Mek抑制劑與奧諾拉(aurora)a激酶選擇性抑制劑的組合的製作方法

2023-04-28 20:19:21 2

Mek抑制劑與奧諾拉(aurora)a激酶選擇性抑制劑的組合的製作方法
【專利摘要】本發明涉及治療增生性病症的方法。具體地說，本發明提供通過投與MEK抑制劑與奧諾拉A激酶選擇性抑制劑的組合治療增生性病症的方法。
【專利說明】MEK抑制劑與奧諾拉(AURORA) A激酶選擇性抑制劑的組合
[0001]優先權要求
[0002]本申請案要求2011年6月3日提交的美國臨時專利申請案第61，493，217號和2012年3月20日提交的美國臨時專利申請案第61，613，207號的優先權，每一文獻以全文引用的方式併入本文中。
【技術領域】
[0003]本發明涉及治療各種細胞增生性病症的方法。具體地說，本發明提供通過投與MEK抑制劑與奧諾拉A激酶選擇性抑制劑的組合治療各種細胞增生性病症的方法。本發明還提供包含MEK抑制劑與選擇性奧諾拉A激酶抑制劑的組合的醫藥組合物和試劑盒。
【背景技術】
[0004]癌症是美國第二大常見死亡原因並且在全世界每八例死亡中即佔一例。在2010間，美國癌症學會(American Cancer Society)估計僅在美國就將確診約1，529，560例新癌症病例，並且估計569，490個美國人將死於癌症。在2008，確診估計1240萬新癌症病例，並且全世界760萬人死於癌症。儘管醫學進步己改良了癌症存活率，但仍不斷需要新穎並且更有效的治療。
[0005]癌症特徵是不受控制的細胞複製。調節從靜止到細胞增生的轉變的細胞分裂周期包含四個階段:G1、S階段(DNA合成)、G2和M階段(有絲分裂)。未分裂細胞在靜止階段GO休息。細胞分裂周期還具有若干檢查點機制，其使細胞周期停滯並且誘導有助於修復細胞損壞的基因轉錄。細胞周期檢查點是控制細胞周期轉變的次序和時序的調節通路。主要細胞周期檢查點包括Gl階段和G2階段內的DNA損傷檢查點以及M階段內的紡錘體組裝檢查點(Spindle Assembly Checkpoint)。這些檢查點確保例如DNA複製和染色體分離的關鍵事件高保真地完成。
[0006]細胞周期檢查點的調節是腫瘤細胞對許多化學療法和輻射的反應方式的關鍵決定因素。許多有效的癌症療法通過引起DNA損傷而起作用；然而，這些藥劑的抗性在癌症治療中仍存在顯著局限性。產生藥物抗性的一種重要機制是活化使細胞周期停滯以提供修復時間的檢查點通路。細胞周期進展通過此機制而受阻，並且可避免受損細胞發生立即細胞死亡。
[0007]細胞分裂周期涉及通常在癌症細胞中過度表達的各種蛋白激酶。這些細胞周期激酶的實例包括(I)Gl / S階段激酶:周期素依賴性激酶(⑶K2、⑶K3、⑶K4、CDK6、⑶K7和CDK9)和細胞分裂周期7激酶(CDC7) ； (2) DNA損傷檢查點激酶:共濟失調毛細血管擴張症突變激酶(ATM)、ATM和Rad3相關激酶(ATR)、檢查點激酶(CHK1和CHK2)、WEEl和髓磷脂轉錄因子I(MYTl);以及(3)有絲分裂激酶:⑶K1、NIMA相關激酶2 (NEK2)、保羅樣激酶
I (PLKl)、奧諾拉A激酶(Aurora A kinase)、奧諾拉B激酶、奧諾拉C激酶、免賴得出芽抑制解除激酶(Budding Uninhibited by Benomyl kinase,BUB1、BUB1B(也稱為BUBR1)和BUB3)和著絲點激酶TTK (也稱為MPSI)。(當代藥物化學(Curr.Med.Chem.) (2007) 14，969-985)。由於其在細胞分裂周期中的重要作用，己研究這些細胞周期激酶作為癌症療法的目標。
[0008]首先在酵母(Ipll)、非洲爪蟾(Xenopus) (Eg2)和果蜆(Drosophila)(奧諾拉)中鑑別到的奧諾拉激酶是有絲分裂的關鍵調節劑。(歐洲分子生物學學會雜誌(Embo J)(1998) 17,5627-5637 ;遺傳學(Genetics) (1993) 135,677-691 ；細胞(Cell) (1995)81，95-105 ;細胞科學雜誌(J Cell Sci) (1998) 111 (Pt5)，557-572)。在人類中，存在奧諾拉激酶的三種同功異型物，包括奧諾拉A、奧諾拉B和奧諾拉C。奧諾拉A和奧諾拉B在細胞通過有絲分裂的正常進展中起關鍵作用，而奧諾拉C活性主要局限於減數分裂細胞。奧諾拉A和奧諾拉B在結構上緊密相關。其催化域位於C端，在C端其僅有幾個胺基酸不同。更大多樣性存在於其非催化N端域中。正是奧諾拉A和奧諾拉B的此區域中的序列多樣性支配其與不同蛋白質搭配物的相互作用，從而使這些激酶在有絲分裂細胞內具有唯一次細胞定位和功能。
