以螺旋藻為主要成分的組合物的製作方法

2023-04-28 07:14:46 2

專利名稱：以螺旋藻為主要成分的組合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種組合物，特別是一種以螺旋藻為主要成分的組合物。
背景技術：
由於我國不同地區人們的飲食習慣、烹飪方法，若長期縱酒、素食、偏食等，均可引起維生素B12、維生維C、葉酸、鐵、蛋白質等營養物質的缺乏，從而易患營養性貧血。中國專利申請號95111284公開了一種螺旋藻補血片，由螺旋藻乾粉、輔以鐵質、微晶纖維素和硬脂酸鎂配伍組成，含鐵量佔總重的1～1.2％，存在以下問題，一是富血鐵添加太多，超出人體營養素攝入量，長期服用，可能產生毒副作用；二是工藝在一定溫度下乾燥，可能引起二價鐵向三價鐵轉化。

發明內容
本發明的目的就是提供一種含鐵量高，易被人體吸收，能補血的組合物。
本發明包括的組分及重量百分比為螺旋藻粉70～78％、硫酸亞鐵2～4％、維生素C4～6％、麥芽糊精15～20％、葉酸0.009～0.012％。其最佳重量百分比為螺旋藻粉75％、硫酸亞鐵3％、維生素C5％、麥芽糊精17％、葉酸0.01％。該組合物可製成片劑、膠囊。
螺旋藻粉蛋白質含量豐富，且含多種人體所需營養成份，在補充人體必需蛋白質的同時，加強對鐵的吸收。葉酸和維生素B12是紅細胞增殖發育中不可缺少的物質，能促進紅細胞的生成，維生素C可將三價鐵還原為二價鐵，促進非鐵血紅素的吸收。根據藥理及功能試驗證明，本發明對改善人體營養性貧血有輔助作用，每1g產品含蛋白質≥0.2g、含鐵≥30mg。
一、組合物小鼠經口急性毒性(LD50)試驗、微核試驗、精子畸變試驗報告1、材料1.1、試驗材料樣品為淺綠色片劑，推薦量為每天三次，每次三片，以60kg成人體重計，該樣品的推薦量為0.045g/kg.b.w，用純淨水配製成各實驗組所需濃度。
1.2實驗動物第一軍醫大學實驗動物中心提供的NIH種健康SPF級小白鼠，合格證號2002A035，本中心SPF動物實驗室合格證號粵檢證號2003C008號。
2、方法與結果2.1、小鼠急性毒性試驗NIH種小白鼠40隻，18-22g，雌雄各半，採用Horn’s法，隨機分為4個劑量組，禁食16小時後，灌胃兩次，間隔3小時，灌胃量0.20ml/10g.b.w，觀察一周，結果見表1。
表1 組合物急性毒性試驗結果劑量動物數 始體重 終體重動物死亡數(g/kg.b.w) (只)(g) (g)(只)21.50 5 19.73±0.54 26.46±0.88 0雌10.00 5 20.63±0.46 25.49±0.81 04.64 5 19.37±0.33 26.01±0.81 0性2.15 5 20.12±0.47 25.57±0.28 021.50 5 20.01±0.52 29.37±0.59 0雄10.00 5 19.80±0.50 28.66±0.56 04.64 5 20.15±0.53 29.46±0.71 0性2.15 5 20.52±0.57 28.97±0.62 0結果未觀察到動物有任何不良反應，得雌雄小鼠LD50＞21.50g/kg.b.w，相當於受試物推薦量的478倍，受試物組合物屬無毒級物質。
2.2、小鼠骨髓核試驗NIH種小鼠60隻，體重25-30g，分別將鼠分為6組，按「食品安全性毒理學評價程序」方法試驗分兩次灌胃，灌胃量0.20ml/10g.b.w劑量見表2，於第二次灌胃6小時後，處死小鼠了取胸骨骨髓材料製片、染色、鏡檢，求出各組微核率，結果按泊松分布方法統計，見表2。
表2 組合物小鼠骨髓微核試驗動物數(只)動物數(只) 嗜多染紅細胞(個) 微核數(個)微核率(‰)(g/kg.b.w)雌 雄 雌雄 雌 雄 雌 雄
10.00 5 5 5000 5000 11 132.2 2.65.005 5 5000 5000 9 8 1.8 1.62.505 5 5000 5000 7 101.4 2.01.255 5 5000 5000 12 9 2.4 1.80.005 5 5000 5000 8 9 1.6 1.8環磷醯胺(0.05) 5 5 5000 5000 156148 31.2** 29.6****與陰性對照組比較p＜0.01。
