細菌菌株和包含它們的藥物組合物以及該菌株在預防和治療疾病上的用途的製作方法

2023-05-02 13:34:46

專利名稱：細菌菌株和包含它們的藥物組合物以及該菌株在預防和治療疾病上的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及細菌菌株和包含它們的藥物組合物以及該菌株在預防和治療與膽汁酸改變的代謝有關的或由這種代謝引起的疾病上的用途。
肝膽汁是具有電解質組合的類似血漿的有色等張液體。膽汁的主要組分包括水(82％)，膽汁酸(12％)，卵磷脂和其它磷脂(4％)，以及未酯化的膽甾醇(0.7％)。其它成分包括綴合膽紅素，蛋白質，電解質，粘液以及藥物肝轉化的最後產物，激素，等等。在基本條件下，膽汁的肝臟產生量是大約500-1000毫升/天。
主要的膽汁酸膽酸(CA)以及鵝膽酸(CDCA)從肝臟的膽甾醇合成，與甘氨酸以及牛磺酸綴合，並且被排洩到膽汁中。次要的膽汁酸，包括脫氧膽酸(DCA)和石膽酸(LA)，在結腸中作為主要的膽汁酸的細菌代謝物形成。其它膽汁酸，稱為第三膽汁酸(例如熊去氧膽酸-UDCA)在腸中隨甾醇環上羥基的酶促差向異構化形成。
在正常的膽汁中，甘氨酸對牛磺酸綴合物的比是大約2∶1，而在膽汁阻塞患者中經常發現硫酸鹽和膽汁酸的葡糖苷酸綴合物的增加的濃度。
腸微生物系統把膽汁酸轉變成為不同的代謝物。這些生物轉化包括在膽汁酸和牛磺酸或甘氨酸之間的鍵的水解，形成未綴合或自由的膽汁酸和牛磺酸或甘氨酸。因此未綴合的膽汁酸使得可以發生C3，C7，和C12位置上的羥基的氧化和在7α和7β位置上的脫羥基化。後一轉化導致次要的膽汁酸DCA與LA的形成。主要的膽汁酸(脫綴合的但不是轉化的)以及次要的膽汁酸被從腸腔再吸收並進入肝門血流。然後被肝膽囊攝取，與甘氨酸或牛磺酸綴合，並再分泌到膽汁(腸肝循環)中。
通常，膽汁酸池每日循環大約5至10次。所述池的腸吸收有大約95％的效率，因此，膽汁酸的糞便排出在0.3至0.6克/天的範圍內。糞便排出被每日合成等值補償。
因此，在膽汁中存在的膽汁酸池的組合是肝臟和微生物系統酶之間的複合相互作用產生的結果。
去綴合活性是許多細菌(需氧菌以及厭氧菌)共有的特徵，但是在專性厭氧細菌中特別普通，所說細菌例如，擬桿菌屬、真細菌界、梭狀芽胞桿菌屬、雙歧桿菌屬等等。細菌的大多數是抗甘氨酸和牛磺酸綴合物兩者活性的；然而，它們中的一些有一定程度的特異性，取決於結合的胺基酸，以及結合至甾類化合物核上的氫氧化物的數量。由細菌水解酶的作用產生的游離膽汁酸可以由羥基類固醇脫氫酶(steroidodehydrogenase)氧化C3，C7和C12位置上存在的羥基。
對膽汁酸的代謝紊亂的興趣來自假設膽汁酸和/或其代謝物涉及一些肝-膽汁和胃腸疾病的致病機理中所說疾病是膽汁消化不良症，膽結石，急性和慢性肝病，結腸的炎症性疾病，等等。
在文獻中膽汁酸疏水性與去垢性相關非常常見；次要的膽汁酸比主要的膽汁酸有更大的疏水性，脫羥基膽酸(DCA)比膽酸(CA)是實際上的更好的去垢劑。因此，在膽汁中DCA增加的濃度可以涉及a)膽甾醇分泌的增加，具有增加的飽和指數；b)對肝臟細胞的細胞毒素作用。
因此，膽汁酸模式的定性的修正可能是一個決定性的因素，尤其在治療以上提及的病理狀態中。
這樣，仍然需要有效的細菌菌株或者組合物，它們通過降低7α-脫羥基酶活性，同時降低去綴合，可以用於治療和/或預防與膽汁酸代謝紊亂相關的疾病。
還沒有發現任何細菌菌株能夠以這樣的方式定性修飾膽汁酸模式。
因此，本發明的一個目的是提供細菌新菌株，特別是革蘭氏-陽性細菌，其在治療和/或預防與膽汁酸代謝紊亂有關的或由膽汁酸代謝紊亂引起的疾病上有用。
本發明的另一個目的是提供包含一種或多種這樣的細菌菌株並且在治療和/或預防與膽汁酸代謝紊亂有關的或由膽汁酸代謝紊亂引起的疾病上有用的藥物組合物。
以上目的和其它目的將在以下詳盡描述期間變得更明顯，它們由發明人達到了，發明人已發現具有降低的7α-脫羥基酶(dehydroxylase)活性或無該活性和降低的使膽汁酸去綴合(deconjugate)能力或無該能力的細菌菌株。這與原先已知的相反。因此，本發明提供了這些菌株在以有用的方式修飾膽酸以預防或治療與膽汁酸代謝紊亂有關的或由膽汁酸代謝紊亂引起的疾病上的用途。
