抗流感病毒化合物及其製備方法和用途的製作方法
2023-05-11 11:01:46
專利名稱：抗流感病毒化合物及其製備方法和用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及有機化學和藥物化學領域，具體而言，本發明涉及一種新的神經氨酸抗流感病毒化合物及其製備方法和用途和含有這些化合物的藥物組合物。
背景技術：
長期以來，人們就知道，許多具有神經氨酸苷酶的微生物和/或動物的主要病原體，並且其中的某些病毒如流感病毒、新城病病毒、家畜疫病毒能夠引發有重大危害的疾病；神經氨酸苷酶活性抑制劑可以防治由神經氨酸苷酶病毒引起的感染；大多數已知的神經氨酸苷酶抑制劑是神經氨酸衍生物或類似物。目前，在全世界範圍內，已經開發成功的神經氨酸抗流感病毒衍生物是由澳大利亞BiotaHolding公司和英國Glaxo-Wellcome研製開發的札那米韋(Zanamivir)(CN1057260A)，和由美國Gilead Sciences和瑞士Roche公司研製開發的泰米弗魯(Tamiflu，Osetamivir)(CN1230946A)。我們在研究了大量神經氨酸酶活性抑制劑化合物的基礎上，找到了新的活性顯著的神經氨酸抗病毒衍生物，因此完成了本發明。
發明目的本發明的目的是提供了一種新的式I化合物和/或其可藥用鹽或溶劑化物 式I化合物結構式其中R可以選自取代或未取代的C1-C8烷基，取代或未取代的C3-C8環烷基，取代或未取代的C1-C8烷氧基，氨基，氰基，取代或未取代的胺基或醯胺基，醯胺基烷基，取代或未取代的腈基，取代或未取代的芳基如取代或未取代的苯基、萘基，取代或未取代的雜芳基如取代或未取代的吡啶基、(氫化)喹啉基、(氫化)異喹啉基、吲哚基、三氮唑基、四氮唑基、噁唑基、噻吩基等，芳烷基，雜芳烷基，巰基，巰基烷基，巰基芳基，烷硫基，芳硫基，芳硫基烷基，這些具體可以帶有取代基；R』可以是取代或未取代的C1-C8烷基，取代或未取代的C3-C8環烷基，取代或未取代的C1-C8烷氧基，取代或未取代的芳基，如取代或未取代的苯基、萘基，取代或未取代的雜芳基，如取代或未取代的吡啶基、(氫化)喹啉基、(氫化)異喹啉基、吲哚基、三氮唑基、四氮唑基、噁唑基、噻吩基等；其前提條件是當R是C1-C8烷基時，R』不是甲基。
本發明的另一目的是提供了一種製備式I化合物和/或其可藥用鹽或溶劑化物的方法。
本發明的另一目的是提供了式I和/或其可藥用鹽或溶劑化物用於抗病毒的用途。
本發明的另一目的是提供了一種含有式I化合物和/或其可藥用鹽或溶劑化物的藥物組合物。
發明詳述本發明中的術語「烷基」是指C1-C8的烷基，包括支鏈或支鏈烷基，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基等；「芳基」是指碳環芳烴，如苯基、萘基、蒽基或菲基等；「雜芳基」是指含有一個或者多個選自N、O、S等雜原子作為環原子的芳基，如吡啶基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、(氫化)喹啉基、(氫化)異喹啉基、吲哚基、三氮唑基、四氮唑基、噁唑基等；「胺基」包括甲胺基、乙胺基、丙胺基、二甲胺基、二乙胺基等；「醯胺基」包括甲醯胺基、乙醯胺基、丙醯胺基、丁醯胺基等。
「取代或未取代」是指基團可以未被取代或者被取代，取代基可以是滷素、氨基、硝基、巰基、氰基、羥基、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、C1-C8醯基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳烷基、胺基、烷氧羰基胺基、芳氧羰基胺基、(取代的)醯胺基、巰基烷基、烷硫基、芳硫基、芳硫基烷基。
本發明式I化合物中，4R，5S與3R的構型也構成本發明化合物的特徵。
