20(s)一喜樹鹼的糖結合物的製作方法

2023-04-26 02:02:31 1

專利名稱：20(s)一喜樹鹼的糖結合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及20(S)-喜樹鹼的糖結合物，其中3-O-甲基化β-L-巖藻糖單元通過硫脲修飾的肽間隔團與喜樹鹼衍生物上的20-羥基連接。本發明還涉及製備本發明化合物的方法，以及本發明化合物作為藥物、尤其是與癌症治療有關的藥物的用途。
20(S)-喜樹鹼是五環生物鹼，在1966年由Wall等人分離到(《美國化學會志》(J.Am.Chem.Soc.)88，3888(1966))。大量的體外和體內試驗證實其具有很強的抗腫瘤活性。然而不幸的是，由於其毒性和溶解性問題，沒能在臨床中實現其有希望的抗腫瘤作用。
通過打開E環內酯和形成鈉鹽，獲得了水溶性化合物，其中此水溶性化合物和此閉環形式之間具有依賴於pH的平衡。對於此水溶性化合物，迄今為止，臨床試驗也一直未獲成功。
大約20年後，發現此生物活性是由於拓撲異構酶I的酶抑制作用所致。從那時以來，為了找到在體內能更相容和活性更高的喜樹鹼衍生物，研究活性的工作又增多了。
為了改善水溶性，A環和B環被修飾的喜樹鹼衍生物的鹽和具有可電離基團的20-O-醯基衍生物的鹽已有人描述過(Vishnuvajjala等人US 4943579)。隨後，後一前藥概念也被用來修飾喜樹鹼衍生物(Wani等人WO 9602546)。然而，所述20-O-醯基前藥在體內的半衰期很短，並且被迅速地裂解以給出母結構。
WO 9631532 A1描述了糖修飾的細胞抑制劑，其中各種細胞毒性或細胞抑制活性化合物通過特定間隔團與例如區域選擇性修飾的糖單元連接，以改善對腫瘤的選擇性。從其中廣泛描述的糖類、間隔團和活性化合物的結合體中，我們驚奇地發現，將在3-位被修飾的β-L-巖藻糖單元通過硫脲修飾的肽間隔團與20(S)-喜樹鹼20-羥基連接可得到具有下述特徵的特別優選的結合物，其中所述肽間隔團由含有空間需要的非極性側鏈和鹼性側鏈的胺基酸組成-依靠載體基團與20-羥基的類似於酯的連接，對活性非常重要的喜樹鹼上的內酯環被穩定了。-依靠二肽間隔團的特殊構象，細胞外介質和血液中的這些結合物的穩定性比在WO 9631532中描述的具有其它間隔團的類似結合物有顯著改善。尤其是，本發明結合物比在US 4943579中描述的喜樹鹼的20-O-醯基前藥更穩定。-本發明結合物的水溶性比WO 9631532中公開的類似結合物要好。-本發明結合物在體外具有很高的抗腫瘤細胞系和腫瘤異種移植物的活性。-靜脈注射給藥後，在幾個劑量階段，本發明結合物在體內具有抗各種腫瘤的優良治療活性。-與原來的毒性基團相比，本發明結合物的可耐受性及腫瘤選擇性明顯增高，在骨髓毒性方面更是如此。
本發明涉及式(I)化合物及其鹽、立體異構體和立體異構體的混合物，
其中R1代表胺基酸的空間需要的非極性側鏈，R2代表胺基酸的鹼性側鏈。
優選的式(I)化合物是具有下述定義的式(I)化合物，其中R1是具有最多4個碳原子的支鏈烷基，R2是式-(CH2)n-R3所示基團，其中R3是-NH2、
或
n是1-4的整數。
特別優選的式(I)化合物是具有下述定義的式(I)化合物，其中R1是下式所示的支鏈烷基，
或
R2是下式所示基團，-(CH2)2-NH2，-(CH2)3-NH2，-(CH2)4-NH2，
或
喜樹鹼單元能以20(R)或20(S)構型存在，或可以是這兩種立體異構體形式的混合物。20(S)構型是優選的。
胺基酸可以呈L或D構型，或者可以是D和L構型的混合物。
術語「胺基酸」尤其是指天然α-胺基酸，此外也包括其同系物、異構體和衍生物。作為異構體的實例，可提及的是對映體。衍生物可以是，例如帶有保護基的胺基酸。
具有「立體需要的」側鏈的胺基酸是指，其側鏈在β-或γ-位具有分支的胺基酸，可提及的實例是纈氨酸和異亮氨酸或亮氨酸。
作為具有非極性側鏈的胺基酸的一般實例，可提及的有丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，脯氨酸，色氨酸，苯丙氨酸，蛋氨酸。
作為具有鹼性側鏈的胺基酸的一般實例，可提及的有賴氨酸，精氨酸，組氨酸，鳥氨酸，二氨基丁酸。
本發明化合物優選以其鹽的形式存在。可提及的鹽通常是與有機酸或無機酸成的鹽。
可用來形成加成鹽的酸優選包括氫滷酸，例如鹽酸和氫溴酸，尤其是鹽酸，此外還有磷酸，硝酸，硫酸，單官能團羧酸和雙官能團羧酸以及羥基羧酸，例如乙酸，三氟乙酸，馬來酸，丙二酸，草酸，葡萄糖酸，琥珀酸，富馬酸，酒石酸，檸檬酸，水楊酸，山梨酸和乳酸，以及磺酸，例如對甲苯磺酸，1，5-萘二磺酸或樟腦磺酸。
本發明的糖結合物可通過，例如將20(S)-喜樹鹼與活化的羧基組分連接而製得，其中所述活化的羧基組分可以是保護的胺基酸、肽或糖修飾的肽的部分。
糖結合物的合成優選順序進行，即首先在合適的溶劑中，適當時在鹼存在下，根據常規方法，用非極性空間需要的胺基酸的N-保護羧基活化單元，將20(S)-喜樹鹼醯化。然後用已知方法將氨基保護基選擇性地除去。然後把鹼性胺基酸單元(需要時可進行適當保護)連接上去，隨後，在α-氨基官能團處脫保護，適當時，可保留側鏈保護基。在此關鍵步驟中，與糖基的連接是這樣進行的，即將對氨基苯基-3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖苷轉化成相應的異硫氰酸酯，隨後與肽基喜樹鹼上脫保護的α-氨基連接。除去可能仍存在的側鏈保護基，可任選地將游離氨基轉化成合適的銨鹽。
本發明還涉及製備式(I)所示糖結合物或其鹽的方法
其中R1代表胺基酸的空間需要的非極性側鏈，R2代表胺基酸的鹼性側鏈，其特徵在於，將式(II)所示異硫氰酸酯
與式(III)所示、任選地帶有側鏈保護基的肽基喜樹鹼反應
其中R1的定義同上R2』具有上述鹼性R2的定義，此外還在此鹼性基團上帶有肽化學領域常用的保護基以生成式(IV)所示的糖結合物
其中R1和R2』的定義同上，根據常規方法將可能存在的側鏈氨基保護基除去，可任選地將所得化合物轉化成所需鹽。
