用苯酚取代的二磷酸酯作抗腫瘤劑的製作方法

2023-04-26 03:01:41

專利名稱：用苯酚取代的二磷酸酯作抗腫瘤劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及抗腫瘤劑，特別是用苯酚取代的偕-二磷酸酯衍生物治療腫瘤疾病。更具體地說，本發明提供了用一些苯酚取代的偕-二磷酸酯衍生物製備用於治療和預防癌症和轉移並且特別是用於治療和預防Ras腫瘤基因依賴性癌症和轉移性侵襲的藥物組合物。
已有的多數抗癌藥物是對殺死腫瘤細胞缺乏特異性的細胞毒素類化合物並由此影響正常細胞，從而產生毒副作用。所以對開發作用於細胞傳送信號通道造成抑制癌細胞增殖而不影響正常細胞增生的更特異性藥劑是需要的(溶瘤細胞藥物，J.R.Prous，特藥物年報，1994版，第459頁和在癌症化療中使用Ras致腫瘤基因方法，G.Bolton等，Annual Reports inMedicinal Chemistry，199429165-17)。
現已表明Ras腫瘤基因的突變存在於各種人腫瘤中並且這些突變可以對所有人類癌症的1/5起作用。人們現已發現50％以上的結腸癌和90％胰腺癌是由其引起的。所以人們認為Ras突變在觸發癌症形成和發展中起重要作用(J.L.Bos，癌症研究.1989；494682-4689)。現在也已經確認Ras蛋白的突變形式僅存在於腫瘤中而不存在於癌症患者的正常組織中。所以，有吸引力的治療劑是能阻斷把正常細胞轉化為癌細胞以及進一步促進癌細胞和腫瘤發展的Ras突變的活性。
相應於歐洲專利N°0,339,237的美國專利N°5,043,330(1991)公開了一類苯酚取代的偕-二磷酸酯衍生物和它們作為降脂劑的用途如治療心血管疾病。
本申請人目前驚奇地發現在US 5,043,330中公開的這類二磷酸酯能夠特異地抑制癌細胞增生以及誘發癌細胞的細胞程序死亡而對正常細胞沒有毒性。所以，一方面，本發明提供了用化合物製備治療腫瘤疾病的藥物，該化合物具有下列通式(I)
其中-Z1、Z2、Z3和Z4是相同或不同的，並是-OR，其中R是H、含有1到8個碳原子的直鏈、支鏈或烷基，-OM，其中M是一個陽離子，-NR2，其中R有如上定義的相同含意，-Z1、Z2和Z3、Z4可以形成含有2到8個碳原子的亞烷基二氧環，-X1、X2是相同或不同並是H、滷原子、含有1到8個碳原子的直鏈、支鏈或環烷基或烷氧基，-X3是H、含有1到4個碳原子的烷基R1、醯基C(O)R1、氨甲醯基C(O)NHR1，其中R1如上所述，X3O和兩種其他取代基X1或X22-可以形成含有1到4個碳原子的亞烷基二氧環，-A是-CH＝CH-CH2-、-(CH2)n-、-O(CH2)n-、-S-、-SO2-、-S(CH2)n-、-SO2(CH2)n-，其中n是1到7的整數，或A與B形成通式為-(CH＝CH)k-(CH2)d-CH＝的亞烷基，其中k是0或1而d是從0到4的整數，-B是H、含有1到4個碳原子的烷基，-t是0或1，條件是當A是-(CH＝CH)k-(CH2)d-CH＝其中k和d是如上所述的時候t是0。
通式(I)的化合物可以鹽存在，本文下列通式(I)的化合物包括化合物的鹽形式，除非另有說明。鹽的例子是通式(I)的化合物，其中Z1、Z2、Z3和Z4中的一個或多個基團是由OM或氨鎓NR4組成，其中M是鹼金屬或鹼土金屬離子或R具有如上所定義的相同含義。
另一方面，本發明提供了用如前所定義的通式(I)的化合物製備治療固體腫瘤例如結腸、胰腺、甲狀腺、肺、乳腺、腦部和頸部腫瘤的藥物。
另一方面，本發明提供了用如前所定義的通式(I)的化合物製備治療造血和免疫系統腫瘤例如淋巴瘤和白血病的藥物。
再一方面，本發明提供了用如前所定義的通式(I)的化合物製備治療最初腫瘤轉移患者的藥物。
又一方面，本發明提供了用前所定義的通式(I)的化合物製備預防正常細胞的轉化或抑制癌細胞對正常細胞的轉移侵襲的藥物。
又一方面，本發明提供了治療腫瘤疾病或預防癌轉移的方法，特別是Ras依賴性癌症，該方法包括把有效治療量的如上述所定義的式(I)化合物給予患有癌症或癌症潛在發展的患者。
本發明的範圍中也包括選擇性去除癌細胞的方法，該方法包括用通式(I)的化合物體外處理來自患者的癌細胞和正常細胞的混合物，然後再把該細胞轉入患者體內。這樣，按照該方法，能夠從患者體內抽取血液、血漿或其它體液，用通式(I)的化合物體外處理，然後再轉入患者體內。
在通式(I)的化合物中，Z1、Z2、Z3和Z4基團的例子包括羥基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。優選的基團是異丙氧基。
本文優選Z1、Z2、Z3和Z4基團是相同的，本發明特別優選的實施方案是Z1、Z2、Z3和Z4基團都是異丙氧基。
基團X1和X2的例子包括氫、含1到5個碳原子的直鏈或支鏈烷基和烷氧基，特別優選1到4個碳原子的。X1和X2的優選基團是甲基、乙基、正丙基、異丙基、仲丁基、叔丁基、甲氧基和乙氧基，特別優選叔丁基。
基團X3的例子包括氫、C1-4烷基和C1-4鏈烷醯基，本文特別優選氫。
通式(I)的化合物包括苯酚取代的亞烷基二磷酸酯(Ia)和苯酚取代的亞鏈烯基二磷酸酯(Ib)。
其中X1、X2、X3、A、B、k、d、Z1、Z2、Z3和Z4如上所述。