結果組合物各劑量組的微核率與陰性對照組比較，差異在統計學上均無顯著性意義，試驗結果為陰性，受試物對體細胞無誘變作用。
2.3、小鼠精子畸形試驗NIH種雄小鼠25隻，體重25-35g，隨機分成5組，連續灌胃5天，灌胃量0.20ml/10g.b.w劑量見表3，經35天後處死動物取雙側副睪按常規製片、染色，油鏡下每組檢查完整精子5000條，求出精子畸形率，按Wilcoson秩和方法檢驗結果，見表3。
表3 組合物小鼠精子畸形分析結果劑量 動物數 受檢精子數 精子畸形數 精子畸形率(g/kg.b.w) (只) (條) (條) (‰)10.00 550006513.05.00 550005811.62.50 550005210.40.00 550006312.6環磷醯胺(0.04)55000395 79.0****與陰性對照組比較p＜0.01。
結果組合物各劑量的精子畸形率與陰性對照組比較，差異在統計學上無顯著性意義，試驗結果為陰性，受試物對生殖細胞無誘變作用。
二、組合物鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動物微粒體酶試驗(Ames試驗)報告1、材料與方法1.1試驗菌株經過鑑定符合要求的鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102試驗菌株。
1.2、代謝活化系統多氯聯苯(PCB)誘導的大鼠肝勻漿S9液(當代謝活化時加入)。
1.3、受試物及劑量選擇實驗前稱取樣品10.00g，加無菌蒸餾水90ml溶解，沸水浴30分鐘後，取適量稀釋成所需濃度供試驗用。通過預試驗，以受試物的最小毒性劑量作為最高劑量。
1.4試驗方法(平板摻入法)在頂層培養基中加入0.1ml試驗菌株增菌液，0.1ml受試物溶液和0.5mlS9混合液(當代謝活時加入)，混勻後倒入底層培養基平板上，每一劑量組均為三個皿。根據受試物毒性測定結果，設5000、1000、200、40、8μg/皿五個劑量組，同時設自發回變、溶劑對照、陽性誘變劑對照，在37℃下培養48小時，記錄各試驗組回變菌落數。如受試物回變菌落數的增加超過溶劑對照2倍以上，亦無劑量-反應關係者，判定為致突變陽性。
表4 組合物對鼠傷寒沙門氏菌的回變結果(第1次) (x±s)劑量 TA97 TA98 TA100TA102受試物(μg/皿) -S9 S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9樣品組 15000 101±15 154±18 36±347±2116±10 128±4 323±6 317±621000 114±7 138±12 35±343±4158±15 142±15 303±21 315±133200 115±3 129±5 35±136±2177±1 128±12 271±21 274±8440 113±5 137±10 35±336±3174±11 156±11 284±9 282±1358125±5 134±4 37±140±2176±7 149±14 287±13 288±8自發回變--116±7 143±7 30±135±4146±10 163±7 270±14 293±7溶劑對 --123±11 155±6 34±137±4157±6 168±9 279±12 297±20陽性對照 (μg/皿)NaN32.51532±1042-AF 10.01836±113 2112±218 1942±91敵克松 50.0 2265±105 1561±141絲裂黴素C 4.0 1866±1141，8-二羥蒽醌 50.0 887±54表5 組合物對鼠傷寒沙門氏菌的回變結果(第2次) (x±s)劑量TA97 TA98 TA100TA102受試物(μg/皿) -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9樣品組 