗粉500kg，加入80%的甲醇5000L，在80°C 85°C回流提取2小時，過濾，收集第一次提取液。濾渣中加入80%的甲醇5000L，在80°C 85°C回流提取2小時，過濾，收集第二次提取液。濾渣中加入80%的甲醇5000L，在80°C 85°C回流提取1小時，過濾，收集第三次提取液。合併三次提取液，減壓濃縮至無醇味。按100L濃縮液加入鹽酸3L，加入檸檬酸鈉1kg，在70 80°C攪拌水解2小時，放冷，加5%氫氧化鈉溶液調節pH 至中性，放置過夜結晶，過濾，收集晶體進行減壓乾燥，得白藜蘆醇8. 8kg, HPLC測定含量為 52. 34%ο實施例七虎杖粗粉500kg，加入85%的甲醇4000L，在80°C 85°C回流提取3小時，過濾，收集第一次提取液。濾渣中加入85%的甲醇4000L，在80°C 85°C回流提取2小時，過濾，收集第二次提取液。濾渣中加入85%的甲醇4000L，在80°C 85°C回流提取1小時，過濾，收集第三次提取液。合併三次提取液，減壓濃縮至無醇味。按濃縮液、鹽酸與檸檬酸鈉的體積比100 3 1的比例加入鹽酸和檸檬酸鈉，在70 75°C攪拌水解2小時，放冷， 加氫氧化鈉固體調節PH至中性，放置過夜結晶，過濾，收集晶體進行減壓乾燥，得白藜蘆醇 8. 5kg，用HPLC測定含量為51. 92%。實施例七虎杖粗粉500kg，加入85%的甲醇5500L，在80°C 85°C回流提取2小時，過濾，收集第一次提取液。濾渣中加入85%的甲醇5500L，在80°C 85°C回流提取2小時，過濾，收集第二次提取液。濾渣中加入85%的甲醇5500L，在80°C 85°C回流提取1小時，過濾，收集第三次提取液。合併三次提取液，減壓濃縮至無醇味。按濃縮液、硫酸與檸檬酸鈉的體積比100 3 1的比例加入硫酸和檸檬酸鈉，在70 75°C水浴中攪拌水解2小時， 放冷，加氫氧化鈉固體調節PH至中性，放置過夜結晶，過濾，收集晶體進行減壓乾燥，得白藜蘆醇8. 7kg，用HPLC測定含量為51. 51%。
權利要求
1.一種從虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法，包括以下操作步驟將虎杖根莖粉碎， 加醇進行回流提取，提取液濃縮至無醇味，加酸和穩定劑進行加熱水解，水解液調PH至中性，靜置析晶，過濾，乾燥晶體。
2.根據權利要求1所述從植物虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法，其特徵在於虎杖需粉碎為粗粉，粒度過10目篩。
3.根據權利要求1所述從植物虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法，其特徵在於虎杖不需進行酶解，直接以已粉碎的虎杖根莖為原料加醇進行提取。
4.根據權利要求1所述從植物虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法，其特徵在於提取溶劑為60 90%甲醇或乙醇。
5.根據權利要求1所述從植物虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法，其特徵在於虎杖原料與提取溶劑用量的比例控制在1 :8 1 :20 (m/v)根據權利要求1所述從植物虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法，其特徵在於需提取三次，提取時間分別是1 3h、0. 5 2h、0. 5 lh，提取溫度需控制在50°C 85°C之間。
6.根據權利要求1所述從植物虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法，其特徵在於水解所用的酸為硫酸、鹽酸、醋酸、磷酸中的任一種，所用穩定劑為檸檬酸鈉，其水解溫度應控制在 50°C 80°C之間，水解時間也應控制0. 5 3小時。
7.根據權利要求1所述從植物虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法，其特徵在於濃縮液酸穩定劑的用量為100 :0. 5 5 :1。
8.根據權利要求1所述從植物虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法，其特徵在於調PH所用的試劑為氫氧化鈉、碳酸氫鈉和碳酸鈉、氧化鈣、氫氧化鈣的固體或溶液。
全文摘要
本發明所述一種從虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法。該方法包括粉碎、提取、濃縮、水解、析晶、過濾、乾燥等步驟。該方法不需酶解、柱層析，直接用甲醇(乙醇)從虎杖中將虎杖苷及白藜蘆醇提取出來，然後加酸把虎杖苷上的糖苷鍵進行分解，再加鹼中和多餘的酸，而得到含量大於50％的白藜蘆醇的方法。本發明不經柱層析，溶劑消耗小，操作簡單，生產周期短、成本低，收率高，適用於工業化大生產。
文檔編號C07C37/055GK102320934SQ20111026648
公開日2012年1月18日 申請日期2011年9月9日 優先權日2011年9月9日
發明者嚴紹華, 李威, 李選民, 許育海 申請人:四川天予植物藥業有限公司