這樣，在第一實施方案中，本發明提供了細菌新菌株，它們具有低於50％，優選地低於25％的7α-脫羥基酶活性，以及低於50％，優選地低於25％的綴合膽汁酸去綴合(deconjugation)活性。
根據本發明的菌株的本質特徵在權利要求1中限定；具有所說特徵的特定菌株在從屬權利要求2至11中限定。
本發明也提供了用於預防和/或治療與膽汁酸改變的代謝有關的或由膽汁酸改變的代謝引起的疾病的藥物組合物，所說的組合物包含根據本發明的至少一種細菌菌株。根據本發明的組合物的本質特徵在權利要求12中限定；所說組合物的特定實施方案在從屬權利要求13至25中限定。
此外，本發明提供了根據本發明的至少一種細菌菌株在製備所說的藥物組合物上的用途。所說用途的本質特徵在權利要求26中限定，特定的實施方案在從屬權利要求27至36中限定。
在本發明的上下文中，與膽汁酸代謝紊亂有關的或由膽汁酸代謝紊亂引起的疾病包括肝臟疾病消化道疾病，如失明環綜合症，膽結石，肝硬化，慢性肝病，急性肝病，囊性纖維變性，肝內膽汁阻塞，腸內炎症性疾病，colonpathies，吸收障礙。該藥物組合物也可以用於預防婦女在懷孕或爾後期間出現膽結石和用於進行減肥或吃規定的飲食的受治療者。
細菌菌株的7α-脫羥基酶活性應低於低於50％，優選地應低於25％。所說的7α-脫羥基酶活性值是由以下實施例1描述的方法測定的那些。具體地說，於37℃在添加有2毫克/毫升甘氨膽酸(GCA)或2毫克/毫升牛磺膽酸(TCA)的15毫升特定的培養基中培養所研究的菌株的107個細胞48小時，然後測定產生的7α-脫羥基化的產物的量。由下式計算7α-脫羥基酶活性的百分比值
培養48小時後
GCA或TCA的質量基於上述，待施用的細菌菌株還應具有低於50％，優選地低於25％的綴合膽汁酸去綴合活性。通過用與描述的測定7α-脫羥基酶活性的培養方法相同的方法，接著測定所形成的脫綴合產物的量來測定脫綴合能力。用下式計算脫綴合活性培養48小時後
GCA或TCA的質量本發明的細菌菌株可以腸道施用。優選地，本發明的細菌菌株口頭施用。
雖然可以施用單一細菌菌株，但施用按照本發明的兩種或多種細菌的混合物也是可能的。
雖然施用的細菌的確切的劑量隨著患者的狀況和體重、被治療的具體的疾病以及被施用的菌株的性質而變化，但經施用103到1013個細菌菌株細胞/克可以獲得理想的結果。為獲得本發明的好的效果，以在患者腸中置入其重要量的量和濃度施用是優選的。因此所說菌株以含有103到1013個細菌菌株細胞/克(優選地是108到1012個細菌菌株細胞/克)的組合物施用，並且所說組合物以使患者在治療時在1到365天(優選地是在3到60天)期限內接著1克到20克菌株/天(優選地是1克到20克菌株/天)的用藥方式施用或者在預防時根據經驗的用藥方式是優選的。所說細菌菌株可以以任何適合於腸內施用的形式施用，如膠囊，片劑，或口服的液體或者腸內施用的液體。
典型地，根據本發明的細菌菌株可以在診斷為代謝紊亂後施用。然而，在膽汁膽石的預防的情況之下，菌株也可以在受治療者被確定為屬於風險群(例如開始懷孕或開始進行減肥或吃規定的飲食)時施用。也可以在在患者的膽囊摘除之後施用本發明的菌株。
在一更為優選的實施方案中，當所治療的疾病是肝硬化時，提供了共同施用乳果糖。合適地，乳果糖以100毫克到100克/天，優選地是1克到20克/天的量施用。
在另一個更為優選的實施方案中，提供了共同施用基於膽汁酸的製劑，如熊去氧膽酸或牛磺牛磺熊去氧膽酸。合適地，熊去氧膽酸或牛磺熊去氧膽酸以10毫克到3000毫克/天，優選地是50毫克到800毫克/天的量施用。
優選地，本發明的藥物組合物包含的細菌菌株的濃度是103至1013個細胞/克，優選地是108至1012個細胞/克。藥學上可接受的的載體可以是適合於腸內施用，並且與細菌菌株相容的任何載體，如右旋糖，碳酸鈣，以及不同的添加物質，如澱粉，明膠，維生素，抗氧化劑，染料或改善味道的物質。
