一種穿心蓮製備物及其製備方法，以及該製備物在製藥中的應用的製作方法

2023-04-25 15:14:26 2

專利名稱：一種穿心蓮製備物及其製備方法，以及該製備物在製藥中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種穿心蓮製備物及其製備方法，以及該製備物在製藥中的應用。
背景技術：
市場上穿心蓮現有單味藥中藥製劑的有效成分的含量較低，如穿心蓮片中的脫水穿心蓮內酯在5％左右；穿心蓮丸為藥材直接粉碎得到的水泛丸，沒有含量測定；現有的產品由於有效成分的含量較低，其服用量也較大。市場上採用的以穿心蓮有效成分為主的藥物，如穿心蓮片、新穿心蓮內酯片、穿心蓮內酯。由於它們成分單一，作用效果不協同，故治療效果不是很理想。目前市場上尚無針對上呼吸道感染的單一中藥的高含量有效成分提取物製劑，亦無高含量穿心蓮內酯與新穿心蓮內酯的穿心蓮提取物的有關報導。

發明內容
本發明的目的是對現有的穿心蓮製劑進行二次開發，提取它的有效部位，最大限度的保留有效成分，提高和保證療效，降低服用量。
為實現上述發明目的，本實用新型採用了如下技術方案一種穿心蓮製備物，該製備物的主要成分為穿心蓮內酯、新穿心蓮內酯，兩者含量的總和在40-90％；穿心蓮內酯的波長為254nm，新穿心蓮內酯的波長為225nm。
穿心蓮製備物的製備方法，將穿心蓮粗粉或粉末，以任意比例的醇/水或酮/水進行低溫加熱提取或滲漉，提取液經濃縮後，過濾，沉澱經乾燥得到穿心蓮提取物粉末。所指的低溫加熱提取的溫度是35-65℃；所指的醇是指甲醇、乙醇、碳小於5的脂肪醇；所指的酮是指丙酮、丁酮、碳小於6的飽和酮；所指的收率在2-10％。
穿心蓮製備物的製備方法，將穿心蓮粗粉或粉末，以超臨界二氧化碳萃取技術進行萃取，加入任意比例的醇/水或酮/水作為夾帶劑進行萃取，所得到的萃取物經過非極性溶劑脫色後，過濾，沉澱經乾燥得到穿心蓮提取物粉末。所指的超臨界二氧化碳萃取技術是指在10-60℃，壓力15-50MPa，加入夾帶劑的量為50-2000ml/min/kg的條件下提取得到。
穿心蓮製備物在治療和預防上呼吸道感染藥物中的應用。所指的上呼吸道感染包括肺炎、支氣管炎、百日咳、咽喉炎、口腔炎，扁桃體炎、肺結核(輕症)，發熱等。
穿心蓮製備物在治療和預防急性菌痢藥物中的應用。
穿心蓮製備物在治療和預防感冒藥物中的應用。穿心蓮製備物在治療和預防胃腸炎藥物中的應用。
穿心蓮製備物在治療和預防陰囊溼疹藥物中的應用。
為更好的理解本發明的實質，下面通過本發明穿心蓮製備物的藥理實驗及其結果來說明其在製藥領域中的新用途。
表1穿心蓮製備物對酵母菌致熱大鼠的退熱作用(n＝10)劑量 體溫增高值(Δ℃)平均基礎組別 (mg提取物/kg) 體溫℃ 0h0.5h 1.0h2.0h 4.0h 6.0h模型組 37.5±0.77 1.73±0.742.20±0.80 2.10±0.82 2.13±0.97 1.99±1.06 1.39±0.97阿司匹林 100# 37.23±0.80 1.71±0.681.11±1.08*0.50±1.30**-0.04±1.09**-0.05±1.28**-0.18±1.46**穿心蓮25 37.56±0.65 1.71±0.521.18±0.82*0.77±0.86**0.98±0.88* 0.92±0.98** 0.33±1.17**製備物50 37.35±0.73 1.69±0.521.34±1.01*0.85±0.75**1.01±0.96* 0.81±0.88* 0.12±1.05*100 37.46±0.62 1.75±0.531.17±0.98*0.56±0.46**0.83±0.80** 0.71±0.92** 0.43±0.83*