[0009]奧諾拉B激酶的過度表達已經在一些癌症中有報導，並且已經與一些癌症中的預後惡化相關。(分子癌症治療學(Mol Cancer Ther) (2007) 6，1851-1857)。奧諾拉B激酶定位於細胞分裂後期前細胞(preanaphase cell)的著絲點。其在紡綞體兩極性和紡綞體組裝檢查點的建立和維持中起關鍵作用。(細胞生物學雜誌(J Cell Biol) (2001) 153,865-880 ；細胞生物學雜誌(2003) 161,267-280 ;細胞生物學雜誌(2003) 161，281-294 ;當代生物學(Curr Biol) (2002) 12，894-899)。缺乏奧諾拉B激酶功能的細胞表明歸因於有絲分裂紡綞體檢查點的快速作用和有效覆蓋在有絲分裂期間正常染色體比對的損失。末期期間，奧諾拉B激酶分別定位於紡綞體中間區和中間體。由此，奧諾拉B激酶在胞質分裂中起作用。(細胞生物學雜誌(2001) 152,669-682 ;基因到細胞(Genes Cells) (2005) 10，127-137)。通過使用基因突變、RNA幹擾或ATP競爭性選擇性小分子抑制劑抑制奧諾拉B激酶會引起紡綞體微管與著絲點的連接、染色體分離以及卵裂溝形成的缺陷。(細胞生物學雜誌(2001) 153，865-880 ;細胞生物學雜誌(2003) 161,267-280 ;細胞生物學雜誌(2001) 152，669-682 ;細胞的分子生物學(Mol Biol Cell) (2003) 14，3325-3341 ;當代生物學(2002) 12，894-899 ;基因到細胞(2005) 10，127-137)。奧諾拉B激酶抑制還阻止紡綞體組裝檢查點的適當形成，使細胞提前退出有絲分裂而不會發生有絲分裂停滯並且通常不會完成胞質分裂。(細胞生物學雜誌(2003) 161,267-280 ;細胞生物學雜誌(2003) 161，281-294)。在稱為核內複製的方法中，這些細胞進入細胞周期的Gl部分，使DNA的量翻倍。文獻中的報導表明此核內複製事件是奧諾拉B抑制的抗增生和抗存活效應的先決條件。此效應可能與奧諾拉B磷酸化Rb腫瘤抑制蛋白質有關，其可能有助於自有絲分裂臨時退出時有絲分裂期後Gl階段中的細胞周期停滯。與此一致，發現在ZM447439抑制奧諾拉B後核內複製和由此發生的細胞凋亡不依賴於P53。(分子癌症治療學(2009) 8 (7)，2046-56)。
[0010]儘管奧諾拉B激酶與奧諾拉A激酶都是奧諾拉激酶家族的成員，但在有絲分裂過程中其具有不同作用。在正常有絲分裂細胞分裂過程中，細胞將雙極性紡綞體組織起來，其中兩徑向排列的微管各聚焦於一端的紡綞極並且連接到另一端的染色體。就在姐妹染色分體分離成子細胞的一瞬間，染色體沿直線(『中期板』)配置。此組織雙極性有絲分裂紡錘體與充分比對的染色體的方法用以確保有絲分裂期間細胞染色體補體的完整性。
[0011]奧諾拉A基因(AURKA)定位於染色體20ql3.2，在各種腫瘤類型中其通常以高發生率擴增或過度表達。(歐洲分子生物學學會雜誌(1998) 17,3052-3065 ;國際癌症雜誌(Int J Cancer) (2006) 118,357-363 ;細胞生物學雜誌(2003) 161，267-280 ;分子癌症治療學(2007)6,1851-1857 ;美國國家腫瘤研究所雜誌(JNatl Cancer Inst) (2002)94,1320-1329)。奧諾拉A基因表達增加與癌症病因和預後惡化相關。(國際腫瘤學雜誌(IntJ Oncol) (2004)25，1631-1639 ;癌症研究(Cancer Res) (2007) 67，10436-10444 ;臨床癌症研究(Clin Cancer Res) (2004) 10，2065-2071 ;臨床癌症研究(2007) 13，4098-4104 ;國際癌症雜誌(2001)92,370-373 ;英國癌症雜誌(BrJ Cancer) (2001)84，824-831 ;美國國家腫瘤研究所雜誌(2002)94,1320-1329)。以實驗模型支持此概念，表明奧諾拉A過度表達導致致癌性轉化。(癌症研究(2002)62,4115-4122 ;分子癌症研究(Mol Cancer Res) (2009)7，678-688 ;癌基因(Oncogene) (2006) 25，7148-7158 ;細胞研究(Cell Res) (2006) 16，356-366 ;癌基因(2008) 27，4305-4314 ;自然遺傳學(Nat Genet) (1998) 20，189-193)。懷疑奧諾拉A激酶的過度表達會引起奧諾拉A與其調節搭配物之間的化學計量不平衡，從而導致染色體不穩定性和後續轉化事件。奧諾拉A的潛在致癌作用使得對靶向此激酶以治療癌症產生極大興趣。
[0012] 作為有絲分裂的關鍵調節劑，奧諾拉A在有絲分裂進入和細胞通過有絲分裂的正常進展中起必要作用。(自然分子細胞生物學評論(Nat Rev Mol Cell Biol) (2003)4,842-854 ;發育生物學當前課題(Curr Top Dev Biol) (2000) 49，331-42 ;自然分子細胞生物學評論(2001) 2(1)，21-32)。在正常細胞周期期間，奧諾拉A激酶首先表達於G2階段中，其中其定位於中心體並且在中心體成熟和分離以及細胞進入有絲分裂中起作用。在有絲分裂細胞中，奧諾拉A激酶主要定位於中心體和初期有絲分裂紡綞體的近端部分。由此，其與在形成有絲分裂紡錘極和紡綞體、紡綞體在著絲點連接到姐妹染色分體、染色體的後續比對和分離、紡綞體組裝檢查點以及胞質分裂中共同起作用的各組蛋白質相互作用並且磷酸化各組蛋白質。(細胞科學雜誌(2007) 120,2987-2996 ;細胞生物學趨向(TrendsCell Biol) (1999)9,454-459 ；自然分子細胞生物學評論(2003)4，842-854 ;細胞生物學趨向(2005) 15,241-250)。