在目標化合物的合成中，另一反應步驟順序也是可以想到的。因此，根據同樣優選的變化合成路線，也可以首先將對異硫氰酸根合苯基-3-O-甲基-β-L-巖藻糖苷與任選地進行過適當保護的末端鹼性胺基酸連接，然後把所得單元與20(S)-喜樹鹼和非極性空間需要的胺基酸形成的胺基酸結合物上的游離氨基反應。除去可能仍存在的側鏈保護基，可任選地將游離氨基轉化成合適的銨鹽。
本發明還涉及製備通式(I)所示化合物或其鹽的另一方法，其特徵在於，將式(II)所示異硫氰酸酯
與式(V)所示、任選地進行過適當保護的末端鹼性胺基酸反應
其中R2』代表其鹼性基團可被保護的胺基酸的鹼性側鏈以生成式(VI)所示胺基酸結合物
其中R2』的定義同上，然後與式(VII)所示胺基酸結合物反應
其中R1的定義同上，將可能存在的側鏈保護基除去，可任選地將所得化合物轉化成所需鹽。
可形成非對映體混合物，尤其是在第一個胺基酸與喜樹鹼連接後形成。本發明化合物純的非對映體可通過上述方法製備，例如在第一個胺基酸單元與喜樹鹼連接後，用合適方法分離非對映體，然後除去保護基。非對映體純的目標化合物可由非對映體純的中間體化合物通過上述製備路線製得。
目標化合物的非對映體混合物也可以用常規方法分離成單獨的非對映體。
反應可在各種壓力和溫度條件下，例如0.5-2巴，和-30-100℃，在合適的溶劑，例如二甲基甲醯胺(DMF)、四氫呋喃(THF)、二氯甲烷、氯仿、低級醇、乙腈、二氧六環、水或所述溶劑的混合物中進行。通常，反應優選在DMF、二氯甲烷或THF/二氯甲烷中於室溫和常壓下進行。
對於羧基的活化，可用的偶合劑是肽化學領域已知的偶合劑，例如在Jakubke/Jeschkeit《胺基酸，肽，蛋白質》(Amino Acid，Peptide，Protein)；Verlag Chemie 1982或《四面體通訊》(Tetrahedr.Lett.)34，6705(1993)中所述的。例如N-羧酸酐、醯氯或混合酐是優選的。
其它適於活化羧基的方法是將羧基與下述化合物形成加和物碳化二亞胺，例如N，N』-二乙基碳化二亞胺，N，N』-二異丙基碳化二亞胺，N，N』-二環己基碳化二亞胺，N-(3-二甲基氨基丙基)-N』-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽，N-環己基-N』-(2-嗎啉代乙基)碳化二亞胺甲基對甲苯磺酸酯，或羰基化合物，例如羰基二咪唑，或1，2-噁唑鎓化合物，例如2-乙基-5-苯基-1，2-噁唑鎓-3-硫酸鹽或2-叔丁基-5-甲基異噁唑鎓高氯酸鹽，或醯氨化合物，例如2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氫喹啉，或丙烷膦酸酐，或氯甲酸異丁酯，或苯並三唑氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸鹽，1-羥基苯並三唑酯或N-羥基琥珀醯亞胺酯。此外，胺基酸組分也能以劉琪氏酐的形式使用。
所用的鹼可以是，例如三乙胺，乙基二異丙基胺，吡啶，N，N-二甲基氨基吡啶等。
用於胺基酸3個官能團的保護基可以是肽化學領域已知的保護基，例如尿烷、烷基、醯基、酯或醯胺型保護基。
本發明所述氨基保護基是肽化學領域中常用的氨基保護基。
這些氨基保護基優選包括苄氧基羰基，3，4-二甲氧基苄氧基羰基，3，5-二甲氧基苄氧基羰基，2，4-二甲氧基苄氧基羰基，4-甲氧基苄氧基羰基，4-硝基苄氧基羰基，2-硝基苄氧基羰基，2-硝基-4，5-二甲氧基苄氧基羰基，甲氧基羰基，乙氧基羰基，叔丁氧基羰基(Boc)，烯丙氧基羰基，乙烯氧基羰基，3，4，5-三甲氧基苄氧基羰基，鄰苯二甲醯基，2，2，2-三氯乙氧基羰基，2，2，2-三氯叔丁氧基羰基，氧基羰基，4-硝基苯氧基羰基，芴基-9-甲氧基羰基(Fmoc)，甲醯基，乙醯基，丙醯基，新戊醯基，2-氯乙醯基，2-溴乙醯基，2，2，2-三氟乙醯基，2，2，2-三氯乙醯基，苯甲醯基，苄基，4-氯苯甲醯基，4-溴苯甲醯基，4-硝基苯甲醯基，苯二醯亞氨基，異戊醯基或苄氧基亞甲基，4-硝基苄基，2，4-二硝基苄基，4-硝基苯基或2-硝基苯基亞磺醯基。Fmoc基團和Boc基團是特別優選的。
優選的羧基保護基是直鏈或支鏈C1-C4烷基酯。
可在合適的反應步驟中除去保護基，例如通過酸或鹼的反應，氫解或以其它方式還原來進行。
無論是在體外還是體內，本發明的糖結合物都具有很強的抗各種腫瘤的活性，尤其是抗肺癌、乳房癌、胰腺癌、黑素瘤和大腸癌的活性，並且對良性細胞具有很強的選擇性。
因此，本發明的糖結合物適於在醫學和獸醫學中治療腫瘤。
本發明包括含有非毒性、惰性可藥用賦形劑和一種或多種本發明化合物的藥物組合物或由一種或多種本發明活性化合物組成的藥物組合物，以及製備這些組合物的方法。
本發明活性化合物可任選地存在於一種或多種上述賦形劑中，並且也可以製成微膠囊劑型。
按整個混合物的重量計，治療活性化合物在上述藥物製劑中的濃度應當為約0.1％-99.5％(重量)，優選為約0.5％-95％(重量)。
除了本發明化合物以外，上述藥物製劑還可以含有其它藥物活性化合物。
通常情況下，經證明，為了達到所需治療結果，每24小時本發明活性化合物以約0.5-約500，優選5-100mg/kg體重的總量給藥，適當時分數個單元劑量給藥在人體醫學和獸醫學中都是有利的。本發明活性化合物在單元劑量中的含量優選為約1-80、尤其是3-30mg/kg體重。生物試驗1.測定細胞毒性特徵的生長抑制試驗將人大腸細胞系SW 480和HT 29(ATCC No.CCL 228和HBT 38)與小鼠黑素瘤細胞系B16F10(CRL 6475)在Roux培養皿中，在加有10％的FCS的RPMI 1640培養基中培養。然後將其受胰蛋白酶作用，並加入到加有10％的FCS的RPMI中，以達到50000個細胞/ml(對於SW 480和HT 29)和20000個細胞/ml(對於B16F10)的濃度。將細胞懸浮液以100μl/孔的量加到96微孔培養皿中，在CO2培養器中於37℃培養1天。然後再加入100μl RPMI培養基和1μl含有測試物質的DMSO。第6天後檢查細胞生長情況。為了檢查細胞生長，將25μl初濃度為5mg/ml水的MTT溶液(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑鎓溴化物)加到每一微孔中。在CO2培養器中於37℃培養5小時。然後抽吸出培養基，加入100μl異丙醇/孔。與100μl水一起振搖30分鐘後，用多盤讀數器(Bio..)3550 UV在595nm處測定消光度。