本發明優選的式I化合物和/或其可藥用鹽或溶劑化物是其中R選自C1-C8烷基，醯胺基烷基，取代或未取代的芳基如取代或未取代的苯基、萘基，取代或未取代的雜芳基如取代或未取代的吡啶基、(氫化)喹啉基、(氫化)異喹啉基、吲哚基等，芳烷基，雜芳烷基，巰基烷基，巰基芳基，烷硫基，芳硫基，芳硫基烷基等；其中R』選自甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、異戊基；其前提條件是當R是C1-C8烷基時，R』不是甲基。
式(I)化合物的藥學上可接受的鹽包括從藥學上可接受的無機和有機酸或鹼得到的鹽。合適的酸的例子有鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、過氯酸、富馬酸、馬來酸、磷酸、乙醇酸、乳酸、水揚酸、琥珀酸、對甲苯磺酸、酒石酸、乙酸、檸檬酸、甲磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、苯磺酸或萘磺酸等。
從適當的鹼得到的鹽包括鹼金屬如鈉或鉀、鹼土金屬如鎂或鈣、銨等得到的鹽。
本發明進一步優選的化合物和/或或其可藥用鹽或溶劑化物是1.(3R，4R，5S)-4，5-環氧-3-(α-喹啉甲醯氧基)-1-環己烯-1-甲酸乙酯；2.(3R，4R，5S)-4，5-環氧-3-(α-氨基-β-苯硫基丙醯氧基)-1-環己烯-1-甲酸乙酯；3.(3R，4R，5S)-4，5-環氧-3-(α-N-乙醯乙醯氧基)-1-環己烯-1-甲酸乙酯；4.(3R，4R，5S)-4，5-環氧-3-(四氮唑乙醯氧基)-1-環己烯-1-甲酸乙酯；5.(3R，4R，5S)-4，5-環氧-3-(β-吲哚乙醯氧基)-1-環己烯-1-甲酸乙酯。
本發明還涉及式I化合物的製備方法，包括將式HS-04化合物與式II化合物反應得到式I化合物 基團R和R』的定義同上。
本發明的式I化合物具有抗病毒活性，尤其是具有抗流感病毒活性。因此，本發明的式I化合物可以作為抗病毒劑，用於治療流感等疾病。因此，本發明的另一方面提供了式I化合物和/或其可藥用鹽或溶劑化物用於製備抗病毒藥物的用途。
本發明還提供了一種抗病毒的藥物組合物，這種組合物還有式I化合物和/或其可藥用鹽或溶劑化物和可藥用輔料，其中可藥用輔料是製藥領域中通常使用的常規輔料，根據常規方法，可以將這種藥物級合物製成片劑、膠囊劑、注射劑、緩釋劑、或控釋劑等。
下面通過製備例和實施例對本發明作進一步說明。應該理解的是，本發明製備例和實施例僅僅是用於說明本發明，而不是對本發明的限制，在本發明的構思前提下對本發明的簡單改進部屬於本發明要求保護的範圍。除非另有說明，本發明中的百分數是重量百分數。
製備例1製備丙酮縮合物及3，4-O-異亞丙基-5-O-(甲磺醯基)-1-環己烯-1-甲酸乙酯 1.取20g喹尼酸(市售，來自義大利)，加80g丙酮，加0.2g對甲苯磺酸，加38g，2，2-二甲氧丙烷，加熱回流2小時，加0.4g 21％的乙醇鈉，真空濃縮，殘餘物加150ml乙酸乙酯和30ml水，振搖，提取，水層再用20ml乙酸乙酯提取，合併有機層，並用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，有機層再真空濃縮，得淺黃色固體，直接用於下步反應。
將上步的產物溶於100ml無水乙醇中，加21％乙醇鈉0.4g，於室溫攪拌2小時，加入0.1g乙酸，真空濃縮，殘餘物中入50ml乙酸乙酯，真空抽乾加20ml乙酸乙酯和20ml正己烷，加熱攪拌至回流狀態，降至室溫，有白色結晶析出，冰箱放置5小時，抽濾，得白色固體。
取上步產物19g，加70ml二氯甲烷，降至0℃，加9g甲烷磺醯氯，再加10g三乙胺，攪拌反應1小時，加10ml水，加稀鹽酸，調PH為5，有機層用水洗滌，真空濃縮，殘餘物加15ml乙酸乙酯，降至-20℃，約2小時，將析出固體抽濾除去，用冷的乙酸乙酯洗滌固體，將濾液真空濃縮，得桔黃色殘餘油狀物20g。