[0013]雖然奧諾拉A激酶的選擇性抑制使有絲分裂進入延遲(生物化學雜誌(TheJournalof biological chemistry) (2003) 278, 51786-51795),但細胞通常仍會進入有絲分裂，儘管具有非活性奧諾拉A激酶。己選擇性抑制奧諾拉A激酶的細胞表明多種有絲分裂缺陷，包括異常有絲分裂紡錘體(單極或多極紡錘體)和染色體比對過程中的缺陷。隨著時間的推移，單極和多極紡錘體可分解形成兩個相對紡錘極，但一些這些缺陷可通過缺陷有絲分裂立即導致細胞死亡。儘管由奧諾拉A激酶抑制產生的紡綞體缺陷會假定通過活化紡綞體組裝檢查點誘導有絲分裂延遲，但細胞最終會以接近未處理細胞的頻率分裂。(分子與細胞生物學(Mol Cell Biol) (2007) 27 (12)，4513-25 ;細胞周期 Cell Cycle) (2008)7(17)，2691-704 ;分子癌症治療學(2009)8(7)，2046-56)。此不當細胞分裂在歸因於奧諾拉A激酶功能損失的紡綞體組裝檢查點的緩動抑制後發生。(細胞周期(2009) 8 (6)，876-88)。在奧諾拉A激酶不起作用下形成的雙極性紡綞體通常顯示染色體比對和分離缺陷，包括中期的染色體集合缺陷、後期的落後染色體以及末期橋。與染色體分離缺陷一致，用MLN8054( —種奧諾拉A激酶選擇性抑制劑)處理的細胞顯現隨著時間增加的非整倍體。在通過缺陷有絲分裂重複繼代後，用MLN8054處理的細胞通常將經歷衰老，即一種具有獨特形態特徵的不可逆生長停滯。(分子癌症研究(2010) 8 (3)，373-84)。在一些細胞系中，MLN8054處理的細胞退出有絲分裂並且活化P53依賴性有絲分裂期後Gl檢查點，其隨後誘導p21和Bax，從而導致Gl停滯，隨後誘導細胞凋亡。(分子癌症治療學(Mol.Cancer Ther) (2009)8(7),2046-56)。一些細胞還可退出有絲分裂而不發生胞質分裂。這些細胞以正常DNA含量的兩倍進入細胞周期的Gl階段，並且因此稱為Gl四倍體細胞。最後，一些細胞可能發生分裂，但具有嚴重染色體分離缺陷(分子與細胞生物學(2007)27( 2)，4513-25)。在後兩種結果中，異常有絲分裂產生有害非整倍體，從而導致細胞死亡或停滯。或者，一部分這些細胞可能抵抗這些最終結果並且可再進入細胞周期，這是因為己表明非整倍體為腫瘤細胞生長的抑制因子與促進劑。
[0014]癌症療法的其它目標包括有絲分裂原活化蛋白激酶(MAPK)級聯，其為涉及正常細胞增生、存活以及分化調節的關鍵信號傳導通路。在己知MAPK信號傳導通路中，RAF-MEK-ERK通路介導促進腫瘤生長、進展以及轉移的生長因子和致癌因子(例如Ras和Raf突變表型)的增生和抗細胞凋亡信號傳導。視刺激和細胞類型而定，此通路可傳遞使得阻止或誘導細胞凋亡或細胞周期進程的信號。
[0015]細胞外信號調節激酶(ERK)是通過Raf絲氨酸/蘇氨酸激酶活化的演化保守性信號傳導模塊的下遊組分。Raf活化MAP激酶ERK激酶(MEK) I / 2雙特異性蛋白激酶，其接著活化ERKl / 2。另外，Raf-MEK-ERK通路是Ras小GTP酶的關鍵下遊效應子。Ras是表皮生長因子受體(EGFR)的關鍵下遊效應子。ERK活化還促進EGFR配體的上調表達，促進對於腫瘤生長關鍵的自分泌生長環。例如PI3K / PTEN / Akt通路的其它信號轉導通路與Raf / MEK / ERK 通路相互作用以積極或消極地調節其活性，或改變下遊目標的磷酸化狀態。
[0016]人類癌症中此通路的常見突變活化表明此通路在人類腫瘤形成中的重要作用。Ras小GTP酶(人類癌症中最常突變的致癌基因)在多種人類癌症中以突變方式活化和/或過度表達。由於Ras處的突變以及用以調節其活性的其它通路中的基因，故此通路的異常活化出現於白血病中。Raf和Erk在許多不同腫瘤類型中也通常發生突變。
[0017]30%以上原發性腫瘤細胞系中報導MAPK的組成性作用，這些細胞系包括由結腸、肺、乳房、胰腺、卵巢和腎產生的細胞系。(癌基因(1999) 18,813-822)。在腫瘤組織中己檢測到與正常鄰近組織相比較高濃度的活性MAPK / ERK(pMAPK / pERK)。(臨床檢查雜誌(J.Clin.1nvest.)(1997)99，1478—1483)。
[0018]己顯示Ras / Raf / MEK活性的抑制伴隨G0-G1邊界的細胞周期停滯，以及在一些病例中由Bcl2抗細胞凋亡蛋白質下調介導的細胞凋亡，兩者都用以阻斷細胞增生。許多生物化學標記與此停滯相關，包括p21Wafl、p27Kipl的上調、周期素/周期素依賴性激酶
2(cdk2)活性的抑制、低磷酸化pRb的積聚以及E2F活性的抑制。(癌症研究(2005)65(11)，4870-80)。
[0019]倘若涉及驅動細胞周期的蛋白激酶具有重要性，如果可開發出靶向這些激酶的更有效治療方案，那麼將會為有益的。具體地說，組合治療方案對患細胞增生性病症的患者可能有幫助，並且甚至可能降低復發率或克服有時可見於這些患者中的對特定抗癌劑的抗性。
[0020]因此，需要新穎癌症治療方案，包括組合療法。
【發明內容】
【專利附圖】

【附圖說明】