結構(Ia)的化合物包括例如是那些其中-X1和X2是相同或不同並是含1到8個碳原子的烷基，-X3是氫，-A是CH＝CH-CH2(CH2)n，S，SO2，S-(CH2)n，SO2-(CH2)n，其中n是1-7，-B是氫或C1-C4烷基，-Z1、Z2、Z3和Z4是相同或不同，並且是OH，含1到8個碳原子的烷氧基或Z1，Z2和Z3，Z4對的一個或兩個是含2到8個碳原子的亞烷基二氧基。
結構(Ib)的化合物包括例如是那些其中-X1和X2是相同或不同並是含1到8個碳原子的烷基，-X3是氫，-k是0或1，d是0到4，-Z1、Z2、Z3和Z4是相同或不同，並且是OH，含1到8個碳原子的烷氧基或Z1、Z2和Z3、Z4對的一個或兩個是含2到8個碳原子的亞烷基二氧基。
用於本發明的通式(I)化合物的具體例子包括表1a和1b中的化合物。
本發明提供了式(I)偕-二磷酸酯治療腫瘤疾病和預防癌症和轉移、特別是那些Ras依賴性癌症的新用途。在特別優選的實施方案中，它提供了式(I)的化合物1製備用於治療癌症的藥物組合物的新用途，其中X1和X2都是叔丁基，分別在3-和5-位，X3是H，在4-位，A是CH2，B是H，t是1，Z1、Z2、Z3、Z4都是異丙氧基。該化合物1具有下列結構、通式和理化特性
2-(3，5-二叔丁基-4-羥基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸四異丙酯，C28H52O7P7，mp＝104-105℃。
按照EP 0 339 237 A的所述的方法可製備本發明的化合物，本文把EP0 339 237 A引用為參考文獻。
一些類似物是新的。所以，另一方面，本發明提供了新化合物，它們選自2-(3，5-二異丙基-4-羥基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3，5-二異丙基-4-羥基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3-叔丁基-4-羥基-5-甲基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3-叔丁基-4-羥基-5-甲基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3-乙氧基-4-羥基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3-乙氧基-4-羥基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3，5-二-叔丁基-4-甲氧基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四乙酯1-(3，5-二-叔丁基-4-羥基苯基)-亞丁基-2，2-二磷酸四異丙酯
式(I)化合物可口服或通過其它黏膜表面(如經鼻、頰、支氣管或直腸黏膜)，經皮轉運，或通過注射(如皮下，腹膜內，靜脈或肌內注射)給藥。
當把通式(I)化合物用於口服給藥時，可以把它們配製成如片劑、膠囊、顆粒劑、丸劑、糖衣藥丸、錠劑、粉劑、溶液、乳液、糖漿、懸浮液或其它任何適於口服給藥的製劑。如果需要的話，可以用一種或多種緩釋包衣包裹口服劑型來控制活性化合物在腸道的特定部位釋放。
可用標準方式把通式(I)的化合物和藥物學上可接受的增溶劑、稀釋劑或載體製備成片劑和其它固體或液體劑型。增溶劑、稀釋劑或載體的例子包括糖類如乳糖、澱粉、纖維素及其衍生物、粉狀西黃耆膠(tracaganth)、麥芽、明膠、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂、硫酸鈣、植物油、多元醇類如甘油、丙二醇和聚乙二醇、藻酸和藻酸鹽、瓊脂、無熱源的水、等滲鹽水、磷酸緩衝溶液和任選的其它藥物學的賦型劑如崩解劑、潤滑劑、溼潤劑如十二烷基硫酸鈉、著色劑、矯味劑和防腐劑等。
膠囊可以是硬或軟的類型，含有固體、液體或半固體形式該活性化合物。一般這種膠囊是由明膠或等同物形成的並且可以包衣或不包衣。如果需要膠囊通過胃部進入腸道時釋放該活性成分，可以提供具有pH敏感包衣的膠囊來適應在十二指腸或迴腸pH中溶解。這種包衣的例子包括Eudragits，它的使用是本領域所熟知的。
注射劑通常由適當增溶劑如去汙劑組成，它也包括化合物和賦型劑如可提供具有正確生理pH等滲溶液的緩衝劑。注射溶液一般無熱源並提拱含單位劑量化合物的密封的管瓶或安瓿。
本發明化合物的單位劑量一般含0.1％到99％重量的活性物質，更一般的是5％到75％的活性物質。作為舉例，單位劑量可含1mg到1g的化合物，更一般的是10mg到500mg，例如50mg至400mg，一般劑量在100mg到200mg之間。
本發明化合物將以有效提供所需治療作用的量給藥。提供所需治療作用的濃度根據疾病的準確特性、患者的大小、體重和年齡和疾病的嚴重程度這些因素而不同。
儘管在特定情況下，所治療疾病的嚴重性需要以引起一些毒性症狀的化合物的量給藥，但優選給藥劑量是對患者物無毒的。