取上步產物10g，加吡啶15ml，二氯甲烷50ml，降至-20℃，滴加6g氯化硫醯，攪拌0.5小時，加3ml乙醇，升至0℃，分別用16％硫酸，水和飽和碳酸氫鈉洗滌，有機層真空濃縮，殘餘物加20ml乙酸乙酯，加2.3g吡咯烷和四-三苯基膦肥，於室溫攪拌反應24小時，加16％硫酸50ml，洗滌有機層通過硅藻土過濾，用50ml乙酸乙酯洗滌，合併有機層，真空濃縮，殘餘物加10ml乙酸乙酯和10ml正己烷，加熱溶解，冰箱冷卻，有白色固體析出，抽濾烘乾，得淺黃色固體4.2g。
製備例2製備中間體二羥基化合物，即(3R，4R，5S)-二羥基-5-甲磺醯氧基-1-環己烯-1-甲酸乙酯
取製備例1丙酮縮合物20g，加300ml，無水乙醇，0.6g對甲苯磺酸，加熱回流2小時，真空濃縮，加300ml乙醇，再回流攪拌4小時，真空濃縮，加200ml乙醚放置，冰箱12小時，有大量固體析出，抽濾，得白色固體二羥基化合物10g，烘乾。
熔點120-122℃；IR 3438cm-1，698cm-1，1343cm-1，1175cm-1，965cm-1；MS[m++Na]303；NMRδ6.92，1H；δ5.00，1H；δ4.5，1H；δ4.2，2H；δ3.9，1H；δ3.1，3H；δ3.0，1H；δ2.5，3H；δ1.3，3H；HPLC96.5％。
製備例3(3R，4R，5S)-4，5-環氧-3-羥基-1-環己烯-1-甲酸乙酯(編號HS-04)的製備 取製備例1得到的化合物10g，加180mlTHF，降至0℃，加5.6ml DBU(1，5-二氮雜二環[5，4，0]+十一烯-5-二環己基碳二亞胺)(市售)，於0℃攪拌的反應3小時，並升至室溫反應5小時，真空濃縮，殘餘物加500ml乙酸乙酯，並加5％檸檬酸100ml提取，洗滌，有機層再用飽和食鹽水洗滌一次，水層用100ml乙酸乙酯及提合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，真空濃縮殘餘物用50％乙醇水溶液重結晶，得淺黃色固體5g(HS-04)。
熔點67-70℃；IR3286cm-1，3180cm-1，1712cm-1，1258cm-1，1087cm-1，745cm-1；MS[M+Na]+207；NMRδ6.7，1H；δ4.5，1H；δ4.2，2H；δ3.5，2H；δ3.0，1H；δ2.5，1H；δ2.0，1H；δ1.3，3H；HPLC94.8％。
實施例1(3R，4R，5S)-4，5-環氧-3-(α-喹啉甲醯氧基)-1-環己烯-1-甲酸乙酯(化合物1，編號HS-05)的製備
取製備例3化合物10g，加入300mlTHF，加少量DMAP(4-二甲氨基吡啶)5g，喹哪啶酸(9g)和DCC(二環己基碳二亞胺)11g於室溫下攪拌反應3-4小時，有大量固體析出，真空濃縮，加500ml乙酸乙酯，硅藻提濾，除去固體，濾液用碳酸氫鈉飽和溶液洗滌兩次，氯化鈉水溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，真空濃縮，殘餘物用乙酸乙酯和正己烷1∶1約50ml重結晶，得淺棕色固體25g(化合物1)。
熔點114-116℃；IR3301cm-1，2932cm-1，1685cm-1，1643cm-1，837cm-1；MS[M+Na]362；NMRδ8.3，1H；δ8.1，1H；δ7.9，1H；δ7.8，2H；δ7.6，1H；δ4.2，1H；δ3.5，1H；δ2.0，3H；δ1.9，2H；δ1.5，2H；δ1.3，3H；HPLC94.5％。
實施例2(3R，4R，5S)-4，5-環氧-3-(α-氨基-β-苯硫基丙醯氧基)-1-環己烯-1-甲酸乙酯(化合物2)的製備 取5g製備例3化合物，加7.5g苄氧甲醯氨基苯丙氨酸(市售)，少量DMAP，300mlTHF(四氫呋喃)攪拌，於室溫下加入5gDCC，攪拌24小時，真空濃縮至幹加300ml乙酸乙酯，攪拌，抽濾濾液用碳酸氫鈉水溶液洗滌，氯化鈉水溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，真空濃縮至50ml，加正己烷至混濁，冰箱放置過夜，有大量固體析出，抽濾得白色固體5g(化合物2)，收率37％。