[0021]圖1 用 DMS0(黑色條)、200nM TAK-733 (白色條)、50nM MLN8237 (灰色條)或200nM TAK-733和50nM MLN8237 (陰影線條)連續處理120小時的A2780細胞中有絲分裂的頻率。時移視頻由120小時內以5分鐘時間間隔獲取的細胞影像產生，並且當附著(間期)細胞從培養板的底部集攏時記錄進入有絲分裂的時間。在此段落中，MLN8237是指鈉鹽，單水合4-{[9_氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-嘧啶並[5，4_d] [2]苯並氮雜環庚三烯-2-基]氨基} -2-甲氧基苯甲酸鈉，並且TAK-733是指3_[ (2R) -2，3- 二羥基丙基]_6_氟_5_[ (2-氟-4-碘苯基)氨基]-8-甲基批卩定並[2, 3_d]嘧唳-4，7 (3H, 8H) - 二酮。
[0022]圖2與僅單一藥劑相比，TAK-733與MLN8237的組合使細胞死亡適度增加。在37°C>5% C02下將A2780細胞以每毫升2X IO4個細胞接種並且生長於6孔細胞培養皿上過夜。細胞用 DMSO(0.05% ν / ν)、TAK-733(50nM 或 200nM)、MLN8237(20nM 或 50nM)或同時用TAK-733和MLN8237處理並且在37°C、5% C02下培育96(A)或120(B)小時。如方法中所述產生細胞周期概況。將亞二倍體細胞閘分為與2N DNA含量的細胞相比具有較低水平的碘化丙錠螢光的細胞。在此段落中，MLN8237是指鈉鹽，單水合4-{[9-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-嘧啶並[5，4-d] [2]苯並氮雜環庚三烯-2-基]氨基} -2-甲氧基苯甲酸鈉，並且TAK-733是指3- [ (2R) -2, 3- 二羥基丙基]-6-氟-5- [ (2-氟-4-碘苯基)氨基]-8-甲基吡啶並[2，3-d]嘧啶-4，7 (3H, 8H) - 二酮。
【具體實施方式】
[0023]本發明提供治療增生性病症的新穎組合療法。具體地說，本發明提供一種治療患增生性病症的患者的方法，其包含向所述患者投與MEK抑制劑與奧諾拉A激酶選擇性抑制劑的組合，其中當組合使用時每一抑制劑的量在治療上有效。本發明還提供一種MEK抑制劑與奧諾拉A激酶選擇性抑制劑的組合，其用於製造用以治療增生性病症的藥劑，其中當組合使用時每一抑制劑的量在治療上有效。本發明還提供包含MEK抑制劑與奧諾拉A激酶選擇性抑制劑的組合的醫藥組合物和試劑盒。
[0024]儘管單一藥劑MEK抑制劑和單一藥劑奧諾拉A激酶選擇性抑制劑可證明對治療某些患者和某些癌症類型有效，但本
【發明者】意外地發現MEK抑制劑與奧諾拉A激酶選擇性抑制劑的組合療法提供任一藥劑個別不會實現的效益。
[0025]如上文所述，MEK抑制的典型理解是在細胞周期的GO-Gl邊界完全停滯，由此阻斷細胞增生。與此理解相反，本
【發明者】發現用MEK抑制劑處理的細胞通過一個或一個以上細胞周期事件使周期繼續。儘管抑制MEK，此繼續細胞周期分裂仍出現並且伴隨異常細胞周期進程時間和在G1、S以及G2 / M階段內改變的繼代速率。本
【發明者】也在一些細胞類型中觀測到DNA損傷標記和異常有絲分裂表型的上調。
[0026]這些觀測與關於MEK在DNA修復中的功能和DNA損傷檢查點功能中所報導的作用一致。不希望受理論束縛，本
【發明者】相信MEK抑制會引起歸因於誘導與損害DNA損傷反應和細胞周期檢查點功能相關的細胞病變的細胞生存力降低。這些細胞病變誘導細胞周期進程減緩並且誘導細胞死亡或最終生長停滯。在MEK抑制劑治療的直接後果中，
【發明者】報導細胞使周期繼續多輪細胞分裂。單一藥劑MEK抑制劑處理的此繼續循環表型根據文獻不直觀，並且表明與選擇性奧諾拉A抑制劑組合，MEK抑制劑處理將提供附加治療效益，這是因為在任一藥劑的活性不妨礙其它藥劑的活性的情況下由於誘導立即細胞周期阻斷將擾亂多個點的正常細胞周期進程。相反，典型地認為，預計MEK抑制劑不會與奧諾拉A激酶抑制劑充分組合，這是因為通過MEK抑制誘導的完全並且立即的細胞周期阻斷將視為幹擾抑制奧諾拉A激酶通過誘導有絲分裂缺陷降低細胞生存力的能力。
[0027]定義:
[0028]除非另外指出，否則本文所用的術語應符合以下定義的含義。
[0029]如本文所用，術語「MEK」是指MAPK激酶家族的成員，其為磷酸化其MAP激酶底物的活化環內的蘇氨酸和酪氨酸殘基的雙特異性酶。此家族中的酶包括MEKl、MEK2、MEK3、MEK4、MEK5、MEK6 和 MEK7。
[0030]術語「MEK抑制劑」或「MEK的抑制劑」用以表示能夠與MEK相互作用並且抑制其酶活性的化合物。抑制MEK酶活性意指降低MEK磷酸化底物肽或蛋白質的能力。在多個實施例中，所述MEK活性降低至少約50%，至少約75%、至少約90%、至少約95%或至少約99%。在多個實施例中，降低MEK酶活性所需的MEK抑制劑的濃度小於約ltM、小於約500nM、小於約IOOnM或小於約50nM。
[0031]在一些實施例中，所述抑制具有選擇性，即MEK抑制劑以低於產生另一不相關生物效應(例如降低不同激酶的酶活性)所需的抑制劑濃度的濃度降低MEK磷酸化底物肽或蛋白質的能力。在一些實施例中，MEK抑制劑也降低另一激酶，優選涉及癌症的激酶的酶活性。
[0032]如本文所用，術語「奧諾拉A激酶」是指涉及有絲分裂進展的絲氨酸/蘇氨酸激酶。奧諾拉 A 激酶也稱為 AIK、ARKl、AURA、BTAK、STK6、STK7、STK15、AUR0RA2、MGC34538 和AURKA。多種在細胞分裂中起作用的細胞蛋白質是用於通過奧諾拉A激酶磷酸化的底物，包括(但不限於)p53、TPX-2、XIEg5 (在非洲爪蟾中)和D-TACC (在果蠅中)。奧諾拉A激酶本身也是用於自磷酸化的底物，例如在Thr288。奧諾拉A激酶優選為人類奧諾拉A激酶。