在表1中，以關於SW 480和HT 29及B16F10細胞系的IC50值表示化合物的細胞毒性作用表1
.比較糖結合物與基本活性化合物(20(S)-喜樹鹼)的生血活性試驗材料和方法從小鼠股骨中衝洗出骨髓細胞。將105個細胞與重組的鼠GM-CSF(Genzyme；幹細胞菌落形成)和測試物質(10-4-100μg/ml在McCoy5A培養基(0.3％的瓊脂)中於37℃和7％的CO2下培養。7天後，計數菌落(＜50個細胞)和菌群(17-50個細胞)的數量。
結果如表2所示，與基本活性化合物(20(S)-喜樹鹼)相比，測試的糖結合物對骨髓幹細胞增殖的抑制作用顯著減小。
表2對由CSF-誘導的小鼠骨髓幹細胞的增殖的抑制作用<
>3.在裸鼠模型中對腫瘤生長的體內抑制作用試驗材料對於所有測定抑制腫瘤生長的體內試驗，都使用無胸腺裸鼠(NMRI nu/nu株)。將所選的大細胞肺癌LXFL 529在裸鼠中通過系列繼代移植培養。通過同工酶和免疫組織化學法確定人體中腫瘤的起因。
試驗安排將腫瘤皮下移植到6-8周大的小nu/nu裸鼠的兩側脅腹內。基於倍增時間，一旦腫瘤的直徑達到5-7mm，就開始治療。將裸鼠隨機分配成治療組和對照組(每組由5隻具有8-10個可測定腫瘤的小鼠組成)。對照組的各個腫瘤都逐漸生長。
用卡尺在兩個方向上測定腫瘤的大小。然後用與細胞數量非常相關的腫瘤體積進行所有評價。依據式「長×寬×寬/2」([a×b2]/2，a和b代表兩個成直角的直徑)計算腫瘤的體積。
通過將第X天的腫瘤大小除以第0天(進行隨機分組的那天)的腫瘤大小，來計算每一單獨腫瘤的相對腫瘤體積值(RTV)。然後用RTV的平均值進行進一步評價。
最後測定的值是腫瘤被抑制的程度(測試組的相對腫瘤體積/對照組的相對腫瘤體積×100，以％表示的T/C)。
治療在例如隨機分組後的第0、1、2天，將化合物靜脈注射(i.v.)給藥，每天的總劑量分2次給藥。
結果作為實例，得自實施例1和2的本發明糖結合物在大細胞人肺癌異種移植LXFL 529中顯示了其療效。在最大耐受劑量(MTD)和1/2MTD時，治療使治療完全緩解到明顯緩解。對於其它腫瘤，也可以證實本發明化合物的優良活性。表3
用第1-3天靜脈注射的治療方案，在另一試驗的

圖1中表示了，實施例1化合物在16-8mg/kg的劑量範圍內對腫瘤的長效完全緩解作用，以及作用的劑量依賴性。4.水解穩定性將得自實施例1、2、8和9的本發明化合物溶在水中，在室溫放置24小時後，在根據面積百分比的HPLC中清楚地顯示，釋放出的喜樹鹼不到1％。
把實施例1和2的化合物以10μM的濃度溶在加有10％FCS的RPMI培養基和30％強度、PBS緩衝液中的全血中，放置24小時後，釋放出的喜樹鹼不到5％。方法HPLC系統Hewlett Packard HP 1050柱Nucleosil 120-5 C 18 250mm×4mm(Macherey Nagel；德國)洗脫液A0.01M的KH2PO4水溶液(H2＝毫孔級)B80％的乙腈/20％的洗脫液A流速1.2ml梯度t020％B-t40100％Bt45100％B-t4720％B檢測240nm或370nm5.內酯穩定性將得自實施例1、2、8和9的本發明糖結合物溶在80％的水和20％的乙腈中，並用2當量的氫氧化鈉溶液將pH值調至9。在室溫放置1小時後，內酯環打開的分子不到5％(依據上述方法檢測)。實施例糖原料I)對氨基苯基-3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖苷
I.a)對硝基苯基-3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖苷將300ml無水甲醇中的6g(21mmol)對硝基苯基-β-L-巖藻吡喃糖苷用7.84g(31.5mmol)氧化二丁基錫處理，加熱回流2小時。然後將混合物濃縮，把剩餘物乾燥，然後置於300ml DMF中。加入15.7ml碘甲烷後，將混合物在70℃攪拌40小時。在真空中除去溶劑，剩餘物置於300ml二氯甲烷中。過濾懸浮液，將濾液再次濃縮，進行快速色譜純化(二氯甲烷/甲醇99∶1)。濃縮後，獲得了3.82g(61％)目標產物。
I)對氨基苯基-3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖苷將3.81g(12.73mmol)對硝基苯基-3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖苷溶在甲醇中，加入二氧化鉑後，在稍微過壓下的氫氣中氫化。濾除催化劑後，用乙醚沉澱，獲得了3g(88％)目標產物。[TLC二氯甲烷/甲醇9∶1 Rf＝0.53]。肽基喜樹鹼原料II)20(S)-20-O-{Nε-[芴基-9-甲氧基羰基]-L-賴氨醯基-L/D-亮氨醯基}喜樹鹼，三氟乙酸鹽II)L 20(S)-20-O-{Nε-[芴基-9-甲氧基羰基]-L-賴氨醯基-L-亮氨醯基}喜樹鹼，三氟乙酸鹽II)D 20(S)-20-O-{Nε-[芴基-9-甲氧基羰基]-L-賴氨醯基-D-亮氨醯基}喜樹鹼，三氟乙酸鹽II.a)20(S)-20-O-[N-(叔丁氧基羰基)-L/D-亮氨醯基]喜樹鹼將10g(28.7mmol)20(S)-喜樹鹼的250ml無水二甲基甲醯胺懸浮液在攪拌下用11.1g(43mmol)N-(叔丁氧基羰基)亮氨酸-N-羧酸酐和1g 4-(N，N-二甲基氨基)吡啶處理。在超聲波浴中於室溫處理16小時後，再加入3.7g N-(叔丁氧基羰基)亮氨酸-N-羧酸酐，混合物在室溫下再放置2小時。通過過濾把溶液和剩餘未溶解的喜樹鹼分離開，將濾液真空濃縮。用快速色譜法純化剩餘物[石油醚/乙酸乙酯1∶1→1∶4]。獲得了13.55g(84％)目標化合物II.a)。[TLC乙腈Rf＝0.47]。
