軟骨細胞中的膠原蛋白和蛋白聚糖合成的促進方法
2023-04-25 11:52:46
軟骨細胞中的膠原蛋白和蛋白聚糖合成的促進方法
【專利摘要】通過投與接種痘苗病毒的炎症組織提取物來促進軟骨細胞如椎間盤細胞、關節軟骨細胞和半月板細胞中的膠原蛋白和蛋白聚糖的合成。
【專利說明】軟骨細胞中的膠原蛋白和蛋白聚糖合成的促進方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及接種痘苗病毒的炎症組織提取物的新醫藥用途，特別涉及軟骨細胞如椎間盤(intervertebral disc cell)細胞、關節軟骨細胞(articular chondrocyte)和半月板細胞(meniscus cell)中的膠原蛋白和蛋白聚糖合成的促進方法。
【背景技術】
[0002]以商品名「神經妥樂平(Neurotropin) 」銷售的藥劑包含來自接種有痘苗病毒的兔的炎症皮膚的非蛋白提取物作為有效成分。在日本神經妥樂平(NTP)已廣泛用於治療神經病理性疼痛，包括皰疹後神經痛和腰痛。在動物模型中，NTP已顯示出由於下行性單胺能疼痛抑制體系的活化引起的抗傷害性(ant1-nociceptive)效果。NTP還顯示出通過抑制激肽釋放酶-激肽(kallikrein-kinin)級聯的活化，由此抑制舒緩激肽在體內和體外的形成來抑制疼痛路徑。
[0003]最近報導了 NTP對人椎間盤細胞的腫瘤壞死因子a (TNF- α )和環氧酶-2 (C0X-2)的mRNA表達的抑制效果。然而，不清楚NTP是否具有對椎間盤細胞的胞外基質(ECM)合成的效果。
【發明內容】
[0004]將接種痘苗病毒的炎症組織提取物用於促進軟骨細胞如椎間盤細胞(牛髓核細胞(bovine nucleus pulposus cell)或纖維環細胞(annulus fibrosus cell))、關節軟骨細胞和半月板細胞中的膠原蛋白和蛋白聚糖的合成。在本發明的方面，提供促進患者的軟骨細胞中的蛋白聚糖和/或膠原蛋白合成的方法，所述方法包括向需要此類治療的患者投與藥物學有效量的接種痘苗病毒 的炎症組織提取物。在本發明的另一方面，提供再生軟骨細胞的胞外基質的方法，所述方法包括向需要此類治療的患者投與從接種有痘苗病毒的炎症組織分離的提取物。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0005]藉助附圖進一步說明本發明，其中:
[0006]圖1為接種痘苗病毒的炎症組織提取物對作為纖維環細胞(AF)的椎間盤細胞中蛋白聚糖合成的活性的實驗結果。
[0007]圖2為接種痘苗病毒的炎症組織提取物對作為牛髓核細胞(NP)的椎間盤細胞中蛋白聚糖合成的活性的實驗結果。
[0008]圖3為接種痘苗病毒的炎症組織提取物對作為纖維環細胞(AF)的椎間盤細胞中膠原蛋白合成的活性的實驗結果。
[0009]圖4為接種痘苗病毒的炎症組織提取物對作為牛髓核細胞(NP)的椎間盤細胞中膠原蛋白合成的活性的實驗結果。【具體實施方式】
[0010]本發明以使用在常氧(normoxic)和低氧(hypoxic)狀態下在海藻酸鹽小球(bead)中培養的牛髓核細胞(NP)和纖維環細胞(AF)來評價NTP對蛋白聚糖(PG)和膠原蛋白合成的影響的結果為基礎。
[0011]關於本發明的接種痘苗病毒的炎症組織提取物，如之前所報導的存在針對在接種有痘苗病毒的炎症組織中產生的生理活性物質、從病變組織中提取該物質的方法和藥物學活性等的各種報導(參見W02009/028605的[0008]段，EP2191836，日本專利申請公布號 JP-A-53-101515、JP-A-55-87724、JP-A-1-265028、JP-A-1-319422、JP-A-2-28119、 JP-A-7-97336、 JP-A-8-291077、 JP-A-10-194978、 JP-A-11-80005、JP-A-11-139977、JP-A-2000-336034、JP-A-2000-16942 和 JP-A-2004-300146，以及國際公布號 TO2004/039383)。