一般，本發明的化合物以0.01mg/kg到100mg/kg體重的量，更優選以0.1mg/kg到10mg/kg體重並特別是1mg/kg到5mg/kg體重的量給藥。對平均70kg體重的人來說，一般本發明化合物的每日劑量在70mg到700mg。這種劑量例如以每天兩到四次給藥。但是，給藥劑量的大小和給藥頻率由治療患者的醫生判斷。
實施例K用來詳細說明發明人製備化合物1膠囊作用的代表性配方。
本發明化合物的藥理活性可採用人膀胱癌T24(H-Ras)致腫瘤基因轉染NIH 3T3細胞克隆，通過體外篩選模型證實。該細胞系(PAP2)已基於它高水平Ras表達特性和與高水平轉移能力有關的Ras依賴活性篩選出來(S.A.Hill等，國立癌症研究所雜誌1988，80484-490和A.Champers等，在侵襲和轉移中1990；10225-240)。PAP2細胞系已表明其使參與轉移過程的組織蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶的Ras-依賴表達增加(A.Chambers等，癌基因分子學，1992；5238-245)。因此PAP2細胞與人類癌症的病理過程有關。這些細胞用於體外試驗以觀察化合物對細胞增生、蛋白水解酶活性(轉移)和下垂蛋白(程序細胞死亡)的作用。當皮下(s.c.)注射這些細胞到免疫缺陷(裸體)鼠時，迅速形成固體腫瘤，然後在口服受試化合物後體內測定受試化合物的抗癌活性。
一系列體外和體內試驗結果導致了本發明發現，即代表性通式(I)化合物和特別是化合物1，
-抑制組織培養中的癌細胞生長，
-誘導組織培養中癌細胞的細胞程序死亡，
-抑制參與轉移的癌細胞中的蛋白水解酶和
-在患有固體腫瘤的裸體鼠中顯示了抗癌活性。
表1-7b中所示的試驗結果提供了證據，即通式(I)的化合物，特別是化合物1可潛在性地用於治療腫瘤疾病，這些腫瘤疾病包括造血和免疫系統的癌症如淋巴癌和白血病以及胰腺、結腸、乳腺、甲狀腺、大腦、肺、頭部和頸部的癌。最近發現的通式(I)化合物的抗癌活性是出人意料的並與以前報導的其降脂活性是無關的。
結果表示為平均
。用未成對數據的Student′s t-試驗評估顯著性差異。
實施例1用通式(I)的化合物抑制Ras依賴性細胞增生
篩選一系列通式(I)的化合物測定最大活性的化合物和結構與活性的關係。選擇PAP2細胞增生的抑制作初始篩選試驗。
簡要地說，以每孔3×104的濃度把PAP2細胞接種到24孔平皿上並使其附著24小時。試驗化合物以在1％乙醇溶液中最終濃度為10和20μM被加入。溫育48小時後將細胞胰蛋白酶化並對可見細胞(除了錐蟲蘭)計數。對化合物(Ia)和(Ib)系列來說，得到的結果分別列在表1a和1b中。
在試驗中篩選的化合物可以按照相應於歐洲專利0 339 237的美國專利5,043,330(1991)中描述的步驟合成。提供一些實施例(實施例A-J)來更詳細地說明按照上述現有技術中所述的步驟合成新衍生物。
表1a
苯酚取代的偕-二磷酸酯(Ia)對PAP2細胞的作用
表1b
苯酚取代的偕-二磷酸酯(Ib)對PAP2細胞的作用
實施例2體外試驗結果Ras依賴性細胞增生的抑制細胞培養
在Dulbecco的改良型Eagle培養基(DMEM)中37℃5％CO2氣氛中使H-Ras-轉染的NIH 3T3細胞(PAP2)(S.A.Hill等；國立癌症研究所雜誌1988；80484-490)生長，其中的培養基含有25mM HEPES和10％胎牛血清。將PAP2細胞胰蛋白酶化並在融合前再培養兩次。1.細胞增生的抑制
用兩種方法監測化合物1對細胞增生的作用
-用血細胞計數器的細胞計數法和合併的DNA測定
-用比色計測定法估計細胞的數目。1.1細胞計數和DNA含量
簡要地說，在加入增加濃度的受試化合物前4小時把PAP2細胞以每孔3×104的濃度接種在24孔的平皿上。隔一天後把細胞胰蛋白酶化。用一臺血細胞計數器對等份的細胞懸浮液計數。在0.01N NaOH中溶解所保留的細胞並用4，6-二氨基-2-苯吲哚作螢光染料和牛犢胸腺DNA作標準物通過螢光分光光度計測定DNA濃度。
表2a
化合物1對PAP2細胞增生的抑制
(細胞數/孔)所計算的化合物1對PAP2細胞生長抑制的IC50值是1.02μM。
表2b
在培養的PAP2細胞中化合物1所產生的DNA濃度的降低
DNA(mg/孔)所計算的化合物1對PAP2 DNA含量降低的IC50值是2.77μM。
表2a和2b中的結果表明通式(I)的化合物特別是化合物1能夠在培養基中抑制PAP2細胞的生長。1.2.比色的MTT測定法
用基本上如T.Mosman在免疫方法雜誌1983；6555-63中所述的MTT測定法估算細胞數。
簡要地說，在加入試驗藥物前5小時，以每孔1×104的濃度把PAP2細胞接種到96孔的平皿(Falcon)上。溫育24小時、48小時或72小時後，向每個孔中加入10μl以5mg/ml溶於PBS的MTT[3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑鎓溴化物]並在37℃溫育4小時。然後除去培養基並向每個孔中加入100μl 0.04N HCl異丙醇溶液。用扣除620nm背景的微板計數器測定570nm處轉化染料的吸收值。
如MTT法所測定的(溫育72小時後)，所計算的化合物1對PAP2細胞增生抑制的IC50值是8.05μM。用另一測定法得到的表3a、3b和3c中的結果證實通式(I)的化合物特別是化合物1能夠在培養基中抑制PAP2細胞的生長。