注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，劑量單位為mg/kg。
結論穿心蓮製備物25、50、100mg提取物/kg對酵母致熱大鼠具有明顯的退熱作用，其作用起效快，給藥後0.5小時開始可見明顯的退熱作用，作用可持續6小時。結果表明穿心蓮製備物對酵母菌引起的大鼠高熱有明顯的退熱作用。
穿心蓮製備物的抗炎作用穿心蓮製備物對二甲苯誘導的耳廓腫脹的抑制作用(n＝10)劑量耳腫脹度抑制率組別(mg提取物/kg) (mg)(％)模型組 - 13.43±6.11 -醋酸潑尼松 10mg/kg 8.02±4.43* 40.3穿心蓮製備物 25 8.39±2.53* 37.550 8.88±4.32* 33.9100 7.74±5.53** 42.4注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01結論穿心蓮製備物25、50、100mg提取物/kg灌胃給藥能明顯抑制二甲苯誘導的小鼠耳廓腫脹；50、100mg提取物/kg能明顯抑制冰醋酸誘導的腹腔毛細血管通透性增高，50、100mg提取物/kg可明顯減輕角叉菜膠誘導大鼠足腫脹；25、50、100mg提取物/kg對棉球刺激引起的肉芽腫增生具有明顯抑制作用。上述結果表明穿心蓮製備物對急、慢性炎症均具有明顯的抗炎作用。
穿心蓮製備物的鎮咳、祛痰作用穿心蓮中間體50、25mg提取物/kg灌胃給藥可明顯抑制濃氨水誘導的小鼠咳嗽；50、100mg提取物/kg可明顯抑制枸櫞酸鈉誘導的豚鼠咳嗽。50mg/kg可明顯增加小鼠氣管酚紅排泌量。結果表明穿心蓮中間體具有明顯的鎮咳、祛痰作用。
穿心蓮製備物對濃氨水誘導的小鼠咳嗽的鎮咳作用(n＝10)劑量 咳嗽潛伏期組別 咳嗽次數(mg提取物/kg) (s)對照組 28.63±16.442.14±0.24咳平 8.0mg/kg 62.79±42.653.49±2.25**穿心蓮製備物 12.5 36.22±21.543.72±3.2125.0 39.90±30.552.65±0.85**50.0 37.00±30.812.60±0.51**注與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01對枸櫞酸誘導的豚鼠咳嗽的鎮咳作用(n＝10)劑量咳嗽潛伏期組別 咳嗽次數(mg提取物/kg) (s)模型組 34.60±20.0117.20±9.80咳平 8.054.44±92.637.44±6.02*一見喜100152.40±128.37**4.30±4.11**50 89.50± 85.957.20±5.22**25 56.70±86.9312.10±10.27注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01穿心蓮製備物的體外和體內抗菌作用體外抗菌試驗顯示，穿心蓮製備物在體外對肺炎球鏈菌、嗜血流感桿菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和大腸桿菌的少數菌株有較弱的體外抗菌作用，對肺炎克雷伯桿菌、B族鏈球菌和綠膿桿菌無體外抑菌作用。