[0033]使用術語「奧諾拉A激酶的抑制劑」或「奧諾拉A激酶抑制劑」表示能夠與奧諾拉A激酶相互作用並且抑制其酶活性的化合物。抑制奧諾拉A激酶酶活性意指降低奧諾拉A激酶磷酸化底物肽或蛋白質的能力。在多個實施例中，所述奧諾拉A激酶活性降低至少約75%、至少約90%、至少約95%或至少約99%。在多個實施例中，降低奧諾拉A激酶酶活性所需的奧諾拉A激酶抑制劑的濃度小於約I μ Μ、小於約500ηΜ、小於約IOOnM或小於約50ηΜ。抑制奧諾拉A激酶酶活性的濃度優選低於抑制奧諾拉B激酶酶活性所需的抑制劑的濃度。在多個實施例中，降低奧諾拉A激酶酶活性所需的奧諾拉A激酶抑制劑的濃度為降低奧諾拉B激酶酶活性所需的抑制劑的濃度的至少約I / 2、至少約I / 5、至少約I / 10、至少約I / 20、至少約I / 50、至少約I / 100、至少約I / 500或至少約I / 1000。
[0034] 抑制奧諾拉A和抑制奧諾拉B產生明顯不同的細胞表型。(美國國家科學院院刊(Proc.Natl.Acad.Sc1.) (2007) 104:4106 ;分子癌症治療學(2009) 8 (7)，2046-56 ;化學與生物學(Chem Biol.) (2008) 15(6)552-62)。舉例來說，如定量絲氨酸10上的磷酸化組蛋白H3 (pHisH3)所測量，在不抑制奧諾拉B下抑制奧諾拉A使有絲分裂指數增加。pHisH3是生理性系統中奧諾拉B的唯一底物(例如完整細胞)。相反，抑制奧諾拉B或雙重抑制奧諾拉A與奧諾拉B使pHisH3降低。因此，如本文所用，術語「奧諾拉A激酶選擇性抑制劑」或「選擇性奧諾拉A激酶抑制劑」是指展現有效抗腫瘤濃度的奧諾拉A激酶抑制劑表型的抑制劑。在一些實施例中，如定量pHisH3所測量，選擇性奧諾拉A激酶抑制劑在以使血漿中的游離部分調節濃度(CaJ等於人類在最大耐受劑量(MTD)下於血漿中實現的游離部分調節濃度的劑量投與小鼠時，會引起短暫有絲分裂延遲。如本文所用，「游離部分調節濃度」是指游離藥物(未結合蛋白質)的血漿濃度。
[0035]如本文所用，術語「組合」是指使用MEK抑制劑與選擇性奧諾拉A激酶抑制劑治療相同患者的相同疾病或病狀。如下文所進一步描述，除非明確地指定，否則術語「組合」不會限制MEK抑制劑和選擇性奧諾拉A激酶抑制劑的投藥時序。
[0036]本文使用術語「約」意指大約、在……左右、大致或左右。術語「約」與數值範圍結合使用時，可通過在所述數值上下擴展邊界值來修飾所述範圍。一般來說，本文使用術語「約」以10%偏差在數值上下修飾所述數值。
[0037]如本文所用，術語「包含」意指「包括(但不限於)」。
[0038]如本文所用，術語「脂肪族」或「脂肪族基」意指完全飽和或含有一個或一個以上不飽和單元，但非芳香族的經取代或未經取代的直鏈、分支鏈或環狀(V12烴。舉例來說，適當脂肪族基包括經取代或未經取代的直鏈、分支鏈或環狀烷基、烯基、炔基和其雜合物，例如(環烷基)烷基、(環烯基)烷基或(環烷基)烯基。
[0039]單獨或作為較大部分的一部分使用的術語「烷基」、「烯基」和「炔基」是指具有I到12個碳原子的直鏈和分支鏈脂肪族基。就本發明來說，當連接脂肪族基到分子的其餘部分的碳原子為飽和碳原子時，使用術語「烷基」。然而，烷基可包括其它碳原子處的不飽和。因此，烷基包括(但不限於)甲基、乙基、丙基、稀丙基、塊丙基、丁基、戍基和己基。
[0040]就本發明來說，當連接脂肪族基到分子的其餘部分的碳原子形成碳-碳雙鍵的一部分時，使用術語「烯基」。烯基包括(但不限於)乙烯基、1-丙烯基、1-丁烯基、1-戊烯基和1-己烯基。
[0041]就本發明來說，當連接脂肪族基到分子的其餘部分的碳原子形成碳-碳三鍵的一部分時，使用術語「炔基」。炔基包括(但不限於)乙炔基、1-丙炔基、1-丁炔基、1-戊炔基和1-己炔基。
[0042]單獨或作為較大部分的一部分使用的術語「環脂肪族」是指具有3到約14個成員的飽和或部分不飽和環狀脂肪族環系統，其中所述脂肪族環系統任選地經取代。在一些實施例中，環脂肪族為具有3到8或3到6個環碳原子的單環烴。非限制性實例包括環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環庚基、環庚烯基、環辛基、環辛烯基和環辛二烯基。在一些實施例中，環脂肪族為具有6到12、6到10或6到8個環碳原子的橋連或稠合雙環烴，其中雙環系統中的任何個別環具有3到8個成員。
[0043]在一些實施例中，環脂肪族環上的兩個鄰近取代基連同插入環原子一起形成具有O到3個選自由O、N和S組成的群組的環雜原子的任選地經取代的稠合5到6元芳香族環或3到8元非芳香族環。因此，術語「環脂肪族」包括稠合到一個或一個以上芳基、雜芳基或雜環基環的脂肪族環。非限制性實例包括二氫茚基、5，6，7，8-四氫喹喔啉基、十氫萘基或四氫萘基，其中連接基團或連接點在脂肪族環上。術語「環脂肪族」可與術語「碳環(carbocycle) 」、「碳環基(carbocyclyl) 」、「碳環(carbocyclo) 」 或「碳環狀(carbocyclic) 」互換使用。