MS[M++Na]520，[M++K]536；HPLC流動相 甲醇∶水＝7∶3，保留時間15.5分鐘，含量96.2％；IR1697cm-1為羰基吸收峰；NMR7.2-7.4為10個苯環上的氫，6.3為又鍵相連的1個H，5.6為NHCHCO上的2個H，5.1為O-CH2-ph上的2個H，4.2為-S-CH2-上的2個H，3.5為環氧六元環上的4個H，2.5-3.1為OCH2上2個H，1.3為-CH3上3個H。
實施例3(3R，4R，5S)-4，5-環氧-3-(α-N-乙醯乙醯氧基)-1-環己烯-1-甲酸乙酯(化合物3)的製備 製備方法按實施例2進行操作MS[M++Na]306；HPLC流動相甲醇∶水＝7∶3，保留時間3.2分鐘，吸收波長215nm，含量95％；IR1720cm-1為羰基吸收峰NMR6.6為雙鍵上的1個H，6.0為N-H的1個H，5.8為O-CH-HC＝C-H上的1H，4.2為N-CH2-CO上的2個H，4.1為六元環上的2個H，3.5-2.0為OCH3，6元環及O-CH2上7個H，1.2為-CH3上3個H。
實施例4(3R，4R，5S)-4，5-環氧-3-(四氮唑乙醯氧基)-1-環己烯-1-甲酸乙酯(化合物4)的製備
製備方法與實施例1方法相同。
MS[M+Na]317，[M++K]318；HPLC流動相甲醇∶水＝7∶3，保留時間3.2分鐘，吸收波長215nm，含量95％；IR1718cm-1為羰基吸收峰；NMRδ(ppm)6.5為雙鍵1H，5.9為四元環上的1H，5.3為CH3CO上的2H，4.2為六元環上的2H，2.5-3.5為OCH2及六元環上4H，13為Me上3H。
實施例5(3R，4R，5S)-4，5-環氧-3-(β-吲哚乙醯氧基)-1-環己烯-1-甲酸乙酯(化合物5)的製備 製備方法與實施例1方法相同。
MS[M++Na]350；HPLC流動相甲醇∶水＝7∶3，吸收波長215nm，保留時間3-5分鐘，含量93％；IR3347cm-1為苯環碳氫吸收，1697cm-1為羰基吸收；NMRδ(ppm)9.0為N-H上的1個H，7.7-7.0為苯環系統5個H，6.7為雙鍵上1個H，4.2-3.1為六元環上5個H，2.5-1.9為O-CH2上2個H，1.3為甲基上3個H。
實施例7製劑實例HS-05 75克澱粉80克輔料25克180克按製劑常規製成顆粒，分裝成1000個膠囊，每個膠囊含活性成分HS-05 70-80毫克。
藥理試驗本發明的式I化合物具有明顯的抗病毒活性，這些活性可以通過HS-05等藥物體外抗甲3型流感病毒和呼吸道合胞病毒藥效實驗進一步證明。
試驗1本發明式I化合物對MDCK(狗腎細胞)和Hep-2(咽癌上皮細胞)細胞的毒性測定I.試驗材料1.驗證藥物HS-04、HS-05本發明製備例3和實施例1製備的化合物C.A-01綠原酸批號A016162701由ACROS公司提供C.A-02綠原酸批號021208 由南京萊爾生物化工有限公司合成供雙黃連(注射液凍乾粉)0110006 由哈藥集團中藥二廠生產2.陽性對照藥物泰米弗魯(Tamiflu)Roche公司開發批號為020805 由南京萊爾生物化工有限公司合成提供3.病毒甲3型流感病毒(H3N2)源自中國微生物菌種保藏管理中心，批號2002310，由中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所傳代保存提供。
呼吸道合胞病毒(RSV)Long株源自美國ATCC菌種庫，批號990521，由中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所提供。
4.細胞狗腎細胞(MDCK)，由中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所提供。
咽癌上皮細胞(Hep-2)，由中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所提供。
