作為蛋白激酶抑制劑和組蛋白去乙醯化酶抑制劑的2-吲哚滿酮衍生物的製作方法

2023-04-28 04:00:51 2

專利名稱：作為蛋白激酶抑制劑和組蛋白去乙醯化酶抑制劑的2-吲哚滿酮衍生物的製作方法
技術領域：
本發明涉及同時具有蛋白激酶抑制活性和組蛋白去乙醯化酶抑制活性的3-(4-醯胺基吡咯-2-基亞甲基)-2-吲哚滿酮衍生物的合成及其在治療與蛋白激酶活性異常以及組蛋白去乙醯化酶活性異常相關的疾病方面的臨床應用。

背景技術：
蛋白激酶是催化蛋白磷酸化的一類酶，特別是催化蛋白中特定的酪氨酸、絲氨酸和蘇氨酸殘基上的羥基的磷酸化。蛋白激酶在調節許多細胞生理過程中都起到關鍵作用，包括代謝、細胞增殖、細胞分化、細胞存活、環境-主體反應、免疫應答和血管生成。許多疾病都與由蛋白激酶調節所引發的反常的細胞應有關。這些疾病包括炎症、自身免疫性疾病、癌症、神經系統疾病和神經退化性疾病、心血管疾病、過敏、哮喘以及與激素相關疾病(Tan，S-L.，2006，J. Immunol.，1762872-2879；Healy，A.ea al.，2006，J. Immunol.，1771886-1 893；Salek-Ardakani，S.et al.，2005，J. Immunol.，1757635-7641；Kim，J.et al.，2004，J. Clin.Invest.，114823-827)。因此，人們一直致力於尋求能夠有效地治療這些疾病的蛋白激酶抑制劑。
蛋白激酶通常分為兩類，即蛋白酪氨酸激酶(PTKs)和絲氨酸-蘇氨酸激酶(STKs)。
蛋白酪氨酸激酶(PTKs)可分為兩類，即非跨膜酪氨酸激酶和跨膜生長因子受體酪氨酸激酶(RTKs)。目前，至少已經確定了RTKs的19種不同的亞族，如表皮生長因子受體(EGFR)，血管內皮生長因子受體(VEGFR)，血小板源生長因子受體(PDGFR)和纖維母細胞生長因子受體(FGFR)。
表皮生長因子受體(EGFR)家族包含了四種跨膜酪氨酸激酶生長因子受體，即HER1、HER2、HER3和HER4。當一組特定的配體與受體的結合後，促進了EGFR的二聚，並且導致受體中酪氨酸殘基的自磷酸化(Arteaga，C-L.，2001，Curr.Opin.Oncol.，6491-498)。一旦受體自磷酸化後，EGFR的幾個信號轉導通路的下遊就被激活了。EGFR的信號轉導通路與腫瘤生成的過程密切相關，包括細胞周期進程、細胞凋亡的抑制、腫瘤細胞的運動、入侵和轉移。EGFR的激活也刺激了血管內皮生長因子(VEGF)，它是血管生成的主要誘導體(Petit，A-M.etal.，1997，Am.J.Pathol.，1511523-1530)。在實驗模型中，EGFR介導的信號轉導通路的下調與腫瘤的發生密切相關(Wikstrand，C-J.et al.，1998，JNatl Cancer Inst.，90799-800)。在許多人體腫瘤中可以觀察到突變導致的EGFR蛋白的連續擴增激活和過度表達，包括胸部、肺部、卵巢和腎臟的腫瘤。這些突變是腫瘤侵潤的決定因素(Wikstrand，C-J.et al.，1998，J Natl Cancer Inst.，90799-800)。EGFR過度表達在非小細胞肺癌(NSCLC)中是非常常見的。EGFR的活性可以通過使用抗-EGFR抗體進行阻斷胞外配體結合區或通過使用小分子抑制EGFR酪氨酸激酶來進行抑制，從而達到抑制EGFR通路下遊信號傳遞的目的(Mendelsohn，J.，1997，Clin.Can.Res.，32707-2707)。
幾乎所有的實體瘤和間質瘤在低氧情況下都會分泌血管內皮生長因子(VEGF)。它對血管內皮是高度專一的，並且對血管增殖和滲透都能起到調節作用。VEGF水平的過度表達與微脈管密度的增加、癌症復發和存活率降低均密切相關(Parikh，A-A.，2004；，Hematol.Oncol.Clin.N.Am.，18951-971 Parikh，A-A.，2004；，Hematol.Oncol.Clin.N.Am.，18951-971)。對VEGF受體來說有6種不同的配體VEGF-A到E和胎盤生長因子。配體與內皮細胞上的特定受體(主要是VEGFR-2)相結合。VEGF-A與VEGFR-1的結合引起內皮細胞的遷移，與VEGFR-2的結合引起內皮細胞增殖、滲透和存活，VEGFR-3被認為調節淋巴血管生成。VEGF與VEGFR-2受體的結合導致了細胞內酪氨酸激酶區域的活化和自磷酸化，並進一步觸發了細胞內一連串信號的產生(Parikh，A-A.，2004，Hematol.Oncol.Clin.N.Am.，18951-971)。
絲氨酸-蘇氨酸激酶(STKs)主要存在於細胞內。也存在少數幾種STKs類型的受體激酶。STKs是胞液激酶最常見的形式，它們在細胞質部位執行它們的功能，而不是細胞質中的細胞器和細胞骨架。
糖原合成酶激酶-3(GSK-3)是一種絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶，包含了α和β兩種異構形式，這兩種異構形式各自以獨特的基因編碼。人們發現GSK-3能夠使許多調控蛋白磷酸化，並可以調節它們的活性。GSK-3與多種疾病相關，包括糖尿病、老年痴呆症、中樞神經系統障礙如狂躁抑鬱障礙和神經退化疾病、心肌肥大等(Haq，et al.，2000，J. Cell Biol.，151117)。
Aurora-2是一種絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶，它與人體癌症密切相關，如結腸癌、乳房癌和其它實體瘤。人們認為它與調節細胞周期的蛋白磷酸化有關。尤其，有絲分裂過程中，Aurora-2在控制染色體的準確分離上起了作用。細胞周期的異常調節可以導致細胞增殖和其它異常。在人體結腸癌組織中，人們發現Aurora-2蛋白被過度表達(Schumacher，et al.，1998，J. Cell Biol.，1431635-1646；Kimura et al.，1997，J.Biol.Chem.，27213766-13771)。
細胞周期依賴性激酶(CDKs)是一種絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶，它調節哺乳動物的細胞分裂。目前，人們已經確定了九個激酶亞基(CDK 1-9)。每一個激酶都和一個特定的調節對象相結合，一起構成了活性催化位點。增殖失控是癌細胞的一個特點，在許多重要的實體瘤中，常常發生CDK功能的異常調節。人們對CDK2和CDK4尤其感興趣，因為在許多人體腫瘤中，它們的活性常常被異常調節。
Raf激酶是一種ras腫瘤蛋白的下遊效應蛋白。它是由細胞表面到細胞核的信號轉導通路的一個關鍵調節器。抑制Raf激酶與在體內和體外抑制許多人體腫瘤的生長密切相關(Monia et al.，1996，Nat.Med.，2668-675)。
其它的絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶包括蛋白激酶A、B和C。這些激酶(即PKA，PKB和PKC)在信號轉導通路中起著關鍵作用。
人們一直致力於尋求具有蛋白激酶抑制活性並能治療與蛋白激酶活性異常動相關的疾病的小分子化合物。文獻報導的化合物有環狀化合物(美國專利US7,151,096)、雙環化合物(美國專利US 7,189,721)、三環化合物(美國專利US7,132,533)、(2-羥基吲哚基-3-亞甲基)乙酸衍生物(美國專利US 7,214,700)、3-(4-醯胺吡咯基-2-基亞甲基)-2-吲哚滿酮衍生物(美國專利US 7,179,910)、稠合吡唑衍生物(美國專利US7,166,597)、胺基呋咱化合物(美國專利US7,157,476)、吡咯取代的的2-吲哚滿酮化合物(美國專利US 7,125,905)、三唑化合物(美國專利US 7,115,739)、吡唑基胺基取代的喹唑啉化合物(美國專利US7,098,330)和吲唑化合物(美國專利US 7,041,687)等。有幾個蛋白激酶抑制劑已被FDA批准用於癌症治療，如Glivec、Sutent和Sorafenib。臨床使用表明，與傳統的化療相比，這些藥物優勢明顯。由此激發人們基於機理對治療方法進行改進，優化化合物分子骨架，以期發現具有更好口服生物利用度、更高的抗癌活性和更低毒性的新化合物。


發明內容
本發明目的之一在於公開一類具有蛋白激酶選擇性抑制活性和同時具有組蛋白去乙醯化酶抑制活性的3-(4-醯胺基吡咯-2-基亞甲基)-2-吲哚滿酮衍生物； 本發明目的之二在於公開這一類所述的化合物的製備方法； 本發明目的之三在於公開這一類所述的化合物作為治療與蛋白激酶活性異常以及組蛋白去乙醯化酶活性異常相關的疾病方面的臨床應用。
組蛋白去乙醯化酶(HDAC)蛋白在調控體內的基因表達方面起著關鍵作用，它改變轉錄因子結合到染色體組DNA的可達性。尤其是HDAC能去除組蛋白中乙醯化賴氨酸殘基的乙醯基，從而導致核小體重構(Grunstein，M.，1997，Nature，389349-352)。由於HDAC蛋白在基因表達中起著關鍵作用，所以它們與許多細胞功能密切相關，包括細胞周期調控、細胞增殖、分化、基因程序化表達和癌症發生(Ruijter，A-J-M.，2003，Biochem.J.，370737-749；Grignani，F.，1998，Nature，391815-818；Lin，R-J.，1998，391811-814；Marks，P-A.，2001，NatureReviews Cancer，1194)。由組蛋白去乙醯化酶誤調所致的異常去乙醯化與許多臨床疾病密切相關，如魯-泰(Rubinstein-Taybi)二氏症候群、脆性X染色體綜合症、白血病和其它各種癌症(Langley B et al.，2005，Current Drug Targets-CNS&Neurological Disorders，441-50)。試驗表明，HDAC抑制劑能夠抑制人類及動物體內的腫瘤的生長，包括肺癌、胃癌、乳腺癌、前列腺癌和淋巴瘤等(Dokmanovic，M.，2005，J.Cell Biochenm.，96293-304)。
組蛋白去乙醯化酶活性異常與各種神經系統疾病及神經退化疾病密切相關，包括中風、亨廷頓舞蹈(Huntington)疾病、肌萎縮側索硬化(AmyotrophicLateral Sclerosis)和阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease)。抑制組蛋白去乙醯化酶能夠誘導抗有絲分裂和抗凋亡基因的表達，如p21和HSP-70，有利於正常細胞的存活。HDAC抑制劑也能夠作用於中樞神經系統的其他神經細胞，如反應性星形膠質細胞和小神經膠質細胞，降低在神經損傷或疾病中的炎症和二次傷害。通過HDAC抑制劑增加乙醯化，可以誘導樹突發芽(突觸數量增加)，重建學習行為，進入長期記憶。HDAC抑制劑可以逆轉弗裡德賴希共濟失調症(Friedreich’s ataxia)的基因沉默。這些數據表明，HDAC抑制是一種極具希望的治療許多中樞神經系統疾病的方法(Langley B et al.，2005，Current Drug Targets-CNS & Neurological Disorders，441-50；Fischer A.，et al，2007，Nature 447(10)178-183；Herman D.，et al.，2006，Nature Chemical Biology 2(10)551-558)。
依據序列同源性，哺乳動物的HDACs可以分為三類。第一類由酵母Rpd3-類蛋白組成(HDAC 1，2，3，8和11)。第二類由酵母HDA1-類蛋白組成(HDAC4，5，6，7，9和10)。第三類由酵母SIR2-類蛋白組成(SIRT 1，2，3，4，5，6和7)。
HDAC1的活性和細胞增殖(癌症的標誌)相關。哺乳動物細胞通過siRNA降低HDAC1表達，具有抗增殖性(Glaser，K-B.，200 3，Biochem.Biophys.Res.Comm.，310529-536)。HDAC1基因敲除鼠是胚胎致死的，其餘細胞表現出不一樣的細胞生長(Lagger，G.，2002，EMBO J.，212672-2681)。HDAC1過度表達的老鼠細胞顯示G2和M期延長及生長速度降低(Bartl.S.，1997，Mol.Cell Biol.，175033-5043)。因此，試驗數據表明，HDAC1與細胞周期調控及細胞增殖密切相關。
HDAC2調控許多胎心肌蛋白異構體的表達。HDAC2缺乏或是通過化學方法抑制組蛋白去乙醯化酶可以阻止胚胎基因的再表達，減少心室肥大。抗肥大和肌醇多磷酸鹽-5-磷酸酶f(Inpp5f)編碼基因表達增加有關，這種增加導致胸腺瘤濾過性病毒的原癌基因(Akt)和3-磷酸肌醇-依賴的蛋白激酶-1失活，激活了糖原合成酶激酶3(Gsk3)。相反，HDAC2轉基因鼠心室肥大增加，這與失活的Gsk3β有關。通過化學方法抑制活化的Gsk3β使得HDAC2-缺乏的成人對心室肥大的刺激變得敏感。這些結果表明，在心臟中HDAC2是HDAC抑制劑的一個重要的分子靶標。HDAC2和Gsk3β都是調控通路的組成部分，這為治療心室肥大和心力衰竭提供了極具吸引力的治療靶標(Trivedi，C-M.，2007，Nat.Med.，13324-331)。
HDAC3在正常小腸的增殖隱窩細胞中表達最多。在結腸癌細胞系中HDAC3表達沉默導致細胞生長抑制、細胞存活降低和細胞凋亡增加。沉默HDAC2表達可以觀察到類似的效果，而對於HDAC1，效果則沒有那麼顯著。HDAC3基因沉默也選擇性的引起鹼性磷酸酯酶的表達(結腸細胞成熟的標誌)。HDAC3的過度表達抑制基礎轉錄及丁酸酯誘導的P21轉錄，而沉默HDAC3則刺激P21基因啟動子的活性和表達。這些發現表明HDAC3是在人體結腸癌中進行下調的基因，是結腸細胞成熟和P21表達的一種新型的調節劑(Wilson，A-J.，2006，J.Biol.Chem.，28113548-13558)。
HDAC6是HDAC家族的一個亞型，它脫去-微管蛋白的乙醯基，增加細胞運動性。在九組口腔鱗狀細胞癌(OSCC)的細胞系和正常的口腔角化細胞(NOKs)上運用定量實時逆轉錄聚合酶鏈反應和Western Blots技術分析，與NOKs相比，HDAC6mRNA和蛋白表達水平在所有的癌細胞中都升高了。通過免疫螢光法分析，在OSCC細胞系的細胞質中檢測到了HDAC6蛋白。和OSCC細胞系相似，在早期的人體OSCC腫瘤中HDAC6上調明顯，mRNA達74％，蛋白達51％。通過對臨床變量的分析，人們發現臨床腫瘤的發展階段和HDAC6的表達狀態相關。分析表明，HDAC6的表達水平在腫瘤早期(I和II期)和晚期(III和IV期)存在顯著差異(P＝0.014)。這些結果表明HDAC6的表達可能和腫瘤的惡性程度有關，這也為設計新的治療方法提供了線索(Sakuma，T.，2006，Int.J.Oncol.，29117-124)。
IIa類HDAC包括HDAC4，5和7。在過去幾年中，研究人員確定了IIa類HDAC在活體中的一些重要生理功能。令人吃驚的是，這些看似沒有聯繫的生理過程有著共同的特徵，它們都依賴於IIa類HDAC對MEF2轉錄活動的嚴密控制。諸如骨骼肌的形成、心肥大、骨發育、T-細胞分化和神經元存活等關鍵生理過程都被IIa類HDAC所控制，這一事實意味著許多人類病理學的幹預療法是有可能的，包括血管類疾病如動脈硬化、中風和動脈瘤、腫瘤血管生成和轉移、侏儒症、骨骼畸形、自身免疫和淋巴增生症候群、神經退化性疾病和心肌肥大(Martin M.et al，2007，Oncogene 265450-5467)。
HDAC使功能染色體表觀基因沉默是許多病理過程的主要機制之一。其中，功能相關基因被HDAC抑制或重調，導致在終末分化、成熟和生長控制中表型缺失，並且喪失組織功能。例如，腫瘤抑制基因經常在癌症的發展過程中被沉默，HDAC抑制劑能夠誘導這些腫瘤抑制基因的表達，從而抑制腫瘤細胞生長和分化(Glaros S et al.，2007，Oncogene June 4 Epub ahead of print；Mai，A，et al.，2007，Int J.Biochem Cell Bio.，April 4，Epub ahead of print；Vincent A.et al.，2007，Oncogene，April 30，Epub ahead of print；our unpublished results)。結構基因(如與Friedreich’s運動失調相關的FXN基因和與脊柱肌肉萎縮相關的SMN基因)的抑制可以被HDAC逆轉，使得FXN和SMN基因重新表達，並恢復組織功能(Herman D et al.，2006，Nature Chemical Biology，2(10)551-8；Avila AM et al.，2007，J Clinic Investigation，117(3)659-71；de Bore J，2006，Tissue Eng.12(10)2927-37)。HDAC抑制劑在染色體6p21-22重調HDAC「熱點」程序，誘導了整個MHC II家族基因表達，進一步延伸了免疫識別和免疫響應的表觀基因調控(Gialitakis M et al.，2007，Nucleic Acids Res.，34(1)；765-72)。
目前已經確定了幾類HDAC抑制劑，包括1)短鏈脂肪酸，如丁酸和苯丁酸；2)有機羥肟酸，如suberoylanilide hydroxamic acid(SAHA)和trichostatin A(TSA)；3)含有2-胺基-8-氧-9，10-環氧癸醯基(AOE)的環四肽，如trapoxin和HC-toxin；4)不含2-氨基-8-氧-9，10-環氧癸醯基的環四肽，如apicidin和FK228；5)苯醯胺類，如MS-275(歐洲專利EP 0847992A1，美國專利2002/0103192A1，世界專利02/26696A1，世界專利01/70675A2，世界專利01/18171A2)。儘管HDAC是一個極具前景的藥物靶標，但目前Merck公司研製的SAHA僅僅局限於對皮膚T細胞淋巴瘤的治療，而對實體瘤療效並不明顯。因此，有必要繼續研製新的化合物，使其具有更強的HDAC抑制活性、更強的抗癌活性、更好的HDAC亞型選擇性和更低的毒性。
靶向治療一直為抗癌藥物研發人員所推崇。人們希望設計藥物，它既能準確的到達腫瘤細胞的某個特定靶標並殺死腫瘤細胞，同時又對正常細胞又沒有傷害。然而，腫瘤細胞能夠運用多種生物引發器和通路來進行生長和傳播。在一個靶點對腫瘤細胞進行打擊，它們會沿著新的生長通路重組和重新部署。由此人們發展了組合靶向治療，並正在成為癌症治療的新範例。幾個多靶點激酶抑制劑現正在研發中，其中Sorafenib和Sutent已經在美國獲得批准上市。Sorafenib(Bayer公司開發)是第一個同時以RAF/MEK/ERK通路(與細胞增殖有關)和VEGFR2/PDGFR級聯信號通路(與血管生成有關)為靶點的藥物，該藥在2005年12月獲得批准用於治療晚期腎癌。儘管這些靶向治療藥物在治療一些實體瘤時是有效的，但是在治療其它實體瘤時，療效並不理想且具有毒副作用。
本發明所述的化合物，結合了RTK抑制劑的抗血管生成和抗增殖活性以及HDAC抑制劑的所具有的誘導分化、免疫調製、阻礙細胞周期、促使細胞凋亡的活性，旨在對實體瘤具有更好的療效，同時克服市售的RTK抑制劑的毒副作用，如高血壓、QT間期延長、甲狀腺退化、皮疹和皮膚變色、疼痛等。
本發明所述的化合物，其化學結構如通式(I)所示
其中， X為共價鍵或-C(O)-NH-(CH2)m-； R1，R2，R3和R4分別為氫、滷素、烷基、烷氧基、硝基或三氟甲基； R5為-NHOH或
R6，R7，R8和R9分別為氫、滷素、烷基、烷氧基或三氟甲基； n為1到5的整數； m為1到5的整數； 包括其游離形式、鹽的形式、對映異構體、非對映異構體或水合物。