[0044]「環烷基」意指非芳香族、飽和或部分不飽和單環、雙環或多環狀環集合。通常使用(Cx)環烷基和(Crf)環烷基，其中X和Y指示環集合中的碳原子數。舉例來說，(C3^10)環烷基包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環己烯基、2，5-環己二烯基、雙環[2.2.2]辛基、金剛烷-1-基、十氫萘基、側氧基環己基、二側氧基環己基、硫基環己基、2-側氧基雙環[2.2.1]庚-1-基等等。在特定實施例中，單獨或與另一基團一起表示的「環烷基」可為(C3_i4)環烷基、(C3_1(l)環烷基、(C3_7)環烷基、(C8_1(l)環烷基或(C5_7)環烷基。或者，單獨或與另一基團一起表示的「環烷基」可為(C5)環烷基、(C6)環烷基、(C7)環烷基、(C8)環烷基、(C9)環烷基或(Cltl)環烷基。
[0045]「雙環烷基」意指飽和或部分不飽和稠合、螺或橋連雙環狀環集合。在特定實施例中，單獨與另一基團一起表不的「雙環烷基」可為(C4-15)雙環烷基、(C4-J0)雙環烷基、(C6_10)雙環烷基或(C8-1(l)雙環烷基。或者，單獨或與另一基團一起表不的「雙環烷基」可為(C8)雙環烷基、(C9)雙環烷基或(Cltl)雙環烷基。
[0046]「雙環芳基」意指稠合、螺或橋連雙環狀環集合，其中構成所述集合的環中的至少一者為芳香族環。通常使用(Cx)雙環芳基和(Crf)雙環芳基，其中X和Y指示雙環狀環集合中直接與環連接的碳原子數。在特定實施例中，單獨或與另一基團一起表示的「雙環芳基」可為(C4_15)雙環芳基、(C4_1Q)雙環芳基、(C6_1Q)雙環芳基或(C8_1Q)雙環芳基。或者，單獨或與另一基團一起表 示的「雙環烷基」可為(C8)雙環芳基、(C9)雙環芳基或(Cltl)雙環芳基。
[0047]單獨或作為較大部分(例如「芳烷基」、「芳烷氧基」或「芳氧基烷基」)的一部分使用的術語「芳基」和「芳_，，是指包含I到3個環的C6到C14芳香族烴，各環任選地經取代。芳基優選為C6,芳基。芳基包括(但不限於)苯基、萘基和蒽基。在一些實施例中，芳環上的兩個鄰近取代基連同插入環原子一起形成具有O到3個選自由0、N和S組成的群組的環雜原子的任選地經取代的稠合5到6元芳香族環或4到8元非芳香族環。因此，如本文所用，術語「芳基」包括芳環稠合到一個或一個以上雜芳基、環脂肪族或雜環基環的基團，其中連接基團或連接點在芳環上。這些稠環系統的非限制性實例包括叼丨哚基、異叼丨哚基、苯並噻吩基、苯並呋喃基、二苯並呋喃基、吲唑基、苯並咪唑基、苯並噻唑基、喹啉基、異喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基、芴基、二氫茚基、菲啶基、四氫萘基、吲哚啉基、吩噁嗪基、苯並二氧雜環己烷基和苯並間二氧雜環戊烯基。芳基可為單環、雙環、三環或多環，優選為單環、雙環或三環，更優選為單環或雙環。術語「芳基(aryl) 」可與術語「芳基(aryl group) 」、「芳基部分」和「芳環」互換使用。
[0048]「芳烷基」或「芳基烷基」包含與烷基共價連接的芳基，所述烷基或芳基獨立地任選地經取代。芳烷基優選為C6,芳基(Cu)烷基、C6,芳基(Ch)烷基或C6_1(l芳基(Cu)烷基，包括(但不限於)苯甲基、苯乙基和萘甲基。
[0049]單獨或作為較大部分(例如「雜芳烷基」或「雜芳烷氧基」)的一部分使用的術語「雜芳基」和「雜芳_，，是指具有5到14個環原子，優選5、6、9或10個環原子；於環排列中共有6、10或14個^電子；並且除碳原子外具有I到4個雜原子的基團。術語「雜原子」是指氮、氧或硫並且包括任何氧化形式的氮或硫以及任何季銨化形式的鹼性氮。雜芳基包括(但不限於)噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、異噁唑基、噁二唑基、噻唑基、異噻唑基、噻二唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲嗪基、嘌呤基、萘啶基和蝶啶基。在一些實施例中，雜芳基上的兩個鄰近取代基連同插入環原子一起形成具有O到3個選自由O、N和S組成的群組的環雜原子的任選地經取代的稠合5到6元芳香族環或4到8元非芳香族環。因此，如本文所用，術語「雜芳基」和「雜芳也包括雜芳環稠合到一個或一個以上芳基、環脂肪族或雜環基環的基團，其中連接基團或連接點在雜芳環上。非限制性實例包括吲哚基、異吲哚基、苯並噻吩基、苯並呋喃基、二苯並呋喃基、吲唑基、苯並咪唑基、苯並噻唑基、喹啉基、異喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、4H-喹嗪基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基和吡啶並[2，3-13]-1，4-噁嗪-3(4?)-酮。雜芳基可為單環、雙環、三環或多環，優選為單環、雙環或三環，更優選為單環或雙環。術語「雜芳基(heteiOaryl)」可與術語「雜芳環」、「雜芳基(heteroaryl group) 」或「雜芳香族」互換使用，這些術語中的任一者包括任選地經取代的環。術語「雜芳烷基」是指經雜芳基取代的烷基，其中烷基和雜芳基部分獨立地任選地經取代。
