一種藻紅蛋白標記抗sti抗體、製備方法及其用途的製作方法

2023-04-25 22:39:31

專利名稱：一種藻紅蛋白標記抗sti抗體、製備方法及其用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種抗體，尤其涉及一種藻紅蛋白標記抗體、製備方法及其用途。
背景技術：
我國是水產品生產大國，2010年水產品總產量達到了 5373萬噸，其中水產品加工產量為1778萬噸，水產品加工業已經成為我國漁業生產中發展速度快、經濟社會效益顯著的重要支柱產業。魚糜製品是大宗低值魚類加工利用的一個重要方向。據統計，在2010年我國魚糜製品產量達到了 96萬噸。近年來，隨著魚糜原料價格的大幅上漲，非魚肉蛋白被添加到了魚糜製品中。其中，大豆蛋白在原料魚漿以及生產過程中普遍使用，使得魚糜製品生產相關企業在原料把關上存在嚴重的挑戰，魚糜製品的有效成分和品質也難於得到保證，損害了消費者的利益和企業的長遠發展。但是目前國內尚未有有效的方法檢測魚糜製品中的大豆蛋白，亟需建立一種快速、有效的檢測方法。

發明內容
本發明要解決的技術問題是:提供一種快速、準確、安全的檢測大豆蛋白的藻紅蛋白標記抗大豆胰蛋白酶抑制劑(soybean trypsin inhibitor, STI)抗體。為實現上述目的，本發明提供一種藻紅蛋白標記抗STI單克隆抗體，其特徵在於，由藻紅蛋白偶聯抗STI單克隆抗體組合而成。所述藻紅蛋白與抗STI單克隆抗體均分別進行了處理；優選為藻紅蛋白通過SPDP (3-(2-吡啶二巰基)丙酸N-羥基琥珀醯亞胺酯)和DTT (二硫蘇糖醇)處理；抗STI單克隆抗體通過SPDP處理。具體處理方法為:
藻紅蛋白的處理:一定量的R-藻紅蛋白與SPDP在恆溫搖床反應，100 rpm/min, 20-30°C，反應I h，反應結束後過脫鹽柱去除多餘的SPDP，並用10 kDa膜濃縮；加入一定量的DTT於上述SPDP處理的R-藻紅蛋白，20-30 1:恆溫搖床反應，100 rpm/min，反應時間為30min，反應結束後過脫鹽柱或透析去除多餘的DTT，並用10 kDa膜濃縮，得到處理後的藻紅蛋白；
抗STI單克隆抗體的處理:一定量的抗STI單克隆抗體與SPDP在恆溫搖床反應，100rpm/min, 20-30 °C反應I h，反應結束後過脫鹽柱或透析去除多餘的SPDP，並用10 kDa膜濃縮，得到處理後的抗STI單克隆抗體；
再將上述SPDP處理後的藻紅蛋白和處理後的抗STI單克隆抗體混合，在恆溫搖床反應，100 rpm/min, 20-30 °C反應16-18 h，得到藻紅蛋白偶聯抗STI單克隆抗體複合物；收集:將獲得的藻紅蛋白偶聯抗STI單克隆抗體複合物過凝膠過濾柱，獲得藻紅蛋白標記的抗體。所述藻紅蛋白與SPDP的比例為摩爾比為1:80-1:100。所述DTT與所述SPDP標記的R-藻紅蛋白的反應濃度為摩爾比為1:100-1:400。所述抗STI單克隆抗 體與SPDP摩爾比為1:80-1:100。本發明還保護依據上述製備方法所得的藻紅蛋白標記抗STI抗體。
本發明還保護藻紅蛋白標記抗STI抗體的用途，優選為檢測魚糜製品中大豆蛋白的用途。本發明還進行了免疫螢光方法與化學發光方法的比較試驗，結果表明免疫螢光法比化學發光法靈敏度更高，且反應時間更短。利用免疫螢光法能夠檢測到1.56 yg/mLSTI。化學發光法能夠檢測到3.12 yg/mL STI。本發明進行了未添加大豆蛋白的自製魚丸和市售魚丸中大豆蛋白的檢測試驗，八種材料分別為未添加大豆蛋白的自製魚丸、魚豆腐、福州魚丸、A公司墨魚魚丸、B公司墨魚魚丸、花枝魚丸、章魚魚丸，含2 % (w/w)大豆蛋白的魚丸。結果表明:未添加大豆蛋白的自製魚丸，沒有對應STI蛋白(21 kDa)的條帶，說明該抗體特異性良好。2 %大豆蛋白添加量(w/w)的魚丸，STI條帶清晰明顯；魚豆腐的條帶最亮，說明魚豆腐中的大豆蛋白含量最高。其次為A公司墨魚魚丸和福州魚丸，添加量為2 %左右。雖然B公司墨魚魚丸、花枝魚丸、章魚丸包裝上未標註含大豆蛋白，但泳道5、6、7顯示也含有一定量的大豆蛋白，該結果與化學發光法一致。本發明所實施的實施例，充分說明了本發明的方法結果與化學發光法一致，且比化學發光法靈敏度更高。由於藻紅蛋白直接標記了一次抗體，與需要二次抗體反應的螢光法相比較，反應時間更短。本發明的方法簡單，準確，安全。


