一種喜樹鹼的分離純化方法
2023-04-28 04:30:31 1
專利名稱：一種喜樹鹼的分離純化方法
技術領域：
本發明涉及一種喜樹鹼的分離純化方法，屬於化工分離技術領域。
背景技術：
喜樹喊(Camptothecin,CPT)是從拱桐科(Nyssaceae)植物喜(Camptotheca acuminataDence.)中分離得到的一種生物鹼。喜樹鹼對頭頸部腫瘤、胃癌、結腸癌、膀朧癌和白血病等多種惡性腫瘤均有顯著的療效，是目前為止發現唯一的一類拓撲異構酶 (Topoisormerase)〗的抑制劑。喜樹鹼類藥物是繼紫杉醇之後第二個獲準上市的具抗癌活性的天然藥物。
喜樹鹼結構式
目前普遍採用的分離喜樹生物鹼的方法有重結晶法、層析與色譜法，大孔吸附樹脂提取法、聚醯胺分離純化法、高速逆流色譜分離法、超臨界流體C02萃取法等。常用的重結晶法是將溶劑提取或鹼提取的粗品經過多次重結晶後得到最終成品，重結晶法雖然操作簡便，但是純度不高；層析法的溶劑消耗量大，操作時間長，其過程中成品損失量大，導致最終得率低；雖然高速逆流色譜法克服了不可逆吸附消耗，可設備構造複雜不宜規模化生產使用，且難以選擇合適的溶劑體系，直接影響成品的純度；超臨界流體C02萃取法除去的是喜樹中的揮髮油、酯等成分，只是減少粗提中的雜質，並不能細分各種喜樹生物鹼各成分。 總體上，傳統的喜樹生物鹼提取分離方法，其溶劑消耗量大，操作工藝複雜，持續時間長，提取純度低，生產成本高。
喜樹生物鹼(Camptothecin)分子結構呈高度不飽和態,五環之間有連續的共軛系統，對光、熱敏感，喜樹鹼沒有明顯的鹼性，不能與各種酸成鹽，喜樹生物鹼幾乎不溶於水，除乙醇、氯仿、二甲基亞碸等少數溶劑外，難溶於一般溶劑，但是在緩衝介質中，喜樹生物鹼內酯環與開環羧酸鹽之間存在動態平衡(李玉豔.尤啟冬.李志裕.王華抗腫瘤新藥伊立替康的合成研究，中國藥物化學雜誌2001 (4) ):pH7.4 時，以開環羧酸鹽形式為主。本發明利用喜樹鹼開/閉環性質，發現開環喜樹鹼由於幾何原因在形成複合物過程中分子間相互作用力的不同，從而有選擇地形成複合物結晶來 分離生物鹼，開發出一種新的分離方法。發明內容
本發明的目的在於提供一種喜樹鹼的分離純化方法，此方法能夠合理高效的起到分離喜樹鹼的作用，為實驗工作和生產工作提供很大的方便，同時避免了物質和能源的浪費。
本發明解決其技術問題所採用的技術方案是:
一種喜樹鹼的分離純化方法，所述方法包括下列步驟:
(I)將喜樹鹼混合物加入氫氧化鈉溶液中開環處理，所述氫氧化鈉溶液的摩爾濃度為2 5mol/L,氫氧化鈉與喜樹鹼混合物中喜樹鹼的摩爾比為1:2 ;
(2)向步驟(I)的反應液中依次加入分離試劑和分離溶劑，於40 80°C反應2 3h，自然冷卻後於-10 40°C度靜置直至析出開環喜樹鹼與分離試劑的複合物晶體，然後過濾得到開環喜樹鹼與分離試劑的複合物晶體粗品，所述分離試劑為鹽酸胍、碳酸胍、硫酸胍或硝酸胍，分離試劑與喜樹鹼混合物中喜樹鹼的摩爾比為2 1:1 ;所述分離溶劑為甲醇-水、乙醇-水或丙酮-水，分離溶劑中醇或酮與水的體積比為I 2:1，分離溶劑的用量以喜樹鹼混合物的質量計為3 20ml/g ；
(3)將開環喜樹鹼與分離試劑的複合物晶體粗品重結晶後過濾，然後將濾餅加至濃鹽酸中攪拌均勻，然後抽濾、洗滌、乾燥即得喜樹鹼，所述重結晶採用的重結晶溶劑為甲醇-水或乙醇-水；所述重結晶溶劑中醇與水的體積比為:1:2 4。