[0050]如本文所用，術語「雜環」、「雜環基(heterocyclyl) 」、「雜環基(heterocyclicradical) 」和「雜環狀環」可互換使用並且是指穩定的3到7元單環或指稠合7到10元或橋連6到10元雙環雜環部分，其為飽和或部分不飽和並且除碳原子外具有一個或一個以上(優選I到4個)如上所定義的雜原子。當關於雜環的環原子使用時，術語「氮」包括經取代的氮。舉例來說，在具有 I到3個選自氧、硫或氮的雜原子的雜環基環中，所述氮可為N(如在3，4- 二氫-2H-吡咯基中)、NH (如在吡咯烷基中)或+NR (如在N-取代的吡咯烷基中)。可將雜環狀環於任何可產生穩定結構的雜原子或碳原子處連接到其側基並且這些環原子中的任一者都可任選地經取代。這些飽和或部分不飽和雜環基的實例包括(但不限於)四氫呋喃基、四氫噻吩基、吡咯烷基、吡咯烷酮基、哌啶基、吡咯啉基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基、十氫喹啉基、噁唑啶基、哌嗪基、二氧雜環己烷基、二氧雜環戊烷基、二氮雜環己三烯基、氧雜氮雜環己三烯基、硫雜氮雜環己三烯基、嗎啉基和奎寧環基。
[0051]在一些實施例中，雜環狀環上的兩個鄰近取代基連同插入環原子一起形成具有O到3個選自由O、N和S組成的群組的環雜原子的任選地經取代的稠合5到6元芳香族環或3到8元非芳香族環。因此，術語「雜環」、「雜環基(heterocyclyl) 」、「雜環基環」、「雜環基(heterocyclic group) 」、「雜環部分」和「雜環基(heterocyclic radical) 」 在本文中可互換使用，並且包括雜環基環稠合到一個或一個以上芳基、雜芳基或環脂肪族環的基團，例如吲哚啉基、3H-吲哚基、色滿基、菲啶基或四氫喹啉基，其中連接基團或連接點在雜環基環上。雜環基可為單環、雙環、三環或多環，優選為單環、雙環或三環，更優選為單環或雙環。術語「雜環基烷基」是指經雜環基取代的烷基，其中所述烷基和所述雜環基部分獨立地任選地經取代。
[0052]如本文所用，術語「部分不飽和」是指於環原子之間包括至少一個雙或三鍵的環部分。術語「部分不飽和」打算涵蓋具有多個不飽和位點的環，但不打算包括如本文所定義的芳基或雜芳基部分。
[0053]術語「滷基脂肪族」、「滷基烷基」、「滷基烯基」和「滷基烷氧基」是指視具體情況而定經一個或一個以上滷素原子取代的脂肪族基、烷基、烯基或烷氧基。如本文所用，術語「滷素」或「滷基」意指F、Cl、Br或I。術語「氟脂肪族」是指滷素為氟的滷基脂肪族基。
[0054]術語「亞烷基」是指二價烷基。「亞烷基鏈」為聚亞甲基，即-(CH2)n-,其中η為正整數，優選為I到6，I到4，I到3，I到2或2到3。經取代的亞烷基鏈為聚亞甲基，其中一個或一個以上亞甲基氫原子經取代基置換。適當取代基包括以下關於經取代脂肪族基描述的取代基。亞烷基鏈也可在一個或一個以上位置經脂肪族基或經取代脂肪族基取代。
[0055] 「氨基」意指具有兩個其它取代基的氮部分，其中例如氫或碳原子與氮連接。舉例來說，代表性氨基包括-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NH((Cu。)烷基)、-N((C1^ici)烷基)2、-ΝΗ(芳基)、_ΝΗ(雜芳基)、_Ν(芳基)2、-Ν(雜芳基)2等等。任選地，兩個取代基連同氮一起也可形成環。除非另外指示，否則含有氨基部分的本發明化合物可包括其經保護的衍生物。氨基部分的適當保護基包括乙醯基、叔丁氧羰基、苯甲氧羰基等等。
[0056]「羰基」意指基團-C (=0)-和/或-C (=0)R，其中R為氫或另一取代基。應注意，羰基可進一步經多個取代基取代以形成包括酸、酸滷化物、醛、醯胺、酯和酮的不同羰基。
[0057]「羧基」意指基團-C(=0)-0-和/或-C(=0)_0R，其中R為氫或另一取代基。應注意，含有羧基部分的本發明化合物可包括其經保護的衍生物，即其中氧經保護基取代。羧基部分的適當保護基包括苯甲基、叔丁基等等。
[0058]「氰基」意指基團-CN。
[0059]「硝基」意指基團-N02。
[0060]「羥基」意指基團-OH。
[0061]「亞氨基」意指基團-CR(=NR')和/或_C(=NR' )_，其中R和V各獨立地為氫或另一取代基。
[0062]「氧基」意指基團-O-或-0R，其中R為氫或另一取代基。因此，應注意氧基可經多個取代基進一步取代以形成不同氧基，包括羥基、烷氧基、芳氧基、雜芳氧基或擬氧基。
[0063]「亞磺醯基」意指基團-SO-和/或-S0-R，其中R為氫或另一取代基。應注意，亞磺醯基可經多個取代基進一步取代以形成不同亞磺醯基，包括亞磺酸、亞磺醯胺、亞磺醯酯和亞碸。
[0064]「磺醯基」意指基團-SO2-和/或-SO2-R,其中R為氫或另一取代基。應注意，磺醯基可經多個取代基進一步取代以形成不同磺醯基，包括磺酸、磺醯胺、磺酸酯和碸。
[0065]「硫基」表示用硫置換氧，並且包括(但不限於)含-SR、-S-和=S的基團。
[0066]「硫烷基」意指如上所定義的烷基，其例外為其中形成烷基鏈的一個或一個以上碳原子經硫原子(-S-或-S-R，其中R為氫或另一取代基)置換。舉例來說，硫(C1,)烷基是指包含I到10個碳和一個或一個以上硫原子的鏈。
[0067]「硫羰基」意指基團-C(=S)-和/或-C(=S)_R，其中R為氫或另一取代基。應注意，硫羰基可經多個取代基進一步取代以形成不同硫羰基，包括硫代酸、硫代醯胺、硫代酯和硫代酮。
