蜂產品中多類農獸藥殘留同時檢測的方法

2023-05-10 14:11:21

專利名稱：：蜂產品中多類農獸藥殘留同時檢測的方法
技術領域：
：本發明涉及蜂產品中多類農獸藥殘留同時檢測的方法，具體涉及蜂蜜或蜂王漿等蜂產品中磺胺類、喹諾酮類、大環內酯類、林可胺類、硝基咪唑類、e-內醯胺類、四環素類、氯黴素類、磺胺增效劑類、殺蟲脒，三唑醇等ii大類農獸藥殘留的同時檢測方法。
背景技術：
：目前獸藥殘留檢測仍然是國內外設立技術壁壘的主要手段，蜂產品、水產品等是我國重要的動物源性出口創匯產品，是歐盟等發達國家關注的重點。目前，國內外有關多殘留分析研究主要是農藥殘留。農藥多為非水溶性的非極性和弱極性化合物，前處理過程有一定的相似性。國內外都有相關的超過百種的農藥多殘留檢測報導。而對於動物源性產品中藥物殘留檢測的方法，主要還是以按類分別分析的方式研發。以蜂蜜為例，國內外有關蜂蜜中各種藥物殘留檢測的國標就有近20種之多，也有許多的文獻報導蜂產品中各種藥物殘留檢測的方法，但對於不同類抗生素藥物很少放在一起進行研究。這是國為各種不同用途的獸用抗生素，其化學分子結構相差較大，性質差異也較大，進行多殘留同時分析有一定的難度。目前國內的獸藥多殘留檢測，多為同類藥物的多殘留檢測，不同種類的獸藥多殘留檢測一次前處理測定的不多。目前，企業在出口蜂產品、水產品等動物源性產品時，需要進行大量的檢測監控，以蜂蜜為例，一個企業完成全套的藥物殘留的檢測需要支付萬元以上的費用，抗生素的檢測成為出口企業的負擔之一。
發明內容本發明的目的是提供一種方便可靠、選擇性好、靈敏度高的蜂產品中多類農獸藥殘留具體是磺胺類、喹諾酮類、大環內酯類、林可胺類、硝基咪唑類、e-內醯胺類、四環素類、氯黴素類、磺胺增效劑類、殺蟲脒，三唑醇等11大類藥物殘留的同時檢測方法，以簡化蜂產品中的各類獸藥殘留的檢測程序。為了實現上述目的，本發明採用如下技術方案。一種蜂產品中磺胺類、喹諾酮類、大環內酯類、林可胺類、硝基咪唑類、e-內醯胺類、四環素類、氯黴素類、磺胺增效劑類、殺蟲脒，三等丄1大類藥物殘留的檢測方法，包括一下步驟(1)蜂產品樣品中加入提取液A和B混合均勻，提取農獸藥殘留；所說的A為1.0-10%重量濃度的三氯乙酸或高氯酸，所說的B為0.05-1.0mol/L濃度的醋酸鹽、磷酸鹽或硼酸鹽溶液，控制pH值4.5-9.0;提取液A、B的加入量分別為樣品重量的O.2-IO倍；(2)將步驟(1)的混合物離心過濾，收集濾液；(3)濾液加入固相萃取柱中萃取，洗脫，棄去流出液，萃取柱吹乾，然後用2g/L草酸-甲醇溶液洗柱，洗脫液用甲醇水溶液定容；(4)將定容樣品溶液用液相色譜-串聯質譜進行分析測試，測得樣品的色譜峰；(5)將測得的色譜峰與各已知藥物的標準色譜峰對照，準定所檢出藥物的具體名稱。上述步驟(3)所說固相萃取柱優選為HLB(500mg，6mL)或C18(lg，6mL)。上述步驟(3)的定容樣品在分析測試前過平均孔徑為0.45txm的濾膜，除去微細雜質。由於蜂蜜或王漿等蜂產品中含有大量的糖、蛋白和其它有機物等雜質，幹擾較多，本發明採用強酸作為蛋白變性試劑，通過加入緩衝鹽溶液控制pH值。所控制的pH值滿足多種藥物在固相萃取柱上的保留條件，從而使多種藥物殘留可同時一次提取。本方法只需對品樣進行一次前處理，即可提取磺胺類、喹諾酮類、大環內酯類、林可胺類、硝基咪唑類、e-內醯胺類、四環素類、氯黴素類、磺胺增效劑類、殺蟲脒，三唑醇等11大類60多種獸藥的藥物殘留，然後通過液相色譜-電噴霧串聯質譜法進行正離子同時檢測和負離子檢測，或正負離子同時檢測，通過測得的樣品中的色譜峰與各藥物已知的標準色譜峰對照，準定所檢出藥物的具體名稱。綜上所述，本方法快速、簡單，選擇性好，靈敏度高，測定低限能滿足目前世界各國對蜂產品中藥物殘留的要求，採用內標法定量，解決了蜂產品中部分獸藥的基質效應問題，定量準確。樣品溶液經液相色譜串聯質譜多反應監測選擇離子分析，經內標校正後，回收率在60%-120%，相對標準偏差RSD《15%。與現有的分類檢測方法相比，分析效率提高至少5倍，檢測成本約為原來的10%。具體實施例方式實施例l蜂蜜樣品的農獸藥殘留檢測準確稱取蜂蜜樣品5.00g(±0.05g)於50mL離心管中，加入10mL為2%濃度的三氯乙酸溶液，渦旋混勻後，再加入0.5mol/L醋酸鈉溶'液5mL，控制溶液的pH值4.5;離心過濾後，加入經5ml甲醇和5iiiL水活化的HLB固相萃取柱中，流速控制在1-2cl/s，流完後，用5mL水洗離心管和貯液管並過柱，棄去全部流出液。