抗菌和防輻射化合物的製作方法

2023-05-10 23:54:01

專利名稱：抗菌和防輻射化合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及具有抗菌和防輻射活性的化合物。具體而言，本發明涉及取代的硝基苯乙烯化合物，該化合物對於包括細菌、真菌和原生動物在內的微生物具有廣譜活性。本發明的化合物還能夠提供對輻射損傷的防護。
背景技術：
本文特此併入了本說明書所引述的包括專利或專利申請在內的所有參考文獻以作為參考。本申請人並不認為所述參考文獻構成了現有技術。這些文獻的觀點評述僅為其作者的斷言，因而本申請人保留質疑所引文獻的確切性和適當性的權利。應當清楚地理解，儘管本文提到了相當數量的現有技術出版物，但這種引用並不構成一種承認在澳大利亞或其他任何國家，其中的任何參考文獻構成本領域的公知常識的一部分。
細菌病原體、真菌病原體和原生動物病原體可造成各種感染，包括從輕微的呼吸道疾病到爆發性的全身性感染和慢性病。由例如沙門氏菌(Salmonella)或彎曲桿菌(Campylobacter)等微生物造成的食物中毒很常見，而且經常與採用集約畜牧業技術飼養的牲畜或家禽中的地域性傳染有關。
儘管已經有了各種抗生素，但是控制傳染仍然很難，而且許多微生物會產生耐藥性。許多微生物導致了迄今證明是非常棘手的問題，例如醫院中發生的能抵抗多種藥物的金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的感染、耐藥性腸球菌(Enterococcus)感染、愛滋病患者的細菌、真菌和原生動物感染和不發達國家的肺結核、瘧疾和其他地域性傳染等。
目前僅有極少數藥物對於源自細菌、真菌和原生動物的病原體具有廣譜活性。抗生素是用來對付病原微生物的使用最廣的藥物。然而，大多數抗生素的特異性較窄。甚至廣譜抗菌抗生素對於真菌和原生動物也不很有效。大多數抗生素屬於種類範圍有限的化合物，儘管已經開發出了這些化合物的改良的半合成衍生物，但是，近二十年來僅出現了少數新的抗生素化合物種類。
可供選擇的能夠保護活的有機體免受放射性輻射損傷的藥物也非常有限。在輻射防護劑中，最有效的是含硫化合物(Kuna，1989)。例如胱胺是允許使用的輻射防護劑(Vladimirov等，1989)。該製劑的防護指數不超過1.45，而且存在導致腹瀉的缺點。另一種已知的輻射防護製劑是巰胺(β-巰乙胺)(Mashkovskiy，1986)這種製劑的治療指數低，作用時間短(0.5-1小時)，而且其輻射防護活性持續時間短。
已知β-硝基苯乙烯及其某些衍生物具有生物活性及部分殺真菌活性(Foyer，1973)。俄羅斯專利2145215顯示，芳基硝基烯烴的某些衍生物具有抗菌、抗真菌和抗原生動物活性，而且它們能夠提供對輻射損傷的防護。這些化合物具有如下結構式 其中，R1』是H或CH3；R2』和R3』是選自H、OCH3、OH、NO2和(CH3)2N的相同或不同的基團。
這些化合物的活性令人滿意，但仍需要具有廣譜殺菌活性的低成本、低毒性藥物。
我們現已發現，某些取代的硝基苯乙烯化合物對於包括細菌、真菌和原生動物在內的各種生物體具有極好的活性，而且，它們還能提供對輻射損傷的防護。