圖1A.純化STI的SDS-PAGE電泳圖，圖1B.抗STI單克隆抗體的特異性分析電泳 圖2.純化STI對胰蛋白酶的抑制效果 圖3.抗STI單克隆抗體純化結果電泳圖； 圖4A.免疫螢光法檢測 圖4B.化學發光法檢測 圖5A.8種不同魚糜製品的免疫螢光法檢測結果 圖5B.8種不同魚糜製品的化學發光法檢測結果圖。
具體實施例方式下面通過具體實施方式
對本發明作進一步詳細說明。但本領域技術人員將會理解，下列實施例僅用於說明本發明，而不應視為限定本發明的範圍。實施例中未註明具體技術或條件者，按照本領域內的文獻所描述的技術或條件或者按照產品說明書進行。所用試劑或儀器未註明生產廠商者，均為可以通過市購獲得的常規產品。實施例1:大豆蛋白STI標準品的製備
用高速藥物粉碎機將大豆磨成粉末，並過60目篩，稱取100 g粉末，加入300 mL丙酮攪拌2 h,絹布過濾,棄去丙酮層。殘留物用80 %的乙醇洗漆,8000 g離心20 min,棄上清，如此重複4次。將所得沉澱浸泡於0.08 mol/L H2SO4中30 min, 6000 g離心15 min，棄上清，沉澱再重懸於0.125 mol/L H2SO4*,攪拌4 h,8000 g離心20 min,絹布過濾,棄沉澱。上清液用I mol/L的NaOH調pH至4.7，靜置0.5 h,8000 g離心20 min，棄沉澱。上清液加Λ 70 %飽和度的(NH4)2SO4,4 °C放置 2 h，8000 g離心 20 min，沉澱用 20 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)的緩衝液溶解，透析過夜。將透析後的樣品上樣於預先用20 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0)的緩衝液平衡好的DEAE-Sephacel層析柱，經0-0.5 mol/L NaCl線性洗脫、收集對胰蛋白酶抑制活性峰部分，於20 mmol/L的HAc-NaAc (pH 4.0)緩衝液中透析21 h，期間分別間隔1、2、4、6 h更換一次緩衝液。透析後樣品進一步上樣於SP-Sepharose離子交換層析柱,經20 mmol/L HAc-NaAc(pH 4.0-6.0)的緩衝液洗脫，得到純化的大豆胰蛋白酶抑制劑(STI)。蛋白的純化效果如圖1A和圖1B，其中泳道M為蛋白標準分子量，泳道I為純化的STI ;從圖中可以看出泳道I除了 STI條帶外，不存在其它條帶，即經過一系列的分離純化，得到了高度純化的STI。純化的STI抑制活性採用螢光底物進行鑑定。即取50 μ L純化的STI加入850 μ L 20 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0)緩衝液中，再加入50 μ L適量濃度的胰蛋白酶(sigma公司)混勻，常溫孵育 10 min 後，加入 10 μ mol/L 突光底物 Boc-Phe-Ser-Arg-MCA (Peptide Institute公司，日本)50 μ L於37 °C反應10 min，用1.5 mL終止液(甲醇:異丙醇:水=35:30:35v:v:v)終止反應。反應釋放的產物7-amino-4-methylcoumarin (AMC)用突光分光光度計(FP-6200，JASC0，日本)，在激發波長380 nm和發射波長450 nm下進行測定。