[0012]此外，來自接種有痘苗病毒的兔的炎症皮膚的提取物的製劑作為藥品是商購可得的，並可用於本發明。如「Drugs in Japan, Ethical Drugs」(2010,由日本醫藥情報中心(Japan Pharmaceutical Information Center)編輯發行)的 2978-2980 頁所記載，該製劑為包含從接種有痘苗病毒的兔的炎症皮膚組織中提取分離的非蛋白活性物質的藥劑。已知該製劑有效對抗腰痛，頸臂症候群，症狀性神經痛，肩關節周圍炎(periarthritisscapulohumeralis)，骨關節炎，伴隨皮膚病(溼疹、皮炎、蕁麻疹)的瘙癢，過敏性鼻炎，亞急性脊髓視神經炎(subacute myelo-optico-neuropathy)的後遺症如寒冷、感覺異常和疼痛，以及皰疹後神經痛等。批准該製劑作為皮下注射、肌肉注射和靜脈注射產品的形式和片劑的形式的處方藥，並且商購可得。
[0013]用於本發明的接種痘苗病毒的炎症組織提取物為如上所述從接種有痘苗病毒的炎症組織中提取的非蛋白生物功能調節物質，而在「Drugs in Japan, Ethical Drugs」中列出的來自接種有痘苗病毒的兔的炎症皮膚的提取液製劑被批准為藥品，並且商購可得。另外，在上述專利文獻中記載的來自接種有痘苗病毒的炎症組織的各種提取物可用作本發明的物質，它們的生產方法和適當的劑量等也在文獻中給出。
[0014]可以如下方法獲得本發明的接種痘苗病毒的炎症組織提取物:將接種有痘苗病毒的炎症組織壓碎；添加提取溶劑來除去組織碎片；然後進行脫蛋白處理；將脫蛋白溶液吸附到吸附劑上；接著洗脫有效成分。
[0015]例如根據下述方法生產接種痘苗病毒的炎症組織提取物。
[0016](a)收集接種有痘苗病毒的兔或小鼠等的炎症皮膚組織，並將炎症組織壓碎。向壓碎的組織添加提取溶劑如水、酹水(phenolated water)、生理鹽水或添加有苯酹的甘油水(phenol-added glycerin water) 0然後，過濾或離心混合物，從而獲得提取液(濾液或上清液)。
[0017](b)將提取液的pH調整為酸性狀態，並加熱液體來進行脫蛋白處理。然後，將脫蛋白溶液調整為鹼性狀態，加熱，然後過濾或離心。
[0018](C)將所得濾液或上清液製成酸性，並吸附到吸附劑如活性炭或高嶺土上。
[0019](d)向吸附劑添加提取溶劑如水，將pH調整為鹼性狀態，洗脫吸附組分，從而獲得接種痘苗病毒的炎症組織提取物。隨後，根據期望，可使洗脫液在減壓下蒸發至乾燥或冷凍乾燥從而給出乾物質。。[0020]關於為了通過接種痘苗病毒獲得炎症組織的動物，可使用感染有痘苗病毒的各種動物如兔、牛、馬、綿羊、山羊、猴、大鼠或小鼠，並且優選的炎症組織為兔的炎症皮膚組織。
[0021]收集並壓碎炎症組織，並添加1-5體積的提取溶劑，從而製備乳化懸液。關於提取溶劑，可使用蒸餾水、生理鹽水和弱酸至弱鹼性緩衝液等。可適當地添加穩定劑如甘油，抗菌/防腐劑如苯酚，以及鹽類如氯化鈉、氯化鉀或氯化鎂。此時，可通過藉助處理如凍融、超聲波、細胞膜溶解酶或表面活性劑來破壞細胞組織，從而促進提取。
[0022]使所得乳化提取液進行過濾或離心等，從而除去組織碎片，然後進行脫蛋白處理。脫蛋白操作可通過通常已知的方法來進行，可應用例如熱處理，藉助蛋白變性劑如酸、鹼、脲和胍的處理，藉助有機溶劑如丙酮的處理，等電沉澱以及鹽析。然後，通過除去不溶物的一般方法如使用濾紙(例如，纖維素或硝化纖維)、玻璃濾器、C鹽(Celite)或蔡氏(Seitz)濾器等的過濾，超濾以及離心，來除去析出的不溶性蛋白質。