發明內容
本發明提供了一種治療和/或預防微生物感染的方法，所述方法包括施用有效量的式I化合物及其藥用鹽或其衍生物、其前藥、其互變異構體和/或其同分異構體的步驟，所述式I化合物為 其中，X和Y是相同或不同的雜原子； 是由雜原子X和Y決定的單鍵或雙鍵；R1至R5是選自氫或無害的取代基的相同或不同的基團；和R6和R7是選自氫和無害的取代基的相同或不同的基團，或者當存在雙鍵時，R6和R7中的一個基團不存在。
本發明還提供了式I化合物在製備治療和/或預防微生物感染的藥物中的應用。
本發明還提供了式I化合物在治療和/或預防微生物感染中的應用。
本發明還提供了保護受試者不受輻射損傷的方法，所述方法包括給需要使用式I化合物的受試者施用有效量的式I化合物的步驟。
另一方面，本發明提供了癌放射療法，所述療法包括以下步驟給需要採用該療法的受試者施用有效量的式I化合物，以及使該受試者的腫瘤部位接受放射源的照射。
另一方面，本發明提供了式I化合物作為抗微生物劑或輻射防護劑的應用。
優選X和Y是選自O和N的相同或不同的原子，更優選X和Y同時為氧。
優選R1和R2是選自氫、羥基、滷素或選擇性地具有取代基的C1-6烷基的相同或不同的基團。
優選R3至R5是選自氫、羥基、滷素、硝基、C1-6烷氧基或選擇性地具有取代基的C1-6烷基的相同或不同的基團。
優選滷素為氯或溴。
優選式I化合物的順式(E)同分異構體。
特別優選式I化合物為，其中，X、Y、 R6和R7如上述定義；R1和R2是選自氫、羥基、Cl、Br和C1-4烷基的相同或不同的基團；以及R3至R5是選自氫、羥基、Cl、Br、硝基、C1-4烷氧基或C1-4烷基的相同或不同的基團。
本發明的化合物的具體例子如下(1)X和Y是O，R1是甲基，R2和R3是氫(3，4-亞甲基二氧-β-甲基-β-硝基苯乙烯) (2)X和Y是O，R1至R3是氫(3，4-亞甲基二氧-β-硝基苯乙烯) (3)X是N，Y是NH，R1是甲基，R2和R3是氫(苯並咪唑-5-β-硝基丙烯)
(4)X是N，Y是NH，R1是氫，R2是甲基，R3不存在(2-甲基苯並咪唑-5-β-硝基乙烯) (5)X是O，Y是N，R1和R2是氫，R3不存在(苯並噁唑-5-β-硝基乙烯) (6)X是N，Y是O，R1和R2是甲基，R3不存在(2-甲基苯並噁唑-5-β-硝基丙烯) 某些式I化合物本身是新的。
因此，本發明提供了式Ia化合物
其中，X、Y、 和R1至R7如上述式I所定義，附帶條件是，當X和Y均為O且R2至R7均為氫時，則R1不為氫、C1-4烷基或CO2Et，或者當X和Y均為O時，則R1至R7不為氫。
本發明還提供了上述定義的式Ia化合物的製備方法，所述方法包括使式II化合物與式III化合物縮合的步驟，所述式II化合物為 所述式III化合物為R1R2CHNO2III在所述式II化合物中，X、Y、 和R3至R7如上述式Ia所定義，在所述式III的化合物中，R1和R2如上述式Ia所定義。
本發明還提供了上述定義的式Ia化合物的製備方法，所述方法包括使式IV化合物與C(NO3)4反應的步驟，所述式IV化合物為
在所述式IV化合物中，X、Y、 和R1至R7如上述式Ia所定義。
上述方法優選在催化劑存在的條件下進行，所述催化劑有例如胺或例如NaOH或KOH等鹼金屬氫氧化物。
另一方面，本發明提供了藥物或獸藥組合物，所述藥物或獸藥組合物含有上述定義的式Ia化合物及藥用的或獸藥用的載體。
優選所述藥物或獸藥組合物是局部的、口服的或非腸道的組合物。
所述藥用的或獸藥用的載體優選有機溶劑，例如丙酮、苯、乙腈、DMSO或醇，所述醇為例如甲醇或乙醇。儘管本發明的化合物水溶性較差，但當水與有機溶劑混合時，可以形成穩定的混合物。
在本說明書中，應當清楚地理解，「含有(包含)」一詞的意思是「包括(含)但不局限於」。
術語「雜原子」指O、N或S。
術語「無害的取代基」在本文中採用其最廣的含義，它指對本發明的化合物的抗菌或輻射防護性能無有害影響的取代基。其例子包括烷基、鏈烯基、炔基、芳基、滷原子取代基、滷代烷基、滷代鏈烯基、滷代炔基、滷代芳基、羥基、烷氧基、鏈烯氧基、芳氧基、苄氧基、滷代烷氧基、滷代鏈烯氧基、滷代芳氧基、硝基、硝基烷基、硝基鏈烯基、硝基炔基、硝基芳基、硝基雜環基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、鏈烯基氨基、炔基氨基、芳氨基、二芳基氨基、苄氨基、二苄基氨基、醯基、鏈烯基醯基、炔基醯基、芳基醯基、醯氨基、二醯基氨基、醯氧基、烷基磺醯氧基、芳基亞磺醯氧基、雜環基、雜環氧基、雜環氨基、滷代雜環基、烷基亞磺醯基、芳基亞磺醯基、烷氧羰基、芳氧羰基巰基、烷硫基、芳硫基、醯硫基和含磷化合物。
特別適合的無害取代基是烷基、鏈烯基、炔基、滷原子取代基、滷代烷基、滷代鏈烯基、滷代炔基、羥基、烷氧基、鏈烯氧基、滷代烷氧基、滷代鏈烯氧基、硝基、硝基烷基、硝基鏈烯基和硝基炔基。
在一個優選實施方式中，所述無害的取代基是C1-6烷基、滷原子取代基、羥基、C1-6烷氧基和硝基。
術語「選擇性地具有取代基」指某基團可以或可以不被例如上述定義的無害的取代基進一步取代。
術語「滷素」指氟、氯、溴和碘，優選氯和溴。
術語「烷氧基」在本文中採用其最廣的含義，它指直鏈、支化鏈或環狀的含氧基團，所述的每個基團均具有烷基部分，優選C1-6烷基，更優選C1-4烷基。這類烷氧基的例子有甲氧基、乙氧基、丙氧基、正丁氧基和叔丁氧基。
單獨使用的或在例如「選擇性地具有取代基的C1-4烷基或C1-6烷基」等複合詞中使用的術語「C1-4烷基」或「C1-6烷基」指具有1-6個碳原子的直鏈、支化鏈或環狀烴基。這類烷基的例子有甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、新戊基、己基、環丙基、環丁基、環戊基或環己基。
式I或Ia化合物的鹽類優選是可藥用的，但應當理解，非藥用鹽也落在本發明的範圍之內，由於它們可用作製備本發明的藥用鹽的中間體。藥用鹽的例子包括藥用陽離子，例如鈉、鉀、鋰、鈣、鎂、銨和烷基銨；藥用無機酸的酸加成鹽，所述藥用無機酸有例如鹽酸、正磷酸、硫酸、磷酸、硝酸、碳酸、硼酸、氨基磺酸和氫溴酸；或藥用有機酸的鹽，所述藥用有機酸有例如乙酸、丙酸、丁酸、酒石酸、馬來酸、羥基馬來酸、富馬酸、檸檬酸、乳酸、粘酸、葡糖酸、苯甲酸、琥珀酸、草酸、苯乙酸、甲烷磺酸、三滷代甲烷磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、水楊酸、對氨基苯磺酸、天冬氨酸、穀氨酸、乙二胺四乙酸、硬脂酸、棕櫚酸、油酸、月桂酸、泛酸、丹寧酸、抗壞血酸和戊酸。
此外，本發明的某些化合物可與水或普通的有機溶劑形成溶劑化物。這些溶劑化物包括在本發明的範圍之內。
「藥用衍生物」指任何藥用鹽、水合物或任何其他化合物，所述其他化合物是指將其施用於受試者後，能夠(直接或間接地)形成式I或式Ia化合物或其具有抗菌或輻射防護性的活性代謝物或殘餘物的化合物。
術語「前藥」在本文中採用其最廣的含義，它包括在體內轉變為式I或式Ia化合物的那些化合物。
術語「互變異構體」在本文中採用其最廣的含義，它包括能夠以兩種異構體形式之間的平衡態存在的式I或式Ia化合物。這類化合物可能在連接兩個原子或基團的化學鍵上有所不同，而且這些原子或基團在該化合物中的位置也有可能不同。
術語「同分異構體」在本文中採用其最廣的含義，它包括結構異構體、幾何異構體和立體異構體。由於式I或式Ia化合物可具有一個或多個手性中心，因此這些化合物可以以對映異構體的形式存在。
術語「微生物感染」在本文中採用其最廣的含義，它指由微生物引起的任何感染，包括細菌感染、真菌感染、酵母菌感染和原生動物感染。
術語「微生物」包括任何微觀生物體或在分類學上相關的屬於藻類、細菌、真菌、酵母菌和原生動物等類別的宏觀生物體。
細菌感染包括但不局限於，由蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)、炭疽芽孢桿菌(Bacillus anthracis)、肉毒梭菌(Clostridiumbotulinum)、艱難梭菌(Clostridium difficile)、破傷風梭菌(Clostridium tetani)、產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)、白喉棒桿菌(Corynebacteria diphtheriae)、腸球菌屬(Enterococcus(鏈球菌屬D(Streptococcus D))、單核細胞增生利斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)引起的感染、肺炎球菌屬(Pneumoccoccal)(肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae))感染、葡萄球菌屬(Strphylococcal)感染和鏈球菌屬(Streptococcal)感染；革蘭氏陰性菌感染，所述革蘭氏陰性菌包括擬桿菌屬(Bacteroides)、百日咳博德特氏菌(Bordetellapertussis)、布魯氏菌屬(Brucella)、彎曲桿菌屬(Campylobacter)；腸出血大腸埃希氏菌(enterohaemorrhagic Escherichia coli(EHEC/E.coli O157:H7)、腸襲大腸埃希氏菌(enteroinvasive Escherichia coli(EIEC))、腸毒大腸埃希氏菌(enterotoxigenic Escherichia coli(ETEC))、流感嗜血菌(Haemophilus Influenzae)、幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、沙氏軍團菌屬菌種(Legionella spp.)、黏膜炎莫拉氏菌(Moraxellacatarrhalis)、淋病奈瑟氏球菌(Neisseria gonnorrhoeae)、腦膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitidis)、敗血變形菌屬菌種(Proteusspp.)、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、沙門氏菌屬菌種(Salmonella spp.)、希瓦氏菌屬菌種(Shigella spp.)、霍亂弧菌(Vibrio cholera)和椰爾森氏菌屬(Yersinia)；抗酸細菌，其包括結合分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)、鳥分枝桿菌—細胞內的(Mycobacterium avium-intracellulare)、約氏分枝桿菌(Myobacteriumjohnei)、麻風分枝桿菌(Mycobacterium Leprae)、非典型細菌(atypicalbacteria)、衣原體屬(Chlamydia)、枝原體屬(Mycoplasma)、立克次氏體屬(Rickettsia)、螺體屬(Spirochetes)、徹白密螺旋體(Treponemapallidum)、回歸熱疏螺旋體(Borrelia recurrentis)、布氏疏螺旋體(Borrelia burgdorfii)和出血黃疸鉤端螺旋體(LeptospiraIcterohemorrhagiae)，以及其他各種細菌，包括放線菌屬(Actinomyces)和諾卡菌屬(Nocardia)。
真菌感染包括但不局限於由以下真菌引起的感染鏈格孢(Alternaria alternata)、黃麴黴菌(Aspergillus flavus)、煙麴黴(Aspergillus fumigatus)、構巢麴黴(Aspergillus nidulans)、尼日麴黴(Aspergillus niger)、雜色麴黴(Aspergillus Versicolor)、皮炎芽生菌(Blastomyces dermatiditis)、白色念珠菌(Candidaalbicans)、Candida dubliensis、克魯斯念珠菌(Candida krusei)、近平滑念珠菌(Candida parapsilosis)、熱帶念珠菌(Candidatropicalis)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、粗球孢子菌(Coccidioides immitis)、新生隱球菌(Cryptococcus neoformans)、絮狀表皮癬菌(Epidermophyton floccosum)、莢膜組織胞漿菌(Histoplasma capsulatum)、糠秕鱗斑菌(Malassezia furfur)、犬小孢子菌(Microsporum canis)、毛菌黴屬菌種(Mucor spp.)、巴西副球孢子菌(Paracoccidioides brasiliensis)、馬爾尼非青黴(Penicilliummarneffei)、卵圓形糠秕孢子菌(Pityrosporum ovale)、卡氏肺囊蟲(Pneumocystis carinii)、申克孢子絲菌(Sporothrix schenkii)、紅色毛癬菌(Trichophyton rubrum)、指間毛癬菌(Trichophytoninterdigitale)、白色毛孢子菌(Trichosporon beigelii)和紅酵母屬菌種(Rhodotorula spp.)。
酵母菌感染包括但不局限於由以下酵母菌引起的感染克勞氏酒香酵母(Brettanomyces clausenii)、卡斯酒香酵母(Brettanomycescusterii)、異酒香酵母(Brettanomyces anomalous)、naardenensis酒香酵母(Brettanomyces naardenensis)、himilis假絲酵母(Candidahimilis)、中間型假絲酵母(Candida intermedia)、清酒假絲酵母(Candida saki)、馬鈴薯假絲酵母(Candida solani)、熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)、Candida versatilis、比奇氏假絲酵母(Candidabechii)、Candida famata、解脂假絲酵母(Candida lipolytica)、星型假絲酵母(Candida stellata)、酒性假絲酵母(Candida vini)、漢遜氏德巴利氏酵母(Debaromyces hansenii)、中間型德克氏酵母(Dekkeraintermedia)、布魯塞爾德克氏酵母(Dekkera bruxellensis)、念珠地絲菌(Geotrichium sandidum)、費比氏漢遜氏酵母(Hansenula fabiani)、葡萄汁有孢漢遜酵母(Hanseniaspora uvarum)、異常漢遜酵母(Hansenulaanomala)、季氏有孢漢遜酵母(Hanseniaspora guillermondii)、vinae有孢漢遜酵母(Hanseniaspora vinae)、乳克魯維氏酵母(Kluyveromyceslactis)、檸檬形克勒克酵母(Kloekera apiculata)、馬克斯克魯維氏酵母(Kluveromyces marxianus)、脆壁克魯維氏酵母(Kluyveromycesfragilis)、美極梅奇酵母(Metschikowia pulcherrima)、季氏畢赤氏酵母(Pichia guilliermodii)、orientalis畢赤氏酵母(Pichiaorientalis)、發酵性畢赤氏酵母(Pichia fermentans)、膜醭畢赤氏酵母(Pichia memranefaciens)、巴楊氏紅糖酵母(RhodotorulaSaccharomyces bayanus)、啤酒糖酵母(Saccharomyces cerevisiae)、大連糖酵母(Saccharomyces dairiensis)、微小糖酵母(Saccharomycesexigus)、單胞糖酵母(Saccharomyces uinsporus)、葡萄汁糖酵母(Saccharomyces uvarum)、oleaginosus糖酵母(Saccharomycesoleaginosus)、boulardii糖酵母(Saccharomyces boulardii)、路為氏糖酵母(Saccharomycodies ludwigii)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、戴爾凱氏有孢圓酵母(Torulasporadelbruekii)、星型球擬酵母(Torulopsis stellata)、拜列氏接合糖酵母(Zygoaccharomyces bailli)和rouxii接合糖酵母(Zygosaccharomyces rouxii)。
原生動物感染包括但不局限於由以下原生動物引起的感染利什曼蟲屬(Leishmania)、弓形體屬(Toxoplasma)、瘧原蟲(Plasmodia)、泰勒蟲屬(Theileria)、無形體(Anaplasma)、鞭毛蟲屬(Giardia)、毛滴蟲屬(Trichomonas)、錐蟲屬(Trypanosoma)、球蟲類(Coccidia)和巴貝蟲屬(Babesia)。具體例子包括克氏錐蟲(Trypanosoma cruzi)、柔嫩艾美球蟲(Eimeria tenella)、惡性瘧原蟲(Plasmodiumfalciparum)、間日瘧原蟲(Plasmodium vivax)或卵形瘧原蟲(Plasmodiumovale)。
優選所述微生物感染是由革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌引起的感染，所述革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌有例如金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、糞腸球菌(Enterococcus fecalis)、肺炎克雷白菌(Klebsiella pneumonia)、鼠傷寒沙門菌(Salmonellatyphimurium)或假結核病菌(pseudotuberculosis)、不動桿菌屬(Acinetobacter)、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)、艱難梭菌(Clostridiumdifficile)、空腸彎曲桿菌(Campylobacter jejuni)或脆弱擬桿菌(Bacteroides fragilis)；真菌或酵母菌感染，例如指間毛癬菌(Trichophyton interdigitale)；煙麴黴(Aspergillus fumigatus)或白色念珠菌(Candida albicans)；或原生動物感染，例如惡性瘧原蟲(Plasmodium falciparum)或陰道毛滴蟲(Trichomonas vaginalis)。
微生物感染的例子包括細菌的或真菌的傷口感染、黏膜感染、腸感染、潰爛、肺炎、沙眼、鳥疫、膣炎症、真菌感染和沙門菌感染，特別是在獸醫實踐中的上述感染。本發明的化合物還可用於對付具有耐藥性的微生物種類，或者用於需要對物質進行防腐處理或消毒的各種領域，例如用於表面消毒。
術語「受試者」在本文中指患有需用藥物活性劑治療的疾病或病症的任何動物。所述受試者可以是哺乳動物，優選人，也可以是家畜或寵物。雖然可以預見的是本發明化合物適用於人的醫療，但本發明化合物也適用於動物治療，包括治療寵物如狗和貓；家畜如馬、矮種馬、驢、騾、駱駝、羊駝、豬、牛和羊；或動物園動物如靈長類、貓科動物、犬科動物、牛科動物和有蹄動物等。
適合的哺乳動物包括以下各目的成員靈長目、齧齒目、兔目、鯨目、食肉目、奇蹄目和偶蹄目動物。特別優選奇蹄目和偶蹄目動物，因為它們在生物學和經濟上的重要性相類似。
例如，偶蹄目包括分布於9個科的約150種生物豬(豬科)、野豬類(Tayassuidae)、河馬(Hippopotamidae)、駱駝(Camelidae)、麝香鹿(Tragulidae)、長頸鹿和霍加狓(Giraffidae)、鹿(Cervidae)、叉角羚(Antilocapridae)、牛、羊、山羊、羚羊(牛科)。上述許多動物在各個國家作為飼養動物。更重要的是，許多重要的經濟動物如山羊、綿羊、牛和豬具有非常相似的生物學並共享了高度的基因同源性。
奇蹄目動物包括馬和驢，它們在經濟上都很重要，而且其關係密切。實際上，人們都知道馬和驢是可以雜交的。
這裡使用的術語「有效量」指本發明化合物產生所需的抗菌和輻射防護活性的有效用量。
具體的「有效量」顯然會隨著以下因素的不同而變化，如有待治療的特定狀況、受試者的身體狀況、有待治療的受試者的類型、治療的持續時間、協同療法(若有的話)的特點、所用的具體製劑及化合物或其衍生物的結構。
術語「輻射損傷」在本文中採用其最廣的含義，指由於暴露於輻射源如電離輻射而引起的損傷。術語「電離輻射」在本文中指有足夠能量可以電離鍵的光子，如來源於放射核的α、β和γ射線以及X射線。
術語「癌放射療法」在本文中採用其最廣的含義，包括良性或惡性腫瘤的放射療法。
本發明的輻射防護劑主要用於癌放射療法。許多在放射療法中會成問題的普通組織如皮膚、口腔黏膜、食管黏膜、直腸黏膜、陰道黏膜以及膀胱上皮細胞等，都可以使用本發明的輻射防護劑來保護。
除用於癌放射療法之外，還可以在高危輻射場合預防性地使用本發明的輻射防護劑。
本發明化合物可與其他藥物一起使用，以達到有效的結合。這種結合可以包括藥物活性劑的任何化學相容的結合，只要這種結合不削弱式I或式Ia化合物的活性即可。應當理解，本發明化合物與其他藥物可以單獨施用、先後施用或同時施用。
治療微生物感染時可以使用的其他藥物包括其他抗感染劑，如抗生素。
當所述化合物被用作輻射防護劑時，所述的其他藥物可包括化療劑，例如擬輻射劑，它是一種破壞DNA的細胞毒素藥劑，它對DNA造成的損傷與電離輻射導致的損傷類似。使DNA鏈斷裂的擬輻射劑的例子包括博來酶素、阿黴素、亞德裡亞黴素、5FU、新制癌菌素、烷化劑以及其他產生DNA加合物的藥劑。可以預期，本發明的輻射防護劑可以採用與防護電離輻射作用同樣的方法來保護DNA不受由這些藥劑帶來的損傷。在臨床使用中，防輻射劑不太可能與化療劑一起進行全身性的施用，因為這樣會削弱該化療劑對腫瘤的作用。但是，有時對病變組織局部使用是有利的。例如，口腔黏膜炎是由細胞毒素藥劑如阿黴素導致的難以處理的副作用，在施用化療劑之前用本發明的輻射防護劑漱口，可以改善這種副作用，而不會削弱該化療劑對非口腔內的腫瘤的作用。類似地，通過口服可以保護胃腸道，而通過吸入霧劑可以保護肺，通過例如輻射防護劑導管在膀胱內給藥可以保護膀胱。因此，本發明的優選方法是將式I或式Ia化合物與其他藥物如擬輻射劑結合使用。
本發明化合物可以通過例如具有相互作用力的基團與其它藥劑相結合，這些藥劑可將該化合物送到目標腫瘤部位。合適的這類藥劑包括抗體或蛋白質、生長因子例如造血生長因子，造血生長因子可以在全身輻射和骨髓移植過程中使造血幹細胞優先得到輻射防護。
在骨髓移植過程中，也可在體外使用本發明化合物的結合體。骨髓移植一般包括從預期病情惡化的受試者獲得骨髓樣本並儲存。隨後採用非常猛烈的化學療法(即大劑量)。這種化學療法由於破壞了正常幹細胞而通常是致命的，但受試者由於接受了他們自身的造血幹細胞而得救。該方法的問題是幹細胞的初始樣本很容易被腫瘤細胞汙染，因此需使用各種方法來清除骨髓製劑中的腫瘤細胞。此時可以將結合在造血生長因子上的輻射防護劑加入骨髓細胞的懸浮液中。然後輻射該懸浮液，以期優先保護正常骨髓細胞，使之不被輻射殺傷，而腫瘤細胞則不會受到保護。
本文中的「藥用載體」指用於將式I或式Ia化合物輸送給受試者的藥用溶劑、助懸劑或賦形劑。所述載體可以是液體或固體，可以根據預計的施用方式對其進行選擇。從與組合物中的其他成分的相容性以及對受試者無害的意義上講，任何載體均必須是製藥學上「可接受的」。
可以口服、局部使用或非腸道施用式I或Ia的化合物，其形式可以是含有傳統的無毒藥用載體、輔助劑和賦形劑的劑量單位製劑。本文使用的術語「非腸道」包括皮下注射、施用於肺和鼻腔的霧劑以及靜脈內的、肌內的、鞘內的、顱內的注射或輸液技術。
本發明還提供適於局部施用、口服和非腸道施用的藥物製劑，以用於本發明的新療法。本發明的化合物可以採用以下形式口服片劑、水性或油性混懸劑、菱形錠劑、糖錠劑、粉劑、粒劑、乳劑、膠囊劑、糖漿劑或酊劑。為了製備外觀和口感良好的藥物製劑，用於口服的組合物可含有選自由以下物質組成的組的一種或多種添加劑甜味劑、香味劑、著色劑和防腐劑。適當的甜味劑包括蔗糖、乳糖、葡萄糖、阿斯巴甜或糖精。適當的崩解劑包括玉米澱粉、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、黃原膠、斑脫土、藻酸或瓊脂。適當的香味劑包括薄荷油、冬青油、櫻桃香味劑、柑桔香味劑或覆盆子香味劑。適當的防腐劑包括苯甲酸鈉、維生素E、α生育酚、抗壞血酸、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯或亞硫酸氫鈉。適當的潤滑劑包括硬脂酸鎂、硬脂酸、油酸鈉、氯化鈉或滑石。適當的緩釋劑包括單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。所述片劑包含與適合生產片劑的、無毒的藥用賦形劑混合在一起的活性成分。
這些賦形劑可以是，例如，(1)惰性稀釋劑，如碳酸鈣、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；(2)造粒劑或崩解劑，如玉米澱粉或藻酸；(3)粘合劑，如澱粉、白明膠或阿拉伯膠；以及(4)潤滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。這些片劑可以不包衣，也可以用公知技術包衣，以延遲藥物在胃腸道的崩解和吸收，並由此使藥物長期持續發揮藥效。例如，可以使用如單硬脂酸甘油酯和二硬脂酸甘油酯等緩釋物質。也可以採用美國專利4,256,108、4,160,452和4,265,874中所述的技術進行包衣，從而得到可控釋放的滲透治療片劑。
本發明方法中使用的式I或式Ia化合物以及藥物活性劑的施用方法可以是，分別或同時採用內服、非腸道注射或長時間逐漸灌注。可以在靜脈內、動脈內、腹膜內、肌肉內、皮下、腔內、經皮給藥或通過如滲透泵來輸液給藥。進行體外研究時，可以將藥劑直接加入或溶解在一種合適的生物用溶劑或緩衝液中，然後再加入到細胞或組織中。
非腸道給藥的製劑包括無菌的水性的或非水性的溶液、懸浮液和乳液。非水性溶劑的例子有丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄欖油，以及可注射的有機酯如油酸乙酯。水性載體包括水、乙醇溶液/水溶液、乳液或懸浮液，包括鹽水和緩衝介質。非腸道給藥用的載體包括氯化鈉溶液、複方氯化鈉(Ringer’s)葡萄糖液、葡萄糖和氯化鈉、包括流體和營養補充物的乳酸鹽的複方氯化鈉靜脈注射載體、電解質補充物(如基於複方氯化鈉葡萄糖液的電解質補充物)等。還可具有防腐劑以及其它添加劑，如抗菌劑、抗氧劑、螯合劑、生長因子和惰性氣體等。
一般來說，本文中使用的「處理」、「治療」等術語是指影響受試者、組織或細胞，以得到預想的藥理和/或生理效果。這些效果可以是預防性的即完全或部分地預防疾病或其體徵、其症狀，和/或治療性的即部分或完全使疾病痊癒。本文使用的「治療」涵蓋治療或預防脊椎動物、哺乳動物，特別是人的疾病，它包括(a)對於對某種疾病易感的、但尚未被診斷為患有該疾病的群體，預防該疾病的發生；(b)控制疾病，即抑制其發展；或(c)緩解或改善病情，即，使該疾病的病情減輕。
本發明包括對改善病情有用的各種藥物組合物。根據本發明的一個實施方案，藥物組合物的製備方法是，利用載體、賦形劑、添加劑或輔助劑，將式I或式Ia化合物、其相似物、其衍生物或其鹽，或者是式I或式Ia化合物與一種或幾種藥物活性劑的結合物製成適合受試者施用的形式。常用的載體或輔助劑包括碳酸鎂、二氧化鈦、乳糖、甘露醇或其他糖、滑石、牛奶蛋白質、白明膠、澱粉、維生素、纖維素及其衍生物、動植物油、聚乙二醇和溶劑如消毒水、醇、甘油和多元醇。靜脈載體包括流質和營養補充物。防腐劑包括抗菌劑、抗氧劑、螯合劑和惰性氣體。其他藥用載體包括水溶液、無毒的賦形劑，其包括鹽、防腐劑、緩衝劑等，這些內容如以下文獻所述例如Remington的《製藥學(Pharmaceutical Sciences)》(第20版，Williams Williams(2000))、《英國國家處方(British National Formulary)》(第43版，BritishMedical Association and Royal Pharmaceutical Society of GreatBritain，2000)，本文引用其內容作為參考。根據現有技術中的常規方法調節所述藥物組合物中各種組分的pH值和具體濃度。參見Goodman和Gilman的《療法的藥理學基礎(The Pharmacological Basis forTherapeutics)》(第7版，1985)。
優選以劑量單元製備和施用所述藥物組合物。固體劑量單元可以是片、膠囊和栓劑。對受試者進行治療時，根據化合物的活性、施用方式、疾病的性質及嚴重程度、受試者的年齡和體重，可使用不同的日劑量。但在特定情況下，可以增大或減小使用劑量。日劑量的施用方式可以是，以單劑量單元或幾個小劑量單元施用一次，也可以按一定間隔多次施用分劑量。
可以採用治療的有效劑量在局部或全身施用本發明的藥物組合物。對於該用途有效的量當然取決於受試者的病情嚴重程度、體重以及總體狀態。一般來說，體外試驗所用的劑量可以為用於相同部位的該藥物組合物的有效劑量提供有益的啟示，所以可以利用動物模型來確定治療微生物感染的有效劑量。各種影響因素已描述於例如「Langer，Science，2491527，(1990)」中。口服用製劑可以是硬明膠膠囊，其中的活性成分與惰性固體稀釋劑相混合，所述惰性固體稀釋劑有例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土。它們也可以是軟明膠膠囊，其中的活性成分與水或油介質相混合，所述油介質有例如花生油、液體石蠟或橄欖油等。
水性懸浮液通常含有與適於製成水性懸浮液的賦形劑混合的所述活性物質。這些賦形劑可以是(1)助懸劑，如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍膠和阿拉伯膠；(2)分散劑或溼潤劑，可以是(a)天然磷脂，如卵磷脂；(b)環氧烷烴與脂肪酸的縮聚產物，如聚氧亞乙基硬脂酸酯；(c)環氧乙烷與長鏈脂肪醇的縮聚產物，如十七乙烯氧基十六烷醇；(d)環氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇得到的偏酯的縮聚產物，如聚氧亞乙基山梨糖醇單油酸酯，或(e)環氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇酐得到的偏酯的縮聚產物，如聚氧亞乙基山梨聚糖單油酸酯。
所述藥物組合物可以是無菌的、可注射的水性或油性懸浮液的形式。該懸浮液可以用上文提到的適合的分散劑、溼潤劑或助懸劑根據已知的方法進行配製。所述的無菌注射製劑也可以是，在無毒的、可非腸道施用的稀釋劑或溶劑中的無菌注射溶液或懸浮液，如在1，3-丁二醇中的溶液。在可用的載體和溶劑中，可以採用的是水、複方氯化鈉(Ringer’s)溶液和等滲的氯化鈉溶液。另外，無菌的不揮發性油常用作溶劑或懸浮介質。為了達到此目的，可以使用任何無刺激性的不揮發性油，包括合成的甘油單酯或甘油二酯。另外，在注射製劑中也可使用如油酸等脂肪酸。
式I或式Ia化合物可以以例如小的單層載體、大的單層載體以及多層載體等脂質體給藥體系的形式施用。脂質體可以由各種磷脂如膽固醇、十八烷胺或卵磷脂等形成。
式I或式Ia化合物也可以用作獸藥組合物的形式，這種獸藥組合物可以按照例如現有技術中的常規方法製備。所述獸藥組合物的例子包括適合以下用途的獸藥組合物(a)口服或外用，如獸用頓服藥(如水性的或非水性的溶液或懸浮液)；片劑或大丸藥；與飼料混在一起的粉即、粒劑或小丸；塗敷在舌頭上的糊劑；(b)非腸道給藥，例如以無菌的溶液或懸浮液的形式通過例如皮下、肌肉或靜脈注射；或者(在適當情況下)通過乳腺內注射，其中，將懸浮液或溶液通過乳頭注入乳房；(c)局部施用，例如以乳膏、軟膏或噴霧劑施用於皮膚；或(d)陰道內施用，例如以陰道栓、乳膏或泡沫的形式。
本發明的式I或式Ia化合物的劑量水平可大致達到每公斤體重約1克。可根據被治療的對象及具體的給藥方式採用不同量的活性成分，所述活性成分可與載體物質結合形成一個單劑量。例如，設計用於人口服的製劑中可含有高達約1克的活性化合物及適量的載體物質，所述載體物質的含量可以佔總組合物的約5％-約95％。劑量單元一般含有約5mg到約500mg的活性成分。
可以選擇性地以分劑量的方式施用本發明的化合物，也即，採用這種施用方式時，總共至少要施用兩次。優選從至少每2小時直至每4小時或更長時間施用一次；例如可以每小時或每半小時施用一次該化合物。在一個優選的實施方案中，分劑量施用法包括，在第一次施用後足夠長的時間之後，血液中活性化合物的水平從第一次施用後達到的最大血漿水平降低到約5-30％後，第二次施用本發明的化合物，以維持活性劑在血液中的有效含量。在從每次在前施用起相應的時間間隔後，可以選擇性地繼續施用一次或多次，優選在血漿水平降低到前一最大水平的約10-50％時施用。
但是應當理解，對於任何特定的患者，具體劑量水平與多種因素有關，這些因素包括所用的特定化合物的活性、年齡、體重、整體健康狀況、性別、飲食、施用時間、施用途徑、排洩速度、藥物的結合情況以及所治療疾病的嚴重程度。