1 5000118±12 147±10 36±2 42±3 124±10 136±7 313±17 314±132 1000124±9 140±7 36±4 40±3 161±15 157±8 297±9311±73 200 125±6 145±13 36±1 39±2 164±10 168±9 297±21 315±274 40 125±13 142±6 37±3 42±3 169±6 185±4 295±13 316±195 8 124±5 141±11 39±3 42±3 175±7 180±8 294±19 291±9自發回變 - - 127±5 126±11 36±6 38±2 141±3 154±1 276±13 286±11溶劑對 - - 130±6 136±6 38±3 38±2 146±6 143±7 276±13 287±18陽性對照 (μg/皿)NaN32.5 1470±1012-AF10.0 1817±95 2259±86 1909±111
敵克松 50.02229±120 1547±130絲裂黴素C4.0 1645±681，8-二羥蒽醌50.0 857±412、結果由表4、表5可見，組合物對鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100、TA102四株試驗菌株，在加及不加S9時，5000、1000、200、40、8μg/皿五個劑量組回變菌落數均未超過溶劑對照菌落數2倍，亦無劑量-反應關係者，表面Ames試驗結果陰性。
3、結論受試物經上述四個試驗菌株測定後，與溶劑對照組相比，在加及不加S9時，各劑量組均未引起試驗菌株的回覆突變菌落數明顯增加，表明該受試物Ames試驗陰性。
三、改善營養性貧血功效人體試食試驗檢測依據《保健食品檢驗與評價技術規範》(2003年版)1、材料與方法1.1樣品組合物由廣東梅州市梅雁螺旋藻高科技研究所生產。該產品為淺綠色片劑，無異味。其組方為螺旋藻粉75％、葉酸0.01％、硫酸亞鐵3％、維生素C5％、麥芽糊精17％。
1.2受試對象選擇符合貧血診斷要求(女性Hb＜120g/L)的女性人群100人，徵求受試者的意見後納入觀察對象。有下列情況之一者排除①有嚴重或進展性疾病；②溶血性貧血、再生性障礙性貧血、β地中海貧血和慢性失血性貧血等；③醫生判斷不適合試驗者。
1.3試食方法將符合貧血診斷要求的志願受試者按完全隨機雙盲法分為實驗組和對照組。給實驗對象連續食用組合物或外觀口感與之相同的安慰劑，每天3次，每次3片，觀察期為40天。試食期間對受試對象的生活和飲食不加幹預，但避免應用其它含鐵製劑。
1.4觀察指標在試驗前和試驗後，經臂靜脈採血6ml(3ml不抗凝，3ml抗凝)，分別在指定醫院檢驗科進行檢測。
1.4.1主觀感覺指標試驗前後對受試者詢問其精神、睡眠、飲食、大小便、血壓和食慾、頭暈、心慌等主觀臨床表現，並按差、好敘述。
1.4.2體格檢查指標試驗前對受試者進行胸透、心電圖、B超。按常規的體格檢查方法由主治醫生進行，並收集尿、大便進行常規檢查。
1.4.3血液學指標包括血紅蛋白(Hb)、紅細胞計數(RBC)、白細胞計數(WBC)、血小板計數(PTC)，由法國產全自動血細胞計數儀進行。
1.4.4生化指標包括尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、谷丙轉氨酶(ALT)、穀草轉氨酶(AST)、葡萄糖(GLU)、膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)。由法國產全自動生化分析儀測定。
1.4.5紅細胞內游離原卟啉(FEP)測定取肝素抗凝全血0.02ml加入0.15ml硅藻土混懸液、4.0ml乙酸-乙酸乙酯混合液中，震蕩2-3分鐘，以3000r/min離心，取上清液用0.5MHCI溶液萃取於日立MPF-4型螢光分光光度計上進行螢光測定(激發波長403nm，發射波長605nm)，根據螢光強度計算FEP值。