[0023]將包含以該方式獲得的有效成分的提取液酸化，優選用酸如鹽酸、硫酸或氫溴酸將PH調為3.5-5.5，然後吸附到吸附劑上。可用的吸附劑的實例包括活性炭和高嶺土。可在攪拌下將吸附劑添加到提取液中，或者可將提取液穿過填充有吸附劑的柱，從而將有效成分吸附到吸附劑上。當將吸附劑添加到提取液中時，通過過濾或離心等除去溶液，從而獲得其中吸附有有效成分的吸附劑。
[0024]為了從吸附劑洗脫(脫附)有效成分，將洗脫溶劑添加到吸附劑，從而在室溫下或者藉助適當的加熱或藉助攪拌來洗脫，並通過一般方法如過濾或離心等來除去吸附劑。關於要使用的洗脫溶劑，可使用鹼性溶劑如調整為鹼性PH的水、甲醇、乙醇或異丙醇或者其適當的混合物，並可優選使用調整為PH9-12的水。
[0025]以該方式獲得的提取物(洗出液)可適當地製備為以製劑用原料或藥劑的適當形式。例如，可將溶液調整為具有幾乎中性的PH，以作為製劑用原料，並且可通過濃縮或稀釋而調整為具有期望濃度。另外 ，關於注射用製劑，可添加氯化鈉來製備等滲生理鹽水溶液。此外，可濃縮乾燥或冷凍乾燥溶液，從而製備可用於片劑等的原料的固體形式。
[0026]對需要治療的患者的投與方法的實例包括以藥物學有效量經口投與和其他投與形式如皮下、肌肉內和靜脈內投與。劑量可依據接種痘苗病毒的炎症組織提取物的類型而適當確定。根據「Drugs in Japan, Ethical Drugs」(2978頁)，商購可得製劑中所批准的劑量作為處方藥基本上經口投與為每天16NU，注射為每天3.6至7.2NU。然而，劑量可依據疾病類型、嚴重程度、患者個體差異、投與方法和投與期間等適當增加或減少(NU:神經妥樂平單位。神經妥樂平單位由使用SART-應激小鼠通過改進的Randall-Selitto法測量的鎮痛效果的ED5tl值所定義,所述應激小鼠為顯示比正常動物低的痛閾(pain threshold)的慢性應激動物。INU表示ED5tl值為100mg/kg製劑時神經妥樂平製劑中Img鎮痛成分的活性)。
[0027]下文中示出生產接種痘苗病毒的炎症組織提取物的方法的實例以及關於提取物的新型藥理學活性，即，對椎間盤細胞中的膠原蛋白和蛋白聚糖合成的促進活性的藥理學試驗結果。本發明不意於受限於下述實施例的記載內容，其中除相反說明外，所有份、百分比和比均以重量計，所有溫度均為V，所有壓力均為大氣壓:
[0028]實施例1
[0029]將健康成年兔的皮膚接種痘苗病毒。將炎症皮膚剝離並壓碎，並向壓碎的皮膚添加酚水。然後，在加壓下過濾混合物，並用鹽酸將所得濾液調整為PH5，然後在90-100°C下加熱30分鐘。通過過濾脫蛋白後,用氫氧化鈉將濾液調整為pH9,進一步在90-100°C下加熱15分鐘，然後過濾。用鹽酸將濾液調整為約pH4.5，並添加2%的活性炭。攪拌混合物2小時後離心。向收集的活性炭中添加水。用氫氧化鈉將混合物調整為pHIO，在60°C下攪拌1.5小時，然後離心過濾，從而獲得上清液。向所收集的活性炭中再次添加水。用氫氧化鈉將混合物調整為pHll，在60°C下攪拌1.5小時後離心，從而獲得上清液。將兩種上清液組合併用鹽酸中和，從而獲得來自接種有痘苗病毒的兔的炎症皮膚的提取物。在以下藥理學試驗中，將提取物調整為適當濃度以供使用。
[0030]實施例2
[0031]將健康成年兔的皮膚接種痘苗病毒以使其感染。隨後，將炎症皮膚無菌剝離並切碎，然後加入添加有苯酚的甘油水。用均化器將混合物磨碎成乳狀。隨後，將乳液過濾。用鹽酸將所得濾液調整為弱酸性(PH4.5-5.5)，然後在100°C下加熱並過濾。用氫氧化鈉將濾液調整為弱鹼性(PH8.5-10.0)，進一步在100°C下加熱，然後過濾。用鹽酸將濾液調整為約pH4.5，並加入約1.5%的活性炭。將混合物攪拌1-5小時後過濾。向通過過濾收集的活性炭,添加水。用氫氧化鈉將混合物調整為PH9.4-10，攪拌3-5小時後過濾。用鹽酸中和濾液。