圖1是實施例9中的白色念珠菌的存活數目的對數值(Log存活數)與時間(小時)的關係圖；圖2是實施例26中被寄生感染的血細胞的百分數與培養時間的關係，其中T＝滋養體，R＝Rings，T/S＝滋養體或裂殖體。
具體實施例方式
實施例下面僅參照以下非限定性的實施例和附圖來詳細描述本發明。
實施例1一般合成方法有文獻(Perekalkin，1982a)描述了苯並二氧戊環(Benzdioxol)類物質。苯並咪唑和苯並噁唑的合成也可以用以下的標準縮合方法1和方法2(Perekalkin，1966，1982b)進行。
方法1
方法2 其中，X、Y、 和R1至R7與以上式I中的定義相同。
方法2中，將等分子數的苯甲醛和硝基烷在錐形燒瓶中混合，然後溶解在等體積的乙醇中。將新蒸餾出的乙二胺以催化劑量(通常相對於醛和硝基烷基為1比10)加入到上述溶液中，然後室溫下避光放置數日(3到10天)。在此過程中化合物結晶。冷卻到約0℃後，將晶體過濾，用冷乙醇洗滌，然後乾燥。若產率較低，可以將母液合併，然後用旋轉蒸發器蒸發。冷卻後又得到一些不純的產物。將該產物溶解在少量沸騰的乙醇中進行提純。然後用活性炭處理，趁熱過濾，在冷卻過程中得到了細小的黃色針狀晶體。產率約為80-85％，色譜分析表明該化合物是均質的。
所得化合物的紅外光譜與文獻(Hamlin and Weston，1949；Knoevenagel and Walter，1904；Burton and Duffield，1949)描述一致。
該化合物可以溶於有機溶劑如乙醇、丙酮、苯、甲醇、乙腈、氯仿和DMSO(二甲基亞碸)中，但在水中溶解性不好(0.1％)。若將乙醇溶液加入到水中，則形成穩定的膠狀混合液。
實施例2化合物(1)(3，4-亞甲基二氧-β-甲基-β-硝基苯乙烯)的製備方法採用上述實施例1所述的方法製備化合物(1)。反應式如下。