1.4.6血清鐵蛋白(SF)測定採用放射免疫競爭抑制法進行。
1.4.7膳食調查採用詢問法調查受試對象試驗前和結束前三天主食及副食等情況。
2、結果2.1血常規、生化指標檢測試驗前後的總蛋白、白蛋白、谷丙轉氨酶、穀草轉氨酶、尿素氮、肌酐、血糖、總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白含量、紅細胞計數、白細胞計數以及血小板計數(見表6)，實驗組和對照組各指標都在正常範圍內。試驗前胸透、腹部B超、心電圖檢查均正常。試驗前後實驗組的受試對象精神狀況和睡眠情況有一定的改善。
表6 試驗前後血液安全性指標變化比較(X±S)項目 實驗組(50例)對照組(50例)試驗前 試驗後試驗前試驗後
TP(g/L) 78.44±7.78 82.36±10.04 77.83±8.17 82.48±10.36ALB(g/L) 45.84±4.70 47.42±4.10 42.81±3.72 44.91±5.42ALT(U/L) 36.98±20.6636.94±43.99 28.70±11.96 30.96±12.76AST(U/L) 45.20±26.8639.42±12.33 36.16±12.37 37.64±8.79尿素氮(mmol/L)4.33±1.56 4.34±2.34 4.25±1.39 3.99±1.82肌酐(μmol/L) 65.44±25.0684.75±24.64 65.71±19.05 86.17±21.49血糖(mmol/L) 4.19±2.74 4.37±2.56 3.82±0.71 3.84±0.77總膽固醇(mmol/L) 4.02±0.93 4.43±0.77 4.46±0.98 4.26±1.12甘油三脂(mmol/L) 0.89±0.41 1.04±0.73 1.12±0.54 1.20±0.71HDL-C(mmol/L) 1.17±0.47 1.09±0.59 1.39±0.51 1.15±0.30RBC(×1012/L)4.39±0.83 4.62±0.66 4.45±0.53 4.28±0.46WBC(×109/L) 5.17±1.32 5.22±1.17 5.29±1.02 4.95±1.12血小板(×109/L) 159.68±67.83 161.28±62.11168.44±43.12181.44±48.652.2功效性指標的變化試驗前後實驗組血紅蛋白(Hb)上升了12.12g/L，前後自身比較差異有顯著性(t＝-8.942，p＜0.01，試驗後與對照組進行成組t檢驗，差異有顯著性(t＝-6.219，p＜0.01)(見表7)。
試驗前後實驗組紅細胞內游離原卟啉(FEP)下降了148.70μg/L，前後自身比較差異有顯著性(t＝-5.635，p＜0.01)。試驗後與對照組進行成組t檢驗，差異無顯著性(t＝1.646，p＜0.05)(見表8)。
實驗受試對象的血清鐵蛋白(SF)試驗期間上升了18.16μg/L，前後自身比較差異有顯著性(t＝-22.287，p＜0.01)。試驗後與對照組進行成組t檢驗，差異有顯著性(t＝14.290，p＜0.01)(見表9)。
表7 試驗前後實驗組與對照組血紅蛋白(Hb)的情況變化(μg/L)組別 試驗前試驗後 差值(試驗前-試驗後)實驗組96.70±11.29 108.82±11.77##-12.12±9.58**對照組94.76±12.03 94.16±11.08 0.60±5.38表8 實驗前後實驗組與對照組紅細胞內游離原卟啉(FEP)的情況變化(μg/L)組別 試驗前 試驗後 差值(試驗前-試驗後)