在65kPa的負壓下，減壓抽乾10min，最後用0.2%草酸-甲醇洗脫，收集洗脫液於10mL試管中，於45。C用氮氣吹乾儀吹乾吹乾萃取柱，用30%甲醇溶液定容至1.0mL，過平均孔徑為0.45um的濾膜，收集濾液入進樣瓶中，供液相色譜-質譜儀測定。藥物標準工作溶液在表1和表2設定的液相色譜-質譜條件下分別進樣，以樣品峰面積與內標面積比值為縱坐標，工作溶液濃度(ng/mL)為橫坐標，繪製出6點標準工作曲線，用標準工作曲線對樣品進行定量，樣品溶液中藥物的響應值均應在儀器測定的線性範圍內。在上述色譜條件下，樣品中是否存在某種藥物，需滿足如下條件該樣品出現的色譜峰的保留時間與標準藥物保留時間相差不超過土2.5%，該色譜峰所對應的藥物在表3中的質譜定性離子的豐度比與標準溶液中藥物的離子豐度比相匹配，則確定為樣品中含有該藥物。表3為各種藥物的母離子、子離子和碰撞能量。在表1和表2設定的色譜條件下，陰性樣品添加標加標實驗的回收率範圍見表4。實施例2王漿樣品的農獸藥殘留檢測準確稱取蜂王槳2.00g±0.05g或乾粉1.00g於50mL離心管中，加入4%濃度的高氯酸溶液10mL,渦旋混勻後，再加入0.5mol/L的磷酸鈉溶液5mL，控制pH值7.4;離心過濾後，加入經5ml甲醇和5mL水活化的C18固相萃取柱，流速控制在l-2d/s，流完後，用5mL水洗滌離心管和貯液管並過柱，棄去全部流出液。在65kPa的負壓下，減壓抽乾10min，最後用2g/L的草酸-甲醇洗脫，收集洗脫液於10mL試管中，於45'C下，用氮氣吹乾儀吹乾吹乾萃取柱，用是3(^甲醇溶液定容至1.0mL，過平均孔徑為0.45um的濾膜，收集濾液到進樣瓶中，供液相色譜-質譜儀測定。陰性樣品添加標回收的回收率檢測結果如表4。藥物標準工作溶液的液相色譜-串聯質譜典型條件見表1和表2。表1質譜正離子模式下的儀器條件參數tableseeoriginaldocumentpage5tableseeoriginaldocumentpage6表3定性離子和定量離子的選擇tableseeoriginaldocumentpage7tableseeoriginaldocumentpage8tableseeoriginaldocumentpage9tableseeoriginaldocumentpage10tableseeoriginaldocumentpage11權利要求1.蜂產品中多類農獸藥殘留同時檢測的方法，其特徵是包括一下步驟(1)蜂產品樣品中加入樣品提取液A和B混合均勻，所說的A為1.0-10％重量濃度的三氯乙酸或高氯酸，所說的B為0.05-1.0mol/L的醋酸鹽、磷酸鹽或硼酸鹽溶液，控制pH值4.5-9.0；提取液A、B的加入量分別為樣品重量的0.2-10倍；(2)將步驟(1)的混合物離心過濾，收集濾液；(3)濾液加入固相萃取柱中萃取，洗脫，棄去流出液，萃取柱吹乾，然後用2g/L草酸-甲醇溶液洗柱，洗脫液用甲醇水溶液定容；(4)將定容樣品溶液用液相色譜-串聯質譜進行分析測試，測得樣品的色譜峰；(5)將測得的色譜峰與各已知藥物的標準色譜峰對照，根據保留時間和質譜離子的豐度確定所檢出藥物的具體名稱。2.根據權利要求l所述的蜂產品中多類農獸藥殘留同時檢測的方法，其特徵是步驟(3)所說固相萃取柱優選為HLB或C18。3.根據權利要求1或2所述的蜂產品中多類農獸藥殘留同時檢測的方法，其特徵是步驟(3)的定容樣品在分析測試前過平均孔徑為0.45um的濾膜，除去微細雜質。全文摘要本發明涉及蜂產品中多類農獸藥殘留同時檢測的方法，樣品加入提取液三氯乙酸或高氯酸和提取液醋酸鹽、磷酸鹽或硼酸鹽溶液，控制pH值4.5-9.0；離心，濾液入固相萃取柱中萃取，洗脫並吹乾萃取柱，用草酸-甲醇溶液洗柱，洗脫液用甲醇水溶液定容，入液相色譜-串聯質譜分析測試，所得的色譜峰與各已知藥物的標準色譜峰對照，根據保留時間和質譜離子的豐度確定所檢出藥物的具體名稱。本方法只需對品樣進行一次前處理，即可同時提取磺胺類、喹諾酮類、大環內酯類、林可胺類、硝基咪唑類、β-內醯胺類、四環素類、氯黴素類、磺胺增效劑類、殺蟲脒，三唑醇等11大類60多種獸藥的藥物殘留，分析效率高，檢測成本大降低。文檔編號G01N30/00GK101358953SQ20081019588公開日2009年2月4日申請日期2008年9月18日優先權日2008年9月18日發明者濤丁,斌吳,張曉燕,濤彭,徐錦忠,宏林,沈崇鈺,原蔣,陳惠蘭,陶宏錦申請人:中華人民共和國江蘇出入境檢驗檢疫局