本發明的組合物也可以包含一個可有可無的藥物組分，其與所使用的細菌相容，並能增強存在的有效成分的活性。抗膽鹼能藥物，抗組胺劑，腎上腺素能劑，抗潰瘍劑，抗酸劑，antidiarroic和-抗炎症性藥物，鎮靜劑，退熱劑，利膽劑、抗風溼劑，止痛藥物，利尿劑，防腐劑，抗脂血症劑，保肝藥物以及在胃腸能動性上有活性的藥物(例如trimebutine)可以是本文所提及的藥物。
當治療肝硬化時，更為優選的是藥物組合物進一步包含乳果糖。合適地，組合物包含100毫克到100克/天，優選地是1克到20克/天的乳果糖。當治療肝硬化和慢性肝炎時，藥物組合物包含基於膽汁酸的製劑(如熊去氧膽酸或牛磺熊去氧膽酸)是優選的。合適地，組合物包含10至3,000毫克/天的這樣的膽汁酸製劑，優選地是50至800毫克/天的熊去氧膽酸或牛磺熊去氧膽酸。
隨著下列例證性實施方案的描述，本發明的其它特徵會變得明顯，這些實施方案用來說明本發明但不用來限制本發明。
實施例實施例1試驗了下列種嗜熱鏈球菌，屎鏈球菌，保加利亞乳桿菌，胚牙乳桿菌，嬰兒雙歧桿菌。在特定的營養培養基(15毫升)中重複培養各菌株(107CFU)；＂CFU＂指＂菌落＂形成單位。
不同種所使用的培養基表嬰兒雙歧桿菌MRS+0.5％葡萄糖(在稀釋成20％無菌溶液滅菌之後添加)嗜熱鏈球菌 M17所有其它菌株MRS
MRS培養基組成 (克/升)通用腖 10.0克肉膏5.0克酵母膏 5.0克磷酸氫鉀2.0克吐溫80 1.0克二鹼價檸檬酸銨 2.0克醋酸鈉 5.0克硫酸鎂 0.1克硫酸錳 0.05克製備以50克/升溶解到蒸餾水中，在121℃滅菌15分鐘-25℃時pH值6.5+-0.1。
M17培養基(Merck)的組成 (克/升)大豆粉腖 5.0克肉腖 2.5克酪蛋白腖 2.5克酵母膏 2.5克肉膏 5.0克乳糖 5.0克抗壞血酸 0.5克β-甘油磷酸鈉 19.0克磷酸鎂 0.25克製備以42.5克/升溶解到蒸餾水中，在121℃滅菌15分鐘-25℃時pH值7.2+-0.1。
在厭氧條件下培養嬰兒雙歧桿菌，由於已知它是厭氧細菌。於37℃的培養24小時後，向每根試管添加相對於30毫克量的膽汁鹽以獲得2毫克/毫升的最終濃度。所使用的膽汁酸是從西格馬化學公司獲得的甘氨膽酸(GCA)和牛磺膽酸(TCA)。各膽汁酸單獨地添加至每一系列的細菌培養物中。
在培養48小時之後，2分鐘內添加異丙醇3毫升。然後在400rpm下離心15分鐘，並收集上清液(5毫升)。上清液在-30℃下冷藏直到被分析。由HPLC(高效液態色譜)測定綴合膽汁鹽存在的百分比，其中採用裝配有檢測器二極體排列模式(Diode array mod)1000和Spherisorb5μmODS2C18反向柱，流動相由甲醇/緩衝磷酸鹽(20mMol)(在水/乙腈/水(150∶60∶20∶20，體積比)中，pH值2.5)組成，流速0.85毫升/分鐘，檢測波長為205nm。在氮氣下乾燥的100微升待試樣品用100微升流動相抽提，所述流動相包含濃度為2毫克/毫升的內標7α-OH-12α-OH-二羥基-58-膽烷酸(Calbiochem美國)。
與細菌培養物一起培養的膽汁酸的回收百分比由檢測的膽汁酸的面積(GCA或TCA)與內標的面積的比計算。當在培養48小時後的細菌培養物中發現綴合膽汁酸的數量低於50％時，在二氧化矽60凝膠板上進行薄層色譜(TLC)，以檢測CA和DCA的存在，用環己烷/異丙醇/醋酸為流動相(30∶10∶1，體積比)。在每一平板上上樣20微升酒精提取物，20微升CA和DCA的溶液，20微升CA，以及20微升DCA。平板在室溫展開後用硫酸處理並加熱到145℃，直到出現有色斑點。
去綴合實驗的結果(表I)說明，用GCA試驗的16個菌株中的5個能夠完全使添加至培養物中的膽汁酸去綴合，如以前文獻中報導的和所有研究者廣泛知道的。令人驚奇地是，十種菌株對能使GCA去綴合但不完全，範圍從9％至90％(表I)。在需氧和厭氧細菌之間沒有任何區別。兩種菌株，嗜熱鏈球菌YS52和嬰兒雙歧桿菌Bi6對GCA沒有任何去綴合活性。此外，菌株YS52不進攻膽汁酸-牛磺酸鍵。
16個試驗的菌株中僅有一個能使TCA全部去綴合嬰兒雙歧桿菌Bi6。