體內抗菌試驗顯示，給小鼠灌胃給予穿心蓮中間體800mg提取物/kg和400mg提取物/kg，對腹腔感染金黃色葡萄球菌的小鼠有明顯的保護作用，死亡保護率均為35％。穿心蓮中間體800mg提取物/kg劑量水平對B族鏈球菌感染小鼠也具有明顯的死亡保護作用，死亡保護率為25％(與陰性對照組比較P＜0.05)。結果表明穿心蓮製備物具有一定的體內抗菌作用。
穿心蓮製備物的體外、體內抗病毒作用穿心蓮製備物在體外對HVJ、Ard3、Ard7、RSV、HSV、CoxB4引起的細胞病變有明顯的抑制作用，有效濃度範圍為0.08-0.15mg提取物/ml，IC50分別為0.067、0.067、0.067、0.112、0.067、0.094mg提取物/ml。對流感病毒引起的細胞病變無明顯的抑制作用。
體內抗病毒試驗結果表明，小鼠灌胃給予穿心蓮製備物100、200mg提取物/kg每日2次，連續5天，可使流感桿菌感染小鼠的肺臟炎症明顯減輕，表明有一定的體內抗病毒作用。
穿心蓮製備物的免疫調節作用小鼠灌胃穿心蓮製備物25.0、50.0mg提取物/kg可明顯對抗醋酸潑泥松誘導的小鼠細胞免疫和體液免疫功能抑制，增強ConA和LPS誘導的脾細胞分裂反應，對環磷醯胺造成的小鼠脾臟淋巴細胞溶血素抗體分泌低下具有明顯的促進作用，對巨噬細胞的吞噬功能具有明顯的增強作用，表明穿心蓮製備物對免疫具有增強作用。
具體實施例方式
實施例1穿心蓮製備物的製備方法穿心蓮經適當粉碎，以稀醇進行滲漉或分次浸泡或加熱提取，得到的提取液減壓回收溶劑，放置使析出沉澱，過濾得到沉澱，真空乾燥，粉碎，得綠色藥粉，收率2-7％。
所述的製備物中所述的粉末是指小於300目的藥材粉末，優選10-40目；；滲漉的溫度為45℃以下，優選20-30℃；滲漉的溶劑用量為藥材重量的100倍以內(V/W)，優選為10-30倍量；浸泡時間原則上不超過3天，優選1-12小時；浸泡次數為10次以內，優選3-5次；低溫加熱提取的溫度是35-80℃，優選為35-60℃；所指的醇是指甲醇、乙醇、碳小於5的脂肪醇，優選為甲醇，乙醇；所指的酮是指丙酮、丁酮、碳小於6的飽和酮，優選為丙酮；所指的一定濃度的醇和稀醇為醇與任意比例的水的混合液，優選為40-90％的乙醇或甲醇液；所指的穿心蓮中間體的收率在2-7％，優選為3-5％。
實施例2穿心蓮製備物的製備方法穿心蓮粉末，以二氧化碳超臨界萃取儀進行萃取，在較低的溫度和較低的壓力下，對穿心蓮進行脫脂，收集二氧化碳萃取物，另置；然後以95％乙醇作為夾帶劑進行萃取，萃取液減壓回收溶劑，真空乾燥，粉碎，得綠色藥粉，收率2-6％。
所述的粉末是指小於300目的藥材粉末，優選40-100目；所指的醇是指甲醇、乙醇、碳小於5的脂肪醇，優選為甲醇，乙醇；所指的任意比例的醇/水提取的優選濃度為60-95％；所指的酮是指丙酮、丁酮、碳小於6的飽和酮，優選為丙酮；所指的超臨界萃取溫度為10-60℃，優選25-40℃；所指的超臨界萃取壓力為5-50MPa，優選5-20MPa；所指的加入夾帶劑的用量為50-2000ml/min/kg，優選500-1000ml/min/kg。