II.b)20(S)-20-O-L/D-亮氨醯基喜樹鹼，三氟乙酸鹽II.b)L 20(S)-20-O-L-亮氨醯基喜樹鹼，三氟乙酸鹽II.b)D 20(S)-20-O-D-亮氨醯基喜樹鹼，三氟乙酸鹽將化合物II.a(13.55g，24.1mmol)在100ml二氯甲烷和40ml無水三氟乙酸的混合物中的溶液在室溫下攪拌30分鐘。真空濃縮至小體積後，用乙醚將產物沉澱，並用乙醚徹底洗滌。在薄層色譜中(乙腈/水20∶1)檢測到了Rf值分別為0.4和0.32的兩個點[產量9.5g(68％)]。
通過用乙醚從二氯甲烷/甲醇中反覆沉澱數次後，混合物可分離成兩個單獨組分II.b)L和II.b)D。經證實兩種形式都是非對映體，其1H-NMR光譜有些微差異極性非對映體400-MHz-1H-NMR(CD2Cl2/CD3OD 1∶1)δ s C-H(B環)8.63ppms C-H(D環)7.4ppm非極性非對映體400-MHz-1H-NMR(CD2Cl2/CD3OD 1∶1)δ s C-H(B環)8.60ppms C-H(D環)7.32ppm在下面的步驟中，可以使用這兩種非對映體形式的混合物或純化的非對映體純的形式。
II.c)20(S)-20-O-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-L-賴氨醯基-L/D-亮氨醯基]喜樹鹼
II.c)L 20(S)-20-O-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-L-賴氨醯基-L-亮氨醯基]喜樹鹼II.c)D 20(S)-20-O-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-L-賴氨醯基-D-亮氨醯基]喜樹鹼將25.6g(54.6mmol)Nα-(叔丁氧基羰基)-Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-L-賴氨酸和11.1g(82mmol)1-羥基-1H-苯並三唑水合物溶在500ml二甲基甲醯胺中。加入12.6g(1.2當量)N-乙基-N』-(二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽後，將混合物在室溫下攪拌1小時。然後加入化合物II.b(26.2g，0.83當量)和7.83ml(1當量)乙基二異丙基胺，把混合物在室溫下再攪拌16小時。真空濃縮後，通過快速色譜法純化[石油醚/乙酸乙酯1∶2→乙酸乙酯]，獲得了目標化合物(43.5g，87％)[TLC乙腈Rf＝0.44]。
當在下面的實施例中也進行此步反應時，也可以用II.b純化的非對映體純的形式以完全類似的方式進行反應。
II)20(S)-20-O-{Nε-[芴基-9-甲氧基羰基]-L-賴氨醯基-L/D-亮氨醯基}喜樹鹼，三氟乙酸鹽II)L 20(S)-20-O-{Nε-[芴基-9-甲氧基羰基]-L-賴氨醯基-L-亮氨醯基}喜樹鹼，三氟乙酸鹽II)D 20(S)-20-O-{Nε-[芴基-9-甲氧基羰基]-L-賴氨醯基-D-亮氨醯基}喜樹鹼，三氟乙酸鹽將化合物II.c(43.3g，47.5mmol)置於150ml二氯甲烷中，用50ml無水三氟乙酸處理。將所得溶液在室溫下攪拌1小時。真空濃縮至小體積後，加入乙醚使產物沉澱。獲得了39.4g(90％)目標化合物[TLC乙腈/水10∶1 Rf＝0.35]。
III)20(S)-20-O-(L-組氨醯基-L/D-纈氨醯基)喜樹鹼，三氟乙酸鹽III.a)20(S)-20-O-(N-叔丁氧基羰基-L/D-纈氨醯基)喜樹鹼將10g(28.7mmol)20(S)-喜樹鹼的500ml無水二甲基甲醯胺懸浮液在攪拌下用21.5g(3當量)N-(叔丁氧基羰基)纈氨酸-N-羧酸酐和1g 4-(N，N-二甲基氨基)吡啶處理。在超聲波浴中於室溫處理16小時後，通過過濾將溶液和剩餘未溶解的喜樹鹼分離開，將濾液真空濃縮。通過快速色譜法[石油醚/乙酸乙酯1∶3→乙酸乙酯]純化剩餘物。獲得了11.65g(73％)目標化合物[TLC乙腈Rf＝0.44]。如果反應不是在二甲基甲醯胺中，而是在二氯甲烷中以回流條件進行，則會非常優先形成具有L-構型纈氨酸單元的非對映體。
III.b)20(S)-20-O-L/D-纈氨醯基喜樹鹼，三氟乙酸鹽III.b)L 20(S)-20-O-L-纈氨醯基喜樹鹼，三氟乙酸鹽III.b)D 20(S)-20-O-D-纈氨醯基喜樹鹼，三氟乙酸鹽將化合物III.a(11.65g，21mmol)在100ml二氯甲烷和100ml無水三氟乙酸的混合物中的溶液在室溫下攪拌1小時。真空濃縮至小體積後，用乙醚將產物沉澱，並用乙醚徹底洗滌。用乙醚將產物從二氯甲烷/甲醇中再次沉澱，分離到非對映體形式的混合物。產量10.9g(92％)[TLC乙腈/水20∶1 Rf＝0.31和0.39]。通過從甲醇中結晶，可能獲得較高純度的、具有L-構型纈氨酸單元的非極性非對映體將8g富含非極性非對映體的所得產物溶在80ml甲醇中，冷卻至0℃，用乙醚處理(每次加10ml)。加入總共60ml乙醚後，抽濾出沉澱產物，並乾燥。獲得了4.6g(58％)純的具有L-構型纈氨酸單元的非極性非對映體。用乙醚將母液再沉澱，獲得了非對映體比例為1∶18的另外730mg(9％)產物部分。
在進一步反應中，非對映體混合物和純化的非極性或極性非對映體都可以使用。反應進程完全相似。
III.c)20(S)-20-O-[N-叔丁氧基羰基-L-組氨醯基-L/D-纈氨醯基]喜樹鹼III.c)L 20(S)-20-O-[N-叔丁氧基羰基-L-組氨醯基-L-纈氨醯基]喜樹鹼III.c)D 20(S)-20-O-[N-叔丁氧基羰基-L-組氨醯基-D-纈氨醯基]喜樹鹼將5.95g(23.3mmol)N-(叔丁氧基羰基)-L-組氨酸和4.73g1-羥基-1H-苯並三唑水合物溶在200ml二甲基甲醯胺中。加入5.38g N-乙基-N』-(二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽後，將混合物在室溫下攪拌1小時。然後加入化合物III.b(10.9g，19.44mmol)和6.7ml乙基二異丙基胺，把混合物在室溫下再攪拌16小時。真空濃縮後，通過快速色譜法純化[乙腈/水50∶1→20∶1]，獲得了目標化合物[TLC乙腈/水10∶1 Rf＝0.42]，產物直接進行下一反應。