將9.8g四硝基甲烷(1摩爾)與10cm3丙酮的混合物用冰冷卻，然後將該混合物滴加到溶有8.1g蒸餾的異黃樟腦(1摩爾)和4.8g吡啶(1.2摩爾)的20cm3丙酮溶液中。滴入第一滴就使反應混合物顏色變深，當四硝基甲烷全部滴加完後，液體變為暗紅色不透明狀。四硝基甲烷的氣味很快消失，大約兩小時以內，將已變得透明的暗紅色液體倒入裝有100cm3水的帶塞的瓶中。將混合物充分振蕩，用乙醚層覆蓋，然後分小批加入由6.7cm333％的苛性鉀溶液(1.03摩爾)和50cm3水組成的混合物。每次加料後均要搖動所述混合物，鹼液全部加完後，繼續搖動，直到暗紅色油狀的吡啶和三硝基甲烷的鹽完全消失。分離水層後，再用乙醚萃取。先用水衝洗結合了乙醚的萃取物，接著用硫酸酸化後的水衝洗，最後再用純水衝洗。真空蒸餾除去乙醚後得到黃色針狀的β-硝化異黃樟腦沉澱，該沉澱是從約65cm3乙醇中重結晶得到的。得到的化合物(1)的熔點為98℃，產量為7g。若溶劑全部蒸發完，可以再得到0.5g化合物(1)。總產量為理論產量的72.5％。
實施例3製備化合物(1)(3，4-亞甲基二氧-β-甲基-β-硝基苯乙烯)的替代方法採用上述實施例1中的方法2製備化合物(1)。反應式如下。
使900g胡椒醛在持續振蕩狀態下溶解到1000cc乙醇中，然後緩慢加入450ml硝基乙烷，再加入10ml乙二胺。攪拌17小時後，將混合物在室溫下避光放置5-7天。用布氏漏鬥過濾生成的黃色晶體，乾燥後用150ml乙醇洗兩次。得到1200g熔點為95℃的化合物(1)。從乙醇中進一步結晶出來後，得到1000g熔點為98℃的淡黃色晶體(產率約80％)。
分子式C10H9NO4，分子量-207.05
物理和化學性質形態黃色晶體溶解性＜溶於乙醇、丙酮、苯、甲醇、乙腈、氯仿和DMSO中-幾乎不溶於水熔點94-98℃(從50％乙醇中結晶的產物約為96-98℃)pH值(在50％v/v乙醇中)接近中性比旋光無光學活性，但有兩個立體異構體穩定性高於200℃時變黑純度質譜分析(MS)表明，分子量為303.4和331.4的雜質為主要雜質紅外光譜1.芳環—大於3000波數及締合芳烴的1470-1630區域2.β-甲基苯乙烯—苯乙烯上的加成基團1442，脂族碳C-+900-1000峰3.硝基在較低波數，如747、673，β-硝基苯乙烯的波數為15204.芳香醚基團-1312(1258)、1138、1030，然而，紅外光譜還給出了該化合物的指紋區(供參考)。為了消除雜質峰的影響，測定了重結晶物質的指紋區。
質譜分子量為303.4和331.4的雜質確認主要物質分子量為207.1NMR譜圖-氫NMR譜(200MHz)顯示芳香環有3個保留的H，3H屬於CH3部分，另外一個接在側鏈上，2H是另一環的一部分。
-碳NMR譜(50MHz)顯示-CH3、CH-、-CH2(作為亞甲基二氧)-化學位移值支持給出的結構式，採用這種合成方法更容易得到E-立體異構體，而不是Z-立體異構體。顯示有強的吸電子基團(NO2)。
紫外/可見光譜重結晶物質在250-270nm和360-370nm處有吸收峰(寬峰)，在210nm以下有強吸收峰。
實施例4 化合物(2)的製備方法採用上述實施例1中所述的方法2製備化合物(2)。反應式如下。
用新鮮蒸餾的乙二胺NH2-CH2-CH2-NH2作催化劑，使3，4-亞甲基二氧苯甲醛與硝基甲烷縮合。該反應在乙醇中進行，反應在室溫下避光進行5天。過濾分離得到的晶體，用冷乙醇衝洗。在空氣中乾燥後，產率為80％，熔點為158-159℃，經過重結晶後，熔點為162-163℃。化合物(2)不溶於水，溶於丙酮、乙醇、乙酸及大部分有機溶劑。
實施例5 抗菌活性本文所述試驗中，採用館藏的病原體菌株(用「M」指代)和選自病理材料的菌株(用「B」指代)，所述館藏的病原體菌株來自Microbiologychair of the Military Medical Academy博物館，所述選自病理材料的菌株來自患者，並且不超過三次實驗室傳代。對於每種類型的病原體採用相應的最佳的營養介質。至於注入方法，是將化合物(1)和(2)以0.03％-2.0％的劑量加入到固體營養介質中。採用與檢測抗生素敏感性的標準方法相類似的瓊脂擴散評估法。
瓊脂擴散評估法的進行如下所述。
製備肉腖瓊脂，然後注入濃度為0.01-2.0％的試驗化合物。將介質倒入培養皿中，靜置。當採用待檢微生物接種瓊脂後，立即截取直徑為10mm的瓊脂棒，放在含有同樣介質的培養皿表面上(每個培養物至少截取6個棒)。在37℃下孵育一天後，檢測瓊脂棒周圍培養物的生長受到抑制的區域的直徑。根據測試對抗生素的敏感性的官方標準對結果進行評價。直徑≤20mm對應於穩定的培養物，直徑為21-28mm對應於中等穩定性，直徑≥29mm對應於敏感性。
與此類似，根據俄羅斯監督局對引進新藥和醫療方法(RussianSupervisory Authority for the Introduction of New MedicinalSubstances and Medical Technology)的官方規程(圓盤法(discmethod))，檢驗病原體對15種抗生素的敏感性。
為了評價其可能的總體性能範圍，採用了數個病原體的類型和菌株，以便能夠揭示這些菌株和類型對試驗物質的敏感性的極限。
下面的表1為濃度為1.0％的化合物(1)的實驗結果，化合物(1)在該濃度下抑制了5×105-5×107個生物體/ml的繁殖，表1還顯示了採用以下15種抗生素的敏感性試驗結果作為對比。
1青黴素，2氨苄青黴素3慶大黴素4羧苄青黴素5卡那黴素6林可黴素7氯黴素(levomicethin)8苯唑青黴素9多粘菌素10利福平11瑞斯託黴素12鏈黴素13四環素14紅黴素15頭孢菌素。
表1