脫羥基作用實驗的結果(表II)說明16個菌株中僅有一個能使GCA完全脫羥基。6個菌株一點也無脫羥基活性YS25；SF2；SF4；LA3；LA10；Bi6。其它的菌株能使GCA對脫羥基但不完全，範圍從9％至90％。對TCA而言，7個菌株根本不能使其脫羥基YS52；SF3；LA3；LA10；LB1；LB7；LB77。1個菌株使TCA完全脫羥基；其它菌株以一定的百分比使TCA脫羥基。
表I在培養48小時之後由細菌培養物產生的GCA和TCA去綴合百分比細菌保藏號 GCA％TCA％嗜熱鏈球菌YS46 I-1668 99嗜熱鏈球菌YS48 I-1669 17 11嗜熱鏈球菌YS52 I-1670 00屎鏈球菌SF2100 3屎鏈球菌SF3 I-1671 27 0屎鏈球菌SF4100 12保加利亞乳桿菌LA3 100 80保加利亞乳桿菌LA10 100 95胚牙乳桿菌LB1 I-1664 90胚牙乳桿菌LB3 I-1665 20 12胚牙乳桿菌LB7 I-1666 14 0胚牙乳桿菌LB77 I-1667 20 0嬰兒雙歧桿菌Bi280 15嬰兒雙歧桿菌Bi390 10嬰兒雙歧桿菌Bi4100 26嬰兒雙歧桿菌Bi60100表II在培養48小時之後由細菌培養物產生的GCA和TCA脫羥基百分比細菌保藏號 GCA％TCA％嗜熱鏈球菌YS46 I-1668 99嗜熱鏈球菌YS48 I-1669 17 11嗜熱鏈球菌YS52 I-1670 00屎鏈球菌SF203屎鏈球菌SF3 I-1671 27 0屎鏈球菌SF4012保加利亞乳桿菌LA3 00保加利亞乳桿菌LA10 00胚牙乳桿菌LB1 I-1664 90胚牙乳桿菌LB3 I-1665 20 12胚牙乳桿菌LB7 I-1666 14 0胚牙乳桿菌LB77 I-1667 20 0嬰兒雙歧桿菌Bi280 15嬰兒雙歧桿菌Bi390 10嬰兒雙歧桿菌Bi4100 26嬰兒雙歧桿菌Bi60100這些菌株已以下列保藏號保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur嗜熱鏈球菌YS46I-1668嗜熱鏈球菌YS48I-1669嗜熱鏈球菌YS52I-1670屎鏈球菌SF3 I-1671胚牙乳桿菌LB1 I-1664胚牙乳桿菌LB3 I-1665胚牙乳桿菌LB7 I-1666胚牙乳桿菌LB77I-1667下列菌株保藏在Centro Ricerche Sitia-Yomo S.p.A.-Strada perMerlino，3-ZELO BUON PERSICO(米蘭)-義大利，並可從該保藏單位獲得，各菌株由以下指出的識別號區別屎鏈球菌SF2SF2屎鏈球菌SF4SF4保加利亞乳桿菌LA3 LA3保加利亞乳桿菌LA10 LA10嬰兒雙歧桿菌Bi2Bi2嬰兒雙歧桿菌Bi3Bi3嬰兒雙歧桿菌Bi4Bi4嬰兒雙歧桿菌Bi6Bi6這些結果顯示我們試驗的菌株的大多數具有使膽汁酸去綴合的低的能力，並且有菌株一點也不去綴合。這一觀察是驚人的，因為還沒有已知乳酸細菌使膽汁鹽去綴合。而且，明顯的是，菌株的酶對結合到側鏈上的特異性膽汁酸是選擇性的。在這種研究中，最清楚的例子是嬰兒雙歧桿菌，這一菌株不能使甘氨酸-綴合膽汁酸去綴合，但是能使牛磺酸-綴合的膽汁酸完全去綴合。一些其它菌株(LB1，LB7，LB77，SF3)不能使TCA去綴合，但在一定程度上能使GCA去綴合。
總之，已發現了去綴合和脫羥基能力弱的或沒有能力的菌株。實施例2三個健康自願者在用每克包含1×1011個嗜熱鏈球菌YS52細胞的lactobacilli製劑處理(每天6克，共28天)後，試驗他們的膽汁酸含量。在開始處理之前和12小時飢餓後，將管插入受試者中，在用藍肽刺激後，收集膽汁，於-80℃冷凍。用回波描記術估價膽囊收縮，由Rx(螢光透視法)檢查所述管子在十二指腸的第二個部分中的位置。
在4周治療之後，對受試者第二次插管，並收集膽汁。試驗以前描述的一些膽汁酸在膽汁樣品中的含量。結果在表III中示出。