本發明所述的「滷素」，為氟、氯、溴、碘； 本發明所述的「烷基」，包括直鏈、支鏈或環狀烷基，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、特丁基、正戊基、異戊基、正己基、異己基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基等； 本發明所述的「烷氧基」，是指烷基與氧原子相連所形成的基團，其中，氧原子具有自由成鍵能力，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、異丙氧基、特丁氧基、環丙氧基、環己基氧基等； 本發明所述的化合物的合成路線如下所示 (a)將化合物1與化合物2進行縮合反應得到化合物3；
(b)將化合物3水解得到化合物4；
(c)將化合物4與羥胺進行縮合反應得到化合物5a；
(d)將化合物4與化合物6進行縮合反應得到化合物5b。

上述縮合反應(a)和(d)以肽縮合劑為催化劑，如1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺(EDC)，N，N』-二環己基碳二亞胺(DCC)，N，N』-碳醯二咪唑(CDI)等。反應溫度為0～80℃，反應時間為4～72小時。反應所用溶劑為常用溶劑，如苯、甲苯、四氫呋喃、二氧六環、二氯甲烷、氯仿、N，N-二甲基甲醯胺等。必要時，也可以加入鹼如氫氧化鈉、三乙胺或吡啶。
上述縮合反應(c)以ClCOOEt為縮合劑，反應溫度為0～80℃，反應時間為1～24小時。反應所用溶劑為常用溶劑，如苯、甲苯、四氫呋喃、二氧六環、二氯甲烷、氯仿、N，N-二甲基甲醯胺等。必要時，也可以加入鹼如氫氧化鈉、三乙胺或吡啶。
上述水解反應(b)以氫氧化鋰，氫氧化鈉或氫氧化鉀為水解試劑，反應溫度為0～80℃，反應時間為2～72小時。反應所用溶劑為常用溶劑，如水、甲醇、乙醇、四氫呋喃、1，4-二氧六環、N，N-二甲基甲醯胺等。
通式(I)所述的化合物及中間體(3)和中間體(4)，可以採用常見的分離方法進行純化，如萃取、重結晶、柱層析等。
本發明所述的化合物還包括通式(II)所示的化合物 A-Y-B(II) 其中， A為

B為
Y為含有-CO-、-CS-、-SO-、-SO2-的線性結構，連接A和B兩部分，長度為4.0～12.0
R1，R2，R3和R4分別為氫、滷素、烷基、烷氧基、硝基或三氟甲基； R6，R7，R8和R9分別為氫、滷素、烷基、烷氧基或三氟甲基； R10，R11，R12，R13，R14和R15分別為氫或烷基。
本發明所述的化合物(通式I和通式II)，同時具有蛋白激酶抑制活性和組蛋白去乙醯化酶抑制活性，可以用於治療與蛋白激酶活性異常以及組蛋白去乙醯化酶活性異常相關的疾病，包括炎症、自身免疫性疾病、癌症、神經系統疾病和神經退化性疾病、心血管疾病、過敏、哮喘以及與激素相關疾病，尤其對血癌和實體瘤具有優異療效。
本發明所述的化合物(通式I和通式II)，被加工成常用的藥用製劑，如片劑、膠囊、粉劑、糖漿、液劑、懸浮劑、針劑。該製劑含有作為活性組分的通式(I)或通式(II)的化合物，以及藥用載體、輔料或稀釋劑。該製劑中通常含有0.5～70％的活性成分，較佳含量為1～20％。該藥用製劑的劑型規格為0.0001～200mg。
本發明所說的藥用載體、輔料或稀釋劑，包括《藥用賦形劑手冊》(美國藥學協會，1986年10月)所列的載體填料，但並不局限於這些載體填料。
本發明所述的化合物(通式I和通式II)，在臨床上可以通過口服或注射方式對哺乳動物(包括人)進行用藥，其中尤以口服方式最佳。用藥劑量為每日0.0001～200mg/kg體重，較佳用藥劑量為每日0.01～100mg/kg體重，最佳用藥劑量為每日0.1～50mg/kg體重，同時，最佳劑量視個體而定，通常開始時劑量較小，然後逐漸增加用量。
本發明所述的代表性化合物如表1所示。化合物編號與實施例部分中的「實施例編號」相一致，即表1中化合物1的合成在「實施例1」中得到描述，表1中化合物52的合成在「實施例52」中得到描述。
表1本發明代表性化合物






圖1各組腫瘤增長率變化圖[(末日腫瘤體積-首日腫瘤體積)/首日腫瘤體積|×100％ 圖2各組腫瘤增長情況(*P＜0.05)
具體實施例方式 下面結合實例進一步闡明本發明的內容，但本發明的保護範圍並不僅僅局限於這些實例。本發明所述的百分比除特別註明外，均為重量百分比。說明書中所描述的數值範圍，如計量單位、反應條件、化合物物理狀態或百分比，均是為了提供明白無誤的書面參考。本領域熟練技術人員在實踐本專利時，使用在此範圍之外或有別於單個數值的溫度、濃度、數量、碳原子數等，仍然可以得到預期的結果。
實施例1 2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-乙酸甲酯的製備
將300mg(1mmol)5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151.8mg(1.2mmol)甘氨酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌20小時，然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得黃色固體2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-乙酸甲酯(325mg，產率88％)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.44(s，3H，pyrrole-CH3)，2.49(s，3H，pyrrole-CH3)，3.66(s，3H，COOCH3)，3.98(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，6.84(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.92(td，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.72(s，1H，vinyl-H)，7.76(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，8.01(t，J＝8.0Hz，1H，CONH)，10.91(s，1H，indolinone-NH)，13.71(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)372(M+1)。
實施例2 2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-乙酸的製備
將371mg(1mmol)2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-乙酸甲酯溶於300ml甲醇中，然後加入25ml 4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調節pH值至3。真空抽濾得固體，水洗，真空乾燥得黃色固體2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-乙酸(342mg，產率96％)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.44(s，3H，pyrrole-CH3)，2.49(s，3H，pyrrole-CH3)，3.88(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，6.84(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.92(td，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.72(s，1H，vinyl-H)，7.76(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.87(t，J＝8.0Hz，1H，CONH)，10.91(s，1H，indolinone-NH)，12.57(s，1H，COOH)，13.70(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)358(M+1)。
實施例3 N-羥基-2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-乙醯胺的製備
將357mg(1mmol)2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-乙酸、151mg(1.5mmol)三乙胺溶於20ml DMF中，於0℃加入163mg(1.5mmol)氯甲酸乙酯。混合物在0℃下攪拌2小時後加入1.32g(20mmol)50％的羥胺水溶液。混合物在室溫下繼續攪拌3小時，然後用1000ml鹽水稀釋。真空抽濾得固體，水洗，真空乾燥得褐色固體N-羥基-2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-乙醯胺(327mg，產率88％)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.46(s，3H，pyrrole-CH3)，2.49(s，3H，pyrrole-CH3)，3.75(d，J＝4.0Hz，2H，CH2CO)，6.83(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.91(td，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.71(s，1H，vinyl-H)，7.74(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.76(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，8.83(br s，1H，N-OH )，10.86(br s，2H，NH-O and indolinone-NH)，13.69(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)373(M+1)。
實施例4 N-(2-氨基苯基)-2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-乙醯胺的製備
將357mg(1mmol)2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-乙酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、864mg(8mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得褐色固體N-(2-氨基苯)-2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-乙醯胺(371mg，產率83％)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.45(s，3H，pyrrole-CH3)，2.47(s，3H，pyrrole-CH3)，4.0(d，J＝4.0Hz，2H，CH2CO)，4.83(s，2H，benzene-NH2)，6.53(m，1H，Ar-H)，6.70(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.82(m，3H，Ar-H)，7.14(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.72(s，1H，vinyl-H)，7.67(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.76(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，9.18(s，1H，benzene-NH)，10.91(s，1H，indolinone-NH)，13.72(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)448(M+1)。
實施例5 N-(2-氨基-4-氟苯基)-2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-乙醯胺的製備
將357mg(1mmol)2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-乙酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑和1.02g(8mmol)4-氟鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水和乙醇洗滌。真空乾燥得褐色固體N-(2-氨基-4-氟苯)-2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-乙醯胺(367mg，產率79％)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.46(s，3H，pyrrole-CH3)，2.48(s，3H，pyrrole-CH3)，4.02(d，J＝4.0Hz，2H，CH2CO)，5.26(s，2H，benzene-NH2)，6.29(m，1H，Ar-H)，6.46(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.84(m，1H，Ar-H)，6.92(td，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.05(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.72(s，1H，vinyl-H)，7.76(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.84(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，9.18(s，1H，benzene-NH)，10.91(s，1H，indolinone-NH)，13.72(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)466(M+1)。
實施例6 3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-丙酸甲酯的製備
將300mg(1mmol)5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和168.6mg(1.2mmol)-丙氨酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得黃色固體3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-丙酸甲酯(333mg，產率87％)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.39(s，3H，pyrrole-CH3)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，2.58(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，3.50(m，2H，NCH2)，3.63(s，3H，COOCH3)，6.84(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.92(td，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.67(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.75(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，10.88(s，1H，indolinone-NH)，13.66(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)386(M+1)。
實施例7 3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-丙酸的製備
將385mg(1mmol)3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-丙酸甲酯溶於300ml甲醇中，然後加入25ml 4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調節pH值至3。真空抽濾得固體，水洗，真空乾燥得黃色固體3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-丙酸(371mg，產率94％)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.39(s，3H，pyrrole-CH3)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，2.48(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，3.41(m，2H，NCH2)，6.84(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.92(td，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.67(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.76(dd，J＝4.0 and8.0Hz，1H，Ar-H)，10.89(s，1H，indolinone-NH)，12.25(s，1H，COOH)，13.67(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)372(M+1)。
實施例8 N-羥基-3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-丙醯胺的製備
將371mg(1mmol)3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-丙酸、151mg(1.5mmol)三乙胺溶於20ml DMF中，於0℃加入163mg(1.5mmol)氯甲酸乙酯。混合物在0℃下攪拌2小時後加入1.32g(20mmol)50％的羥胺水溶液。混合物在室溫下繼續攪拌3小時。然後用1000ml鹽水稀釋。真空抽濾得固體，水洗，真空乾燥得褐色固體N-羥基-3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-丙醯胺(355mg，產率92％)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.23(d，J＝4.0Hz，2H，CH2CO)，2.39(s，3H，pyrrole-CH3)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，3.34(m，2H，NCH2)，6.83(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.90(td，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.68(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.76(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，8.70(br s，1H，N-OH)，10.69(s，2H，NH-O and indolinone-NH)，13.69(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)387(M+1)。