注+敏感性菌株±中度敏感菌株-穩定菌株下表2是採用上述瓊脂擴散法得到的某些微生物對化合物(1)的敏感性的結果。
表3

實施例6 抗菌實驗採用瓊脂擴散法檢驗化合物(1)的抗菌活性。
由於該化合物的溶解性很小，因此不能在液相中進行研究。為此，在肉腖瓊脂上製備含0.5％的試驗化合物的初始母飽和體。將該母飽和體在水浴中再生為液態，通過加入瓊脂基，從該母飽和體得到連續的雙重稀釋液。由此得到了化合物濃度分別為0.5％、0.25％、0.12％、0.06％、0.03％和0.015％的稀釋液，將該稀釋液倒入培養皿中，在該培養皿上使6種細菌和兩種真菌的試驗培養物接種。
使用了以下的試驗培養物1)金黃色葡萄球菌株674，從患者分離得到，對慶大黴素、苯唑青黴素、四環素、紅黴素、頭孢菌素敏感，對鏈黴素輕微敏感。
2)糞腸球菌館藏菌株，對氨苄青黴素、利福平和鏈黴素敏感。
3)肺炎克雷白菌株312，從患者分離得到，對慶大黴素和多粘菌素敏感。
4)鼠傷寒沙門館藏菌株727，對氨苄青黴素、慶大黴素、羧苄青黴素、卡那黴素、多粘菌素和頭孢菌素敏感。
從表7中可以看出，與未成核樹脂相比，所有的成核樹脂對於吹塑薄膜都更有效得多。此外，NA-11對於給定量的成核劑/澄清劑添加劑比NA-21或磨製的(Millad)3988更有效得多。使用ADK NA-11不僅可以製造質量更好的薄膜，此外，與其它成核劑/澄清劑添加劑相比，使用NA-11還可以降低實施本發明的成本。因此，ADK NA-11及其化學衍生物是本發明中使用的最優選的成核劑/澄清劑添加劑。
此外，表7的數據表明，隨著膜厚度增加，NA-11優於其它成核劑/澄清劑添加劑的優點就變得更加明顯。儘管不希望使本發明受限於任何特定理論，但是這種優點被認為是由NA-11相對於其它成核劑/澄清劑添加劑較快的結晶速率產生的。此外，數據傾向於表明，在製造本發明的薄膜時，熔體流動速率約為8克/10分鐘的樹脂優於熔體流動速率為10至11克/10分鐘的類似樹脂。
表7的薄膜的快速差示掃描量熱分析按照上述程序使用快速DSC掃描以200℃/分鐘的速率測試表7的實施例1a、2、3、5和8的薄膜。下列實施例和圖8-10對應於表7的薄膜樣品。
實施例1a、2、3、5和8的薄膜樣品的結晶起始溫度值與結晶半表5化合物在瓊脂擴散試驗中生長延緩的結果

在同樣的濃度下，化合物(1)可以抑制耐氨苄青黴素的葡萄球菌和對該抗生素敏感的腸球菌的生長。對於其他病原體和製劑可以觀察到類似的差別。
化合物(1)抗結核桿菌(TB)的效果用10％的正常馬血清，通過在合成液體介質(SOTON)中連續雙重稀釋的標準方法檢驗抗TB效果。在吐溫80中製備該溶液。
試驗培養物為對抗結核桿菌的藥物敏感的結核分枝桿菌(Mycobacttub.)H.37RV。
將分枝桿菌懸浮液(密度5×107個細胞/ml)灑在特殊的液體介質(Vischnevsky，B.I.)上。
在37℃下孵育10-14天後計算結果。MIC(完全抑制了結核分枝桿菌)結果見下表6。
表6