用MTT測定法測得的化合物1對PAP2細胞增生的作用
表3a
化合物1溫育24小時
(在570nm的OD)
表3b
化合物1溫育48小時
(在570nm的OD)
表3c
化合物1溫育72小時
(在570nm的OD)3.對DNA合成的抑制
把用氘標記的胸苷摻入培養PAP2細胞的三乙酸(TCA)沉澱物質中來測定DNA的合成。把PAP2細胞以每孔3×104個細胞接種到24孔平皿中兩天。然後用溶於乙醇的化合物1預溫育後，加入0.5μCi的甲基-[3H]-胸苷(特異活性82Ci/mmol)並標記4小時。然後用1ml的冷磷酸酯緩衝鹽水(PBS)洗滌該細胞。用0.2ml 4％的十二烷基硫酸鈉溶解。用1ml 30％TCA沉澱細胞提取物並冰浴保存1小時。在玻璃纖維濾紙上過濾收集沉澱物並用5ml 5％TCA洗滌。用液晶閃爍計數器對濾紙上的放射活性計數。
表4
化合物1對Ras轉染細胞(PAP2)中DNA合成的抑制
把3H-胸苷摻入DNA(cpm)所計算的化合物1對PAP2細胞中DNA合成抑制的IC50值是3.75μM。
表4中的結果表明通式(I)的化合物特別是化合物1能夠抑制Ras轉染細胞中DNA的合成。4.細胞程序死亡的誘導
現已表明通式(I)的化合物在5μM或更高濃度對PAP2細胞系中促進細胞死亡具有選擇性作用。在用化合物1處理的其它兩種人癌細胞系(HepG2和SW480)中證實了這種選擇性促進癌細胞中細胞程序死亡的特異作用，這表明這些化合物不僅抑制細胞成長而且還產生癌細胞自身的破壞(表5)。這已被顯示DNA片段和細胞程序死亡的檢驗印跡的凝膠電泳所證實。
表5
化合物對人癌細胞系中細胞生存力的作用·處理前，細胞在24孔平皿中培養了48小時。·10μM化合物處理24小時。·計數把細胞胰蛋白酶化並對生存的細胞計數。5.化合物1對較廣範圍的人癌細胞系的作用
在較廣範圍的已建立的來源於人的癌細胞系中對化合物1的抗增殖活性進行了試驗以證實這些化合物對與在人相關的癌症中的潛在用途(表6)。結果表明化合物1在所試驗的50個人癌細胞系中對90％以上細胞系降低細胞增生有效。所以，可以認為通式(I)的化合物能夠用於治療較廣範圍的具有和沒有Ras突變的人癌症。
表6
化合物1對來自人腫瘤的細胞系的抗增殖作用實施例2體內的結果腫瘤生長的抑制
當天將0.5ml的PAP2細胞(每0.5mlDMEM 5×10個細胞)皮下(s.c.)注射到7到9周雌性裸鼠(Swiss nu/nu)。在同一天用化合物1口服治療(50mg/kg)。治療組(n＝18)得到混合有食物的化合物1(0.03％w/w)，對照組(n＝22)得到未加化合物的飲食。在第15天，給該鼠稱重、殺死並摘除腫瘤稱重。
表7a
用化合物1口服治療(50mg/kg)對皮下注射
PAP2細胞的裸鼠所產生的腫瘤重量的作用
表7a的結果顯示在治療組中平均的腫瘤重量顯著下降，這表明化合物1是有效的抗腫瘤劑。在對照組和治療組中小鼠的重量相同，所以確定化合物1無毒性。
在另一例試驗中，以12.50和100mg/kg的劑量試驗化合物1。表7b的結果顯示化合物1在低至12.5mg/kg劑量時抑制腫瘤生長並以依賴劑量方式抑制裸鼠的腫瘤生長。這些結果證實通式(I)的化合物特別是化合物1是有效的口服活性抗腫瘤化合物並對正常細胞、組織或器官不具有毒性作用。
表7b
用不同劑量的化合物1口服治療注射有
PAP2細胞的裸鼠觀察腫瘤重量的降低實施例A2-(3，5-二異丙基-4-羥基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四異丙酯
把四氯化鈦(13.83g，73mmol)滴加到無水THF(80ml)，在0℃保持。在0℃把所得到的混合物按順序用3，5-二異丙基-4-羥基苯甲醛(5.0g，24mmol)、亞甲基二磷酸四異丙酯(10.85g，32mmol)和N-甲基嗎啉(14.71g，146mmol)處理。在室溫下把該反應混合物攪拌12小時並加80ml水。用二乙醚(3×60ml)萃取淬滅的反應混合物，用飽和的NaCl溶液萃取合併的醚部分直到水溶液洗到中性pH。在MgSO4上乾燥後，蒸發有機溶劑並在矽膠上用CH2Cl2∶MeOH(95∶5)的混合物作洗脫劑進行柱色譜層析純化該殘餘物，得到8g(62％)的固體；mp＝87-88℃。MSm/e＝532M+367M+-PO3iPr2NMR(CDCl3)δ＝8.22(dd，J＝31和48Hz，1H)Ph-CH＝C-P2
7.7(s，2H)芳香H，
5.6(s，1H)OH，
4.85-4.63(2m，4H)P-O-CHMe2，
3.16(分開的，2H)Ph-CHMe2，
1.39，1.36，1.27，1.23和1.16(8d，36H總共)P-O-CHMe2和Ph-CHMe2。實施例B2-(3，5-二異丙基-4-羥基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸四異丙酯