實施例9 N-(2-氨基苯基)-3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-丙醯胺的製備
將371mg(1mmol)3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-丙酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得褐色固體N-(2-氨基苯)-3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-丙醯胺(387mg，產率84％)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.40(s，3H，pyrrole-CH3)，2.42(s，3H，pyrrole-CH3)，2.60(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，3.51(m，2H，NCH2)，4.83(s，2H，benzene-NH2)，6.52(m，1H，Ar-H)，6.70(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.82(m，3H，Ar-H)，7.16(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.74(m，2H，CONH and Ar-H)，9.18(s，1H，benzene-NH)，10.89(s，1H，indolinone-NH)，13.67(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)462(M+1)。
實施例10 N-(2-氨基-4-氟苯基)-3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-丙醯胺的製備
將371mg(1mmol)3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-丙酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151mg(1.2mmol)4-氟鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得褐色固體N-(2-氨基-4-氟苯)-3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-丙醯胺(373mg，產率78％)。1HNMR(DMSO-d6)δ2.40(s，3H，pyrrole-CH3)，2.42(s，3H，pyrrole-CH3)，2.62(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，3.53(m，2H，NCH2)，5.26(s，2H，benzene-NH2)，6.29(m，1H，Ar-H)，6.46(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.84(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.92(td，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.06(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.72(s，1H，vinyl-H)，7.76(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.84(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，9.18(s，1H，benzene-NH)，10.86(s，1H，indolinone-NH)，13.66(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)480(M+1)。
實施例11 6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸甲酯的製備
將300mg(1mmol)5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和217.8mg(1.2mmol)6-氨基正己酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得黃色固體6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸甲酯(346mg，產率81％)。1HNMR(DMSO-d6)δ1.30(m，2H，CH2)，1.51(m，2H，CH2)，1.55(m，2H，CH2)，2.31(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.39(s，3H，pyrrole-CH3)，2.40(s，3H，pyrrole-CH3)，3.18(m，2H，NCH2)，3.57(s，3H，COOCH3)，6.82(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.92(td，J＝4.0 and8.0Hz，1H，Ar-H)，7.70(s，1，vinyl-H)，7.63(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.76(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，10.89(s，1H，indolinone-NH)，13.66(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)428(M+1)。
實施例12 6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸的製備
將427mg(1mmol)6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸甲酯溶於300ml甲醇中，然後加入25ml4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調節pH值至3。真空抽濾得固體，水洗，真空乾燥得黃色固體6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸(377mg，產率91％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.30(m，2H，CH2)，1.50(m，4H，2×CH2)，2.20(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.39(s，3H，pyrrole-CH3)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，3.18(m，2H，NCH2)，6.82(dd，J＝4.0 and8.0Hz，1H，Ar-H)，6.92(td，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.63(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.76(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，10.89(s，1H，indolinone-NH)，12.00(s，1H，COOH)，13.66(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)414(M+1)。
實施例13 N-羥基-6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺的製備
將413mg(1mmol)6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸、151mg(1.5mmol)三乙胺溶於20ml DMF中，於0℃加入163mg(1.5mmol)氯甲酸乙酯。混合物在0℃下攪拌2小時後加入1.32g(20mmol)50％的羥胺水溶液。混合物在室溫下繼續攪拌3小時。然後用1000ml鹽水稀釋。真空抽濾得固體，水洗，真空乾燥得褐色固體N-羥基-6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺(385mg，產率90％)。1HNMR(DMSO-d6)δ1.29(m，2H，CH2)，1.50(m，4H，2×CH2)，1.94(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.39(s，3H，pyrrole-CH3)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，3.19(m，2H，NCH2)，6.83(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.92(td，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.63(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.75(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，8.70(br s，1H，N-OH)，10.70(s，2H，NH-Oand indolinone-NH)，13.66(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)429(M+1)。
實施例14 N-(2-氨基苯基)-6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺的製備
將413mg(1mmol)6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空於燥得褐色固體N-(2-氨基苯)-6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺(437mg，產率87％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.38(m，2H，CH2)，1.54(m，2H，CH2)，1.62(m，2H，CH2)，2.32(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，2.49(s，3H，pyrrole-CH3)，3.21(m，2H，NCH2)，4.82(s，2H，benzene-NH2)，6.53(m，1H，Ar-H)，6.70(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.85(m，3H，Ar-H)，7.14(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.65(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.75(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，9.11(s，1H，benzene-NH)，10.90(s，1H，indolinone-NH)，13.66(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)504(M+1)。
實施例15 N-(2-氨基-4-氟苯基)-6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺的製備
將413mg(1mmol)6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151mg(1.2mmol)4-氟鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得褐色固體N-(2-氨基-4-氟苯)-6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺(354mg，產率68％)。1HNMR(DMSO-d6)δ1.38(m，2H，CH2)，1.54(m，2H，CH2)，1.62(m，2H，CH2)，2.32(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，2.49(s，3H，pyrrole-CH3)，3.21(m，2H，NCH2)，5.25(s，2H，benzene-NH2)，6.29(m，1H，Ar-H)，6.47(dd，J＝4.0 and8.0Hz，1H，Ar-H)，6.83(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.92(td，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.06(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.71(s，1H，vinyl-H)，7.75(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.84(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，9.18(s，1H，benzene-NH)，10.86(s，1H，indolinone-NH)，13.66(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)522(M+1)。
實施例16 2-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-乙酸甲酯的製備
將357mg(1mmol)2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基J-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-乙酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151.8mg(1.2mmol)甘氨酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得黃色固體2-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-乙酸甲酯(342mg，產率80％)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.47(s，3H，pyrrole-CH3)，2.49(s，3H，pyrrole-CH3)，3.63(s，3H，COOCH3)，3.88(d，J＝8.0Hz，2H，N-CH2)，3.90(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，6.83(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.92(td，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.72(s，1H，vinyl-H)，7.74(t，J＝8.0Hz，1H，CONH)，7.75(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，8.31(t，J＝8.0Hz，1H，CONH)，10.90(s，1H，indolinone-NH)，13.71(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)429(M+1)。
實施例17 2-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-乙酸的製備
將428mg(1mmol)2-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-乙酸甲酯溶於300ml甲醇中，然後加入25ml 4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調節pH值至3。真空抽濾得固體，水洗，真空乾燥得黃色固體2-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-乙酸(363mg，產率88％)。1HNMR(DMSO-d6)δ2.45(s，3H，pyrrole-CH3)，2.47(s，3H，pyrrole-CH3)，3.78(d，J＝4.0Hz，2H，N-CH2)，3.89(d，J＝4.0Hz，2H，CH2CO)，6.83(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.92(td，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.71(s，1H，vinyl-H)，7.74(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.75(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，8.14(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，10.90(s，1H，indolinone-NH)，12.57(s，1H，COOH)，13.70(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)415(M+1)。
實施例18 N-羥基-2-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-乙醯胺的製備