III)20(S)-20-O-(L-組氨醯基-L/D-纈氨醯基)喜樹鹼，雙三氟乙酸鹽III)L 20(S)-20-O-(L-組氨醯基-L-纈氨醯基)喜樹鹼，雙三氟乙酸鹽III)D 20(S)-20-O-(L-組氨醯基-D-纈氨醯基)喜樹鹼，雙三氟乙酸鹽將化合物III.c置於100ml二氯甲烷中，用50ml無水三氟乙酸處理。將所得溶液在室溫下攪拌30分鐘。真空濃縮至小體積後，加入乙醚使產物沉澱。獲得了13.05g(83％)目標化合物[TLC乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.2]。
IV)20(S)-20-O-{Nε-[芴基-9-甲氧基羰基]-D-賴氨醯基-L/D-亮氨醯基}喜樹鹼，三氟乙酸鹽IV)L 20(S)-20-O-{Nε-[芴基-9-甲氧基羰基]-D-賴氨醯基-L-亮氨醯基}喜樹鹼，三氟乙酸鹽IV)D 20(S)-20-O-{Nε-[芴基-9-甲氧基羰基]-D-賴氨醯基-D-亮氨醯基}喜樹鹼，三氟乙酸鹽此化合物的合成與非對映體化合物II完全類似。其中在步驟II.c中，不用Nα-(叔丁氧基羰基)-Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-L-賴氨酸，而代之以使用其相應的D異構體[TLC乙腈/水10∶1 Rf＝0.4]。
V)20(S)-20-O-{Nε-[芴基-9-甲氧基羰基]-L-鳥氨醯基-L/D-亮氨醯基}喜樹鹼，三氟乙酸鹽V)L 20(S)-20-O-{Nε-[芴基-9-甲氧基羰基]-L-鳥氨醯基-L-亮氨醯基}喜樹鹼，三氟乙酸鹽V)D 20(S)-20-O-{Nε-[芴基-9-甲氧基羰基]-L-鳥氨醯基-D-亮氨醯基}喜樹鹼，三氟乙酸鹽此化合物的合成與相應的賴氨酸化合物II完全類似。其中在步驟II.c中，用Nα-(叔丁氧基羰基)-Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-L-鳥氨酸代替Nα-(叔丁氧基羰基)-Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-L-賴氨酸[TLC乙腈/水20∶1 Rf＝0.125]。
VI)20(S)-20-O-(L-精氨醯基-L/D-亮氨醯基)喜樹鹼，三三氟乙酸鹽
VI)L 20(S)-20-O-(L-精氨醯基-L-亮氨醯基)喜樹鹼，三三氟乙酸鹽VI)D 20(S)-20-O-(L-精氨醯基-D-亮氨醯基)喜樹鹼，三三氟乙酸鹽VI.a)20(S)-20-O-(三叔丁氧基羰基-L-精氨醯基-L/D-亮氨醯基)喜樹鹼VI.a)L 20(S)-20-O-(三叔丁氧基羰基-L-精氨醯基-L-亮氨醯基)喜樹鹼VI.a)D 20(S)-20-O-(三叔丁氧基羰基-L-精氨醯基-D-亮氨醯基)喜樹鹼將200mg(0.42mmol)三叔丁氧基羰基-L-精氨酸和80mg 1-羥基-1H-苯並三唑水合物溶在20ml二甲基甲醯胺中。加入97mg N-乙基-N』-(二甲基氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽後，將混合物在室溫下攪拌1小時。然後加入化合物II.b(200mg，0.35mmol)和217μl乙基二異丙基胺，把混合物在室溫下再攪拌3天。真空濃縮後，用水處理，獲得了目標化合物[TLC乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.77]，產物直接進行下一反應。
VI)20(S)-20-O-(L-精氨醯基-L/D-亮氨醯基)喜樹鹼，三三氟乙酸鹽VI)L 20(S)-20-O-(L-精氨醯基-L-亮氨醯基)喜樹鹼，三三氟乙酸鹽VI)D 20(S)-20-O-(L-精氨醯基-D-亮氨醯基)喜樹鹼，三三氟乙酸鹽將0.35mmol化合物VI.a)與5ml無水三氟乙酸在10ml二氯甲烷中於室溫下攪拌2小時。濃縮混合物，用乙醚從二氯甲烷/甲醇中沉澱2次。獲得了280mg(82％)目標化合物[TLC乙腈/水10∶3∶1.5 Rf＝0.42]。
VII)L 20(S)-20-O-{Nε-[芴基-9-甲氧基羰基]-L-賴氨醯基-L-纈氨醯基}喜樹鹼，三氟乙酸鹽VII.a)L 20(S)-20-O-[Nα-(叔丁氧基羰基)-Nε-(芴基-9-甲氧基羰基)-L-賴氨醯基-L-纈氨醯基]喜樹鹼將10.02g(21.4mmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-(芴基-9-甲氧基羰基)-L-賴氨酸和4.4g(32.1mmol)1-羥基-1H-苯並三唑水合物溶在400ml二甲基甲醯胺中。加入4.92g(1.2當量)N-乙基-N』-(二甲基氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽後，將混合物在0℃攪拌30分鐘。然後加入10g(17.8mmol)化合物III.b的非極性非對映體III.b L和9.2ml(3當量)乙基二異丙基胺，把混合物在室溫下再攪拌16小時。真空濃縮後，將剩餘物與500ml水攪拌30分鐘，並抽濾。將產物置於400ml二氯甲烷中，除去剩餘的水，把溶液濃縮至200ml，然後用800ml乙醚沉澱。抽濾出沉澱，用乙醚洗滌。獲得了14.712g(92％)目標化合物[TLC乙腈Rf＝0.6]。