把2-(3，5-二異丙基-4-羥基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四異丙酯(5g，9.4mmol)溶於乙醇(50ml)並在室溫50psi在2g10％鈀/碳上氫化溶液4小時。過濾結晶，蒸發溶劑並在矽膠上用CH2Cl2∶MeOH(95∶5)的混合物作洗脫劑進行柱色譜層析純化該殘餘物，得到2.5g(50％)的固體；mp＝90-91℃。MSm/e＝534M+，369M+-PO3iPr2NMR(CDCl3)δ＝6.94(m，2H)芳香H，
4.8-4.7(m，5H)P-O-CHMe2和OH，
3.2-3.1(幾個m，總共6H)Ph-CH2-CH和Ph-CHMe2，
2.51(tt，J＝6和24H，1H)Ph-CH2-CH，
1.33-1.21(幾個d，總共36H)P-O-CHMe2和Ph-CHMe2。實施例C2-(3，4，5-三甲氧基基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四異丙酯
按照實施例A中所描述的在THF中用四氯化鈦、亞甲基二磷酸四異丙酯和N-甲基嗎啉處理3，4，5-三甲氧基苯甲醛(7g，35.7mmol)得到11.5g(62％)的標題化合物。MSm/e＝522M+357M+-PO3iPr2NMR(CDCl3)δ＝8.21(dd，J＝30和48Hz，1H)Ph-CH＝C-P2
7.28(s，2H)芳香H，
4.85-4.63(2m，4H)P-O-CHMe2，
3.9(t，9H)Ph-OMe，
1.4，1.36和1.22(4d，總共24H)P-O-CHMe2。實施例D2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸四異丙酯
如實施例B中所描述的在10％Pd/C上氫化2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四異丙酯(7g，13.4mmol)得到5.7g(81％)的標題化合物。MSm/e＝524M+，359M+-PO3iPr2NMR(CDCl3)δ＝6.55(s，2H)芳香H，
4.8-4.7(m，4H)P-O-CHMe2，
3.85和3.81(2s，9H)Ph-OMe，
3.17(dt，J＝6和16Hz，2H)Ph-CH2-CH，
2.50(tt，J＝6和24Hz，1H)Ph-CH2-CH，
1.33-1.26(幾個d，總共24H)P-O-CHMe2。實施例E2-(3-叔丁基-4-羥基-5-甲基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四異丙酯
按照實施例A中所描述的在THF中用四氯化鈦、亞甲基二磷酸四異丙酯和N-甲基嗎啉處理3-叔丁基-4-羥基-5-甲基苯甲醛(6g，31.3mmol)得到4.2g(62％)的標題化合物。MSm/e＝518M+353M+-PO3iPr2NMR(CDCl3)δ＝8.19(dd，J＝30和48Hz，1H)Ph-CH＝C-P2
7.71-7.76(m，2H)芳香H，
5.6(s，1H)OH，
4.8-4.7(2m，4H)P-O-CHMe2，
2.26(s，3H)Ph-Me，
1.40(s，9H)Ph-t-Bu，
1.38，1.36，1.24和1.20(8d，總共24H)P-O-CHMe2。實施例F2-(3-叔丁基-4-羥基-5-甲基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸四異丙酯
按照實施例B中所描述的在10％Pd/C上氫化2-(3-叔丁基-4-羥基-5-甲基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四異丙酯(5g，9.6mmol)氫化得到2.9g(58％)的標題化合物。MSm/e＝520M+355M+-PO3iPr2NMR(CDCl3)δ＝7.02和6.92(2m，2H)芳香H，
4.8-4.7(m，5H)P-O-CHMe2和OH，
3.11(dt，J＝6和17Hz，2H)Ph-CH2-CH，
2.49(tt，J＝6和24Hz，1H)Ph-CH2-CH，
2.21(s，3H)Ph-Me，
1.39(s，9H)Ph-t-Bu，
1.31，1.26和1.24(3d，24H)P-O-CHMe2。實施例G2-(3-乙氧基-4-羥基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四異丙酯
按照實施例A中所描述的在THF中用四氯化鈦、亞甲基二磷酸四異丙酯和N-甲基嗎啉處理3-乙氧基-4-羥基苯甲醛(6g，36.1mmol)得到4.2g(62％)的標題化合物。MSm/e＝492M+327M+-PO3iPr2NMR(CDCl3)δ＝8.19(dd，J＝31和48Hz，1H)Ph-CH＝C-P2
7.9，7.3和6.91(3m，3H)芳香H，
6.2(s，1H)OH，
4.85-4.6 3(2m，4H)P-O-CHMe2，
4.19(q，J＝7Hz)Ph-OCH2-CH3，
1.46(t，J＝7Hz)Ph-OCH2-CH3，
1.39，1.36，1.23和1.21(4d，總共24H)P-O-CHMe2。實施例H2-(3-乙氧基-4-羥基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸四異丙酯