[0032]實施例3
[0033]接下來，示出關於對椎間盤細胞中膠原蛋白和蛋白聚糖的合成的促進活性的藥理學試驗結果的實例，其中將實施例1中獲得的本發明的接種痘苗病毒的炎症組織提取物(NTP)用作試驗物質。下文及圖1-4給出NTP對蛋白聚糖(PG)代謝和膠原蛋白合成以及椎間盤細胞中的細胞增殖的效果。
[0034]1.材料和方法
[0035]從14-18個月大的牛尾骨椎間盤中分離的牛髓核(NP)和纖維環(AF)細胞封裝在海藻酸鹽中(4E+6個細胞/mL)，並在常氧(21%02)或低氧(5%02)條件下在含有10%胎牛血清(FBS)的DMEM/F12中培養11天。用三種不同濃度(0.001NU/ml、0.0lNU/mL和0.1NU/mL)的NTP處理這些培養物3天。為了評價PG和膠原蛋白的合成，在最後4或16小時分別用35S-硫酸或3H-脯氨酸標記培養物。如前所述，在標記後收集小球和介質並由木瓜蛋白酶消化[Masuda，K.等人，J Orthop Res.，21，922-930 (2003)，和Akeda, K, Spine, 31，959-966 (2006)]，單獨在介質和海藻酸鹽小球中測量放射性前體的摻入量(incorporation)。使用 CellTiter96Aqueous One Solution Cell ProliferationAssay (Promega, Madison, WI)評價細胞增殖。用各實驗中對照組的平均值將來自細胞的不同批次的三次實驗的所有數據標準化。使用ANOVA以PSLD試驗作為事後檢驗(posthoctest)來評價處理效果。
[0036]2.結果
[0037]1)細胞增殖
[0038]在7和14天的時間點，氧濃度和用NTP處理不影響NP和AF細胞的增殖。
[0039]2) PG 合成
[0040]在NP細胞中，在5%02培養下用NTP處理使PG合成顯著增加(在0.01NU/ml下，+65%，ρ〈0.05，在0.1NU/ml下，+66%，ρ〈0.05，圖2)。常氧培養下NP細胞中的PG合成沒有明顯差異。如圖1所示，在AF細胞中，在常氧和低氧條件下，NTP均不改變PG合成的水平。
[0041]3)膠原蛋白合成
[0042]如圖3和4所示，通過NTP處理使5%02下的NP細胞以及21%02下的NP和AF細胞的膠原蛋白合成以劑量依賴方式增加(0.1NU/ml下的最高刺激:NP，5%02，+50% ；NP,21%02,+63% ；AF, 21%02，+47%)。
[0043]如上所示，該研究首次示出NTP可刺激椎間盤細胞的胞外基質合成。有趣的是，NTP對NP細胞的PG合成的作用在5%02的培養條件下比在21%02的培養條件下更明顯。考慮到NP的體內低氧條件，這些結果可表明NP細胞可在生理相關條件下響應NTP。儘管在5%02和21%02下均觀察到NTP對NP細胞的膠原蛋白合成的積極作用，但AF中的刺激僅在21%02條件下觀察到。與NP細胞的PG合成增加響應於NTP不同，AF細胞在21%02條件下更響應NTP。因為AF中的氧張力(oxygen tension)顯著高於NP,所以21%02下AF細胞對NTP的更大的響應還可反應最佳培養條件。
[0044]軟骨細胞存在於各種軟骨中，如關節軟骨、椎間盤、半月板等。軟骨細胞隨著細胞分裂而在其周圍產生胞外基質，從而使軟骨形成。軟骨根據無定形基質和纖維成分的含量比而分組為透明軟骨、彈性軟骨和纖維軟骨。胞外基質的主要成分為膠原蛋白和蛋白聚糖。由於NTP對軟骨細胞如椎間盤細胞中的膠原蛋白和蛋白聚糖的合成具有促進活性，所以表明NTP對各種軟骨的軟骨細胞的胞外基質具有再生活性。
[0045]產業h的可利用件