VII)L 20(S)-20-O-{N-[芴基-9-甲氧基羰基]-L-賴氨醯基-L-纈氨醯基}喜樹鹼，三氟乙酸鹽將化合物VII.a)L(14.65g，16.3mmol)置於300ml二氯甲烷中，並在0℃用50ml無水三氟乙酸處理。把所得溶液在冰浴中攪拌2小時。濃縮至小體積後，加入乙醚使產物沉澱。獲得了13.8g(93％)目標化合物[TLC乙腈/水10∶1 Rf＝0.35]。
實施例120(S)-20-O-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖基)-4-羥基苯基氨基硫代羰基]-L-賴氨醯基-L/D-亮氨醯基}喜樹鹼，鹽酸鹽
1.a)20(S)-20-O-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖基)-4-羥基苯基氨基硫代羰基]-Nε-[芴基-9-甲氧基羰基]-L-賴氨醯基-L/D-亮氨醯基}喜樹鹼將9.82g(36.5mmol)對氨基苯基-3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖苷(實施例I)的500ml二氧六環/水(1∶1)溶液在攪拌下用3.94ml硫光氣(1.4當量)處理。10分鐘後，將混合物用4當量的乙基二異丙基胺處理，然後真空濃縮，把剩餘物在油泵真空中乾燥1小時。將獲得的異硫氰酸酯溶在500ml無水二甲基甲醯胺中，用30.4g(32.8mmol)化合物II和22.6ml乙基二異丙基胺處理。把混合物在室溫下攪拌16小時，然後真空濃縮，並與水攪拌。通過快速色譜法[乙腈→乙腈/水30∶1]純化剩餘物。用乙醚將產物從二氯甲烷/甲醇中再沉澱，並用乙醚洗滌。獲得了28.7g(78％)目標產物[TLC乙腈/水10∶1 Rf＝0.44]。
1.b)20-O-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖基)-4-羥基苯基氨基硫代羰基]-L-賴氨醯基-L/D-亮氨醯基}喜樹鹼將28.6g(25.5mmol)結合物1.a)在200ml二甲基甲醯胺中用5ml哌啶處理。室溫攪拌2小時後，將混合物濃縮，把剩餘物用二氯甲烷蒸煮兩次，加入乙醚。然後將混合物置於二甲基甲醯胺/二氯甲烷中，用乙醚沉澱。將此純化步驟重複兩次。抽濾出產物，用乙醚洗滌。產量19.5g(85％)[TLC乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.3]。
1)20(S)-20-O-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖基)-4-羥基苯基氨基硫代羰基]-L-賴氨醯基-L/D-亮氨醯基}喜樹鹼，鹽酸鹽將10g(11.1mmol)得自實施例1.b的化合物置於100ml水中，用11.1ml(1當量)1N的鹽酸溶液處理並冷凍乾燥。然後用乙醚將產物從二氯甲烷/甲醇中反覆沉澱數次。產量9.15g(88％)[TLC乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.3]。
實施例220(S)-20-O-{N-[O-(3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖基)-4-羥基苯基氨基硫代羰基]-L-組氨醯基-L/D-纈氨醯基}喜樹鹼，鹽酸鹽
將7.14g(26.5mmol)對氨基苯基-3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖苷(實施例I糖原料)的300ml二氧六環/水(1∶1)溶液在攪拌下用2.86ml硫光氣(1.4當量)處理。10分鐘後，將混合物用4當量的乙基二異丙基胺處理，然後真空濃縮，把剩餘物在油泵真空中乾燥1小時。將獲得的異硫氰酸酯溶在500ml無水二甲基甲醯胺中，用17.45g(22mmol)化合物III和22.7ml乙基二異丙基胺處理。把混合物在室溫下攪拌16小時，然後真空濃縮，將剩餘物置於水中。用1N的氫氧化鈉水溶液將pH值調至7.8，抽濾出所得固體。高度真空乾燥後，用乙醚將剩餘物從二氯甲烷/甲醇中再沉澱兩次，用乙醚洗滌。獲得了17.97g(91％)目標產物，然後用1當量的0.1N的鹽酸將目標產物轉化成其鹽酸鹽[TLC乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2Rf＝0.36][FAB-MSm/e＝896(M+H+)]。
實施例320(S)-20-O-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖基)-4-羥基苯基氨基硫代羰基]-D-賴氨醯基-D-亮氨醯基}喜樹鹼，鹽酸鹽
用與實施例1完全相似的方式進行此化合物的合成。其中原料I和IV.D用作起始化合物，所用的極性非對映體II.b)D得自20-O-亮氨醯基喜樹鹼II.b步驟。[TLC乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.31][FAB-MSm/e＝901(M+H+)]。
實施例420(S)-20-O-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖基)-4-羥基苯基氨基硫代羰基]-L-鳥氨醯基-D-亮氨醯基}喜樹鹼，鹽酸鹽
用與實施例1完全相似的方式進行此化合物的合成。其中原料I和V)D用作起始化合物，所用的具有D-亮氨酸構型的極性非對映體II.b)D得自20-O-亮氨醯基喜樹鹼II.b步驟。[TLC乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.25]。
實施例520(S)-20-O-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖基)-4-羥基苯基氨基硫代羰基]-L-精氨醯基-D-亮氨醯基}喜樹鹼