按照實施例B中所描述的在10％Pd/C上氫化2-(3-乙氧基-4-羥基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四異丙酯(5g，10.16mmol)得到4.5g(90％)的標題化合物。MSm/e＝494M+329M+-PO3iPr2NMR(CDCl3)δ＝6.85和6.75(幾個m，3H)芳香H，
5.65(s，1H)OH，
4.8-4.7(m，4H)P-O-CHMe2，
4.10(q，J＝7Hz)Ph-OCH2-CH3，
3.14(dt，J＝6和16Hz，2H)Ph-CH2-CH，
2.45(tt，J＝6和24Hz，1H)Ph-CH2-CH，
1.43(t，J＝7Hz)Ph-OCH-CH3，
1.32-1.25(4個部分重疊的d，總共24H)P-O-CHMe2。實施例I2-(3，5-二叔丁基-4-甲氧基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四異丙酯
按照實施例A中所描述的在THF中用四氯化鈦、亞甲基二磷酸四異丙酯和N-甲基嗎啉處理3，5-二叔丁基-4-甲氧基苯甲醛(2.0g，8.1mmol)得到3.0g(72％)的標題化合物。mp＝66-67℃MSm/e＝518M+381M+-PO3Et2NMR(CDCl3)δ＝8.26(dd，J＝30和48Hz，1H)Ph-CH＝C-P2
7.8(s，2H)芳香H，
4.25-4.00(2m，8H)P-O-CH2-CH3，
3.69(s，3H)Ph-OMe，
1.44(s，18H)Ph-t-Bu，
1.38和1.70(2t，12H)Ph-OCH2-CH3。實施例J1-(3，5-二叔丁基-4-羥基苯基)-亞丁基-2，2-二磷酸四異丙酯
通過在NaH存在下於THF中將亞甲基二磷酸四異丙酯與3當量的碘乙烷反應來製備亞丙基-1，1-二磷酸四異丙酯。
把亞丙基-1，1-二磷酸四異丙酯(2.2g，6.0mmol)加入60％NaH(0.5g，12.0mmol)的20ml無水THF懸浮液中並把混合物攪拌到NaH消失。加入在10ml THF中的3，5-二叔丁基-4-羥基苄氯(1.5g，6mmol)並把混合物回流一夜。完成後，在矽膠上用CHCl3∶AcOEt(8∶2)作洗脫劑柱色譜層析得到1.5g(42％)的標題化合物。MSm/e＝590M+425M+-PO3Pr2，基峰341M+-2×propenmp＝131-132℃實施例K化合物製劑的典型例活性成分化合物1非活性成分預膠凝化的澱粉NF3號不透明的暗蘭色明膠膠囊
代表性的配方
一般一批2000個膠囊
權利要求
1.用一種苯酚取代的偕-二磷酸酯製備治療或預防腫瘤疾病的藥物，其中苯酚取代的偕-二磷酸酯選自通式為(I)的化合物，
其中-Z1、Z2、Z3和Z4是相同或不同的，並是-OR，其中R是H、含有1到8個碳原子的直鏈、支鏈或環狀烷基，-OM，其中M是一個陽離子，-NR2，其中R有如上定義的相同含意，-Z1、Z2和Z3、Z4可以形成一種含有2到8個碳原子的亞烷基二氧環，-X1、X2是相同或不同並是H、滷原子、含有1到8個碳原子的直鏈、支鏈或環烷基或烷氧基，-X3是H、含有1到4個碳原子的烷基R1、醯基C(O)R1、氨甲醯基C(O)NHR1，其中R1如上所述，X3O和兩種其他取代基X1或X2之一可以形成含有1到4個碳原子的亞烷基二氧環，-A是-CH＝CH-CH2-、-(CH2)n-、-O(CH2)n-、-S-、-SO2-、-S(CH2)n-、-SO2(CH2)n-，其中n是1到7的整數，或A與B形成通式為-(CH＝CH)k-(CH2)d-CH＝的亞烷基，其中k是0或1而d是從0到4的整數，-B是H、含有1到4個碳原子的烷基，-t是0或1，條件是當A是-(CH＝CH)k-(CH2)d-CH＝其中k和d是如上所述的時候t是0。
2.根據權利要求1的用途，其中的腫瘤疾病選自造血和免疫系統的癌症，包括淋巴瘤和白血病，以及胰腺、結腸、乳腺、甲狀腺、大腦、肺、頭部和頸部癌。
3.根據權利要求1的用途，選自於式〔I〕化合物中的二磷酸酯用於製備預防癌細胞對正常細胞的轉移性侵襲的藥物。
4.根據權利要求1到3中的任一用途，苯酚取代的亞烷基二磷酸酯選自式(Ia)化合物
其中X1、X2、X3、A、B、Z1、Z2、Z3和Z4如權利要求1中所定義。
5.根據權利要求1到3中的任一用途，苯酚取代的亞鏈烯基二磷酸酯選自式(Ib)化合物
其中X1、X2、X3、k、d、Z1、Z2、Z3和Z4如權利要求1中所定義。
6.根據上述權利要求中的任何一個用途，其中Z1、Z2、Z3和Z4是相同或不同的並選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基和叔丁基。
7.根據權利要求6的用途，其中Z1、Z2、Z3和Z4是相同的。
8.根據權利要求7的用途，其中Z1、Z2、Z3和Z4是異丙基。
9.根據上述權利要求中的任何一個用途，其中X1和X2是相同或不同的並選自具有1到5個碳原子的直鏈或支鏈烷基和烷氧基。
10.根據權利要求9用途，其中X1和X2是相同或不同的並選自甲基、乙基正丙基、仲丁基、叔丁基、甲氧基和乙氧基。
11.根據權利要求10的用途，其中X1和X2是相同的。
12根據權利要求1的用途，其中X1和X2都是叔丁基。
