光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在製備防治大菱鮃紅嘴病菌劑中的應用的製作方法
2023-04-28 06:40:56 3
專利名稱：光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在製備防治大菱鮃紅嘴病菌劑中的應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於生物技術領域，涉及菌類的應用，特別涉及光合細菌和枯草芽孢桿菌 在製備防治大菱鮃紅嘴病菌劑中的應用。
背景技術：
大菱鮃是原產於歐洲沿海的一種名貴比目魚，其身體扁平近似圓形，雙眼位於身 體左側，有眼側呈青褐色，有點狀黑色素和少量皮刺，無眼側光滑呈白色，背鰭與臀鰭無硬 刺，很長，頭部及尾鰭均較小，身體中部肉厚，內臟團小。大菱鮃自然分布於大西洋東側歐洲 沿岸，常見於北海和波羅地海。它具有適應低水溫生活、生長速度快、肉質好、養殖和市場潛 力大等優點，相繼成為歐洲各國開發的優良海水養殖魚類之一。1992年被引進我國，現已 成為我國北方沿海重要的養殖品種。但是伴隨著養殖範圍的擴大和養殖密度的增加，致使 多寶魚的病害問題日趨嚴重，給養殖業造成了巨大損失。其中「紅嘴病」，主要危害50-150g 魚種，主要症狀表現為病魚吻端及腹面上頌出血，部分魚鰓蓋有出血的潰爛小凹洞，口腔 內出血，部分病魚眼睛腫大突出、挑破外膜內有大量膿液，腸道充血無食物，腸道末端有少 量粘稠液體，肝臟充血、色暗淡呈糜散狀，脾臟腫大發紅。在治療過程中，養殖戶為追求經濟 效益，胡亂用藥等現象時有發生，致使農藥殘留問題日趨嚴重。如何進行健康養殖，便成為 的水產界亟待解決的問題。光合細菌是一類光能自養或異養微生物，能以養殖水體中的有機物為碳源進行光 合作用，起到淨化水質、抑制病原微生物生長繁殖和提高水產動物免疫力的作用。枯草芽抱桿菌是一種短杆狀、無莢膜能運動的革蘭氏陽性細菌，能產生中生芽抱， 為嚴格好氧。枯草芽抱桿菌的分布非常廣泛，土壤、湖泊、海洋、動植物體表及其棲息地皆能 發現。是常用的益生菌之一，可分泌抗菌素抑制病原微生物的生長，無毒性，在水產中的應 用具有極大的潛力和優勢。結合光合細菌和枯草芽孢桿菌兩者的優勢製成的混合菌液，可以達到有效防治紅 嘴病，治癒率高達100%。克服了抗生素濫用帶來的副作用及高頻換水帶來的高成本，提供 了一種安全、綠色、無公害的水產養殖模式。
發明內容
本發明的目的在於克服現有濫用抗生素治療魚病導致各種食品安全問題的不足 之處，提供一種光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在製備防治大菱鮃紅嘴病菌劑中的應用。本發明的目的通過以下技術方案實現光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在製備防治大菱鮃紅嘴病菌劑中的應用。所述光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液中光合細菌和枯草芽孢桿菌細菌數之比 為 1 1。
所述光合細菌為紅假單胞菌(Rhodopseudomonas sp.，CGMCC 1.2193)、沼澤紅 假單胞菌(Rhodopseudomonas palustris, CGMCC 1.2352)或莢膜紅細胞(Rhodobacter capsulatus, GIM1. 168)中的至少一種。所述枯草芽孢桿菌(BacillusSubtilis Cohn，GIM1. 136)。所述光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在大菱鮃養成中的應用是將光合細菌和 枯草芽孢桿菌混合菌液潑灑於水體中，使水體中光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液終濃度 為 10-107cfu/mL。所述光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在在大菱鮃養成中的應用是將飼料用濃 度為10-107CfU/mL的光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液浸泡15 45min。本發明利用光合 細菌和枯草芽孢桿菌抑制病原微生物生長繁殖，從而實現有效防治大菱鮃紅嘴病的目的。本發明相對於現有技術具有如下的優點及效果1、本發明能有效防治大菱鮃的紅嘴病。2、本發明所述菌劑在水產動物病害防治的應用中安全性好。利用光合細菌和枯草芽孢桿菌對病原菌的拮抗作用、利用水產養殖環境中的有機 物質、產生一些有利於水產動物生長的活性因子而達到防治病害的方法屬於生物方法，從 而克服了藥物濫用帶來的副作用3、本發明所述的菌劑有效、環保、不產生病原菌抗性，應用前景良好。