實驗組 498.48±188.76 349.78±102.89 148.70±186.60**對照組 400.62±195.58 394.22±160.88 6.40±233.08表9 試驗前後實驗組與對照組血清鐵蛋白(SF)的情況變化(μg/L)組別 試驗前 試驗後 差值(試驗前-試驗後)實驗組 14.58±4.4532.74±8.36## -18.16±5.76**對照組 13.26±3.1214.76±3.05-1.50±3.92****試驗前後自身配對t檢驗，P＜0.01；##試驗後實驗組與對照組成組t檢驗，P＜0.012.3改善營養性貧血功能的判定，見表10。按規定食用組合物40天的50例實驗組受試對象中，54％的人血紅蛋白值明顯上升，20％的受試對象有一定的改善，總有效率為74％。①顯效臨床症狀，體徵消失或明顯好轉，血紅蛋白值上升10g/L以上，其餘所觀察的指標有改善；②有效臨床症狀，體徵有改善，血紅蛋白升高超過5g/L，其它所觀察指標無不良改變。③無效未達到上列「有效」標準者。
表10 功效判定組別 人數 顯效 有效 無效總有效率例數 率(％) 例數 率(％) 例數 率(％) 例數 率(％)試驗組 502754 10 20 13 26 37 74對照組 500 05 10 45 90 5 102.4膳食調查及營養評價通過實驗開始前、結束前三天的膳食調查，結果表明實驗組和對照組的受試對象在實驗前、後的膳食結構基本未改變，其總熱量、蛋白質、鐵和維生素C的攝入量基本接近，說明飲食因素對實驗結果未造成影響。
3、結論3.1實驗結果表明，實驗組50名患有營養性貧血的受試者，在連續食用組合物40天後，各項有關血液指標有明顯改善。血紅蛋白的含量平均升高12.12±9.58g/L，實驗前後經配對t檢驗差異有顯著性(p＜0.01)，實驗後與對照組進行成組t檢驗，差異有顯著性(p＜0.01)；紅細胞內游離原卟啉明顯下隆，實驗前後經配對t檢驗差異有顯著性(p＜0.01)，實驗後與對照組進行成組t檢驗，差異無顯著性(p＜0.05)；實驗後血清鐵蛋白的含量明顯升高，實驗前後經配對t檢驗差異有顯著性(p＜0.01)；實驗後與對照組進行成組t檢驗，差異有顯著性(p＜0.01)。實驗組改善營養性貧血的總有效率達74％。結果表明，組合物具有改善營養性貧血的保健功能。
3.2試食組合物前後，血清谷丙轉氨酶、穀草轉氨酶、總蛋白、白蛋白、尿素氮、肌酐、葡萄糖、甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白含量、紅細胞計數、白細胞計數等指標均在正常範圍內，說明本品對受試者健康無不良影響。
3.3試食過程中未觀察到過敏及其它不良反應。
具體實施例方式
下面結合實施例，對本發明作進一步的描述。
實施例一取檢驗合格的硫酸亞鐵30克、維生素C50克、麥芽糊精170克、葉酸0.1克，用V型混合機混合旋轉攪拌15分鐘，取螺旋藻粉750克加入V型混合機旋轉攪拌30分鐘；在10萬級空氣淨化壓片車間內，用壓片機將混合物壓製成片，得到1000克片劑，用裝瓶機將組合物裝瓶並密封。
實施例二取檢驗合格的硫酸亞鐵30克、維生素C40克、麥芽糊精150克、葉酸0.1克，用V型混合機混合旋轉攪拌20分鐘，取螺旋藻粉780克加入V型混合機旋轉攪拌35分鐘；在10萬級空氣淨化壓片車間內，用壓片機將混合物壓製成片，得到1000克片劑，用裝瓶機將組合物裝瓶並密封。
根據需要，本發明可製成膠囊、飲料。
權利要求
1.一種以螺旋藻為主要成分的組合物，其特徵在於包括的組分及重量百分比為螺旋藻粉70～78％、硫酸亞鐵2～4％、維生素C4～6％、麥芽糊精15～20％、葉酸0.009～0.012％。
2.依權利要求1所述的組合物，其特徵在於最佳重量百分比為螺旋藻粉75％、硫酸亞鐵3％、維生素C5％、麥芽糊精17％、葉酸0.01％。
全文摘要
本發明涉及一種以螺旋藻為主要成分的組合物，其特徵在於包括的組分及重量百分比為螺旋藻粉70～78％、硫酸亞鐵2～4％、維生素C4～6％、麥芽糊精15～20％、葉酸0.009～0.012％。旋藻粉蛋白質含量豐富，且含多種人體所需營養成分，在補充人體必需蛋白質的同時，加強對鐵的吸收。葉酸和維生素B
文檔編號A61P3/02GK1544079SQ20031011219
公開日2004年11月10日 申請日期2003年11月16日 優先權日2003年11月16日
發明者楊欽歡, 李江平, 王建勇 申請人:廣東梅州市梅雁螺旋藻高科技研究所