只有化合物(1)的MIC與乙胺丁醇/異煙肼的MIC接近。
實施例7 抗原生動物活性還研究了化合物(1)和(2)對毛滴蟲的作用。採用從患者分離出的陰道毛滴蟲。在37℃、pH為5.8-6.5的介質199中培養這些毛滴蟲，所述介質199含5.0％的天然胎牛血清、碳水化合物和用來抑制伴生菌群的抗生素。在培養試管中的介質表面塗上凡士林。實驗樣本中所含的試驗化合物的濃度為0.3％。
研究了7個樣本，樣本中含有遊動的寄生蟲，數量為1.0cm3中有5-8個細胞。在對照試驗中，培養的寄生蟲可以成功地經過3-4次傳代(每次傳代5-6天)。相反，在任何情況下，在含有試驗化合物的介質中的都不能培養遊動的寄生蟲。在試驗化合物存在的情況下，僅僅經一次傳代，就不能繁殖遊動的寄生蟲。
實施例8 體內抗菌活性通過對腹膜內或鼻腔內感染了副結核棒桿菌(Corynebacteriumparatuberculosis)的小鼠進行體內實驗，確定該化合物的治療和預防效果。
通過腹膜內、肌肉或口服施用化合物(1)和(2)，在不同於感染日的時期施用＜20％LD50/0.2的劑量，即感染前2天和1天(記為2，1)、感染當日(記為0)以及感染後的1、2、3天等(記為+1、+2、+3等)。
檢查每天的死亡率，計算出累計變量，在此基礎上根據下式得到製劑的性能結果AI＝[(B-A)∶B]×100其中AI＝製劑的活性指數(％)，A＝實驗組的累計死亡率，B＝對照組的累計死亡率試驗結果見下表7，結果表明，所試驗的化合物(1)和(2)對感染了副結核棒桿菌的小鼠表現出治療和預防活性。
對於肌內給藥，用動物死亡率的降低來表示臨床預防效果，該預防效果為52.53％。對沙門氏菌病的臨床效果在50.0-20.0％的範圍內變化。

表8

注*1hR＝100倫琴結果表明，與對照組相比，在所有輻射劑量下，預防性地施用試驗化合物後都可以顯著降低受輻射動物的死亡率。FCD(LD50對照)＝1.39-1.43，這表明試驗化合物具有強的防輻射作用，其性能不遜於文獻報導的介質。
實施例10 感染傷口的治療人志願者的皮膚傷口被鏈球菌和葡萄球菌感染後，用含有0.1％的化合物(1)和(2)的軟膏處理傷口，所述軟膏基質是由凡士林、綿羊油和亞碸組成。施用0.1％的軟膏3天即徹底清除了傷口的膿，隨後傷口癒合。
治療3例被真菌大面積感染的皮膚，真菌的類型未經鑑定。每天用0.1％的軟膏擦拭傷口兩次。一周內皮膚上不再生長真菌。
實施例11 藥代動力學儘管還沒有對本發明的化合物的藥代動力學進行詳細研究，但經腹膜和胃腸道對小鼠施用化合物(1)和(2)的試驗已經證實，該化合物在血液中的生物活性濃度可以維持24小時以上。
實施例12 毒性試驗對小鼠經胃腸道給藥時的平均致死劑量為1500毫克/千克體重；而經腹膜給藥時，平均致死劑量為575毫克/千克體重。因此，本發明的化合物的毒性較小。
實施例13 化合物(1)的抗菌活性和溶解性化合物(1)相對地不溶於水，但在10％的DMSO中的溶解度為1mg/mL(0.1％)，在10％的乙醇中的溶解度為2mg/ml，在10％的丙酮中的溶解度為2mg/mL。
在5％的溶劑中可檢測到的最高濃度是512μg/ml，或者在2.5％的溶劑中可檢測到的最高濃度是256μg/ml。在殺滅微生物的試驗中不需要專門進行化學中和，稀釋就足以使殘留活性中和。
試驗中選擇DMSO作溶劑，因為它對檢驗菌株的毒性最小。
當化合物(1)與乙醇配製時，其對大腸埃希氏菌的活性至少提高8倍，化合物(1)在2.5％的DMSO中的MIC為＞512μg/ml，而其在0.06％的乙醇中的MIC為128μg/ml。乙醇濃度大於2.5％時對大腸埃希氏菌有毒性。
實施例14 化合物(1)的抗菌活性NCCLS-USA標準方法-肉湯微量稀釋法(或大量稀釋法)(Mueller-Hinton)。
接種體1-4×104cfu(菌落形成單元)(或-4×105cfu)。環丙沙星試驗對照。加入氯己定值以便對比消毒和殺菌活性。
除非另有說明，將最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)作為在35℃、24小時有氧條件下的3log減少率(殺死99.9％)。經過48小時滴定沒有顯著差異。
結果如表9所示。
結果小結對於作為代表性選擇的革蘭氏陽性菌或陰性菌，化合物(1)在可接受的體外濃度範圍內具有殺菌活性，是具有較寬殺傷範圍的抗菌藥。化合物(1)對抵抗具有臨床重要意義的喜氧革蘭氏陽性或陰性球菌和喜氧革蘭陽性桿菌普遍有效。
耐藥性革蘭氏陽性球菌的感染臨床分離的金黃色葡萄球菌和糞腸球菌(具有多種抗生素耐藥性)與標準菌株一樣易受感染。雖然在低濃度的目前的治療藥物條件下沒有活性，但有可能採用化合物(1)作為治療手段，來對抗對目前選用的藥物沒有響應的多耐藥性葡萄球菌和腸球菌。
厭氧感染化合物(1)對有臨床重要意義的產氣莢膜梭菌、艱難梭菌和脆弱擬桿菌具有活性。艱難梭菌可以引起住院患者的小腸結腸炎，目前選用藥物萬古黴素進行治療。使用萬古黴素的潛在問題是會產生耐藥性。因此作為對萬古黴素的替代品，用於治療艱難梭菌引起的小腸結腸炎的口服藥具有市場前景。
厭氧感染通常是一種或多種厭氧菌與兼性細菌引起的混合感染，所述兼性細菌通常是腸革蘭氏陰性桿菌。最常見的厭氧病原體是艱難梭菌和脆弱擬桿菌。目前使用甲硝唑與其他抗菌藥結合的治療方法通常是有效的。由於化合物(1)對喜氧和厭氧菌具有廣譜活性，所以可用該化合物來治療此類感染。
腸道感染化合物(1)對空腸彎曲桿菌具有非常高的活性。空腸彎曲菌屬目前在全世界是腸道感染的最主要的原因，由於腸道感染對某些患者的嚴重性，而且有可能被感染而發展成為格-巴二氏症候群(Guillain-Barresyndrome，嚴重的中樞神經系統(CNS)疾病)，因此需要進行治療。
化合物(1)對腸道革蘭氏陰性菌的對抗性可能源於其溶解性及滲透細胞的能力。已經有成功治療動物的頑固的腸道感染以及沙門氏菌感染的例證。
外陰陰道炎化合物(1)對淋病奈瑟球菌具有活性。外陰陰道炎由白色念珠菌、淋病奈瑟球菌、沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis)和陰道毛滴蟲引起(是分別引起，不是共同感染)。化合物(1)對其中的兩種具有活性。
配製化合物(1)使之達到較大的溶解度(因此可能會有較大的吸收)可以提高其在體內的活性並改善其分布。
接種物約5×104菌絲碎片/ml(血球計數法)。咪康唑對照。
在30℃、有氧條件下，對酵母菌2、7和10天，對絲狀真菌4、7、和14天的最小抑菌濃度(MIC)和最小抗真菌濃度(MFC)(2log減少率-99％殺死)。
結果列在表10中。
結果小結化合物(1)在相對低的濃度下對大部分有臨床重要意義的酵母菌和絲狀真菌具有抗真菌作用(表10)。
皮膚真菌感染化合物(1)對引起人體和動物的皮膚、毛髮以及指甲感染的3種主要真菌具有良好的活性。表面真菌感染是全世界最普遍的真菌感染，其治療時間很長，需數個月(指甲感染需要幾年)。使用抗真菌洗液或乳膏進行表面治療的療效很有限。目前的治療雖然成本低，但療效不好，而且復發率高。優選採取口服的全身性藥物(特比奈芬和伊曲康唑)治療缺乏抵抗力的患者的表面感染和指甲感染。
實施例16 化合物(1)的殺孢子的活性枯草芽孢桿菌內生孢子煙麴黴無性外生孢子檢驗在水和吐溫20中達24小時的化合物(1)的殺孢子活性。
512μg/ml的化合物(1)在24小時內不能殺死枯草芽孢桿菌內生孢子。
512μg/ml的化合物(1)在24小時內可以殺死煙麴黴無性外生孢子，但在6小時內不能。
吸入麴黴屬孢子是主要的傳播機理。抗孢子活性對於防止缺乏抵抗力的個體患病非常重要。由於孢子必須通過發芽而傳染，但其療效最終是決定於對植物形式的真菌的活性。
實施例17 化合物(1)的耐藥性的產生細菌菌株和真菌菌株在低於抑制濃度的化合物(1)中連續暴露12個星期，檢測發現MIC升高了，這表明產生了抗藥機制。每周的傳代培養中使用大量不同的接種物，因此抑制濃度每周均有變化。在暴露開始和結束時測定標準MIC。若標準化的MIC的變化大於4倍，則表明耐藥性增強，或每周MIC有增大趨勢。已知所選用的菌種很容易對許多抗菌素產生耐藥性，這是臨床上的一個主要問題。
已知許多菌種和白色念珠菌對當前的很多藥物會產生耐藥性，但當它們在化合物(1)中連續暴露12周後沒有產生耐藥性(表11)。仔細觀察菌株的微觀和宏觀的異常變化。普通變形菌喪失了群遊能力，表明對鞭毛有影響。其他菌株表現正常。紅酵母菌和另外3種黴菌的試驗沒有完成。化合物(1)的明顯優點是沒有使這些菌株產生耐藥性。
表11在MHB中低於抑制濃度的化合物(1)中連續暴露12個星期後，細菌菌株和真菌菌株的MIC(μg/ml)升高情況。