[0046]本發明涉及接種痘苗病毒的炎症組織提取物的新醫藥用途，特別涉及軟骨細胞如椎間盤細胞、關節軟骨細胞和半月板細胞中的膠原蛋白和蛋白聚糖合成的促進方法。以下給出本發明的優選實施方案:
[0047]1.一種患者的軟骨細胞中的蛋白聚糖和/或膠原蛋白合成的促進方法，其包括向需要此類治療的患者投與接種痘苗病毒的炎症組織提取物。
[0048]2.一種軟骨細胞中的蛋白聚糖和/或膠原蛋白的合成促進劑，其包含接種痘苗病毒的炎症組織提取物。
[0049]3.接種痘苗病毒的炎症組織提取物用於促進軟骨細胞中的蛋白聚糖和/或膠原蛋白合成的用途。
[0050]4.一種接種痘苗病毒的炎症組織提取物的判定或評價方法，其中使用培養的軟骨細胞中的蛋白聚糖和/或膠原蛋白的合成促進活性作為指標。
[0051]5.一種接種痘苗病毒的炎症組織提取物，其具有對軟骨細胞中的蛋白聚糖和/或膠原蛋白的合成促進活性。
[0052]6.一種軟骨細胞的胞外基質的再生方法，其包括向需要此類治療的患者投與接種痘苗病毒的炎症組織提取物。
[0053]7. 一種軟骨細胞的胞外基質的再生劑，其包含接種痘苗病毒的炎症組織提取物。
[0054]8.接種痘苗病毒的炎症組織提取物用於使軟骨細胞的胞外基質再生的用途。
[0055]9.一種接種痘苗病毒的炎症組織提取物的判定或評價方法，其中使用軟骨細胞的胞外基質的再生活性作為指標。
[0056]10.一種接種痘苗病毒的炎症組織提取物，其具有軟骨細胞的胞外基質的再生活性。[0057]11.一種椎間盤細胞(牛髓核細胞)中的蛋白聚糖合成的促進方法，其包括向需要此類治療的患者投與接種痘苗病毒的炎症組織提取物。
[0058]12.一種椎間盤細胞(牛髓核細胞或纖維環細胞)中的膠原蛋白合成的促進方法，其包括向需要此類治療的患者投與接種痘苗病毒的炎症組織提取物。
[0059]13.一種椎間盤細胞(牛髓核細胞)中的蛋白聚糖的合成促進劑，其包含接種痘苗病毒的炎症組織提取物。
[0060]14.一種椎間盤細胞(牛髓核細胞或纖維環細胞)中的膠原蛋白的合成促進劑，其包含接種痘苗病毒的炎症組織提取物。
[0061]15.接種痘苗病毒的炎症組織提取物用於促進椎間盤細胞(牛髓核細胞)中蛋白聚糖合成的用途。
[0062]16.接種痘苗病毒的炎症組織提取物用於促進椎間盤細胞(牛髓核細胞或纖維環細胞)中膠原蛋白合成的用途。
[0063]17.一種接種痘苗病毒的炎症組織提取物的判定或評價方法，其中使用培養的椎間盤細胞(牛髓核細胞)中的蛋白聚糖的合成促進活性作為指標。
[0064]18.一種接種痘苗病毒的炎症組織提取物的判定或評價方法，其中使用培養的椎間盤細胞(牛髓核細胞或纖維環細胞)中的膠原蛋白的合成促進活性作為指標。
[0065]19.一種接種痘苗病毒的炎症組織提取物，其具有對椎間盤細胞(牛髓核細胞)中的蛋白聚糖的合成促進活性。
[0066]20.一種接種痘苗 病毒的炎症組織提取物，其具有對椎間盤細胞(牛髓核細胞或纖維環細胞)中的膠原蛋白的合成促進活性。
[0067]21.一種椎間盤細胞的胞外基質的再生方法，其包括向需要此類治療的患者投與接種痘苗病毒的炎症組織提取物。
[0068]22.一種椎間盤細胞的胞外基質的再生劑，其包含接種痘苗病毒的炎症組織提取物。
[0069]23.接種痘苗病毒的炎症組織提取物用於使椎間盤細胞的胞外基質再生的用途。
[0070]24.一種接種痘苗病毒的炎症組織提取物的判定或評價方法，其中使用椎間盤細胞的胞外基質的再生活性作為指標。
[0071]25.一種接種痘苗病毒的炎症組織提取物，其具有椎間盤細胞的胞外基質的再生活性。
[0072]26.一種變性椎間盤(degenerative intervertebral discs)的治療或預防方法，其包括向需要此類治療的患者投與接種痘苗病毒的炎症組織提取物。
[0073]27.一種變性椎間盤的治療或預防劑，其包含接種痘苗病毒的炎症組織提取物。
[0074]28.接種痘苗病毒的炎症組織提取物用於治療或預防變性椎間盤的用途。