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步詳細的描述，但本發明的實施方式不限於此。實施例1殺菌劑的製備(1)光合細菌菌液的製備濃度為109cfu/mL 的紅假單胞菌(Rhodopseudomonas sp.，CGMCC 1. 2193，購於中 國普通微生物菌種保藏管理中心)按培養基體積的0. 接種到優化RCVBN液體培養基中， 於30°C、光照強度為30001x下光照厭氧培養48h後得到的菌液按培養基體積的10%接種 入優化的RCVBN培養基中，光照厭氧發酵培養48h，然後6000rpm離心15min獲得菌體，往菌 體中加入無菌的磷酸鹽緩衝液可得到濃度為IO12CfuAiL的光合細菌菌液。(2)枯草芽孢桿菌菌液的製備濃度為109cfu/mL 的枯草芽孢桿菌(Bacillus Subtilis Cohn, GIM1. 136，購於廣 東省微生物研究所)按培養基體積的0. 接種到營養肉湯培養基中，於37°C、250rpm搖 床活化培養18h，得到的菌液按培養基提及的10%接種入營養肉湯培養基中，置於37°C、 250rpm搖床培養24h，然後6000rpm離心15min獲得菌體，往菌體中加入無菌的磷酸鹽緩衝 液可得到濃度為IO12CfuAiL的光合細菌菌液。(3)將光合細菌濃縮液與枯草芽孢桿菌濃縮液按細菌數1 1混合。實施例2殺菌劑的應用1每個大菱鮃養殖水池大菱鮃5000尾(大菱鮃來源於山東省某魚場)，大菱鮃均重 25 士 0. 5g，水溫為 25 0C ο平均分A、B、C、D四個實驗組，B、C、D每個實驗組有4個小組，分別為Bi、Cl、Dl ； B2、C2、D2 ；B3、C3、D3 ；B4、C4、D4 ；每組2個重複。五組試驗組的處理如下
A組工廠生產的養殖方式(對照組)。B組在水中潑灑光合細菌和枯草芽孢桿菌的混合菌液，使水體中光合細菌和枯 草芽孢桿菌混合菌液濃度分別達到10、103、105、107cfU/mL，餵食普通飼料，每40天換全池 水一次後加菌。C組在水中投放經濃度為10、103、105、107Cfu/mL的光合細菌和枯草芽孢桿菌的 混合菌液浸泡後的飼料，每40天換全池水一次。D組在水中加入光合細菌和枯草芽孢桿菌的混合菌液，使水體中光合細菌和枯 草芽孢桿菌混合菌液濃度分別達到10、103、105、107cfU/mL，同時分別投放經濃度為10、103、 105、107CfU/mL的光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液浸泡後的飼料，每40天換全池水一次 後加菌。Bi、Cl、Dl投放的菌液濃度為10cfu/mLB2、C2、D2投放的菌液濃度為103cfu/mLB3、C3、D3投放的菌液濃度為105cfu/mLB4、C4、D4投放的菌液濃度為107cfu/mL所用飼料符合中華人民共和國農業行業標準《無公害食品漁用配合飼料安全限 量》(NY5072-2002)的規定。試驗結束測定大菱鮃患有紅嘴病的數目。表一紅嘴病患病率 由上表可看出，通過加入光合細菌和枯草芽孢桿菌菌液，可以預防大菱鮃換紅嘴 病，最低濃度只要達到lOcfu/mL即可達到效果。從而為大菱鮃的養殖提供了一種綠色、安 全的養殖新方法。實施例3殺菌劑的應用2每個大菱鮃養殖水池患有紅嘴病大菱鮃(病魚吻端及腹面上頌出血)30尾，水溫 為25°C，治療時間8天。
平均分A、B、C、D、E五個實驗組，C、D、E每個實驗組有4個小組，分別為C1、D1、E1 ； C2、D2、E2 ；C3、D3、E3 ；C4、D4、E4 ；Cl、El ；C2、E2 ；C3、E3 ；C4、E4 每小組再分為 2 組，即 ClU C12......E41、E42，每組2個重複。五組試驗組的處理如下A組工廠生產的養殖方式(對照組)。B組在水中潑灑抗生素(聚維酮碘，lmg/L-2mg/L)，餵食普通飼料。C組在水中潑灑光合細菌和枯草芽孢桿菌的混合菌液，使水體中光合細菌和枯 草芽孢桿菌混合菌液濃度分別達到10、103、105、107cfU/mL，餵食普通飼料。D組在水中投放經濃度為10、103、105、107Cfu/mL的光合細菌和枯草芽孢桿菌的 混合菌液浸泡後的飼料。E組在水中加入光合細菌和枯草芽孢桿菌的混合菌液，使菌體濃度分別達到10、 103U05U07cfu/mL,同時分別投放經濃度為10、ΙΟ3、105、107cfu/mL的光合細菌和枯草芽孢 桿菌混合菌液浸泡後的飼料。Cl、Dl、El投放的菌液濃度為10cfu/mLC2、D2、E2投放的菌液濃度為103cfu/mLC3、D3、E3投放的菌液濃度為105cfu/mLC4、D4、E4投放的菌液濃度為107cfu/mL所用飼料符合中華人民共和國農業行業標準《無公害食品漁用配合飼料安全限 量》(NY5072-2002)的規定。