實施例17 化合物(1)在血液存在下的抗菌活性在血漿和全血(馬)存在的條件下，用大量稀釋法測定化合物(1)和環丙沙星在Mueller Hinton液體培養基中48小時的活性。
化合物(1)的活性在10％的血漿存在下似乎相對不受影響，而在5％全血存在時活性較高。這些藥物在血液存在下的抑制活性的稍顯改善有時是與抗菌劑在一起時發生的，這可能是由於血液中天然存在的抗菌因子造成的。進一步提高血漿和全血濃度後，如表13所示，化合物(1)對金黃色葡萄球菌的抗菌活性降低了。在10％血漿和全血存在下，環丙沙星對金黃色葡萄球菌的抗菌活性分別下降4倍和2倍。
表2

注#敏感的+中度敏感的-穩定的表3為病原真菌對化合物(1)的敏感性的實驗結果。
實施例20 殺死率將測試菌種植入化合物(1)水溶液，立即取樣，並在1、2、4、6和9小時後分別取樣。由MHA(35℃，48小時)上的活菌計數來估計存活量。
測定殺死量用log減少率因子來表示活菌數量(log)的降低。
(例如，1log減少率＝90％被殺死，2log＝99％被殺死，3log＝99.9％被殺死等)化合物(1)僅對白色念珠菌表現出快速殺傷力，512μg/ml時在2小時內的減少率高於99.999％，而256μg/ml時在4小時內可以達到高於99.999％的減少率。
對細菌的殺死速度較慢。512μg/ml時在2小時內對枯草芽孢桿菌的殺死率為99.99％，而256μg/ml時在9小時內對金黃色葡萄球菌的殺死率可以達到99.99％。
沒有對環丙沙星進行試驗。
表14化合物(1)在6或9小時內的log減少率因子

實施例21 化合物(1)在大鼠中的劑量範圍試驗該實施例的目的是確定大鼠口服單劑量後，大鼠中化合物(1)的吸收和血液水平。
用二氧化碳給大鼠施行無痛致死。
記錄所有病理狀態，切除心臟、肺、肝、腎、胃、脾、十二指腸以及結腸樣本(10％福馬林)，作組織學檢驗。
實施例22 化合物(1)的血液水平生物鑑定由於化合物(1)與血液蛋白和瓊脂之間具有強的結合力，所以在這種結合力造成的幹擾下，無法對血液中的化合物(1)水平進行生物鑑定。
瓊脂擴散不可能進行化合物(1)的瓊脂擴散檢驗，因為化合物(1)與瓊脂之間結合力很強，以致在1至512μg/ml的任一濃度下，都沒有形成對易感菌株金黃色葡萄球菌或釀膿鏈球菌的抑制區域。進行了孔板擴散和平板擴散檢驗。
肉湯稀釋液在MHB中稀釋血清，不可能用少量釀膿鏈球菌接種物(被MHB中的1μg/ml化合物(1)抑制)進行試驗，因為其在高濃度下與血漿強結合會產生顯著的前帶(prozone)。
紫外光譜檢測對於單個大鼠試樣的檢測，血清量不足。
因此取治療組和對照組的試樣，得到化合物(1)對每一治療組的平均水平。
試驗方法將化合物(1)用甲苯從血清中萃取(2次)出來，在370nm處檢測吸光率(日立U2000)。還檢驗了採用在50％甲醇/水(v/v)中的100μg/ml的化合物(1)的峰形(spiked)對照和未處理對照。
血液水平從胃腸道吸收的化合物(1)非常少，大約是到達血液的口服劑量的2％。血液水平隨著劑量水平增大而增加。8小時的水平一般高於4小時的水平。4小時和8小時的水平之間的微小差別說明吸收慢。
表15

實施例23 化合物(1)的抗菌活性譜抗真菌活性絲狀真菌NCCLS-USA肉湯大量稀釋法(RPMI介質)—試行。接種物1-4×105cfu。咪康唑對照。該檢驗用於評價初始活性譜。
採用新提出的測試真菌M38-P NCCLS-USA標準微量稀釋法，重複檢驗先前採用NCCLS-USA肉湯大量稀釋法檢驗過的絲狀真菌的MIC和MFC。
在不同日平行測試2或3次得到結果。
對於所有先前檢驗過的真菌，檢驗結果與先前使用舊方法得到的檢驗結果沒有明顯區別。一些檢驗中用兩性黴素B代替咪康唑作為對照。
酵母菌採用官方標準NCCLS-M27-A肉湯大量稀釋法檢驗酵母菌的抗真菌易感性。
還採用了用於絲狀真菌的M38-P微量稀釋法。
在35℃下，測定48小時最小抑菌濃度(MIC)和最小殺真菌濃度(MFC-2log減少率-99％殺死)。用每種方法在不同日平行測試兩次或三次作為結果。兩種方法得到的結果沒有顯著區別。據報導，M38-P僅用於酵母菌和絲狀真菌。
表16化合物(1)和兩性黴素B對具有臨床重要意義的真菌的MIC/MFC(μg/ml)-M38-P法對假結核病的預防效果為50.0％。
表7以AI評估化合物的活性等級

實施例9 輻射防護活性用體重為18-20g的雄性白鼠檢測待檢化合物(1)和(2)的輻射防護性能。
劑量2、4、6、8、10、15、20Gr(1hR＝100倫琴)。
觀察期25天。
報告方法動態死亡率，累計死亡率和劑量的實際變化(FactualChanges of Dosage；FCD)的計算。
給藥進度安排(Schedule of introduction)以50mg/kg的劑量給白鼠施用0.2mL。
第一組對照組，第二組直到輻射前2天和1天。
表8為待檢化合物的防輻射性能的試驗結果。
表9化合物(1)、環丙沙星和氯己定對多種具有臨床重要意義的細菌的MIC/MBC(μg/ml)


彎曲桿菌屬(Campylobacter)用化合物(1)對從人體分離的多種彎曲桿菌屬菌株進行試驗。
表18化合物(1)的MIC/MMC(μg/mL)，採用NCCLS-M7 A5大量稀釋法，

在世界範圍內，彎曲桿菌屬細菌是引起腸胃炎(血性腹瀉、腹痛、嘔吐、頭痛、發熱、持續約1周)的最常見的原因。後遺症是關節炎和格-巴二氏症候群(0.1％)。這類病主要由食用家禽所致。在美國每年約有250萬個病例。99％的病例由空腸彎曲桿菌所引發。在缺乏抵抗力的患者中，其表現從亞臨床到急性各不相同。患有這些病時通常僅採用液體置換法而不作治療，如果病情嚴重或危及生命，則採用抗生素(紅黴素、四環素或氟喹諾酮)治療。
表1.FGL肽的不同製劑對通過撤回高鉀或加入6-羥基多巴胺(6-OHDA)或(25-35)β-澱粉樣蛋白肽片段而被誘導經受細胞死亡的大鼠CGN、DN和HN的原代培養物中神經元存活的影響總結。

a將沒有FGL處理被誘導經受細胞死亡的培養物中的存活指定為100％實施例24 對化合物(1)的耐藥性的產生從經過12周耐藥性試驗的菌株中選擇具有耐藥性的菌株，採用新的微量稀釋法與母株一起同時進行重複試驗。
表20在MHB中的低於抑制濃度的化合物(1)裡連續暴露12周後，真菌菌株MIC的變化(μg/mL)

經過重複試驗，真菌的MIC表現出高達4倍的差異。MIC的顯著增加為大於等於8倍。
測試的絲狀黴菌株沒有產生顯著的耐藥性。
實施例25 乙醇中的製劑對活性的影響對於白色念珠菌(Candida albicans)、鼠傷寒沙門菌(SalmonellaTyphimurium)和大腸埃希氏菌(Escherichia coli)，採用大量稀釋法和微量稀釋法比較了化合物(1)的DMSO和乙醇製劑對化合物(1)的MIC的影響。
使用前將乙醇中的原液靜置48小時以便提高其溶解性。化合物(1)在乙醇中的溶解性不如在DMSO中的溶解性。將乙醇和DMSO的濃度保持恆定在2％，並與原液正常稀釋時溶劑濃度的下降相比較。兩種方法沒有差別。在DMSO的恆定和下降水平之間MIC沒有差異。在恆定的2％乙醇存在下，僅有大腸埃希氏菌對乙醇的易感性增強了。
表21微量稀釋法中溶劑對化合物(1)的MIC(μg/ml)的影響

原本為選擇藥物的適當溶劑而對溶劑進行測試時，已經注意到了乙醇對大腸埃希氏菌的協同效應。乙醇對葡萄球菌、沙門氏菌或念珠菌沒有增強作用。DMSO是體外試驗中藥物的較好的溶劑。乙醇將被用於動物研究。
實施例26 貯存時化合物(1)溶液的穩定性在室溫(RT約18-21℃)、4℃和-20℃下將在水+5％DMSO中的濃度為512μg/ml的化合物(1)的原液貯存達12周，每隔2周測定對於枯草芽孢桿菌的MIC，從而測試其效力。
表22每隔2周測定512μg/ml的化合物(1)的原液對枯草芽孢桿菌(24小時，35℃)的MIC/MBC，從而測試其穩定性