5.培養基及器材均由中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所提供。
II.試驗方法預備試驗
1.HS-05等藥物在MDCK細胞的毒性測定細胞形態變化CPE法MDCK細胞以40萬/ml濃度接種96孔培養板，37℃、5％CO2培養24小時，分別加入驗證藥物和陽性對照藥物，藥物分別稀釋為3000μg/ml～187.5μg/ml，每濃度接種3孔，每孔100μl。同時設正常細胞對照。置37℃、5％CO2培養5～7天。每24小時在倒置顯微鏡下觀察細胞形態變化，記錄細胞形態變化(CPE)以25％以下變化為+，26％～50％變化為++，51％～75％為+++，76％～100％變化為++++。用Reed-Muench法，計算藥物半數中毒濃度(TD50)和最大無毒濃度(TD0)，試驗重複二次。
2.HS-05等藥物對Hep-2細胞的毒性測定細胞形態變化CPE法Hep-5細胞以40萬/ml濃度接種96孔培養板，37℃、5％CO2培養24小時，分別加入驗證藥物和陽性對照藥物，藥物分別稀釋為3000μg/ml～187.5μg/ml，每濃度接種3孔，每孔100μl。同時設正常細胞對照。置37℃、5％CO2培養5～7天。每24小時在倒置顯微鏡下觀察細胞形態變化，記錄細胞形態變化(CPE)以25％以下變化為+，26％～50％變化為++，51％～75％為+++，76％～100％變化為++++。用Reed-Muench法，計算藥物半數中毒濃度(TD50)和最大無毒濃度(TD0)，試驗重複二次。
3.在雞胚和MDCK細胞培養內對甲3型流感病毒的製備和病毒毒力的測定甲3型流感病毒的製備漢防95-359(H3N2)乾燥毒種，用生理鹽水1∶1000稀釋病毒液，接種10日齡雞胚尿囊腔，33℃培養48小時。收穫尿囊液，採用血凝抑制法測定血凝滴度，＞1/320的尿囊液，-70℃保存作為毒種。
在MDCK細胞培養內對甲3型流感病毒病毒毒力的測定採用病毒CPE法MDCK細胞以每毫升40萬濃度接種96孔培養板，37℃、5％CO2培養24小時，加入A3病毒，病毒1∶10～1∶40，稀釋4個濃度，每濃度3孔，每孔100μl。同時設正常細胞對照，置33℃、5％CO2培養5～7天，每24小時在倒置顯微鏡下觀察細胞形態變化，記錄細胞形態變化(CPE)以25％以下變化為+，26％～50％變化為++，51％～75％為+++，76％～100％變化為++++。用Reed-Muench法，計算病毒半數感染濃度TCID50，試驗重複二次。
4.在Hep-2細胞培養內對呼吸道合胞病毒毒力的測定採用病毒CPE法Hep-2細胞以每毫升40萬濃度接種96孔培養板，37℃培養24小時，加入RSV病毒，10倍稀釋10-1～10-7個濃度，每濃度3孔，每孔100μl。設正常細胞對照。37℃培養5～7天。觀察細胞形態CPE，用Reed-Muench法，計算病毒半數感染濃度TCID50，試驗重複二次。
正式試驗5.HS-05等藥物在MDCK細胞培養內對甲3型流感病毒的抑制試驗採用病毒CPE法MDCK細胞以40萬/ml濃度接種96孔培養板，37℃培養24～48小時培養至細胞單層，棄掉培養液，加入A3病毒液1∶30，每孔100μl，33℃吸附3小時，棄掉病毒液，加入驗證藥物HS-04、HS-05、C.A-01、C.A-02、雙黃連，藥物選用對細胞的最大無毒濃度(TD0)二倍稀釋7～10個濃度，每濃度3孔，每孔100μl。陽性對照藥物泰米弗魯藥物選用對細胞的最大無毒濃度(TD0)二倍稀釋7～10個濃度，每濃度3孔，每孔100μl。同時設病毒對照和正常細胞對照，於33℃、5％CO2培養5～7天，每24小時倒置顯微鏡下觀察病毒CPE，至病毒對照細胞病變(CPE)出現「++-++++」時結束試驗，試驗重複3次，計算藥物半數有效濃度(IC50)和最小有效濃度(MIC)及治療指數(TI)。