13.根據上述權利要求中的任何一個用途，其中X3選自氫、C1-4烷基和C1-4烷醯基。
14.根據權利要求13的用途，其中X3是氫原子。
15.根據權利要求1到3中的任一用途，其中式(I)的化合物是2-(3，5-二-叔丁基-4-羥基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸四異丙酯。
16.根據權利要求1到3中的任一用途，其中苯酚取代的偕-二磷酸酯選自2-(3，5-二叔丁基-4-羥基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸2-(3，5-二叔丁基-4-羥基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸四甲酯2-(3，5-二叔丁基-4-羥基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸四乙酯2-(3，5-二叔丁基-4-羥基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸四正丙酯2-(3，5-二叔丁基-4-羥基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸四正丁酯2-(3，5-二叔丁基-4-羥基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3，5-二仲丁基-4-羥基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3，5-二異丙基-4-羥基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸四乙酯2-(3，5-二異丙基-4-羥基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3-叔丁基-4-羥基-5-甲基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸四乙酯2-(3-叔丁基-4-羥基-5-甲基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸四異丙酯3，5-二叔丁基-4-羥基-苯基-硫代亞甲基-1，1-二磷酸四乙酯3，5-二叔丁基-4-羥基-苯基-硫代亞甲基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-亞乙基--1，1-二磷酸四異丙酯2-(3，5-二叔丁基-4-羥基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸二丁基二乙酯2-(3，5-二叔丁基-4-羥基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸二乙基二異丙酯1-(3，5-二叔丁基-4-羥基苯基)-亞丁基-2，2-二磷酸四乙酯2-(3，5-二叔丁基-4-羥基苯基)-亞乙基-1，1-二(2-氧代-1，3，2-dioxaphosphorinan)1-(3，5-二叔丁基-4-羥基苯基)-亞丁基-2，2-二磷酸四異丙酯2-(3，5-二叔丁基-4-羥基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸2-(3，5-二叔丁基-4-羥基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四甲酯2-(3，5-二叔丁基-4-羥基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四乙酯2-(3，5-二叔丁基-4-羥基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3，5-二叔丁基-4-羥基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四正丙酯2-(3，5-二叔丁基-4-羥基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四正丁酯2-(3，5-二仲丁基-4-羥基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四乙酯2-(3，5-二仲丁基-4-羥基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3，5-二異丙基-4-羥基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3-叔丁基-4-羥基-5-甲基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四乙酯2-(3-叔丁基-4-羥基-5-甲基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3，5-二甲氧基-4-羥基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