將414mg(1mmol)2-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-乙酸、151mg(1.5mmol)三乙胺溶於20ml DMF中，於0℃加入163mg(1.5mmol)氯甲酸乙酯。混合物在0℃下攪拌2小時後加入1.32g(20mmol)50％的羥胺水溶液。混合物在室溫下繼續攪拌3小時。然後用1000ml鹽水稀釋。真空抽濾得固體，水洗，真空乾燥得褐色固體N-羥基-2-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-乙醯胺(365mg，產率85％)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.45(s，3H，pyrrole-CH3)，2.47(s，3H，pyrrole-CH3)，3.65(d，J＝4.0Hz，2H，N-CH2)，3.88(d，J＝4.0Hz，2H，CH2CO)，6.83(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.91(td，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.71(s，1H，vinyl-H)，7.74(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.76(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，8.14(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，8.83(br s，1H，N-OH)，10.86(br s，2H，NH-O and indolinone-NH)，13.71(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)430(M+1)。
實施例19 N-(2-氨基苯基)-2-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-乙醯胺的製備
將414mg(1mmol)2-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-乙酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432毫克(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得褐色固體N-(2-氨基苯)-2-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-乙醯胺(423mg，產率84％)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.45(s，3H，pyrrole-CH3)，2.47(s，3H，pyrrole-CH3)，3.91(d，J＝4.0Hz，2H，N-CH2)，3.93(d，J＝4.0Hz，2H，CH2CO)，4.89(s，2H，benzene-NH2)，6.53(m，1H，Ar-H)，6.70(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.83(m，1H，Ar-H)，6.90(m，2H，Ar-H)，7.10(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.72(s，1H，vinyl-H)，7.75(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.83(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，8.25(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，9.10(s，1H，benzene-NH)，10.91(s，1H，indolinone-NH)，13.72(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)505(M+1)。
實施例20 N-(2-氨基-4-氟苯基)-2-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-乙醯胺的製備
將414mg(1mmol)2-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-乙酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151mg(1.2mmol)4-氟鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得褐色固體N-(2-氨基-4-氟苯)-2-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-乙醯胺(381mg，產率73％)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.45(s，3H，pyrrole-CH3)，2.46(s，3H，pyrrole-CH3)，3.91(d，J＝4.0Hz，4H，2×CH2)，5.22(s，2H，benzene-NH2)，6.28(m，1H，Ar-H)，6.45(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.83(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.90(td，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.02(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.72(s，1H，vinyl-H)，7.76(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.82(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，8.25(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，9.03(s，1H，benzene-NH)，10.90(s，1H，indolinone-NH)，13.72(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)523(M+1)。
實施例21 2-{3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}丙醯氨基-乙酸甲酯的製備
將371mg(1mmol)3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-丙酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151.8mg(1.2mmol)甘氨酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得黃色固體2-{3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}丙醯氨基-乙酸甲酯(372mg，產率84％)。1HNMR(DMSO-d6)δ2.35(s，3H，pyrrole-CH3)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，2.49(d，J＝8.0Hz，2H，N-CH2)，3.41(m，2H，N-CH2)，3.63(s，3H，COOCH3)，3.83(d，J＝4.0Hz，2H，N-CH2)，6.83(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.92(td，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.60(t，J＝8.0Hz，1H，CONH)，7.75(dd，J＝4.0 and8.0Hz，1H，Ar-H)，8.41(t，J＝8.0Hz，1H，CONH)，10.89(s，1H，indolinone-NH)，13.67(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)443(M+1)。
實施例22 2-{3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}丙醯氨基-乙酸的製備
將442mg(1mmol)2-{3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}丙醯氨基-乙酸甲酯溶於300ml甲醇中，然後加入25ml 4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調節pH值至3。真空抽濾得固體，水洗，真空乾燥得黃色固體2-{3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}丙醯氨基-乙酸(404mg，產率94％)。1HNMR(DMSO-d6)δ2.39(s，3H，pyrrole-CH3)，241(s，3H，pyrrole-CH3)，2.49(d，J＝4.0Hz，2H，N-CH2)，3.43(m，2H，N-CH2)，3.74(d，J＝4.0Hz，2H，CH2CO)，6.83(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.92(td，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.59(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.75(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，8.28(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，10.89(s，1H，indolinone-NH)，12.60(s，1H，COOH)，13.67(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)429(M+1)。
實施例23 N-羥基-2-{3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}丙醯氨基-乙醯胺的製備
將428mg(1mmol)2-{3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}丙醯氨基-乙酸、151mg(1.5mmol)三乙胺溶於20ml DMF中，於0℃加入163mg(1.5mmol)氯甲酸乙酯。混合物在0℃下攪拌2小時後加入1.32g(20mmol)50％的羥胺水溶液。混合物在室溫下繼續攪拌3小時。然後用1000ml鹽水稀釋。真空抽濾得固體，水洗，真空乾燥得褐色固體N-羥基-2-{3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}丙醯氨基-乙醯胺(372mg，產率84％)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.28(d，J＝4.0Hz，2H，N-CH2)，2.39(s，3H，pyrrole-CH3)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，3.60(m，2H，N-CH2)，3.92(d，J＝4.0Hz，2H，CH2CO)，6.82(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.91(td，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.63(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.75(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，8.18(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，8.75(br s，1H，N-OH)，10.86(br s，2H，NH-O and indolinone-NH)，13.67(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)444(M+1)。
實施例24 N-(2-氨基苯基)-2-{3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}丙醯氨基-乙醯胺的製備
將428mg(1mmol)2-{3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}丙醯氨基-乙酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得褐色固體N-(2-氨基苯)-2-{3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}丙醯氨基-乙醯胺(419mg，產率81％)。1HNMR(DMSO-d6)δ2.40(s，3H，pyrrole-CH3)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，2.496(d，J＝4.0Hz，2H，N-CH2)，3.45(m，2H，N-CH2)，3.89(d，J＝4.0Hz，2H，CH2CO)，4.88(s，2H，benzene-NH2)，6.51(m，1H，Ar-H)，6.69(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.86(m，3H，Ar-H)，7.09(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.64(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.75(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，8.30(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，9.18(s，1H，benzene-NH)，10.89(s，1H，indolinone-NH)，13.67(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)519(M+1)。
實施例25 N-(2-氨基-4-氟苯基)-2-{3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}丙醯氨基-乙醯胺的製備
將428mg(1mmol)2-{3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}丙醯氨基-乙酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151g(1.2mmol)4-氟鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得褐色固體N-(2-氨基-4-氟苯)-2-{3-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}丙醯氨基-乙醯胺(407mg，產率76％)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.39(s，3H，pyrrole-CH3)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，2.45(d，J＝4.0Hz，2H，N-CH2)，3.45(m，2H，N-CH2)，3.87(d，J＝4.0Hz，2H，CH2CO)，5.21(s，2H，benzene-NH2)，6.26(m，1H，Ar-H)，6.45(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.82(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.91(td，J＝4.0 and8.0Hz，1H，Ar-H)，7.01(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.65(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.69(s，1H，vinyl-H)，7.75(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，8.31(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，9.10(s，1H，benzene-NH)，10.89(s，1H，indolinone-NH)，13.67(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(rm/z)537(M+1)。
實施例26 6-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-己酸甲酯的製備
將357mg(1mmol)2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-乙酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和217.8mg(1.2mmol)6-氨基己酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得黃色固體6-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-己酸甲酯(415mg，產率86％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.27(m，2H，CH2)，1.39(m，2H，CH2)，1.52(m，2H，CH2)，2.28(t，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.45(s，3H，pyrrole-CH3)，2.47(s，3H，pyrrole-CH3)，3.06(m，2H，N-CH2)，3.57(s，3H，COOCH3)，3.81(d，J＝4.0Hz，2H，N-CH2)，6.83(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.91(td，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.72(s，1H，vinyl-H)，7.67(t，J＝8.0Hz，1H，CONH)，7.75(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.87(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，10.92(s，1H，indolinone-NH)，13.71(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)485(M+1)。