將73mg(0.27mmol)對氨基苯基-3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖苷(實施例I原料)的20ml二氧六環/水(1∶1)溶液在攪拌下用30μl硫光氣(1.4當量)處理。10分鐘後，將混合物用4當量的乙基二異丙基胺處理，然後真空濃縮，把剩餘物在油泵真空中乾燥1小時。將獲得的異硫氰酸酯溶在20ml無水二甲基甲醯胺中，用175mg(0.18mmol)化合物VI)D和620μl乙基二異丙基胺處理。對於化合物VI)D的合成，所用的極性非對映體II.b)D得自20-O-亮氨醯基喜樹鹼II.b步驟。把混合物在室溫下攪拌16小時，然後真空濃縮，並與二氯甲烷攪拌。用乙醚將剩餘物從二氯甲烷/甲醇中再沉澱，並用乙醚洗滌。然後從二氧六環/水中冷凍乾燥，再用乙醚從二氯甲烷/甲醇中結晶。獲得了154mg(90％)目標產物[TLC乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.39][FAB-MSm/e＝929(M+H+)]。
實施例620(S)-20-O-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖基)-4-羥基苯基氨基硫代羰基]-L-賴氨醯基-D-亮氨醯基}喜樹鹼，鹽酸鹽
用與實施例1完全相似的方法製備此化合物，其中所用的具有D-亮氨酸構型的極性非對映體II.b)D得自20-O-亮氨醯基喜樹鹼II.b步驟。
或者，例如也可以通過製備HPLC法將得自實施例1的化合物分離成單獨的異構體形式。條件分離柱Macherey Nagel 250×21 mm Nucleosil 100-7 C18 AB洗脫液AH2O+0.1 M KH2PO4洗脫液B乙腈/水4∶1+0.02 M KH2PO4流速10ml/分鐘進樣量1500μl梯度0-30％ B4-3020-9022-9024-30波長215nmHPLC分離後，將相應組分冷凍乾燥，然後用乙醚把剩餘物從二氯甲烷/甲醇中反覆沉澱數次。然後把混合物的pH值調至8-9，濾出剩餘物，用0.1N的鹽酸將其轉化成鹽酸鹽。
在1H-NMR光譜中，實施例6和7的異構體表現出不同的化學位移，尤其對於喜樹鹼B環或D環上芳香氫原子的兩個單峰，更是如此。具有D-亮氨酸的非對映體400-MHz-1H-NMR(CD2Cl2/CD3OD 1∶1)δ s C-H(B環)8.52ppms C-H(D環)7.42ppm[FAB-MSm/e＝901＝M+H+]。
實施例720(S)-20-O-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖基)-4-羥基苯基氨基硫代羰基]-L-賴氨醯基-L-亮氨醯基}喜樹鹼，鹽酸鹽
用與實施例1完全相似的方法製備此化合物，其中所用的具有L-亮氨酸構型的非極性非對映體II.b)L得自20-O-亮氨醯基喜樹鹼II.b步驟。
或者，例如也可以通過製備HPLC法將得自實施例1的化合物分離成單獨的異構體形式。條件如實施例6所示HPLC分離後，將相應組分冷凍乾燥，然後用乙醚把剩餘物從二氯甲烷/甲醇中反覆沉澱數次。然後把混合物的pH值調至8-9，濾出剩餘物，用0.1N的鹽酸將其轉化成鹽酸鹽。
在1H-NMR光譜中，實施例6和7的異構體表現出不同的化學位移，尤其對於例如喜樹鹼B環或D環上芳香氫原子的兩個單峰，更是如此。具有L-亮氨酸的非對映體400-MHz-1H-NMR(CD2Cl2/CD3OD 1∶1)δ s C-H(B環)8.6ppms C-H(D環)7.35ppm[FAB-MSm/e＝901＝M+H+]。
實施例820(S)-20-O-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖基)-4-羥基苯基氨基硫代羰基]-L-賴氨醯基-L-纈氨醯基}喜樹鹼，鹽酸鹽
以化合物VII)L為原料，在非極性系列反應步驟中用與實施例1相似的方法製備此化合物。
可通過分析HPLC測定產物中非對映體的比例。適當時，可通過從甲醇中結晶來進一步純化具有L-構型纈氨酸的非對映體(＞20∶1)。HPLC條件分離柱Macherey Nagel 250×4 mm Nucleosil 100-7 C18 AB洗脫液AH2O+0.1 M KH2PO4洗脫液B乙腈/水4∶1+0.02 M KH2PO4流速1ml/分鐘進樣量15μl在1H-NMR光譜中，例如，對於喜樹鹼B環或D環上芳香氫原子的兩個單峰，此純淨的非對映體只表現出一個信號組。400-MHz-1H-NMR(CD2Cl2/CD3OD 1∶1)δ s C-H(B環)8.55ppms C-H(D環)7.35ppm[FAB-MSm/e＝887＝M+H+]。
在實施例8化合物的合成中，也有另一方法。在此方法中，得自實施例I的糖單元首先連接到側鏈被保護的賴氨酸衍生物上8a)Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖基)-4-羥基苯基氨基硫代羰基]-Nε-[芴基-9-甲氧基羰基]-L-賴氨酸
將6.8g(25.3mmol)對氨基苯基-3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖苷(實施例I)的600ml二氧六環/水(1∶1)溶液在攪拌下用2.72ml硫光氣(1.4當量)處理。10分鐘後，將混合物用26ml乙基二異丙基胺處理，室溫攪拌5分鐘，然後真空濃縮至150ml。加入800ml二氯甲烷，分離各相。將有機相用水洗滌兩次，用硫酸鈉乾燥並濃縮。將剩餘物與200ml甲基叔丁基醚和200ml石油醚攪拌，並抽濾。獲得了7.26g(92％)異硫氰酸酯。
將2.92g(9.4mmol)所得異硫氰酸酯溶在200ml二氧六環/水(1∶1)中，用3.11g(0.9當量)Nε-[芴基-9-甲氧基羰基]-賴氨酸和3.2ml乙基二異丙基胺處理。把混合物在室溫下攪拌16小時，然後真空濃縮，把剩餘物置於水中。用1N的鹽酸將pH值調至2，產物沉澱了出來，30分鐘後把沉澱抽濾出。將沉澱懸浮在二氯甲烷中，除去溶劑，此項處理進行兩次。用乙醚和石油醚洗滌數次後，獲得了5.3g(92％)目標產物[TLC乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.69]。