表III膽汁酸 病人#1病人#2病人#3前 後前 後前後Glychenodeoxycholic32 1522 152812Glycodeoxycholic 6 5 9 2 43Glycourscdeoxycholic 1 5 1 7 14牛磺膽酸 9 2615 251221脫氧牛磺膽酸 1 3 5 8 39注(膽汁酸按親水能力順序列出，其與去垢性成反向關係)牛磺膽酸牛磺脫氧膽酸GlycourscdeoxycholicGlycadeoxycholicGlychenodeoxycholic這一實驗證實實施例1中所示的結果，如果施用本發明的目標菌株，則對一種主要的膽汁酸有較低的去綴合作用。所獲得的結果是在腸肝循環中更長地保持主要的膽汁酸。
膽汁酸的性質在表III的注釋中指出。因此，按照這些結果，施用選擇的細菌菌株可以降低膽汁酸的去垢性，從而降低細胞溶解活性。實施例3用包含嗜熱鏈球菌YS46和YS48(兩種菌株)、保加利亞乳桿菌LB1，LB7和LB77(三種菌株)處理14個慢性肝炎患者。對於製備包含各菌株的重量的相同分數的混合物而言，在與其它的混合之前，使各菌株達每克150×109個細胞的濃度。每天施用6克所說的混合物，共28天。肝臟酶在處理前和處理後測量，結果示於表IV中。
表IV用細菌混合物處理對肝臟酶天冬氨酸氨基移轉酶(AST；SGOT)和丙氨酸氨基轉移酶(ALT；SGPT)的影響病人 AST(SGOT) ALT(SGPT)前 後 前 後#1 92 59 10246#2 89 67 96 42#3 17486 97 39#4 12191 10266#5 11681 11155#6 15687 94 76#7 16366 69 37#8 78 64 12257#9 10939 87 86#1016670 10248#1156 24 11862#1213183 96 79#1313786 94 74#1484 87 144114平均 11971 10263標準偏差 36 19 17 21配對數據的t試驗P＜0,001P＜0,00權利要求
1.一種具有下列特性的細菌菌株(a)低於50％的7α-脫羥基酶活性，和(b)低於50％的膽汁酸去綴合活性，以及保持活性(a)和(b)的其後代、突變體和衍生物。
2.權利要求1的菌株，該菌株是革蘭氏-陽性細菌菌株。
3.權利要求1和/或2的菌株，該菌株屬於選自嗜熱鏈球菌，屎鏈球菌和保加利亞乳桿菌的種。
4.權利要求3的菌株，其中所說的細菌菌株是嗜熱鏈球菌YS52，該菌株以保藏號I-1670保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
5.權利要求3的菌株，其中所說的細菌菌株是嗜熱鏈球菌YS46，該菌株以保藏號I-1668保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
6.權利要求3的菌株，其中所說的細菌菌株是嗜熱鏈球菌YS48，該菌株以保藏號I-1669保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
7.權利要求3的菌株，其中所說的細菌菌株是屎鏈球菌SF3，該菌株以保藏號I-1671保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-Institut Pasteur。
8.權利要求3的菌株，其中所說的細菌菌株是保加利亞乳桿菌LB1，該菌株以保藏號I-1664保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
9.權利要求3的菌株，其中所說的細菌菌株是保加利亞乳桿菌LB3，該菌株以保藏號I-1665保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
10.權利要求3的菌株，其中所說的細菌菌株是保加利亞乳桿菌LB7，該菌株以保藏號I-1666保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
11.權利要求3的菌株，其中所說的細菌菌株是保加利亞乳桿菌LB77，該菌株以保藏號I-1667保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-Institut Pasteur。