實施例27 6-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-己酸的製備
將484mg(1mmol)6-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-己酸甲酯溶於300ml甲醇中，然後加入25ml 4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調節pH值至3。真空抽濾得固體，水洗，真空乾燥得黃色固體6-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-己酸(431mg，產率92％)。1HNMR(DMSO-d6)δ1.27(m，2H，CH2)，1.40(m，2H，CH2)，1.49(m，2H ，CH2)，2.18(t，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.44(s，3H，pyrrole-CH3)，2.49(s，3H，pyrrole-CH3)，3.06(m，2H，N-CH2)，3.81(d，J＝4.0Hz，2H，N-CH2)，6.83(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.92(td，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.65(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.72(s，1H，vinyl-H)，7.77(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.85(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，10.90(s，1H，indolinone-NH)，12.01(s，1H，COOH)，13.66(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)471(M+1)。
實施例28 N-羥基-6-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-己醯胺的製備
將470mg(1mmol)6-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-己酸、151mg(1.5mmol)三乙胺溶於20ml DMF中，於0℃加入163mg(1.5mmol)氯甲酸乙酯。混合物在0℃下攪拌2小時後加入50％的羥胺水溶液(1.32g，20mmol)。混合物在室溫下繼續攪拌3小時。然後用1000ml鹽水稀釋。真空抽濾得固體，水洗，真空乾燥得褐色固體N-羥基-6-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-己醯胺(378mg，產率78％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.23(m，2H，CH2)，1.38(m，2H，CH2)，1.46(m，2H，CH2)，1.92(t，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.44(s，3H，pyrrole-CH3)，2.47(s，3H，pyrrole-CH3)，3.06(m，2H，N-CH2)，3.81(d，J＝4.0Hz，2H，N-CH2)，6.84(dd，J＝4.0 and 8.0)Hz，1H，Ar-H)，6.92(td，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.72(s，1H，vinyl-H)，7.67(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.76(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1，Ar-H)，7.85(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，8.70(br s，1H，N-OH )，10.64(br s，2H，NH-O and indolinone-NH)，13.71(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)486(M+1)。
實施例29 N-(2-氨基苯基)-6-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-己醯胺的製備
將470mg(1mmol)6-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-己酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得褐色固體N-(2-氨基苯)-6-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-己醯胺(456mg，產率80％)。1HNMR(DMSO-d6)δ1.32(m，2H，CH2)，1.44(m，2H，CH2)，1.59(m，2H，CH2)，2.30(t，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.47(s，3H，pyrrole-CH3)，2.49(s，3H，pyrrole-CH3)，3.09(m，2H，N-CH2)，3.81(d，J＝4.0Hz，2H，N-CH2)，4.81(s，2H，benzene-NH2)，6.53(m，1H，Ar-H)，6.70(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.83(m，3H，Ar-H)，7.14(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.67(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.72(s，1H，vinyl-H)，7.76(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.88(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，9.10(s，1H，benzene-NH)，10.91(s，1H，indolinone-NH)，13.71(s，1H ，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)561(M+1)。
實施例30 N-(2-氨基-4-氟苯基)-6-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-己醯胺的製備
將470mg(1mmol)6-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-己酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151mg(1.2mmol)4-氟鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得褐色固體N-(2-氨基-4-氟苯)-6-{2-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基}乙醯氨基-己醯胺(416mg，產率72％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.32(m，2H，CH2)，1.44(m，2H，CH2)，1.58(m，2H，CH2)，2.30(t，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.47(s，3H，pyrrole-CH3)，2.49(s，3H，pyrrole-CH3)，3.08(m，2H，N-CH2)，3.82(d，J＝4.0Hz，2H ，N-CH2)，5.21(s，2H，benzene-NH2)，6.26(m，1H，Ar-H)，6.45(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.82(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.91(td，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.02(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.65(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.76(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，8.31(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，9.10(s，1H，benzene-NH)，10.89(s，1H，indolinone-NH)，13.71(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)579(M+1)。
實施例31 N-(2-氨基-4-氯苯基)-6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺的製備
將413mg(1mmol)6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和171mg(1.2mmol)4-氯鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得褐色固體N-(2-氨基-4-氯苯)-6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺(414mg，產率78％)。1HNMR(DMSO-d6)δ1.38(m，2H，CH2)，1.54(m，2H，CH2)，1.62(m，2H，CH2)，2.32(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.47(s，3H，pyrrole-CH3)，2.49(s，3H，pyrrole-CH3)，3.21(m，2H，NCH2)，4.86(s，2H，benzene-NH2)，6.65(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.85(m，3H，Ar-H)，7.28(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.65(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.75(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，9.12(s，1H，benzene-NH)，10.90(s，1H，indolinone-NH)，13.67(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)539(M+1)。
實施例32 N-(2-氨基-4-甲苯基)-6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺的製備
將413mg(1mmol)6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和146mg(1.2mmol)4-甲基鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得褐色固體N-(2-氨基-4-甲苯)-6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺(418mg，產率81％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.38(m，2H，CH2)，1.54(m，2H，CH2)，1.62(m，2H，CH2)，2.32(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.34(s，3H，benzene-CH3)，2.46(s，3H，pyrrole-CH3)，2.48(s，3H，pyrrole-CH3)，3.21(m，2H，NCH2)，4.75(s，2H，benzene-NH2)，6.55(m，2H，Ar-H)，6.82(dd，1H，J＝4.0and 8.0Hz，Ar-H)，6.92(td，J＝4.0 and 8.0Hz，Ar-H)，7.05(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.65(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.75(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，9.11(s，1H，benzene-NH)，10.90(s，1H，indolinone-NH)，13.66(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)518(M+1)。
實施例33 N-(2-氨基-4-甲氧基苯基)-6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺的製備
將413mg(1mmol)6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和166mg(1.2mmol)4-甲氧基鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得褐色固體N-(2-氨基-4-甲氧基苯)-6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺(442mg，產率83％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.38(m，2H，CH2)，1.54(m，2H，CH2)，1.62(m，2H，CH2)，2.32(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.49(s，3H，pyrrole-CH3)，2.51(s，3H，pyrrole-CH3)，3.21(m，2H，NCH2)，3.83(s，3H，O-CH3)，4.82(s，2H，benzene-NH2)，6.16(d，J＝4.0Hz，1H，Ar-H)，6.33(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.83(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.92(m，1H，Ar-H)，7.45(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.65(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.75(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，9.11(s，1H，benzene-NH)，10.90(s，1H，indolinone-NH)，13.66(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)534(M+1)。
實施例34 N-(2-氨基-4-三氟甲基苯基)-6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺的製備
將413mg(1mmol)6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和211mg(1.2mmol)4-三氟甲基鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得褐色固體N-(2-氨基-4-三氟甲基苯)-6-{5-[5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺(451mg，產率79％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.38(m，2H，CH2)，1.54(m，2H，CH2)，1.62(m，2H，CH2)，2.32(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.49(s，3H，pyrrole-CH3)，2.52(s，3H，pyrrole-CH3)，3.21(m，2H，NCH2)，4.75(s，2H，benzene-NH2)，6.83(dd，J＝4.0 and8.0Hz，1H，Ar-H)，6.94(m，3H，Ar-H)，7.10(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.65(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.75(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，9.11(s，1H，benzene-NH)，10.90(s，1H，indolinone-NH)，13.66(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)572(M+1)。
實施例35 6-{5-[2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸甲酯的製備
將282mg(1mmol)5-[2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和217.8mg(1.2mmol)6-氨基正己酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得黃色固體6-{5-[2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸甲酯(303mg，產率74％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.30(m，2H，CH2)，1.51(m，2H，CH2)，1.55(m，2H，CH2)，2.31(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.39(s，3H，pyrrole-CH3)，2.40(s，3H，pyrrole-CH3)，3.18(m，2H，NCH2)，3.57(s，3H，COOCH3)，6.88(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.01(m，1H，Ar-H)，7.01(m，1H，Ar-H)，7.63(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.82(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，10.89(s，1H，indolinone-NH)，13.66(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)410(M+1)。