[0075]29.一種由椎間盤變性(degeneration)引起的疼痛的治療或預防方法,其中通過向需要此類治療的患者投與接種痘苗病毒的炎症組織提取物來使椎間盤細胞的胞外基質再生。
[0076]30.一種由椎間盤變性引起的疼痛的治療或預防方法，其中通過向需要此類治療的患者投與接種痘苗病毒的炎症組織提取物來促進椎間盤細胞(牛髓核細胞)中的蛋白聚糖的合成。[0077]31.一種由椎間盤變性引起的疼痛的治療或預防方法，其中通過向需要此類治療的患者投與接種痘苗病毒的炎症組織提取物來促進椎間盤細胞(牛髓核細胞或纖維環細胞)中的膠原蛋白的合成。[0078]32.如上所述在副段落1-31任一中的實施方案，所述炎症組織為兔皮膚組織。
【權利要求】
1.一種軟骨細胞中的蛋白聚糖和/或膠原蛋白合成的促進方法，其包括向需要此類治療的患者投與接種痘苗病毒的炎症組織提取物。
2.根據權利要求1所述的方法，其中所述軟骨細胞包括椎間盤細胞。
3.根據權利要求2所述的方法，其中所述椎間盤細胞包括牛髓核細胞和/或纖維環細胞。
4.根據權利要求2所述的方法，其中促進蛋白聚糖的合成。
5.根據權利要求2所述的方法，其中促進膠原蛋白的合成。
6.根據權利要求2所述的方法，其中所述炎症組織為兔皮膚組織。
7.根據權利要求4所述的方法，其中所述椎間盤細胞包括牛髓核細胞。
8.根據權利要求4所述的方法，其中所述椎間盤細胞包括纖維環細胞。
9.根據權利要求5所述的方法，其中所述椎間盤細胞包括牛髓核細胞。
10.根據權利要求5所述的方法，其中所述椎間盤細胞包括纖維環細胞。
11.一種接種痘苗病毒的炎症組織提取物的判定或評價方法，其包括測量所述提取物對培養的軟骨細胞中的蛋白聚糖和/或膠原蛋白的合成促進活性作為指標。
12.根據權利要求11所述的方法，其中所述軟骨細胞包括椎間盤細胞。
13.根據權利要求12所述的方法，其中所述椎間盤細胞包括牛髓核細胞和/或纖維環細胞。
14.根據權利要求12所述的方法，其中促進蛋白聚糖的合成。
15.根據權利要求12所述的方法，其中促進膠原蛋白的合成。
16.根據權利要求12所述的方法，其中所述炎症組織為兔皮膚組織。
17.一種軟骨細胞的胞外基質的再生方法，其包括向需要此類治療的患者投與接種痘苗病毒的炎症組織提取物。
18.根據權利要求17所述的方法，其中所述軟骨細胞的胞外基質為椎間盤細胞的胞外基質。
19.一種接種痘苗病毒的炎症組織提取物的判定或評價方法，其包括測量所述提取物對軟骨細胞的胞外基質的再生活性作為指標。
20.根據權利要求19所述的方法，其中所述軟骨細胞的胞外基質為椎間盤細胞的胞外基質。
21.一種變性椎間盤的治療方法，其包括向需要此類治療的患者投與接種痘苗病毒的炎症組織提取物。
22.—種由椎間盤變性引起的疼痛的治療方法，其包括通過向需要此類治療的患者投與接種痘苗病毒的炎症組織提取物來使椎間盤細胞的胞外基質再生。
23.—種由椎間盤變性引起的疼痛的治療方法，其包括通過向需要此類治療的患者投與接種痘苗病毒的炎症組織提取物來促進椎間盤細胞中的蛋白聚糖的合成。
24.一種由椎間盤變性引起的疼痛的治療方法，其包括通過向需要此類治療的患者投與接種痘苗病毒的炎症組織提取物來促進椎間盤細胞中的膠原蛋白的合成。
25.一種變性椎間盤的治療或預防劑，其包含接種痘苗病毒的炎症組織提取物。
26.—種椎間盤細胞中的蛋白聚糖和/或膠原蛋白的合成促進劑，其包含接種痘苗病毒的炎症組織提取物。
【文檔編號】C12N5/00GK103476923SQ201180049567
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2011年10月11日 優先權日:2010年10月14日
【發明者】舛田浩一, 內木充 申請人:日本臟器製藥株式會社, 加利福尼亞大學校董會