1 8周後溶液從淡黃色變為深黃色。
2 2周後溶液從淡黃色變為深黃色。
化合物(1)很穩定，稀釋液在4℃和-20℃下貯存12周後仍保持效力。與抗生素工作液相比，室溫下貯存6周後效力下降2倍是很低的。它也在對細菌的MIC測試的允許變化範圍(2倍)內。沒有試驗對照抗真菌劑。
實施例27 化合物(1)在體外對人血紅細胞中的人瘧疾寄生蟲惡性瘧原蟲生長的影響本實施例的目的是定量研究化合物(1)在體外對人血紅細胞中的人瘧疾寄生蟲惡性瘧原蟲(Plasmodium falciparum)的生長的影響。
方法瘧疾寄生蟲3D7特別適合作為本實驗的惡性瘧原蟲的體外培養品系。這種寄生蟲在人血紅細胞內經過了多個生長和複製重複周期。每一個完整的周期為48小時，周期從環狀體幼蟲開始到分節的裂殖體結束，環狀體在周期開始的最初24小時內經由著色的原蟲發育成熟，分節的裂殖體破裂會釋放出有感染性的裂殖子，裂殖子迅速侵入血紅細胞。新入侵的裂殖子變為環狀體，於是繼續進入下一周期。
寄生蟲培養和生長抑制分析採用常規方法，在新採集的人血紅細胞中對惡性瘧原蟲進行體外同步培養。為了進行入侵分析，將含有同步化的著色的成熟營養子的血紅細胞純化，然後在新鮮的人的血紅細胞中再懸浮，使每100個血紅細胞中約有2個被寄生感染(2％的寄生蟲血症)。將新鮮的培養基加入，得到最終的血紅細胞濃度為2×108個紅細胞/ml。
在37℃及低氧張力(1％O2、3％CO2、96％N2)的氣氛中，孵育含有試驗化合物、僅含有載體(此時為乙醇)或PBS(對照)的等分血紅細胞懸浮液。立即(時間＝0)製作血塗片，然後先後經過24、48和72小時的培養。用吉姆薩染液(Giemsa)在pH為7.2下染色後，通過鏡檢來定量分析每一塗片的寄生蟲血症和寄生蟲成熟的階段。這樣可以定量分析侵入、寄生蟲的成長和隨後的再侵入。在每個取樣時間點上，用新鮮的介質完全置換所有樣品中的培養基(±化合物/載體)。
測試各自含有10％乙醇的、化合物(1)的濃度分別為100、400和1000μg/ml的水溶液。使用前將原液在4℃下保存。分析時，將每種溶液進一步在寄生蟲的完全培養基(pH＝7.2)中以1∶40的比例稀釋，從而得到所需的工作濃度(5、10和25μg/ml)，然後過濾除菌(0.22μm)，再加入到被寄生的血紅細胞懸浮液中。在整個分析過程中將原液在4℃下保存，需要時在寄生蟲的培養基中適當稀釋。應當指出，濃度為1000μg/ml時，該化合物甚至在加熱到37℃和劇烈渦旋下也不能完全溶解。於是，在25μg/ml的推定濃度下進行的試驗事實上是在更低的有效濃度下進行的。
結果在最終濃度為5、10和25μg/ml下測試了化合物(1)對寄生蟲生長的影響。結果如圖2所示。檢測發現，所有試驗的藥物濃度都對寄生蟲的生長和複製有濃度依賴性的抑制作用，經過72小時的培養後，試驗的最大濃度(25μg/ml)下的抑制作用最大。單獨使用乙醇時，在0.25％的最終濃度下對於寄生蟲的生長沒有明顯影響。沒有檢測到任何濃度的試驗化合物對血紅細胞的形態有負面影響。
在25μg/ml下沒有觀察到寄生蟲，在10μg/ml下僅觀察到了很少數寄生蟲，這表明該化合物實際上殺死了寄生蟲。
很明顯，為了清楚和便於理解，雖然在一定程度上對本發明進行了詳細描述，但是只要不超越本說明書所公開的發明思想的範圍，本領域的技術人員可以對本文所描述的實施方式和方法作各種修改和變化。
下面是參考文獻，其內容經引用併入本發明。
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權利要求
1.治療和/或預防微生物感染的方法，所述方法包括施用有效量的式I化合物及其藥用鹽或其衍生物、其前藥、其互變異構體和/或其同分異構體的步驟，所述式I化合物為 其中，X和Y是相同或不同的雜原子； 是由雜原子X和Y決定的單鍵或雙鍵；R1至R5是選自氫或無害的取代基的相同或不同的基團；和R6和R7是選自氫或無害的取代基的相同或不同的基團，或者當存在雙鍵時，R6和R7中的一個基團不存在。
2.如權利要求1所述的方法，其中所述微生物感染是細菌感染、真菌感染、酵母菌感染、原生動物感染或病毒性感染。
3.如權利要求1或2所述的方法，其中所述的細菌感染是由革蘭氏陽性菌或革蘭氏陰性菌引起的感染。
4.如權利要求3所述的方法，其中的革蘭氏陽性菌或革蘭氏陰性菌是金黃色葡萄球菌、糞腸球菌、肺炎克雷白菌、鼠傷寒沙門菌或假結核病、不動桿菌屬、銅綠假單胞菌、產氣莢膜梭菌、艱難梭菌、空腸彎曲桿菌或脆弱擬桿菌。
5.如權利要求1或2所述的方法，其中所述的真菌感染或酵母菌感染是指間毛癬菌、煙麴黴或白色念珠菌。
6.如權利要求1或2所述的方法，其中所述原生動物感染是惡性瘧原蟲或陰道毛滴蟲。
7.如權利要求1到6任一項所述的方法，其中所述的微生物感染是細菌或真菌傷口感染、黏膜感染、腸感染、潰爛、肺炎、沙眼、鳥疫、膣炎或沙門菌病。
8.如權利要求1到7任一項所述的方法，其中X和Y是選自O和N的相同或不同的原子。
9.如權利要求8所述的方法，其中X和Y同時為O。
10.如權利要求1到9任一項所述的方法，其中R1和R2是選自氫、羥基、滷素或選擇性地具有取代基的C1-6烷基的相同或不同的基團。
11.如權利要求1到10任一項所述的方法，其中R3至R5是選自氫、羥基、滷素、硝基、C1-6烷氧基或選擇性地具有取代基的C1-6烷基的相同或不同的基團。
12.如權利要求10或11所述的方法，其中所述的滷素是氯或溴。
13.如權利要求1到12任一項所述的方法，其中式I化合物是E同分異構體形式。
14.如權利要求1到13任一項所述的方法，其中X、Y、 R6和R7如權利要求1所定義；R1和R2是選自氫、羥基、Cl、Br和C1-4烷基的相同或不同的基團；R3至R5是選自氫、羥基、Cl、Br、硝基、C1-4烷氧基或C1-4烷基的相同或不同的基團。
15.如權利要求2到14任一項所述的方法，其中X和Y是O，R1是甲基，R2和R3是氫(3，4-亞甲基二氧-β-甲基-β-硝基苯乙烯) X和Y是O，R1至R3是氫(3，4-亞甲基二氧-β-硝基苯乙烯) X是N，Y是NH，R1是甲基，R2和R3是氫(苯並咪唑-5-β-硝基丙烯) X是N，Y是NH，R1是氫，R2是甲基，R3不存在(2-甲基苯並咪唑-5-β-硝基乙烯) X是O，Y是N，R1和R2是氫，R3不存在(苯並噁唑-5-β-硝基乙烯) X是N，Y是O，R1和R2是甲基，R3不存在(2-甲基苯並噁唑-5-β-硝基丙烯)
16.權利要求1中所定義的式I化合物在製備治療和/或預防微生物感染的藥劑中的應用。
17.權利要求1中所定義的式I化合物在治療和/或預防微生物感染中的應用。
18..保護受試者不受輻射損傷的方法，所述方法包括給需要使用如權利要求1所定義的式I化合物的受試者施用有效劑量的如權利要求1所定義的式I化合物的步驟。
19.如權利要求18所述的方法，其中所述的輻射是電離輻射。
20.癌放射療法，所述方法包括給需要採用所述療法的受試者施用有效量的如權利要求1所述的式I化合物的步驟，以及使該受試者的腫瘤部位接受放射源照射的步驟。
21.如權利要求1所定義的式I化合物作為抗微生物劑或輻射防護劑的應用。
22.式Ia化合物 其中，X、Y、 和R1至R7如上述式I所定義，附帶條件是，當X和Y均為O且R2至R7均為氫時，則R1不為氫、C1-4烷基或CO2Et，或者當X和Y均為O時，則R1至R7不為氫。
23.製備上述定義的式Ia化合物的方法，所述方法包括使式II化合物與式III化合物縮合的步驟，所述式II化合物為 所述式III化合物為R1R2CHNO2III在所述式II化合物中，X、Y、 和R3至R7如權利要求22的式Ia所定義，在所述式III化合物中，R1和R2如權利要求22的式Ia所定義。
24.如權利要求22所定義的式Ia化合物的製備方法，所述方法包括使式IV化合物與C(NO3)4反應的步驟，所述式IV化合物為 在所述式IV化合物中，X、Y、 和R1至R7如權利要求22的式Ia所定義。
25.如權利要求23或24所述的方法，所述方法在催化劑存在下進行。
26.藥物或獸藥組合物，其含有如權利要求22所定義的式Ia化合物及藥用的或獸藥用的載體。
27.如權利要求26所述的組合物，其中所述藥物或獸藥組合物是局部的、口服的或非腸道的組合物。
28.如權利要求26或27所述的組合物，其中所述的藥用的或獸藥用的載體是有機溶劑。
29.如權利要求28所述的組合物，其中所述有機溶劑是丙酮、苯、乙腈、DMSO或醇。
全文摘要
本發明提供了一種治療和/或預防微生物感染的方法，所述方法包括施用有效量的式(I)的化合物及其藥用鹽或其衍生物、其前藥、其互變異構體和/或同分異構體的步驟，其中，X和Y是相同或不同的雜原子；是由雜原子X和Y決定的單鍵或雙鍵；R
文檔編號C07D263/56GK1863788SQ02812171
公開日2006年11月15日 申請日期2002年6月14日 優先權日2001年6月18日
發明者彼得·普羅科菲耶夫·傑尼先科, 尼古拉·謝爾蓋耶維奇·薩普羅諾夫, 亞歷山大·亞歷山德羅維奇·塔拉先科 申請人:拜歐戴姆有限公司