實施例36 6-{5-[2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸的製備
將409mg(1mmol)6-{5-[2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸甲酯溶於300ml甲醇中，然後加入25ml 4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調節pH值至3。真空抽濾得固體，水洗，真空乾燥得黃色固體6-{5-[2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸(354mg，產率90％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.30(m，2H，CH2)，1.50(m，4H，2×CH2)，2.20(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.39(s，3H，pyrrole-CH3)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，3.18(m，2H，NCH2)，6.88(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.01(m，1H，Ar-H)，7.01(m，1H，Ar-H)，7.63(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.71(s，1H，vinyl-H)，7.82(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，10.89(s，1H，indolinone-NH)，12.06(s，1H，COOH)，13.71(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)396(M+1)。
實施例37 N-(2-氨基苯基)-6-{5-[2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺的製備
將395mg(1mmol)6-{5-[2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得褐色固體N-(2-氨基苯)-6-{5-[2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺(433mg，產率89％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.38(m，2H，CH2)，1.54(m，2H，CH2)，1.62(m，2H，CH2)，2.32(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，2.49(s，3H，pyrrole-CH3)，3.21(m，2H，NCH2)，4.82(s，2H，benzene-NH2)，6.52(m，1H，Ar-H)，6.70(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.89(m，2H，Ar-H)，7.01(m，2H，Ar-H)，7.16(m，2H，Ar-H)，7.65(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.82(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，9.11(s，1H，benzene-NH)，10.90(s，1H，indolinone-NH)，13.66(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)486(M+1)。
實施例38 6-{5-[5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸甲酯的製備
將316mg(1mmol)5-[5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和217.8mg(1.2mmol)6-氨基正己酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得黃色固體6-{5-[5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸甲酯(356mg，產率80％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.30(m，2H，CH2)，1.51(m，2H，CH2)，1.55(m，2H，CH2)，2.31(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.39(s，3H，pyrrole-CH3)，2.40(s，3H，pyrrole-CH3)，3.18(m，2H，NCH2)，3.57(s，3H，COOCH3)，6.87(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.18(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.63(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.98(d，J＝4.0Hz，1H ，Ar-H)，10.88(s，1H，indolinone-NH)，13.66(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)444(M+1)。
實施例39 6-{5-[5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸的製備
將443mg(1mmol)6-{5-[5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸甲酯溶於300ml甲醇中，然後加入25ml 4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調節pH值至3。真空抽濾得固體，水洗，真空乾燥得黃色固體6-{5-[5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸(382mg，產率89％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.30(m，2H，CH2)，1.50(m，4H，2×CH2)，2.20(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.39(s，3H，pyrrole-CH3)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，3.18(m，2H，NCH2)，6.87(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.18(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.63(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.98(d，J＝4.0Hz，1H，Ar-H)，10.89(s，1H，indolinone-NH)，12.00(s，1H，COOH)，13.67(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)430(M+1)。
實施例40 N-(2-氨基苯基)-6-{5-[5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺的製備
將430mg(1mmol)6-{5-[5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得褐色固體N-(2-氨基苯)-6-{5-[5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺(436mg，產率84％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.38(m，2H，CH2)，1.54(m，2H，CH2)，1.62(m，2H，CH2)，2.32(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，2.49(s，3H，pyrrole-CH3)，3.21(m，2H，NCH2)，4.82(s，2H，benzene-NH2)，6.52(m，1H，Ar-H)，6.70(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.88(m，2H，Ar-H)，7.16(m，2H，Ar-H)，7.65(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.95(d，J＝4.0Hz，1H，Ar-H)，9.11(s，1H，benzene-NH)，10.90(s，1H，indolinone-NH)，13.66(s，1H，pyrrole-NH).LC-MS(m/z)520(M+1). 實施例41 6-{5-[4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸甲酯的製備
將296mg(1mmol)5-[4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和217.8mg(1.2mmol)6-氨基正己酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得黃色固體6-{5-[4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸甲酯(312mg，產率74％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.30(m，2H，CH2)，1.51(m，2H，CH2)，1.55(m，2H，CH2)，2.31(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.39(s，3H，pyrrole-CH3)，2.40(s，3H，pyrrole-CH3)，2.48(s，3H，indolinone-CH3)，3.18(m，2H，NCH2)，3.57(s，3H，COOCH3)，6.75(dd，J＝4.0 and8.0Hz，1H，Ar-H)，7.19(t，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.63(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.95(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，10.89(s，1H，indolinone-NH)，13.66(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)424(M+1)。
實施例42 6-{5-[4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸的製備
將423mg(1mmol)6-{5-[4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸甲酯溶於300ml甲醇中，然後加入25ml 4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調節pH值至3。真空抽濾得固體，水洗，真空乾燥得黃色固體6-{5-[4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸(355mg，產率87％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.30(m，2H，CH2)，1.50(m，4H，2×CH2)，2.20(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.39(s，3H，pyrrole-CH3)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，2.48(s，3H，indolinone-CH3)，3.18(m，2H，NCH2)，6.75(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.19(t，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.63(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.95(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，10.89(s，1H，indolinone-NH)，12.00(s，1H，COOH)，13.67(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)410(M+1)。
實施例43 N-羥基-6-{5-[4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺的製備
將409mg(1mmol)6-{5-[4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸、151mg(1.5mmol)三乙胺溶於20ml DMF中，於0℃加入163mg(1.5mmol)氯甲酸乙酯。混合物在0℃下攪拌2小時後加入1.32g(20mmol)50％的羥胺水溶液。混合物在室溫下繼續攪拌3小時。然後用1000ml鹽水稀釋。真空抽濾得固體，水洗，真空乾燥得褐色固體N-羥基-6-{5-[4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺(364mg，產率86％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.29(m，2H，CH2)，1.50(m，4H，2×CH2)，1.94(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.39(s，3H，pyrrole-CH3)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，2.48(s，3H，indolinone-CH3)，3.19(m，2H，NCH2)，6.75(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.19(t，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.64(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.95(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，8.70(br s，1H，N-OH)，10.70(s，2H，NH-O and indolinone-NH)，13.66(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)429(M+1)。
實施例44 6-{5-[5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸甲酯的製備
將327mg(1mmol)5-[5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和217.8mg(1.2mmol)6-氨基正己酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得黃色固體6-{5-[5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸甲酯(321mg，產率71％)。1HNMR(DMSO-d6)δ1.30(m，2H，CH2)，1.51(m，2H，CH2)，1.55(m，2H，CH2)，2.31(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.39(s，3H，pyrrole-CH3)，2.40(s，3H，pyrrole-CH3)，3.18(m，2H，NCH2)，3.57(s，3H，COOCH3)，7.63(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.91(d，J＝4.0Hz，1H，Ar-H)，8.02(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，8.12(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，10.88(s，1H，indolinone-NH)，13.67(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)455(M+1)。
實施例45 6-{5-[5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸的製備
將454mg(1mmol)6-{5-[5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸甲酯溶於300ml甲醇中，然後加入25ml4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調節pH值至3。真空抽濾得固體，水洗，真空乾燥得黃色固體6-{5-[5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸(409mg，產率93％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.30(m，2H，CH2)，1.50(m，4H，2×CH2)，2.20(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.39(s，3H，pyrrole-CH3)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，3.18(m，2H，NCH2)，7.63(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.91(d，J＝4.0Hz，1H，Ar-H)，8.02(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，8.12(dd，J＝4.0and 8.0Hz，1H，Ar-H)，10.89(s，1H，indolinone-NH)，12.03(s，1H，COOH)，13.67(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)441(M+1)。