8b)20(S)-20-O-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖基)-4-羥基苯基氨基硫代羰基]-Nε-[芴基-9-甲氧基羰基]-L-賴氨醯基-L-纈氨醯基}喜樹鹼將1.2g(1.76mmol)Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖基)-4-羥基苯基氨基硫代羰基]-Nε-[芴基-9-甲氧基羰基]-L-賴氨酸(實施例8a)和675mg(1.2mmol)化合物III.b)L溶在50ml二甲基甲醯胺中，把混合物冷卻至0℃，用346mg(1.8mmol)N-乙基-N』-(二甲基氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽處理。將混合物溫度升至室溫並攪拌過夜。在真空中蒸發掉溶劑，將剩餘物與水攪拌。通過快速色譜法在矽膠中純化產物，其中首先以乙腈作為洗脫液，隨後逐漸變至乙腈/水50∶1。將相應組分濃縮後，獲得了1.06g(76％)目標產物[TLC乙腈/水20∶1 Rf＝0.34]。
脫保護以及隨後轉化成鹽酸鹽的操作按照與實施例1類似的方法進行。
實施例920(S)-20-O-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖基)-4-羥基苯基氨基硫代羰基]-L-組氨醯基-L-纈氨醯基}喜樹鹼，鹽酸鹽
以20-O-纈氨醯基喜樹鹼的非極性非對映體的三氟乙酸鹽(III.b)L為原料，按照與實施例2相似的方法製備此化合物。
可通過分析HPLC測定產物中非對映體的比例。適當時，可通過從甲醇中結晶來進一步純化具有L-構型纈氨酸的非極性非對映體(＞20∶1)。HPLC條件分離柱Macherey Nagel 250×4 mm Nucleosil 100-7 C18 AB洗脫液AH2O+0.1 M KH2PO4洗脫液B乙腈/水4∶1+0.02 M KH2PO4流速1ml/分鐘進樣量15μl在1H-NMR光譜中，例如，對於喜樹鹼B環或D環上芳香氫原子的兩個單峰，此純淨的非對映體只表現出一個信號組。具有L-纈氨酸的非對映體400-MHz-1H-NMR(CD2Cl2/CD3OD 1∶1)δs C-H(B環)8.58ppm(被組氨酸上芳香CH的峰覆蓋)s C-H(D環)7.35ppm[TLC乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.36][FAB-MSm/e＝896(M+H+)]。
實施例1020(S)-20-O-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖基)-4-羥基苯基氨基硫代羰基]-L-精氨醯基-L-亮氨醯基}喜樹鹼，鹽酸鹽
用與實施例5相似的方式製備此化合物。其中所用的非極性非對映體II.b)L得自20-O-亮氨醯基喜樹鹼II.b)步驟。[TLC乙腈/水/冰醋酸5∶1∶0.2 Rf＝0.4][FAB-MSm/e＝929＝M+H+]。
利用實施例8和9所給出的HPLC條件，可以鑑別得自實施例5和10的非對映體。
權利要求
1.式(I)所示的喜樹鹼的糖結合物及其鹽、立體異構體和立體異構體的混合物，
其中R1代表胺基酸的空間需要的非極性側鏈，R2代表胺基酸的鹼性側鏈。
2.根據權利要求1的式(I)化合物及其鹽、立體異構體和立體異構體的混合物，其中R1是具有最多4個碳原子的支鏈烷基，R2是式-(CH2)n-R3所示基團，其中R3是-NH2、
或
和n是1-4的整數。
3.根據權利要求1的式(I)化合物及其鹽、立體異構體和立體異構體的混合物，其中R1是下式所示的支鏈烷基，
R2是下式所示基團，-(CH2)2-NH2，-(CH2)3-NH2，-(CH2)4-NH2，
或
4.製備式(I)所示糖結合物或其鹽的方法
其中R1代表胺基酸的空間需要的非極性側鏈，R2代表胺基酸的鹼性側鏈，其特徵在於，將式(II)所示異硫氰酸酯
與式(III)所示的、任選地帶有側鏈保護基的肽基喜樹鹼反應
其中R1的定義同上R2』具有上述鹼性R2的定義，此外還在此鹼性基團上帶有肽化學領域常用的保護基以生成式(IV)所示的糖結合物
其中R1和R2』的定義同上，根據常規方法將可能存在的側鏈氨基保護基除去，可任選地將所得化合物轉化成所需鹽。
5.製備通式(I)所示化合物或其鹽的方法，其特徵在於，將式(II)所示異硫氰酸酯
與式(V)所示的、任選地進行過適當保護的末端鹼性胺基酸反應
其中R2』代表其鹼性基團可被保護的胺基酸的鹼性側鏈，以生成式(VI)所示的胺基酸結合物
其中R2』的定義同上，然後與式(VII)所示的胺基酸結合物反應
其中R1的定義同上，將可能存在的側鏈保護基除去，可任選地將所得化合物轉化成合適的鹽。
6.根據權利要求1的化合物，其特徵在於，所述化合物是下式所示的20(S)-20-O-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖基)-4-羥基苯基氨基硫代羰基]-L-賴氨醯基-L-纈氨醯基}喜樹鹼及其鹽
7.根據權利要求1的化合物，其特徵在於，所述化合物是下式所示的20(S)-20-O-{Nα-[O-(3-O-甲基-β-L-巖藻吡喃糖基)-4-羥基苯基氨基硫代羰基]-L-組氨醯基-L-纈氨醯基}喜樹鹼及其鹽
8.如權利要求1所述的式(I)化合物在製備藥物中的用途。
9.含有如權利要求1所述的式(I)化合物的藥物。
全文摘要
本發明涉及20(S)－喜樹鹼的糖結合物,其中3－O－甲基化β－L－巖藻糖單元通過硫脲修飾的肽間隔團與喜樹鹼衍生物上的20－羥基連接。本發明還涉及製備本發明化合物的方法,以及本發明化合物作為藥物、尤其是與癌症治療有關的藥物的用途。
文檔編號C07K5/072GK1255926SQ98805102
公開日2000年6月7日 申請日期1998年5月4日 優先權日1997年5月14日
發明者H·-G·萊爾陳, K·馮德姆布魯赫, J·鮑姆加藤, M·施佩策爾 申請人:拜爾公司