所得到的值即STI的抑制活力用Ti表示。對照(胰蛋白酶酶活力)的測定方法類似，即將50 μ L的緩衝液代替50 μ L純化的STI反應，所測得的值用T表示。抑制活力單位(Unit)定義為將胰蛋白酶活性降低I個活力單位的抑制活性，其中胰蛋白酶的活力單位定義為每分鐘釋放I nmol AMC所需要的酶量。抑制率採用百分數I (%)表示，計算公式如下:1 (%) = ( (T-Ti)/Τ) X 100。結果如圖2所示,橫坐標表示純化的STI的濃度,縱坐標表示抑制率I (%),從圖中可以看出，當純化的STI濃度為1/64000 mg/mL (15.6 ng/mL)時，對胰蛋白酶仍然有10%左右的抑制活性，純化STI的IC50 (測定導致胰蛋白酶活力下降50 %的抑制劑濃度)為1/32000 mg/mL即3L 3 ng/mL，說明純化的STI對胰蛋白酶具有強烈的抑制效果。實施例2抗大豆蛋白STI單克隆抗體的製備 選擇5隻雌性、6 8周齡的BALB/c小鼠(上海斯萊克實驗動物有限公司)，將實施例1得到純化的大豆蛋白STI經110 °C，處理30 min後(100 μ L)與等體積的弗氏完全佐劑(Sigma)混勻所得即為抗原，每隻小鼠100 μ g抗原的劑量進行腹腔注射；之後每隔2周以相同劑量的抗原加強免疫；免疫3次後，對小鼠進行尾部取血，利用間接ELISA法檢測小鼠血清效價，即抗原以2 yg/mL的濃度包被酶標板，4 1:包被過夜，以200 μ L/孔TBST洗滌5遍，經5 %的脫脂奶37 °C條件下溫育1.5 h，以200 μ L/孔TBST洗滌2遍，將小鼠抗血清以 1:200、1:1000、1:5000、1:10000、1:20000、1:60000、1:240000 的稀釋度稀釋，50 μ L/孔加樣，37 °C條件下溫育I h，用TBST以200 μ L/孔洗滌2遍，羊抗鼠HRPl: 5000稀釋使用，以100 μ L/孔加樣，37 °C條件下溫育I h，用TBST以200 μ L/孔洗滌3遍，加100μ L/孔TMB (3，，5，5』 -四甲基聯苯胺)顯色液，反應20 min後，加入50 μ L/孔的H2SO4終止反應，酶標儀測定OD45tl Μ讀數，選擇抗體滴度最高的一隻小鼠(血清稀釋度為I: 10000時，OD450 Μ為1.294)在細胞融合前4天,進行強化免疫I次。免疫量仍然為每隻小鼠100 μ g抗原。分離強化免疫的小鼠脾臟淋巴細胞，將其與SP2/0骨髓瘤細胞(中國科學院細胞庫)在聚乙二醇(Sigma)的介導下進行融合；融合後的細胞在含有I % HAT (Sigma)和20%胎牛血清(Invitrogen)的RPMI 1640 (Invitrogen)培養基中37 °C培養；雜交瘤細胞通過ELISA法進行篩選(方法同之前提供的間接ELISA法)。篩選出的陽性細胞採用有限稀釋法進行克隆化培養，該操作重複3次以保證篩選出能分泌抗大豆蛋白STI抗體的單克隆陽性細胞株。篩選的能分泌抗大豆蛋白STI單克隆抗體的陽性細胞株進行擴大培養，收集培養上清，1500 g離心10 min取上清即得抗小清蛋白單克隆抗體。將得到的單克隆抗體與平衡緩衝液(20 mmol/L的PBS，pH 7.0)混合後，上樣於預先用20 mmol/L的PBS (pH 7.0)平衡的Protein G Sepharose親和層析柱(Amersham Biosciences),收集該部分樣品(未吸附部分);繼續用平衡緩衝液流洗至A28tol為基線，然後以0.1 mol/L glycine (甘氨酸)-HCl (pH2.7)進行洗脫至A28tlnm為基線，收集時先在離心管中預先加入100 μ L lmol/L Tris-HCl(pH 9.0)的緩衝液，每管收集I mL，洗脫部分所得樣品稱吸附部分。分別將細胞培養上清、未吸附部分及吸附部分的蛋白峰部分SDS化後(樣:上樣緩衝液=3:1，V: V)，進行SDS-PAGE電泳分析，結果如圖3的泳道1、2、3所示。