6.HS-05等藥物在Hep-2細胞培養內對呼吸道合胞病毒的抑制試驗採用病毒CPE法Hep-2細胞以40萬/ml濃度接種96孔培養板，37℃培養24～48小時培養至細胞單層，棄掉培養液，加入RSV病毒100TCID50的病毒液，每孔100μl，37℃吸附1小時，棄掉病毒液，加入驗證藥物HS-04、HS-05、C.A-01、C.A-02、雙黃連，藥物選用對細胞的最大無毒濃度(TD0)二倍稀釋7～10個濃度，每濃度3孔，每孔100μl。陽性對照藥物泰米弗魯藥物選用對細胞的最大無毒濃度(TD0)二倍稀釋7～10個濃度，每濃度3孔，每孔100μl。同時設病毒對照和正常細胞對照，於37℃、5％CO2培養5～7天，每24小時倒置顯微鏡下觀察病毒CPE，至病毒對照細胞病變(CPE)出現「++-++++」時結束試驗，試驗重複3次，計長時期藥物半數有效濃度(IC50)和最小有效濃度(MIC)及治療指數(TI)。
III.試驗結果預備試驗結果藥物對細胞的毒性作用本發明的HS-05等藥物和陽性對照藥物泰米弗魯在MDCK和Hep-2細胞培養內對細胞的毒性試驗結果，試驗採用細胞形態變化(CPE)法。
1.HS-05等藥物對MDCK細胞的毒性測定結果(以下數據為三次試驗結果的均值)驗證藥物
HS-04藥物最大無毒濃度(ID0)為750±0μg/ml，半數中毒濃度(ID50)為150±0μg/ml。
HS-05藥物最大無毒濃度(ID0)為1500±0μg/ml，半數中毒濃度(TD50)為2912±152μg/ml。
C.A-01綠原酸藥物最大無毒濃度(ID0)為75±0μg/ml，半數中毒濃度(TD50)為1500±0μg/ml。
C.A-02綠原酸藥物最大無毒濃度(ID0)為750±0μg/ml，半數中毒濃度(TD50)為1500±0μg/ml。
雙黃連藥物最大無毒濃度(ID0)為3000±0μg/ml，半數中毒濃度(TD50)為＞3000±0μg/ml。
陽性對照藥物泰米弗魯藥物最大無毒濃度(ID0)為1500±0μg/ml，半數中毒濃(TD50)為2912±152μg/ml。
2.HS-05等藥物對Hep-2細胞的毒性測定結果(以下數據為三次試驗結果的均值)驗證藥物HS-04藥物最大無毒濃度(ID0)為1250±433μg/ml，半數中毒濃度(TD50)為2375±50μg/ml。
HS-05藥物最大無毒濃度(ID0)為1500±0μg/ml，半數中毒濃度(TD50)為2495±79μg/ml。
C.A-01綠原酸藥物最大無毒濃度(ID0)為750±0μg/ml，半數中毒濃度(TD50)為1500±0μg/ml。
C.A-02綠原酸藥物最大無毒濃度(ID0)為750±0μg/ml，半數中毒濃度(ID50)為1250±0μg/ml。
雙黃連藥物最大無毒濃度(ID0)為3000±0μg/ml，半數中毒濃度(TD50)為＞3000±0μg/ml。
陽性對照藥物泰米弗魯藥物最大無毒濃度(ID0)為1500±0μg/ml，半數中毒濃度(TD50)為2220±26μg/ml。
3.在MDCK細胞培養內對A3病毒毒力測定結果(TCD50)流感甲3型病毒(A3)∶半數感染量(TCID50)為1∶304.在Hep-2細胞培養內對RSV病毒毒力測定結果(TCIC50)呼吸道合胞病毒RSV半數感染量(TCID50)為10-5
正式試驗結果5.HS-05等藥物在MDCK細胞培養內對A3病毒的抑制試驗結果(以下數據為三次試驗結果的均值)驗證藥物HS-04化合物CPE法，藥物半數有效濃度(IC50)為116±17μg/ml，最小有效濃度(MIC)為375±0μg/ml，治療指數(TI)為2。
HS-05藥物CPE法，藥物半數有效濃度(IC50)為37.9±8.6μg/ml，最小有效濃度(MIC)為93.8±0μg/ml，治療指數(TI)為16。
C.A-01藥物CPE法，藥物半數有效濃度(IC50)為94±0μg/ml，最小有效濃度(MIC)為187.5±0μg/ml，治療指數(TI)為4。
C.A-02藥物CPE法，藥物半數有效濃(IC50)為23±0μg/ml，最小有效濃度(MIC)為94±0μg/ml，治療指數(TI)為7.9。