實施例3製備方法，將穿心蓮100kg適當粉碎成粗份，以稀乙醇浸泡3小時後，滲漉洗脫，流速控制在每小時藥材體積的1～2倍，收集相當於藥材重量10-20倍體積的滲漉液(V/W)，滲漉液在45℃以下減壓回收乙醇至無醇味，合併濃縮液，放置使析出沉澱，濾布過濾得到沉澱，沉澱在30℃以下真空乾燥，粉碎，得綠色藥粉，收率2-5％。
實施例4製備方法，將穿心蓮10kg適當粉碎成粗份，加入稀乙醇約3-4倍量，在5-40℃溫度下浸泡3小時後，放出浸泡液，如此反覆3次，冷浸液合併，並在45℃以下減壓回收乙醇至無醇味，合併濃縮液，放置使析出沉澱，濾布過濾得到沉澱，沉澱在30℃以下真空乾燥，粉碎，得綠色藥粉，收率4-5％。
實施例5製備方法，將穿心蓮10kg適當粉碎，以稀乙醇進行提取3次，提取液合併，在45℃以下減壓回收乙醇至無醇味，合併濃縮液，放置使析出沉澱，離心過濾得到沉澱，沉澱在30℃以下真空乾燥，粉碎，得綠色藥粉，收率3-7％。
實施例6製備方法，將穿心蓮10kg粉碎成40目以下的粉末，以二氧化碳超臨界萃取儀進行萃取，在較低的溫度(＜25℃)和較低的壓力下，對穿心蓮進行脫脂2小時，收集二氧化碳萃取物，另置；然後以95％乙醇作為夾帶劑進行萃取3小時，萃取液減壓回收，30℃以下真空乾燥，粉碎，得綠色藥粉，收率2-6％。
實施例7穿心蓮製備物的安全性實驗麻醉貓經十二指腸給藥給予穿心蓮製備物180、360、720mg提取物/kg後，各劑量組動物的收縮壓、舒張壓、平均動脈壓、心電圖、心率、心律、呼吸頻率和呼吸深度等均與對照組無顯著差異。小鼠灌胃給予穿心蓮製備物200、400、800mg提取物/kg 7天後，各劑量組動物的自發活動、中樞神經系統、肌肉、植物神經系統、胃腸、皮毛、黏膜及眼睛均未見明顯影響。結果表明，穿心蓮製備物對呼吸系統、循環系統和神經系統未見明顯影響。
實施例8穿心蓮製備物的急性毒性試驗穿心蓮製備物片給小鼠灌胃給藥，按最大給藥濃度和最大灌胃體積一日內給藥一次，劑量達10g提取物/kg(270g生藥/kg)，相當於推薦的臨床60kg人日用劑量的1000倍，動物未出現毒性症狀，未出現呼吸抑制、驚厥、抽搐等反應；動物的一般情況、活動、排洩物、皮毛均未見異常，給藥組體重增長與對照組無顯著差異。
實施例9穿心蓮製備物的大鼠的長期毒性試驗穿心蓮製備物以0.5、1.0、2.0g提取物/kg/天的劑量給大鼠連續灌胃給藥2個月和停藥2周，均未引起大鼠死亡，對雌性和雄性動物體重和飼料消耗量無明顯影響，對動物的活動、行為、食量、糞便等一般情況無明顯影響。3個劑量水平組動物的雌性和雄性大鼠的各項血液學指標(RBC、HGB、WBC、HCT、PLT、以及白細胞分類)、血液生化學指標(GLU、ALB、TP、Crea、CHOL、BUN、AST、ALT、ALP、TBIL)、尿液定性(尿糖、尿酮、尿膽紅素、尿蛋白、尿膽原)以及心電圖等指標均在正常值範圍內或與對照組無顯著差異，重要臟器的肉眼檢查和組織形態學檢查未見明顯異常。結果表明穿心蓮製備物對大鼠灌胃給藥2個月的無毒劑量為2.0g提取物/kg，相當於臨床人日用劑量的200倍。