實施例46 N-(2-氨基苯基)-6-{5-[5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺的製備
將440mg(1mmol)6-{5-[5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得褐色固體N-(2-氨基苯)-6-{5-[5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺(434mg，產率82％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.38(m，2H，CH2)，1.54(m，2H，CH2)，1.62(m，2H，CH2)，2.32(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，2.49(s，3H，pyrrole-CH3)，3.21(m，2H，NCH2)，4.82(s，2H，benzene-NH2)，6.52(m，1H，Ar-H)，6.70(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.89(m，3H，Ar-H)，7.16(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.65(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.91(d，J＝4.0Hz，1H，Ar-H)，8.02(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，8.12(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，9.11(s，1H，benzene-NH)，10.90(s，1H，indolinone-NH)，13.67(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)531(M+1)。
實施例47 6-{5-[6-甲氧基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸甲酯的製備
將312mg(1mmol)5-[6-甲氧基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和217.8mg(1.2mmol)6-氨基正己酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得黃色固體6-{5-[6-甲氧基-2-氧-1，2-二氧-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸甲酯(328mg，產率75％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.30(m，2H，CH2)，1.51(m，2H，CH2)，1.55(m，2H，CH2)，2.31(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.39(s，3H，pyrrole-CH3)，2.40(s，3H，pyrrole-CH3)，3.18(m，2H，NCH2)，3.57(s，3H，COOCH3)，3.83(s，3H，O-CH3)，6.68(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.25(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.39(d，J＝4.0Hz，1H，Ar-H)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.63(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，10.89(s，1H，indolinone-NH)，13.66(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)440(M+1)。
實施例48 6-{5-[6-甲氧基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸的製備
將439mg(1mmol)6-{5-[6-甲氧基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸甲酯溶於300ml甲醇中，然後加入25ml 4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調節pH值至3。真空抽濾得固體，水洗，真空乾燥得黃色固體6-{5-[6-甲氧基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸(361mg，產率85％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.30(m，2H，CH2)，1.50(m，4H，2×CH2)，2.20(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.39(s，3H，pyrrole-CH3)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，3.18(m，2H，NCH2)，3.83(s，3H，O-CH3)，6.68(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.25(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.39(d，J＝4.0Hz，1，Ar-H)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.63(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，10.89(s，1H，indolinone-NH)，12.01(s，1H，COOH)，13.71(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)426(M+1)。
實施例49 N-(2-氨基苯基)-6-{5-[6-甲氧基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺的製備
將425mg(1mmol)6-{5-[6-甲氧基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得褐色固體N-(2-氨基苯)-6-{5-[6-甲氧基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺(443mg，產率86％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.38(m，2H，CH2)，1.54(m，2H，CH2)，1.62(m，2H，CH2)，2.32(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，2.49(s，3H，pyrrole-CH3)，3.21(m，2H，NCH2)，3.83(s，3H，O-CH3)，4.82(s，2H，benzene-NH2)，6.52(m，1H，Ar-H)，6.69(m，2H，Ar-H)，6.89(m，3H，Ar-H)，7.16(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.25(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.32(d，J＝4.0Hz，1H，Ar-H)，7.65(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.70(s，1H，vinyl-H)，9.10(s，1H，benzene-NH)，10.89(s，1H，indolinone-NH)，13.66(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)516(M+1)。
實施例50 6-{5-[6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸甲酯的製備
將350mg(1mmol)5-[6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和217.8mg(1.2mmol)6-氨基正己酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得黃色固體6-{5-[6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸甲酯(344mg，產率72％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.30(m，2H，CH2)，1.51(m，2H，CH2)，1.55(m，2H，CH2)，2.31(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.39(s，3H，pyrrole-CH3)，2.40(s，3H，pyrrole-CH3)，3.18(m，2H，NCH2)，3.57(s，3H，COOCH3)，7.30(m，2H，Ar-H)，7.63(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.70(s，1H，vinyl-H)，8.07(d，J＝4.0Hz，1H，Ar-H)，10.86(s，1H，indolinone-NH)，13.66(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)478(M+1)。
實施例51 6-{5-[6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸的製備
將477mg(1mmol)6-{5-[6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸甲酯溶於300ml甲醇中，然後加入25ml 4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調節pH值至3。真空抽濾得固體，水洗，真空乾燥得黃色固體6-{5-[6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸(380mg，產率82％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.30(m，2H，CH2)，1.50(m，4H，2×CH2)，2.20(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.39(s，3H，pyrrole-CH3)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，3.18(m，2H，NCH2)，7.30(m，2H，Ar-H)，7.63(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.70(s，1H，vinyl-H)，8.07(d，J＝4.0Hz，1H，Ar-H)，10.89(s，1，indolinone-NH)，12.01(s，1H，COOH)，13.69(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)464(M+1)。
實施例52 N-(2-氨基苯基)-6-{5-[6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺的製備
將463mg(1mmol)6-{5-[6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己酸溶於8ml DMF中，然後加入394mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯並三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌20小時。然後用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空乾燥得褐色固體N-(2-氨基苯)-6-{5-[6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-(3Z)-基亞甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羰基}氨基-己醯胺(448mg，產率81％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.38(m，2H，CH2)，1.54(m，2H，CH2)，1.62(m，2H，CH2)，2.32(d，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，2.49(s，3H，pyrrole-CH3)，3.21(m，2H，NCH2)，4.82(s，2H，benzene-NH2)，6.52(m，1H，Ar-H)，6.70(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.89(m，3H，Ar-H)，7.16(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.30(m，2H，Ar-H)，7.65(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，7.71(s，1H，vinyl-H)，8.06(d，J＝4.0Hz，1H，Ar-H)，1089(s，1H，indolinone-NH )，13.67(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)554(M+1)。
實施例53 片劑的製備 處方(1000片) 化合物145g 微晶纖維素 90g 羧甲基澱粉鈉5g 4％聚維酮K30無水乙醇溶液50g 滑石粉 0.5g 製備工藝將化合物14過100目篩，將微晶纖維素、羧甲基澱粉鈉和滑石粉過80目篩，稱取處方量的微晶纖維素和羧甲基澱粉鈉，混合均勻，然後將化合物14與其按等量遞加法混勻，加入4％聚維酮K30無水乙醇溶液適量制粒，乾燥後加入處方量滑石粉混勻，壓片即得。
實施例54 膠囊的製備 處方(1000粒) 化合物145g 微晶纖維素 55g 乳糖35g 羧甲基澱粉鈉5g 硬脂酸鎂0.5g 製備工藝將化合物14過100目篩，將微晶纖維素、乳糖、羧甲基澱粉鈉和硬脂酸鎂過80目篩，稱取處方量的微晶纖維素、乳糖和羧甲基澱粉鈉，混合均勻，然後將化合物14與其按等量遞加法混勻，加入處方量硬脂酸鎂混勻，灌裝膠囊即得。
實施例55 注射液的製備 處方 化合物131.00mg 藥用DMSO0.10ml 藥用乙醇1.00ml 製備工藝將化合物14溶於藥用DMSO，加入藥用乙醇即得。
實施例56 化合物3-52體外抑制酪氨酸激酶受體c-Kit，PDGFR和VEGFR2的酶活性實驗及配體依賴性細胞增殖實驗 一、酪氨酸激酶受體酶活性體外抑制的測定 (一)PDGFR 活性測定 使用ELISA方法測定體外PDGFR的激酶活性。
材料和試劑 1.鏈黴親和素包被的96孔板 2.抗酪氨酸磷酸化單克隆抗體(P-Tyr-100)(Cell Signaling) 3.HRP-標記的抗鼠lgG(Uptate) 4.HTScanTM酪氨酸激酶緩衝液(4X) 5.DTT(1000X 1.25M) 6.ATP(10mM) 7.FLT3(Tyr589)生物素標記底物肽(Cell Signaling) 8.PDGF受體激酶(Cell Signaling) 9.清洗緩衝液1X PBS，0.05％Tween-20(PBS/T) 10.牛血清白蛋白(BSA) 11.終止緩衝液50mM EDTA，pH8 12.加強化學發光試劑(ECL)(Amersham) 實驗步驟 1.在1.25ml 6μM的底物肽中加入10μl 10mM的ATP。將混合液用dH2O稀釋至2.5ml，得到2X ATP/底物混合物([ATP]＝40μM，[substrate]＝3μm)。
2.將酶從-80℃冰箱轉移至冰上，在冰上解凍。
3.4℃短時離心使酶沉降在瓶子的底部，立刻移至冰上。
4.將10μl DTT(1.25M)加入2.5ml 4X HTScanTM酪氨酸激酶緩衝液(240mM HEPES pH7.5，20mM MgCI2，20mM MnCI2，12μM Na3VO4)得到DTT/激酶緩衝液混合物。
5.將1.25ml DTT/激酶緩衝液混合物再與激酶混合得到4X反應混合物(4X反應混合物中酶＝4ng/μL)。
6.將12.5μl的4X反應混合物和12.5μl/孔的預先稀釋的待測化合物放在一起於室溫孵育5分鐘。
7.將25μl 2X ATP/底物混合物加入25μl/孔預先培養好的反應混合物/化合物中。50μl反應液的最後條件是 60mM HEPES pH 7.5 5mM MgCl2 5mM MnCl2 3μM Na3VO4 1.25mM DTT 20μM ATP 1.5μM底物肽 50ng PDGF受體激酶 8.將微孔板在室溫下放置反應30分鐘。
9.加入50μl/孔終止緩衝液(50mM EDTA，pH 8)終止反應。
10.取各反應液25μl和75μl dH2O/孔至鏈黴親和素包被的96板，然後在室溫下孵育60分鐘。
11.用200μl/孔PBS/T洗滌三次。
12.將抗酪氨酸磷酸化的單克隆抗體(P-Tyr-100)以1∶1000的比例稀釋於含1％BSA的PBS/T，每孔加入100μl。
13.在室溫下孵育60分鐘。
14.用200μl/孔PBS/T洗滌三次。
15.將HRP-標記的抗鼠lgG以1∶500的比例稀釋於含1％BSA的PBS/T，每孔加入100μl。
16.在室溫下孵育30分鐘。
17.用200μl/孔PBS/T洗滌五次。
18.加入100μl/孔ECL溶液。
19.用發光酶標儀檢測。
(二)VEGFR2活性測定 使用ELISA方法測定體外VEGFR2的激酶活性。