[0068]「可在體內轉化為氫的取代基」意指可通過酶學或化學方式(包括(但不限於)水解和氫解)轉化為氫原子的任何基團。實例包括可水解基團，例如醯基、具有氧羰基的基團、氣基酸殘基、妝殘基、鄰硝基苯基次橫酸基、二甲基娃烷基、四氫!吡喃基、二苯基氧勝基等等。醯基的實例包括甲醯基、乙醯基、三氟乙醯基等等。具有氧羰基的基團的實例包括乙氧羰基、叔丁氧羰基[(CH3)3C-OCO-]、苯甲氧羰基、對甲氧基苯甲氧羰基、乙烯基氧羰基、β_(對甲苯磺醯基)乙氧羰基等等。適當胺基酸殘基的實例包括胺基酸殘基本身和經保護基保護的胺基酸殘基。適當胺基酸殘基包括(但不限於)Gly (甘氨酸)、Ala(丙氨酸；CH3CH (NH2) CO-)、Arg (精氨酸)、Asn (天冬醯胺)、Asp (天冬氨酸)、Cys (半胱氨酸)、Glu (穀氨酸)、His (組氨酸)、Ile (異亮氨酸)、Leu (亮氨酸；(CH3)2CHCH2CH(NH2) CO-)、Lys (賴氨酸)、Met (甲硫氨酸)、Phe (苯丙氨酸)、Pro (脯氨酸)、Ser (絲氨酸)、Thr (蘇氨酸)、Trp (色氨酸)、Tyr (酪氨酸)、Val (纈氨酸)、Nva (正纈氨酸)、Hse (高絲氨酸)、4-取？(4-羥脯氨酸)、5-取1(5-羥基賴氨酸)、0111(鳥氨酸)和β-Ala殘基。適當保護基的實例包括通常用於肽合成的保護基，包括醯基(例如甲醯基和乙醯基)、芳基甲氧羰基(例如苯甲氧羰基和對硝基苯甲氧羰基)、叔丁氧羰基[(CH3)3C-OCO-]等等。適當肽殘基包括包含2到5個，並且任選地2到3個前述胺基酸殘基的肽殘基。這些肽殘基的實例包括(但不限於)例如 Ala-Ala[CH3CH(NH2) CO-NHCH(CH3) CO-]、Gly-Phe, Nva-Nva, Ala-Phe,Gly-Gly、Gly-Gly-Gly、 Ala-Met、Met-Met、Leu_Met 和 Ala-Leu 的妝殘基。這些胺基酸或妝的殘基可以D形、L形或其混合物的立體化學配置呈現。此外，胺基酸或肽殘基可具有不對稱碳原子。具有不對稱碳原子的適當胺基酸殘基的實例包括Ala、Leu、Phe、Trp、Nva、Val、Met、Ser、LyS、Thr和Tyr的殘基。具有不對稱碳原子的肽殘基包括具有一個或一個以上具有不對稱碳原子的組成胺基酸殘基的肽殘基。適當胺基酸保護基的實例包括通常用於肽合成中的胺基酸保護基，包括醯基(例如甲醯基和乙醯基)、芳基甲氧羰基(例如苯甲氧羰基和對硝基苯甲氧羰基)、叔丁氧羰基[(CH3)3C-OCO-]等等。「可在體內轉化為氫」的取代基的其它實例包括可還原消除的可氫解基團。適當可還原消除的可氫解基團的實例包括(但不限於)芳基磺醯基(例如鄰甲苯磺醯基)；經苯基或苯甲氧基取代的甲基(例如苯甲基、三苯甲基和苯甲氧基甲基)；芳基甲氧羰基(例如苯甲氧羰基和鄰甲氧基-苯甲氧羰基)；以及滷基乙氧羰基(例如β，β，β-三氯乙氧羰基和β-碘乙氧羰基)。
[0069]具有以虛線鍵表示的式的化合物打算包括任選地具有O個、一個或一個以上雙鍵
的式,如下文所例示並且展示:
【權利要求】
1.一種治療患增生性病症的患者的方法，其包含向所述患者投與MEK抑制劑與奧諾拉(AuiOra)A激酶選擇性抑制劑的組合，其中當組合使用時每一抑制劑的量均是治療上有效的。
2.根據權利要求1所述的方法，其中所述增生性病症為癌症。
3.根據權利要求2所述的方法，其中所述癌症選自由以下各項組成的群組:胃癌、頭頸鱗狀細胞癌、小細胞肺癌、黑素瘤和結腸直腸癌。
4.根據權利要求1所述的方法，其中所述MEK抑制劑由式(IA)表示:
5.根據權利要求4所述的方法，其中R1包含:
6.根據權利要求4所述的方法，其中所述MEK抑制劑由式(II)表示:
7.根據權利要求1所述的方法，其中所述MEK抑制劑為3-[(2R )_2，3_ 二羥基丙基]_6_氟_5_[ (2-氟-4-碘苯基)氨基]-8-甲基批卩定並[2, 3_d]嘧唳-4，7 (3H, 8H) - 二酮(TAK-733)或其藥學上可接受的鹽。
8.根據權利要求1所述的方法，其中所述奧諾拉A激酶選擇性抑制劑由式(III)表示:
9.根據權利要求8所述的方法，其中所述奧諾拉A激酶選擇性抑制劑由式(IV)表示:
10.根據權利要求1所述的方法，其中所述奧諾拉A激酶選擇性抑制劑為4-{[9-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-嘧啶並[5，4_d] [2]苯並氮雜環庚三烯_2_基]氨基}-2_甲氧基苯甲酸(阿利色替(alisertib) (MLN8237))或其藥學上可接受的鹽。
11.根據權利要求10所述的方法，其中所述藥學上可接受的鹽為4-{[9-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-嘧啶並[5，4_d] [2]苯並氮雜環庚三烯_2_基]氨基}-2_甲氧基苯甲酸鈉。
【文檔編號】A01N43/00GK103957709SQ201280036936
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2012年6月4日 優先權日:2011年6月3日
【發明者】阿里吉特·查克拉瓦蒂, 派屈克·文森特 申請人:米倫紐姆醫藥公司, 武田藥品工業有限公司