說明經Protein G Sepharose親和層析柱的純化，有效去除了雜蛋白，得到了高度純化的抗STI單克隆抗體。如泳道3所示(吸附部分)，在還原條件下(加入巰基乙醇)分別顯示出50 kDa左右的重鏈和25 kDa左右的輕鏈。將得到的單克隆抗體進行特異性分析，結果見圖1A和B，其中泳道M為蛋白分子量標準，泳道I為純化的STI ;泳道2為空白對照(魚肉+澱粉);泳道3為大豆分離蛋白，圖1A的SDS-PAGE電泳所示，除純化的STI，空白對照及大豆分離蛋白均含有許多雜蛋白，但圖1B (抗STI單克隆單克隆抗體的Western blot分析)結果顯示,大豆分離蛋白及純化的STI只在STI處存在免疫反應，空白對照(魚肉+澱粉)則沒有任何反應條帶。說明製備的抗STI單克隆抗體具有較好的特異性，除大豆蛋白STI外，不與大豆及魚糜中的其它蛋白發生免疫反應。實施例3藻紅蛋白標記抗STI抗體的製備
藻紅蛋白的處理:R-藻紅蛋白與SPDP的比例為1:80,恆溫搖床反應，100 rpm/min,25°C反應lh，反應結束後過脫鹽柱去除多餘的SPDP，並用IOkDa膜濃縮；用DTT處理上述SPDP標記的R-藻紅蛋白，DTT與所述SPDP標記的R-藻紅蛋白的反應濃度為摩爾比1:100，在25 1:下100 rpm/min搖床反應30 min，反應結束後過脫鹽柱去除多餘的DTT，並用IOkDa膜濃縮，得到處理後的藻紅蛋白。抗STI單克隆抗體的處理^STI單克隆抗體與SPDP摩爾比為1:80，在25 °〇下100 rpm/min搖床反應I h，反應結束後過脫鹽柱去除多餘的SPDP，並用10 kDa膜濃縮，得到處理後的抗STI單克隆抗體。再將所述處理後的藻紅蛋白和處理後的抗STI單克隆抗體混合，在25 °C下，100rpm/min搖床反應18 h。收集:將獲得的藻紅蛋白偶聯抗STI單克隆抗體進行Sephacryl S-300柱層析,去除多餘的藻紅蛋白和抗體。實施例4藻紅蛋白標記抗STI抗體的製備
藻紅蛋白的處理:R-藻紅蛋白與SPDP的比例為摩爾比1:100，在25 °C下，100 rpm/min搖床反應I h，反應結束後過脫 鹽柱去除多餘的SPDP，並用IOkDa膜濃縮；用DTT處理上述SPDP標記的R-藻紅蛋白，DTT與所述SPDP標記的R-藻紅蛋白的反應濃度為1:400 (摩爾比)，在25 1:下100 rpm/min搖床反應30 min，反應結束後過脫鹽柱去除多餘的DTT，並用10 kDa膜濃縮，得到處理後的藻紅蛋白。
抗STI單克隆抗體的處理:抗STI單克隆抗體與SPDP以摩爾比1:100混合，在25°C下，100 rpm/min搖床反應I h，反應結束後過脫鹽柱去除多餘的SPDP，並用10 kDa膜濃縮，得到處理後的抗STI單克隆抗體。再將所述處理後的藻紅蛋白和處理後的抗STI單克隆抗體混合，在25 °C下，100rpm/min搖床反應16 h。收集:將獲得的藻紅蛋白偶聯抗STI單克隆抗體複合物進行Sephacryl S-300柱層析，去除多餘的藻紅蛋白和抗體。實施例5藻紅蛋白標記抗STI抗體的製備
藻紅蛋白的處理=R-藻紅蛋白與SPDP的摩爾為1:90，在25 °C下，100 rpm/min搖床反應lh，反應結束後過脫鹽柱去除多餘的SPDP，並用10 kDa膜濃縮；用DTT處理上述SPDP標記的R-藻紅蛋白，DTT與所述SPDP標記的R-藻紅蛋白的反應摩爾比為1:250，在25 V下，100 rpm/min搖床反應30 min,反應結束後過脫鹽柱去除多餘的DTT,並用IOkDa膜濃縮，得到處理後的藻紅蛋白。抗STI單克隆抗體的處理:抗STI單克隆抗體與SPDP摩爾比為1:90，在25 °C下，100 rpm/min搖床反應lh，反應結束後過脫鹽柱去除多餘的SPDP，並用IOkDa膜濃縮，得到處理後的抗STI單克隆抗體。