材料和試劑 1.鏈黴親和素包被的96孔板 2.抗酪氨酸磷酸化單克隆抗體(P-Tyr-100)(Cell Signaling) 3.HRP-標記的抗鼠lgG(Uptate) 4.HTScanTM酪氨酸激酶緩衝液(4X) 5.DTT(1000X.1.25M) 6.ATP(10mM) 7.胃泌素前體(Tyr87)生物素標記底物肽(Cell Signaling) 8.重組人VEGF2受體激酶(Cell Signaling) 9.清洗緩衝液1X PBS，0.05％Tween-20(PBS/T) 10.牛血清白蛋白(BSA) 11.終止緩衝液50mM EDTA，pH8 12.加強化學發光試劑(ECL)(Amersham) 實驗步驟 1.在1.25ml 6μM的底物肽中加入10μl 10mM的ATP。將混合液用dH2O稀釋至2.5ml，得到2 X ATP/底物混合物([ATP]＝40μM，[substrate]＝3μm)。
2.將酶從-80℃冰箱轉移至冰上，在冰上解凍。
3.4℃短時離心使酶沉降在瓶子的底部，立刻移至冰上。
4.將10μl DTT(1.25M)加入2.5ml 4X HTScanTM酪氨酸激酶緩衝液(240mM HEPES pH 7.5，20mM MgCI2，20mM MnCI2，12μM Na3VO4)得到DTT/激酶緩衝液混合物。
5.將1.25ml DTT/激酶緩衝液混合物再與激酶混合得到4X反應混合物(4X反應混合物中酶＝4ng/μL)。
6.將12.5μl的4X反應混合物和12.5μl/孔的預先稀釋的待測化合物放在一起於室溫孵育5分鐘。
7.將25μl 2X ATP/底物混合物加入25μl/孔預先培養好的反應混合物/化合物中。50μl反應液的最後條件是 60mM HEPES pH 7.5 5mM MgCl2 5mM MnCl2 3μM Na3VO4 1.25mM DTT 20μM ATP 1.5μM底物肽 100ng VEGFR2激酶 8.將反應微孔板在室溫下孵育30分鐘。
9.加入50μl/孔終止緩衝液(50mM EDTA，pH 8)，終止反應。
10.取各反應液25μl和75μl dH2O/孔至鏈黴親和素包被的96板，然後在室溫下孵育60分鐘。
11.用200μl/孔PBS/T洗滌三次。
12.將抗酪氨酸磷酸化的單克隆抗體(P-Tyr-100)以1∶1000的比例稀釋於含1％BSA的PBS/T，每孔加入100μl。
13.在室溫下孵育60分鐘。
14.用200μl/孔PBS/T洗滌三次。
15.將HRP-標記的抗鼠lgG以1∶500的比例稀釋於含1％BSA的PBS/T，每孔加入100μl。
16.在室溫下孵育30分鐘。
17.用200μl/孔PBS/T洗滌五次。
18.加入100μl/孔ECL溶液。
19.用發光酶標儀檢測。
(三)c-KIT活性測定 使用ELISA方法測定體外c-KIT的激酶活性。
材料和試劑 1.鏈黴親和素包被的96孔板 2.抗酪氨酸磷酸化單克隆抗體(P-Tyr-100)(Cell Signaling) 3.HRP-標記的抗鼠lgG(Uptate) 4.HTScanTM酪氨酸激酶緩衝液(4X) 5.DTT(1000X.1.25M) 6.ATP(10mM) 7.KDR(Tyr996)生物素標記底物肽(Cell Signaling) 8.重組人c-KIT激酶(Cell Signaling) 9.清洗緩衝液1 X PBS，0.05％Tween-20(PBS/T) 10.牛血清白蛋白(BSA) 11.終止緩衝液50mM EDTA，pH8 12.加強化學發光試劑(ECL)(Amersham) 實驗步驟 1.在1.25ml 6μM的底物肽中加入10μl 10mM的ATP。將混合液用dH2O稀釋至2.5ml，得到2 X ATP/底物混合物([ATP]＝40μM，[substrate]＝3μm)。
2.將酶從-80℃冰箱轉移至冰上，在冰上解凍。
3.4℃短時離心使酶沉降在瓶子的底部，立刻移至冰上。
4.將10μl DTT(1.25M)加入2.5ml 4X HTScanTM酪氨酸激酶緩衝液(240mM HEPES pH7.5，20mM MgCI2，20mM MnCI2，12μM Na3VO4)得到DTT/激酶緩衝液混合物。
5.將1.25ml DTT/激酶緩衝液混合物再與激酶混合得到4X反應混合物(4X反應混合物中酶＝4ng/μL)。
6.將12.5μl的4X反應混合物和12.5μl/孔的預先稀釋的待測化合物放在一起於室溫孵育5分鐘。
7.將25μl 2X ATP/底物混合物加入25μl/孔預先培養好的反應混合物/化合物中。50μl反應液的最後條件是 60mM HEPES pH7.5 5mM MgCl2 5mM MnCl2 3μM Na3VO4 1.25mM DTT 20μM ATP 1.5μM底物肽 100ng c-KIT激酶 8.將反應微孔板在室溫下孵育30分鐘。
9.加入50μl/孔終止緩衝液(50mM EDTA，pH 8)，終止反應。
10.取各反應液25μl和75μl dH2O/孔至鏈黴親和素包被的96板，然後在室溫下孵育60分鐘。
11.用200μl/孔PBS/T洗滌三次。
12.將抗酪氨酸磷酸化的單克隆抗體(P-Tyr-100)以1∶1000的比例稀釋於含1％BSA的PBS/T，每孔加入100μl。
13.在室溫下孵育60分鐘。
14.用200μl/孔PBS/T洗滌三次。
15.將HRP-標記的抗鼠lgG以1∶500的比例稀釋於含1％BSA的PBS/T，每孔加入100μl。
16.在室溫下孵育30分鐘。
17.用200μl/孔PBS/T洗滌五次。
18.加入100μl/孔ECL溶液。
19.用發光酶標儀檢測。
二、配體依賴性細胞增殖實驗 (一)PDGF依賴性細胞增殖 採用穩定表達人PDGFR 的小鼠NIH-3T3成纖維工程細胞株來評價PDGF依賴的細胞增殖。PDGFR~NIH-3T3細胞以5000每孔的密度分種於96孔微孔板，24小時後換成無血清培養基培養過夜。加入待測化合物和PDGF BB(50ng/ml)，繼續在無血清培養基中培養72小時。細胞增殖情況根據說明用MTS方法(Promega)進行檢測。在CO2培養箱37C培養2小時，然後在ELISA酶標儀上測量490nm的吸收值。
(二)VEGF依賴性細胞增殖 HUVEC細胞以6000每孔的密度分種於96孔微孔板，24小時後換成無血清培養基中培養2小時。加入待測化合物和VEGF 165(50ng/ml)，繼續在無血清培養基中培養72小時。細胞增殖情況根據說明用MTS方法(Promega)進行檢測。在CO2培養箱37℃培養2小時，然後在ELISA酶標儀上測量490nm的吸收值。
實驗結果見表2。
表2

實施例57 化合物3-52體外抑制HDAC總酶活性，體外抑制HDAC亞型活性及細胞內微管蛋白乙醯化的試驗。
一、體外HDAC總酶活性的測定 體外HDAC總酶活性的測定是我們採用BIOMOL公司的HDACFluorimetric Assay/Drug Discovery Kit對抑制劑的體外抑制活性進行測試。實驗的原理如下一種特殊的底物Fluor de Lys在組蛋白去乙醯化酶(實驗中採用HeLa細胞的核提取物，富含多種亞型的HDAC)的作用下會去掉一個乙醯基，暴露出遊離的氨基，當加入Developer後會產生一種可誘導的螢光。這種螢光的激發波長為360nm，發射波長為460nm。底物去乙醯化越充分，誘導的螢光值就越高，在無抑制劑情況下的螢光值為對照；而當有抑制劑存在的時候，被誘導的螢光值會降低，而無酶時(相當於酶活性完全被抑制)的螢光值為空白。而一般抑制後的螢光值會介於對照和空白之間。在分析時我們將空白作為0，對照作為1進行計算，值越小則說明抑制活性越高。
1.將實驗緩衝液，稀釋後的trichostatin A及被測試的抑制劑加入微孔板適當的孔中。下表中列出了不同實驗類型每種試劑的用量。


2.將稀釋的HeLa核蛋白提取物加入那些除標記為「空白」以外的所有孔中。
3.讓稀釋後的Fluor de LysTM底物和微孔板中的樣品平衡到25℃。
4.將稀釋後的底物(25μl)加入每一個孔中並混合均勻以啟動HDAC反應。
5.在室溫反應30分鐘，然後加入Fluor de LysTM顯影劑(50μl)終止反應。將微孔板在室溫(25℃)孵育10-15分鐘。
6.在激發波長為369納米，發射波長為451納米的螢光酶標儀上讀取螢光值。
二、報告基因對抑制劑HDAC亞型選擇性的測定 HDAC不同亞型可以與不同的轉錄因子結合，參與不同基因的表達調控中。選擇合適轉錄因子的調控元件構建成報告基因，可以用來評估抑制劑對HDAC亞型的選擇性抑制作用。在轉染前一天將HeLa細胞種入96孔板使轉染時密度達到50-80％的融合。在螢光素酶基因上遊插入了p21-啟動子，gdf11-啟動子，血清響應元件(SRE)，MEF-結合元件等調控序列的報告基因質粒分別使用FuGene6(Roche)轉染試劑，根據操作說明進行轉染。同時為了校正轉染效率，共轉染了綠色螢光蛋白(GFP)的表達質粒。在轉染24小時後加入化合物或溶劑對照(DMSO)。再過24小時後收集並裂解細胞，按照操作說明使用螢光素酶(Promega)檢測試劑盒對螢光素酶的量進行評估。同時進一步測定GFP的含量，對轉染效率進行校正。
三、細胞內乙醯化水平的測定 微管蛋白乙醯化水平的ELISA檢測 材料和試劑 1.96孔組織培養白板 2.A549細胞系 3.抗乙醯化-微管蛋白抗體(Upstate) 4.HRP-標記的羊抗鼠lgG(Uptate) 5.固定液95％乙醇，5％乙酸 6.TBS0.15M NaCl，0.02M Tris-Cl pH 7.4 7.ADSTBS+2％BSA+0.1％Triton X-100 8.加強化學發光試劑(ECL)(Amersham) 實驗步驟 1.A549細胞以20000個細胞/200μl/孔的密度分種在96孔白板上，在37℃下培養24小時。
2.加入待測化合物，在37℃下繼續培養24小時。
3.去除培養基，然後加入100μl/孔的固定液，固定細胞5分鐘。
4.去除固定液，然後用150μl/孔ADB洗兩次。
5.將孔吸乾後，加入100μl/孔含抗乙醯化-微管蛋白抗體的ADB(1∶200)，然後在室溫孵育2小時。
6.將孔吸乾後，用150μl/孔ADB洗兩次。
7.將孔吸乾後，加入100μl/孔的羊抗鼠IgG-HRP抗體(1∶1000)，然後在室溫孵育2小時。
8.微孔板用150μl TBS洗滌三次。
9.加入50μl/孔的ECL混合物，然後在讀板器上讀板。
實驗結果見表3。
表3
nd*未測定ia*無活性 實施例58 化合物3-52對腫瘤細胞增值抑制的MTS試驗。
將腫瘤細胞用胰酶消化後，以3000個每孔的密度分種於96孔微孔板，在含10％FBS的完全培養基裡培養24小時。加入待測化合物和溶劑對照，最終化合物濃度為100nmol/L到100μmol/L。然後在完全培養基裡培養72小時。根據說明書的方法加入MTS試劑(Promega)，在37℃CO2培養箱中培養2小時，然後在ELISA酶標儀上讀取490nm的吸收值。
實驗結果見表4。
表4
實施例59 化合物13，14，29對HeLa細胞組蛋白H3和Tubulin乙醯化的Western檢測及對HDAC1，3，5的體外酶活抑制。
一、細胞內蛋白乙醯化的Western檢測 (一)組蛋白H3乙醯化的Western檢測 組蛋白去乙醯化酶被藥物抑制後，細胞內的組蛋白乙醯化程度就會增高，可以通過Western的方法檢測組蛋白乙醯化水平的變化，從而可以驗證西達本胺是否具有抑制組蛋白去乙醯化酶的作用。2×106個HeLa細胞分別接種於直徑10cm的細胞培養皿，37℃5％CO2培養24小時後，分別加入CS055及對照藥物SAHA，空白對照加入相同體積的DMSO，培養24小時後收集細胞，按常規方法分別提取細胞核組蛋白。對核組蛋白定量後，各取10g核組蛋白進行12％SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳，蛋白轉膜和封閉後，分別以鼠抗人Histone H3的一抗(Upstate，1∶1000稀釋)和HRP標記的羊抗鼠的二抗(Upstate，1∶2000稀釋)進行孵育，洗膜後進行ECL化學發光，X光片曝光並顯影，定影。將該膜上的一抗二抗Striping後重新封閉，分別以兔抗人乙醯化Histone H3的一抗(Upstate，1∶50000稀釋)和HRP標記的羊抗兔的二抗(Upstate，1∶2000稀釋)進行孵育，洗膜後進行ECL化學發光，X光片曝光並顯影，定影。
(二)α-Tubulin乙醯化的Western檢測 HDAC6被抑制後，可以特異誘導細胞內的微管蛋白α-Tubulin的乙醯化[6]，因此可以通過Western檢測西達本胺作用後細胞內α-Tubulin乙醯化是否改變，來了解西達本胺對HDAC6是否有抑制作用。3×105個HeLa細胞分別接種於6孔板中，37℃5％CO2培養24小時後，分別加入CS055及對照藥物SAHA，空白對照加入相同體積的DMSO，培養24小時後用PBS洗滌一次，每孔加入100ul M-PER Mammlian Protein Extraction Reagent(PIERCE)，收集細胞裂解液。對細胞裂解液定量後，各取10ug細胞裂解液進行10％SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳，蛋白轉膜和封閉後，分別以鼠抗人α-Tubulin的一抗(Santa Cruz，1∶500稀釋)和HRP標記的羊抗鼠的二抗(Upstate，1∶2000稀釋)進行孵育，洗膜後進行ECL化學發光，X光片曝光並顯影，定影。將該膜上的一抗二抗Striping後重新封閉，分別以鼠抗人乙醯化α-Tubulin的一抗(Santa Cruz，1∶1000稀釋)和HRP標記的羊抗鼠的二抗(Upstate，1∶2000稀釋)進行孵育，洗膜後進行ECL化學發光，X光片曝光並顯影，定影。
二、HDAC亞型酶活抑制的測定 採用BIOMOL公司的HDAC Fluorimetric Assay/Drug Discovery Kit對抑制劑的體外抑制活性進行測試。實驗的原理如下一種特殊的底物Fluor de Lys在組蛋白去乙醯化酶(實驗中採用HeLa細胞的核提取物，富含多種亞型的HDAC)的作用下會去掉一個乙醯基，暴露出遊離的氨基，當加入Developer後會產生一種可誘導的螢光。這種螢光的激發波長為360nm，發射波長為460nm。底物去乙醯化越充分，誘導的螢光值就越高，在無抑制劑情況下的螢光值為Contorl；而當有抑制劑存在的時候，被誘導的螢光值會降低，而無酶時(相當於酶活性完全被抑制)的螢光值為Blank。而一般抑制後的螢光值會介於Contorl和Blank之間。在分析時我們將Blank作為0，Contorl作為1進行計算，值越小則說明抑制活性越高。
實驗結果見表5。
表5
實施例60 化合物4、13、14對人結腸癌裸鼠移植性腫瘤HCT-8的抑制實驗 選用裸鼠，雌性，14-16g，經正常飼養觀察3天如無異常，以40隻常規腋下接種人結腸癌裸鼠HCT-8後飼養觀察，確認瘤細胞著床增殖且瘤塊直徑大於6mm時隨機分組，8隻/組共4組，其中3種受試物共3組，溶劑對照一組。即日給藥，1次/日，共28次，其中化合物4和14為口服給藥，給藥劑量為80mg/kg體重；化合物13為腹腔注射給藥，給藥劑量為40mg/kg體重。給藥後每2天稱量動物體重及測量腫瘤體積，末次給藥後次日處死動物剝取腫瘤稱瘤重，按公式[(末日腫瘤體積-首日腫瘤體積)/首日腫瘤體積]×100％，計算各組腫瘤增長率，並求出增長率的平均值。實驗結果見圖1。
實施例61 化合物13、14對人乳腺癌裸鼠移植性腫瘤MCF-7的抑制實驗 選用裸鼠，雌性，14-16g，經正常飼養觀察3天如無異常，以50隻常規腋下接種人乳腺癌裸鼠MCF-7後飼養觀察，確認瘤細胞著床增殖且瘤塊直徑大於6mm時隨機分組，8隻/組共5組，其中2種受試物兩個給藥濃度共4組，溶劑對照一組。即日給藥，1次/日，共28次，其中化合物14為口服給藥，給藥劑量為120mg/kg和240mg/kg體重；化合物13為腹腔注射給藥，給藥劑量為30mg/kg和60mg/kg體重。給藥21後次日處死動物剝取腫瘤稱瘤重，按公式[(對照組平均瘤重-實驗組平均瘤重)/對照組平均瘤重]×100％，計算各組腫瘤抑制率，並對瘤重數據進行t檢驗。實驗結果見圖2。
權利要求
1.一種具有通式(I)的3-(4-醯胺基吡咯-2-基亞甲基)-2-吲哚滿酮的衍生物
其中，
X為共價鍵或-C(O)-NH-(CH2)m-；
R1，R2，R3和R4分別為氫、滷素、烷基、烷氧基、硝基或三氟甲基；
R5為-NHOH或
R6，R7，R8和R9分別為氫、滷素、烷基、烷氧基或三氟甲基；
n為1到5的整數；
m為1到5的整數；
包括其游離形式、鹽的形式、對映異構體、非對映異構體或水合物。
2.如權利要求1所述的化合物，其特徵在於所述化合物為
X為共價鍵；
R1，R2，R3和R4分別為氫、滷素、烷基、烷氧基、硝基或三氟甲基；
R5為-NHOH；
n為4或5。
3.如權利要求1所述的化合物，其特徵在於所述化合物為
X為共價鍵；
R1，R2，R3和R4分別為氫、滷素、烷基、烷氧基、硝基或三氟甲基；
R5為
R6，R7，R8和R9分別為氫、滷素、烷基、烷氧基或三氟甲基；
n為4或5。
4.如權利要求1所述的化合物，其特徵在於所述化合物為
X為-C(O)-NH-(CH2)m-；
R1，R2，R3和R4分別為氫、滷素、烷基、烷氧基、硝基或三氟甲基；
R5為-NHOH；
n為3、4或5；
m為1。
5.如權利要求1所述的化合物，其特徵在於所述化合物為
X為-C(O)-NH-(CH2)m-；
R1，R2，R3和R4分別為氫、滷素、烷基、烷氧基、硝基或三氟甲基；
R5為
R6，R7，R8和R9分別為氫、滷素、烷基、烷氧基或三氟甲基；
n為3、4或5；
m為1。
6.通式(I)的化合物的製備方法，該方法包括如下步驟
(a)將化合物1與化合物2進行縮合反應得到化合物3；
(b)將化合物3水解得到化合物4；
(c)將化合物4與羥胺進行縮合反應得到化合物5a；
(d)將化合物4與化合物6進行縮合反應得到化合物5b；
其中，
X為共價鍵或-C(O)-NH-(CH2)m-；
R1，R2，R3和R4分別為氫、滷素、烷基、烷氧基、硝基或三氟甲基；
R5為-NHOH或
R6，R7，R8和R9分別為氫、滷素、烷基、烷氧基或三氟甲基；
n為1到5的整數；
m為1到5的整數。
7.如權利要求6的製備方法，其特徵在於，反應步驟(a)和(d)均使用肽縮合劑作催化劑。
8.權利要求7所述的肽縮合劑，選自1-乙基-3-(3-二甲胺內基)碳二亞胺(EDC)，N，N』-二環己基碳二亞胺(DCC)或N，N』-碳醯二咪唑(CDI)。
9.如權利要求6的製備方法，其特徵在於，反應步驟(c)使用ClCOOEt作縮合劑。
10.如權利要求6的製備方法，其特徵在於，反應步驟(b)使用水解試劑進行反應。
11.權利要求10所述的水解試劑，選自氫氧化鋰、氫氧化鈉或氫氧化鉀。
12.一種用於治療與蛋白激酶活性異常或組蛋白去乙醯化酶活性異常相關的疾病的藥用製劑，其特徵在於，該製劑由權利要求1所述的通式(1)的化合物以及藥用載體、輔料或稀釋劑所組成。
13.權利要求1所述的化合物在製備用於治療炎症、自身免疫性疾病、癌症、神經系統疾病和神經退化性疾病、過敏、哮喘、心血管疾病或與激素相關的疾病的藥物中的應用。
14.權利要求12所述的藥用製劑的劑型規格為0.0001～200mg。
15.權利要求12所述的藥用製劑的給藥方式為口服或注射。
全文摘要
本發明公開了一種3-(4-醯胺基吡咯-2-基亞甲基)-2-吲哚滿酮衍生物的製備方法與應用，其結構如通式(I)所示，其中，X、R1、R2、R3、R4、R5和n的定義同說明書。該類化合物同時具有蛋白激酶抑制活性和組蛋白去乙醯化酶抑制活性，可以用於治療與蛋白激酶活性異常或組蛋白去乙醯化酶活性異常相關的疾病，包括炎症、自身免疫性疾病、癌症、神經系統疾病和神經退化性疾病、心血管疾病、過敏、哮喘以及與激素相關的疾病。
文檔編號A61P25/00GK101328166SQ200810132838
公開日2008年12月24日 申請日期2008年7月10日 優先權日2008年7月10日
發明者魯先平, 李志斌, 松 山, 吳仲聞, 馬保順, 王祥輝, 餘金迪, 寧志強 申請人:深圳微芯生物科技生物有限責任公司