四乙酯2-(3，5-二甲氧基-4-羥基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3-乙氧基-4-羥基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四異丙酯4-(3，5-二叔丁基-4-羥基苯基)-1，3-亞丁間二烯基-1，1-二磷酸四乙酯4-(3，5-二叔丁基-4-羥基苯基)-1，3-亞丁間二烯基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3，5-二叔丁基-4-羥基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸二丁基二乙酯2-(3，5-二叔丁基-4-羥基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸二乙基二異丙酯2-(3，5-二叔丁基-4-甲氧基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四乙酯2-(3，4-亞甲基二氧基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四乙酯和2-(3，4-亞乙基二氧基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四乙酯。
17.一種治療或預防患者腫瘤疾病的方法，該方法包括給予有效治療量的上述任一權利要求定義的式(I)化合物。
18.根據權利要求17的方法，其中腫瘤疾病選自造血和免疫系統的癌症，包括淋巴瘤和白血病，以及胰腺、結腸、乳腺、甲狀腺、大腦、肺、頭部和頸部癌。
19.根據權利要求17或18的方法，其中的癌症是Ras依賴性癌症。
20.一種預防或抑制患者的正常組織受癌細胞的轉移性侵襲的方法，該方法包括給予患者有效量的上述任一權利要求所定義的式(I)化合物。
21.一種預防由突變的Ras活性所誘發的正常細胞轉化為腫瘤細胞的方法，該方法包括用有效阻斷Ras活性量的上述任一權利要求所定義的式(I)化合物處理細胞。
22.根據權利要求21的方法，其中正常細胞存在於患者體內。
23.一種選擇性滅絕癌細胞的方法，它包括用式(I)化合物以體外方式處理來自患者的癌細胞和正常細胞的混合物，然後把該細胞再轉入患者。
24.根據權利要求23的方法，其中用注射或輸注把細胞再轉入患者。
25.選自下面的化合物2-(3，5-二異丙基-4-羥基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3，5-二異丙基-4-羥基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3-叔丁基-4-羥基-5-甲基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3-叔丁基-4-羥基-5-甲基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3-乙氧基-4-羥基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3-乙氧基-4-羥基苯基)-亞乙基-1，1-二磷酸四異丙酯2-(3，5-二叔丁基-4-甲氧基苯基)-亞乙烯基-1，1-二磷酸四乙酯1-(3，5-二叔丁基-4-羥基苯基)-亞丁基-2，2-二磷酸四異丙酯
26.藥物組合物，它含有權利要求25中所定義的化合物和藥物學上可接受的載體。
27.權利要求25的化合物用於治療癌症特別是Ras依賴性癌症。
全文摘要
本發明提供用一種苯酚取代的偕－二磷酸酯製備治療和預防腫瘤疾病特別是Ra s依賴性癌症的藥物,其中苯酚取代的偕－二磷酸酯選自通式(Ⅰ)的化合物,通式(Ⅰ)中Z1、Z2、Z3和Z4是相同或不同的,是OR,R是H、含有1到8個碳原子的直鏈、支鏈或環狀烷基,OM中M是一個陽離子,NR2中R有如上定義的相同含意,Z1、Z2和Z3、Z4可以形成一種含有2到8個碳原子的亞烷基二氧環,X1、X2是相同或不同並是H、含有1到8個碳原子的直鏈、支鏈或環狀烷基或烷氧基,X3是H、含有1到4個碳原子的烷基R1、醯基C(O)R1、氨甲醯基C(O)NHR1,其中R1如上所述,X3O和兩種其他取代基X1或X2可以形成含有1到4個碳原子的亞烷基二氧環,A是－CH=CH－CH2－、－(CH2)m－、－O(CH2)n－、－S－、－SO2－、－S(CH2)n－、－SO2(CH2)n－,其中n是1到7的整數,或A與B形成一種通式為－(CH=CH)k－(CH2)d－CH=的亞烷基,其中k是0或1而d是從0到4的整數,B是H、一個含有1到4個碳原子的烷基,t是0或1,條件是A是－(CH=CH)k－(CH2)d－CH=其中k和d是如上所述的時候t是0。
文檔編號A61K31/66GK1192148SQ9619600
公開日1998年9月2日 申請日期1996年7月26日 優先權日1995年7月28日
發明者E·尼索爾, C·L·苯特恩, L·M·尼古耶, J－L·特威拉德, H·T·法恩, J·弗拉奇 申請人:西姆法有限公司