作為優選，步驟(I)中所述喜樹鹼混合物中喜樹生物鹼(指來源於喜樹，結構與喜樹鹼類似的化合物)的總質量含量為90%，喜樹鹼質量含量為60% 80%。
作為優選，步驟(2)中靜置直至析出開環喜樹鹼與分離試劑的複合物晶體的靜置時間為I 12h。
作為優選，步驟(3)中所述濃鹽酸的摩爾濃度為5mol/L。
本發明利用主體分子與客體分子之間幾何匹配，提出了用分子識別的方法來分離含有內酯環的喜樹鹼和其他生物鹼，由於喜樹生物鹼內酯環與開環羧酸鹽之間存在動態平衡:pH〈4.5時，以內酯環形式為主，pH>7.4時，以開環羧酸鹽形式為主，開環喜樹鹼鈉鹽因為特異幾何性質，在溶液中能有選擇地與無機胍鹽發生複分解反應，形成開環喜樹鹼-胍複合物(也可稱為:開環喜樹鹼-胍鹽)結晶，然後開環喜樹鹼胍鹽結晶在酸性條件下，重新閉環成喜樹鹼沉澱，而胍則溶於酸性溶劑中。
權利要求
1.一種喜樹鹼的分離純化方法，其特徵在於所述方法包括下列步驟(1)將喜樹鹼混合物加入氫氧化鈉溶液中開環處理，所述氫氧化鈉溶液的摩爾濃度為 2飛mol/L，氫氧化鈉與喜樹鹼混合物中喜樹鹼的摩爾比為1:2 ;(2)向步驟(I)的反應液中依次加入分離試劑和分離溶劑，於4(T80°C反應疒3h，自然冷卻後於-1(T4(TC度靜置直至析出開環喜樹鹼與分離試劑的複合物晶體，然後過濾得到開環喜樹鹼與分離試劑的複合物晶體粗品，所述分離試劑為鹽酸胍、碳酸胍、硫酸胍或硝酸胍，分離試劑與喜樹鹼混合物中喜樹鹼的摩爾比為2 1:1 ;所述分離溶劑為甲醇-水、乙醇-水或丙酮-水，分離溶劑中醇或酮與水的體積比為廣2:1，分離溶劑的用量以喜樹鹼混合物的質量計為3 20ml/g ；(3)將開環喜樹鹼與分離試劑的複合物晶體粗品重結晶後過濾，將濾餅加至濃鹽酸中攪拌均勻，然後抽濾、洗滌、乾燥即得喜樹鹼，所述重結晶採用的重結晶溶劑為甲醇-水或乙醇-水；所述重結晶溶劑中醇與水的體積比為1: 2^4ο
2.根據權利要求I所述的一種喜樹鹼的分離純化方法，其特徵在於步驟(I)中所述喜樹鹼混合物中喜樹生物鹼的總質量含量為90%，喜樹鹼質量含量為60°/Γ80%。
3.根據權利要求I或2所述的一種喜樹鹼的分離純化方法，其特徵在於步驟(2)中靜置直至析出開環喜樹鹼與分離試劑的複合物晶體的靜置時間為fl2h。
4.根據權利要求I或2所述的一種喜樹鹼的分離純化方法，其特徵在於步驟(3)中所述濃鹽酸的摩爾濃度為5mol/L。
全文摘要
本發明涉及一種喜樹鹼的分離純化方法，所述方法包括下列步驟(1)將喜樹鹼混合物加入氫氧化鈉溶液中開環處理；(2)向步驟(1)的反應液中依次加入分離試劑和分離溶劑，於40~80℃反應2~3h；自然冷卻後於-10~40℃度靜置直至析出開環喜樹鹼與分離試劑的複合物晶體，過濾得到喜樹鹼與分離試劑的複合物晶體粗品，所述分離試劑為鹽酸胍、碳酸胍、硫酸胍或硝酸胍，所述分離溶劑為甲醇-水、乙醇-水或丙酮-水；(3)將開環喜樹鹼與分離試劑的複合物晶體粗品重結晶後過濾，濾餅加至濃鹽酸中攪拌均勻，然後抽濾、洗滌、乾燥即得喜樹鹼。本發明能夠合理高效的起到分離喜樹鹼的作用，為實驗工作和生產工作提供很大的方便，同時避免了物質和能源浪費。
文檔編號C07D491/22GK103254206SQ20131019123
公開日2013年8月21日 申請日期2013年5月21日 優先權日2013年5月21日
發明者李康武, 金志敏, 夏春年, 李亞琴 申請人:浙江工業大學