實施例10穿心蓮製備物的Beagle犬長期毒性試驗穿心蓮中間體按1.0、0.4、0.2g提取物/kg體重的劑量，分別相當於臨床人日用量的100、40、20倍，給Beagle犬連續灌胃給藥2個月，3個劑量水平均未引起動物死亡，對Beagle犬的體重、進食、一般狀況、行為活動、糞便等均無影響，動物無噁心、嘔吐、流涎等反應。3個劑量水平組對雌性和雄性犬的各項血液學指標(RBC、HGB、WBC、HCT、PLT、以及白細胞分類)無明顯影響，除了高劑量組(1.0g提取物/kg)雄性犬可見血清ALB值輕度降低外，其它血液生化學指標(GLU、ALB、TP、Crea、CHOL、BUN、AST、ALT、ALP、TBIL)均未見明顯的毒性反應，心電圖、尿液定性檢查、臟器重量及其係數、骨髓象檢查以及組織形態學檢查等均未見明顯異常。停藥2周後，未見遲發性毒性反應。
權利要求
1.一種穿心蓮製備物，其特徵在於該製備物的主要成分為穿心蓮內酯、新穿心蓮內酯，兩者含量的總和在40-90％；穿心蓮內酯的波長為254nm，新穿心蓮內酯的波長為225nm。
2.如權利要求1所述穿心蓮製備物的製備方法，其特徵在於將穿心蓮粗粉或粉末，以任意比例的醇/水或酮/水進行低溫加熱提取或滲漉，提取液經濃縮後，過濾，沉澱經乾燥得到穿心蓮提取物粉末。
3.如權利要求2所述穿心蓮製備物的製備方法，其特徵在於所指的低溫加熱提取的溫度是35-65℃；所指的醇是指甲醇、乙醇、碳小於5的脂肪醇；所指的酮是指丙酮、丁酮、碳小於6的飽和酮；所指的收率在2-10％。
4.如權利要求1所述穿心蓮製備物的製備方法，其特徵在於將穿心蓮粗粉或粉末，以超臨界二氧化碳萃取技術進行萃取，加入任意比例的醇/水或酮/水作為夾帶劑進行萃取，所得到的萃取物經過非極性溶劑脫色後，過濾，沉澱經乾燥得到穿心蓮提取物粉末。
5.如權利要求4所述穿心蓮製備物的製備方法，其特徵在於所指的超臨界二氧化碳萃取技術是指在10-60℃，壓力15-50MPa，加入夾帶劑的量為50-2000ml/min/kg的條件下提取得到。
6.如權利要求1所述穿心蓮製備物在治療和預防上呼吸道感染藥物中的應用。
7.如權利要求6所述的穿心蓮製備物在治療和預防上呼吸道感染藥物中的應用，其特徵在於所指的上呼吸道感染包括肺炎、支氣管炎、百日咳、咽喉炎、口腔炎，扁桃體炎、肺結核(輕症)，發熱等。
8.如權利要求1所述穿心蓮製備物在治療和預防急性菌痢藥物中的應用。
9.如權利要求1所述穿心蓮製備物在治療和預防感冒藥物中的應用。
10.如權利要求1所述穿心蓮製備物在治療和預防胃腸炎藥物中的應用。
11.如權利要求1所述穿心蓮製備物在治療和預防陰囊溼疹藥物中的應用。
全文摘要
一種穿心蓮製備物及其製備方法，以及該製備物在製藥中的應用。該製備物的主要成分為穿心蓮內酯、新穿心蓮內酯，兩者含量的總和在40－90％；穿心蓮內酯的波長為254nm，新穿心蓮內酯的波長為225nm。穿心蓮製備物的製備方法，將穿心蓮粗粉或粉末，以任意比例的醇/水或酮/水進行低溫加熱提取或滲漉，提取液經濃縮後，過濾，沉澱經乾燥得到穿心蓮提取物粉末。穿心蓮製備物在治療和預防上呼吸道感染藥物中的應用。
文檔編號A61P31/06GK1548041SQ0313619
公開日2004年11月24日 申請日期2003年5月19日 優先權日2003年5月19日
發明者馬越峰, 楊建科 申請人:浙江可立思安製藥有限公司