再將所述處理後的藻紅蛋白和處理後的抗STI單克隆抗體混合，在25 °C下，100rpm/min搖床反應16 h。收集:將獲得的藻紅蛋白偶聯抗STI單克隆抗體複合物進行Sephacryl S-300柱層析，去除多餘的藻紅蛋白和抗體。實施例6免疫螢光方法與化學發光方法比較 免疫螢光方法(本發明方法):免疫螢光檢測即用藻紅蛋白標記一次抗體，直接利用藻紅蛋白本身的螢光來檢測抗原的方法。先將純化的STI (實施例1所得)以1/20 mg/mL為起始濃度，進行2倍梯度稀釋，SDS化後進行SDS-PAGE電泳，採用電轉移裝置將蛋白轉至硝酸纖維素膜上，經脫脂奶封閉，藻紅蛋白標記的抗STI單克隆抗體(實施例3或實施例4或實施例5所得)孵育後,利用化學發光成像系統(Fluor chem Q)記錄結果。如圖4A所示，利用免疫螢光法能夠檢測到STI的最低濃度為1.56 μ g/mL。化學發光方法:化學發光法操作步驟與傳統的Western blot法一致，即抗原轉膜後，經一抗(抗STI單克隆抗體)、二抗(HRP標記的兔抗鼠IgG)孵育後，採用ECL顯色2 min,利用化學發光成像系統(Fluor chem Q)記錄結果。結果如圖4B所示，化學發光法能夠檢測到STI的最低濃度為3.12 μ g/mL。圖4A和 4B 中；泳道 1-8 的 STI 濃度分別為:1/20 mg/mL; 1/40 mg/mL; 1/80 mg/mL; 1/160 mg/mL; 1/320 mg/mL; 1/640 mg/mL; 1/1280 mg/mL 和 1/2560 mg/mL;泳道 9為空白對照。比較圖4A、B可知免疫螢光法比化學發光法靈敏度更高，而且因不需二次抗體，檢測時間更短。實施例7魚丸中大豆蛋白的檢測
8種不冋魚糜製品:未添加大 蛋白的自製魚丸、魚 腐、福州魚丸、A公司墨魚魚丸、B公司墨魚魚丸、花枝魚丸、章魚魚丸，含2 % (w/w)大豆蛋白的魚丸。
檢測方法見實施例6的免疫螢光方法。其中，魚豆腐、福州魚丸、A公司墨魚魚丸包裝上有添加大豆蛋白的標識，結果如圖5A和5B所示，其中泳道M為標準分子量蛋白；泳道I為未添加大豆蛋白的自製魚丸；泳道2為魚豆腐；泳道3為福州魚丸；泳道4為A公司墨魚丸；泳道5為B公司墨魚丸；泳道6為花枝魚丸；泳道7為章魚魚丸；泳道8為含2 %大豆蛋白的魚丸。從圖中可以看出，泳道I為空白對照(未添加大豆蛋白的自製魚丸)，沒有STI條帶，再次說明該抗體特異性良好。泳道8為2 %大豆蛋白添加量(w/w)的魚丸，STI條帶清晰明顯。圖中，泳道2的條帶最亮，說明魚豆腐中的大豆蛋白含量最多，且超過2 % (w/w)大豆蛋白的添加量。其次為A公司墨魚魚丸和福州魚丸，添加量為2 %左右。雖然B公司墨魚魚丸、花枝魚丸、章魚丸包裝上未標註含大豆蛋白，但泳道5、6、7顯示也含有一定量的大豆蛋白，該結果與化學發光法一致。出現該結果的原因可能有兩個，一是這些魚丸的原料魚漿被添加了大豆蛋白，另一個原因是企業在生 產過程中添加了大豆蛋白但對產品未標示。以上所述的具體實施例，對本發明的目的、技術方案和有益效果進行了進一步詳細說明，所應理解的是，以上所述僅為本發明的具體實施例而已，並不用於限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內，所做的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護範圍之內。
權利要求
1.一種藻紅蛋白標記抗STI抗體，其特徵在於，為藻紅蛋白偶聯抗STI單克隆抗體組合。
2.權利要求1的藻紅蛋白標記抗STI抗體，其特徵在於，藻紅蛋白與抗STI單克隆抗體均分別進行了處理；優選為藻紅蛋白通過SPDP和DTT處理，抗STI單克隆抗體通過SPDP處理。