雙黃連藥物CPE法，藥物半數有效濃度(IC50)為52.4±6.1μg/ml，最小有效濃度(MIC)為93.75±0μg/ml，治療指數(TI)為32。
陽性對照藥物泰米弗魯藥物CPE法，藥物半數有效濃度(IC50)51.1±1.4μg/ml，最小有效濃度(MIC)為187.5±0μg/ml，治療指數(TI)為8。
6.HS-05等藥物在Hep-2細胞培養內對RSV病毒的抑制試驗結果(以下數據為三次試驗結果的均值)驗證藥物HS-04化合物CPE法，藥物半數有效濃度(IC50)為260±37μg/ml，最小有效濃度(MIC)為75±0μg/ml，治療指數(TI)為1.7。
HS-05藥物CPE法，藥物半數有效濃度(IC50)為48.4±2.6μg/ml，最小有效濃度(MIC)為93.8±0μg/ml，治療指數(TI)為16。
C.A-01藥物CPE法，藥物半數有效濃度(IC50)為198±48μg/ml，最小有效濃度(MIC)為375±0μg/ml，治療指數(TI)為2。
C.A-02藥物CPE法，藥物半數有效濃(IC50)為94±0μg/ml，最小有效濃度(MIC)為187.5±0μg/ml，治療指數(TI)為4。
雙黃連藥物CPE法，藥物半數有效濃度(IC50)為46.9±0μg/ml，最小有效濃度(MIC)為93.8±0μg/ml，治療指數(TI)為32。
陽性對照藥物
泰米弗魯藥物CPE法，藥物半數有效濃度(IC50)52.2±4.4μg/ml，最小有效濃度(MIC)為187.5±0μg/ml，治療指數(TI)為8。
試驗結果歸納在表1和表2中表1.HS-05等藥物對MDCK和Hep-2細胞的毒性測定結果
注以上數據為三次試驗結果的均值TD0為最大無毒濃度、TD50為半數中毒濃度表2.HS-05等藥物對A3和RSV病毒的抑制試驗結果
注以上數據為三次試驗結果的均值IC50為半數有效濃度、MIC為最小有效濃度、TI為治療指數結論以上試驗結果表明本發明的式I化合物在MDCK和Hep-2細胞培養內，採用病毒CPE法，具有抗甲3型流感病毒和呼吸道合胞病毒的作用。
權利要求
1.一種下面的式I化合物和/或其可藥用鹽或溶劑化物 式I化臺物結構式其中R可以選自取代或未取代的C1-C8烷基，取代或未取代的C3-C8環烷基，取代或未取代的C1-C8烷氧基,氨基,氰基，取代或未取代的胺基或醯胺基，醯胺基烷基，取代或未取代的腈基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的雜芳基，芳烷基，雜芳烷基，巰基，巰基烷基，巰基芳基，烷硫基，芳硫基，芳硫基烷基，這些基團可以帶有取代基；R』可以是取代或未取代的C1-C8烷基，取代或未取代的C3-C8環烷基，取代或未取代的C1-C8烷氧基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的雜芳基；取代基可以是滷素、氨基、硝基、巰基、氰基、羥基、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、C1-C8醯基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳烷基、胺基、烷氧羰基胺基、芳氧羰基胺基、(取代的)醯胺基、巰基烷基、烷硫基、芳硫基、芳硫基烷基；其前提條件是當R是C1-C8烷基時，R』不是甲基。
2.根據權利要求1的化合物，其中R可以選自取代或未取代的C1-C8烷基，取代或未取代的C3-C8環烷基，取代或未取代的C1-C8烷氧基，氨基，氰基，取代或未取代的胺基或醯胺基，醯胺基烷基，取代或未取代的腈基，取代或未取代的苯基、萘基，取代或未取代的吡啶基、喹啉基、氫化喹啉基、異喹啉基、氫化異喹啉基、吲哚基、三氮唑基、四氮唑基、噁唑基、噻吩基，芳烷基，雜芳烷基，巰基，巰基烷基，巰基芳基，烷硫基，芳硫基，芳硫基烷基，這些基團可以帶有取代基；R』可以取代或未取代的C1-C8烷基，取代或未取代的C3-C8環烷基，取代或未取代的C1-C8烷氧基，取代或未取代的苯基、萘基；取代基可以是滷素、氨基、硝基、巰基、氰基、羥基、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、C1-C8醯基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳烷基、胺基、烷氧羰基胺基、芳氧羰基胺基、(取代的)醯胺基、巰基烷基、烷硫基、芳硫基、芳硫基烷基； 其中，R和R』與上面的定義相同。