所用魚藥符合中華人民共和國農業行業標準《無公害食品漁用 藥物使用準則》(NY 5071-2002)的規定。表二紅嘴病魚痊癒率(％ ) 由上表可看出，C、D、E組明顯的要比A和B組效果要好，且無論是往水池裡潑灑菌 液還是在飼料裡面添加菌液，都可以達到痊癒率100%的治療效果，且同時潑灑混合菌液和 餵食混合菌液浸泡過的飼料效果更好。光合細菌和枯草芽孢桿菌是通過拮抗作用，抑制病 原菌的生長。光合細菌和枯草芽孢桿菌的混合菌液在大菱鮃紅嘴病的治療上具有很大的利用價值和應用潛力。 本發明的實施方式並不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發明的精神實 質與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應為等效的置換方式，都包含在本發明 的保護範圍之內。
權利要求
光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在製備防治大菱鮃紅嘴病菌劑中的應用。
2.根據權利要求1所述光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在製備防治大菱鮃紅嘴病 菌劑中的應用，其特徵在於所述光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液中光合細菌和枯草芽 孢桿菌細菌數之比為1 1。
3.根據權利要求1所述光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在製備防治大菱鮃紅嘴病 菌劑中的應用，其特徵在於所述光合細菌為紅假單胞菌(Rhodopseudomonas sp.，CGMCC 1. 2193)、沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudomonas palustris, CGMCC 1.2352)或莢膜紅細胞 (Rhodobacter capsulatus, GIM1. 168)中的至少一種。
4.根據權利要求1所述光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在製備防治大菱鮃紅嘴病 菌劑中的應用，其特徵在於所述枯草芽孢桿菌(Bacillus Subtilis Cohn，GIM1. 136)。
5.根據權利要求1所述光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在製備防治大菱鮃紅嘴病 菌劑中的應用，其特徵在於所述光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在大菱鮃養成中的應 用是將光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液潑灑於水體中，使水體中光合細菌和枯草芽孢杆 菌混合菌液終濃度為10-107cfU/mL。
6.根據權利要求1所述光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在製備防治大菱鮃紅嘴 病菌劑中的應用，其特徵在於所述光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在在大菱鮃養成中 的應用是將飼料用濃度為IO-IO7CfuAiL的光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液浸泡15 45min。
全文摘要
本發明公開了一種光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液在製備防治大菱鮃紅嘴病菌劑中的應用，其特徵在於光合細菌培養液和枯草芽孢桿菌培養液按細菌數1∶1混合，光合細菌為紅假單胞菌、沼澤紅假單胞菌或莢膜紅細胞中的至少一種，菌劑應用方法為向水體中潑灑殺菌劑，使水體中光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液終濃度為10-107cfu/mL，或者將飼料用光合細菌和枯草芽孢桿菌混合菌液浸泡，混合菌液中光合細菌和枯草芽孢桿菌濃度為10-107cfu/mL。本發明所述的殺菌劑有效、環保、無公害，應用前景良好，對防止濫用抗生素也具有重要指導意義。
文檔編號A01P1/00GK101919408SQ20101026843
公開日2010年12月22日 申請日期2010年8月31日 優先權日2010年8月31日
發明者肖小麗, 蔡俊鵬 申請人:華南理工大學