3.權利要求1的藻紅蛋白標記抗STI抗體，其特徵在於，製備方法包括如下步驟: 藻紅蛋白的處理:一定量的R-藻紅蛋白與SPDP在恆溫搖床反應，100 rpm/min, 20-30°C，反應I h，反應結束後過脫鹽柱去除多餘的SPDP，並用10 kDa膜濃縮；加入一定量的DTT於上述SPDP處理的R-藻紅蛋白，20-30 1:恆溫搖床反應，100 rpm/min，反應時間為30min，反應結束後過脫鹽柱或透析去除多餘的DTT，並用10 kDa膜濃縮，得到處理後的藻紅蛋白； 抗STI單克隆抗體的處理:一定量的抗STI單克隆抗體與SPDP在恆溫搖床反應，100rpm/min, 20-30 °C反應I h，反應結束後過脫鹽柱或透析去除多餘的SPDP，並用10 kDa膜濃縮，得到處理後的抗STI單克隆抗體； 再將上述SPDP處理後的藻紅蛋白和處理後的抗STI單克隆抗體混合，在恆溫搖床反應，100 rpm/min, 20-30 °C反應16-18 h，得到藻紅蛋白偶聯抗STI單克隆抗體複合物； 收集:將獲得的藻紅蛋白偶聯抗STI單克隆抗體複合物過凝膠過濾柱，獲得藻紅蛋白標記的抗體。
4.權利要求3的藻紅蛋白標記抗STI抗體，其特徵在於，藻紅蛋白與SPDP的比例為摩爾比 1:80- 1:100。
5.權利要求3的藻紅蛋白標記抗STI抗體，其特徵在於，DTT與所述SPDP標記的R-藻紅蛋白的反應濃度為摩爾比1:100-1:400。
6.權利要求3的藻紅蛋白標記抗STI抗體，其特徵在於，抗STI單克隆抗體與SPDP摩爾比 1:80- 1:100。
7.權利要求1-6任一所述的藻紅蛋白標記抗STI抗體的製備方法，其步驟為: 藻紅蛋白的處理:一定量的R-藻紅蛋白與SPDP在恆溫搖床反應，100 rpm/min, 20-30°C反應時間為I h，反應結束後過脫鹽柱或透析去除多餘的SPDP，並用10 kDa膜濃縮；用一定量的DTT處理上述SPDP標記的R-藻紅蛋白，20-30 1:恆溫搖床反應，100 rpm/min，反應30 min，反應結束後過脫鹽柱或透析去除多餘的DTT，並用10 kDa膜濃縮；得到處理後的藻紅蛋白； 抗STI單克隆抗體的處理:一定量的抗STI單克隆抗體與SPDP混合，在100 rpm/min,20-30 °C恆溫搖床反應I h，反應結束後過脫鹽柱或透析去除多餘的SPDP，並用10 kDa膜濃縮，得到處理後的抗STI單克隆抗體； 再將所述處理後的藻紅蛋白和處理後的抗STI單克隆抗體混合，在100 rpm/min,20-30 °C恆溫搖床反應16-18 h，得到藻紅蛋白偶聯抗STI單克隆抗體複合物； 收集:將獲得的藻紅蛋白偶聯抗STI單克隆抗體複合物過凝膠過濾柱，獲得藻紅蛋白標記的抗體。
8.權利要求7的藻紅蛋白標記抗STI抗體，其特徵在於，藻紅蛋白與SPDP的比例為摩爾比 1:80- 1:100。
9.權利要求7的藻紅蛋白標記抗STI抗體，其特徵在於，DTT與所述SPDP標記的R-藻紅蛋白的反應濃度為摩爾比1:100-1:400 ； 任選地，所述抗STI單克隆抗體與SPDP摩爾比1:80- 1:100。
10.權利要求1-6任一項所述的藻紅蛋白標記抗STI抗體的用途，優選為檢測魚糜製品中大豆蛋白 的用途。
全文摘要
本發明涉及一種藻紅蛋白標記抗大豆胰蛋白酶抑制劑(soybean trypsin inhibitor,STI)抗體、製備方法及其用途。所述藻紅蛋白標記抗STI抗體為經過處理的藻紅蛋白偶聯經過處理的抗STI單克隆抗體組合而成。本發明還保護所述抗體的製備方法和用途，優選為檢測魚糜製品中大豆蛋白的用途。本發明的檢測方法具有與化學發光法一致的結果，且比化學發光法靈敏度更高，反應時間更短，更簡單，準確，安全。
文檔編號G01N33/68GK103087197SQ20131001980
公開日2013年5月8日 申請日期2013年1月21日 優先權日2013年1月21日
發明者曹敏傑, 蔡秋鳳, 沈建東, 江韜玲, 劉光明, 蘇文金 申請人:集美大學