7.根據權利要求1-5之一的化合物用於製備治療流感疾病的藥物的用途。
8.一種用於治療流感的藥物組合物，其含有作為活性成分的治療有郊量的權利要求1-5之一的化合物和可藥用輔料。
9.根據權利要求8的藥物合物，其可以是片劑、膠囊劑、注射劑、緩釋劑、或控釋劑。可以帶有取代基；R』可以是提取代或未取代的C1-C8烷基，取代或未取代的C3-C8環烷基，取代或未取代的C1-C8烷氧基，取代或未取代的芳基，如取代或未取代的苯基、萘基，取代或未取代的雜芳基，如取代或未取代的吡啶基、(氫化)喹啉基、(氫化)異喹啉基、吲哚基、三氮唑基、四氮唑基、噁唑基、噻吩基等；其前提條件是當R是C1-C8烷基時，R』不是甲基。本發明的另一目的是提供了一種製備式I化合物和/或其可藥用鹽或溶化物的方法。本發明的另一目的是提供了式I和/或其可藥用鹽或溶劑化物用於抗病毒的用途。本發明的另一目的是提供了一種含有式I化合物和/或其可藥用鹽或溶劑化物的藥物組合物。發明詳述本發明中的術語「烷基」是指C1-C8的烷基，包括支鏈或支鏈烷基，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基等；「芳基」是指碳環芳烴，如苯基、萘基、蒽基或菲基等；「雜芳基」是指含有一個或者多個選自N、O、S等雜原子作為環原子的芳基，如吡啶基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、(氫化)喹啉基、(氫化)異喹啉基、吲哚基、三氮唑基、四氮唑基、噁唑基等；「胺基」包括甲胺基、乙胺基、丙胺基、二甲胺基、二乙胺基等；「醯胺基」包括甲醯胺基、乙醯胺基、丙醯胺基、丁醯胺基等。「取代或未取代」是指基團可以未被取代或者被取代，取代基可以是滷素、氨基、硝基、巰基、氰基、羥基、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、C1-C8醯基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳烷基、胺基、烷氧羰基胺基、芳氧羰基胺基、(取代的)醯胺基、巰基烷基、烷硫基、芳硫基、芳硫基烷基。本發明式I化合物中，4R,5S與3R的構型也構成本發明化合物的特徵。本發明優選的式I化合物和/或其可藥用鹽或溶劑化物是其中R選自C1-C8烷基，醯胺基烷基，取代或未取代的芳基如取代或未取代的苯基、萘基，取代或未取代的雜芳基如取代或未取代的吡啶基、(氫化)喹啉基、(氫化)異喹啉基、吲哚基等，芳烷基，雜芳烷基，巰基烷基，巰基芳基，烷硫基，芳硫基，芳硫基烷基等；其中R』選自甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、異戊基；其前提條件是當R是C1-C8烷基時，R』不是甲基。
全文摘要
本發明涉及一種式I化合物和/或其可藥用鹽或溶劑化物及製備方法和用途，本發明式I化合物神經氨酸酶活性抑制劑，對流感病毒具有明顯的抑制作用，可以用作治療流感疾病的藥物。本發明還涉及式I化合物的製備方法和該化合物用作製備抗病毒藥物的用途，以及含有這些化合物的藥物組合物，這些組合物可以以各種製劑形式使用。
文檔編號C07D303/00GK1594300SQ03156869
公開日2005年3月16日 申請日期2003年9月11日 優先權日2003年9月11日
發明者陳新, 浦志海, 李平 申請人:浙江海正藥業股份有限公司