12.一種用於預防和治療與膽汁酸改變的代謝有關的或由膽汁酸改變的代謝引起的疾病的藥物組合物，其特徵在於該組合物包含能產生使患者改變的代謝正常化之作用的有效量的(1)至少一種具有下列活性(a)和(b)的細菌菌株以及保持活性(a)和(b)的其後代、突變體和衍生物(a)低於50％的7α-脫羥基酶活性，和(b)低於50％的膽汁酸去綴合活性。(2)藥學上可接受的載體。
13.權利要求12的藥物組合物，其中所說的至少一種細菌菌株是革蘭氏-陽性細菌菌株。
14.權利要求12和/或13的組合物，其中所說的至少一種細菌菌株屬於選自嗜熱鏈球菌，屎鏈球菌和保加利亞乳桿菌的種。
15.權利要求14的組合物，其中所說的細菌菌株是嗜熱鏈球菌YS52，該菌株以保藏號I-1670保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
16.權利要求14的組合物，其中所說的細菌菌株是嗜熱鏈球菌YS46，該菌株以保藏號I-1668保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
17.權利要求14的組合物，其中所說的細菌菌株是嗜熱鏈球菌YS48，該菌株以保藏號I-1669保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
18.權利要求14的組合物，其中所說的細菌菌株是屎鏈球菌SF3，該菌株以保藏號I-1671保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
19.權利要求14的組合物，其中所說的細菌菌株是保加利亞乳桿菌LB1，該菌株以保藏號I-1664保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
20.權利要求14的組合物，其中所說的細菌菌株是保加利亞乳桿菌LB3，該菌株以保藏號I-1665保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
21.權利要求14的組合物，其中所說的細菌菌株是保加利亞乳桿菌LB7，該菌株以保藏號I-1666保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
22.權利要求14的組合物，其中所說的細菌菌株是保加利亞乳桿菌LB77，該菌株以保藏號I-1667保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-Institut Pasteur。
23.權利要求12的組合物，該組合物每克包含103至1013個所述細菌菌株細胞。
24.權利要求12的組合物，該組合物還包含乳果糖。
25.權利要求12的組合物，該組合物還包含選自熊去氧膽酸(ursodeoxycholic acid)和牛磺熊去氧膽酸(tauroursodeoxycholicacid)的基於膽汁酸的製劑。
26.至少一種具有下列活性(a)和(b)的細菌菌株以及保持活性(a)和(b)的其突變體和衍生物在製備預防和治療與膽汁酸改變的代謝有關的或由膽汁酸改變的代謝引起的疾病之藥物組合物上的用途(a)低於50％的7α-脫羥基酶活性，和(b)低於50％的膽汁酸去綴合活性。
27.權利要求26的用途，其中所說的至少一種細菌菌株是革蘭氏-陽性細菌菌株。
28.權利要求26和/或27的用途，其中所說的至少一種細菌菌株屬於選自嗜熱鏈球菌，屎鏈球菌和保加利亞乳桿菌的種。
29.權利要求28的用途，其中所說的細菌菌株是嗜熱鏈球菌YS52，該菌株以保藏號I-1670保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
30.權利要求28的用途，其中所說的細菌菌株是嗜熱鏈球菌YS46，該菌株以保藏號I-1668保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
31.權利要求28的用途，其中所說的細菌菌株是嗜熱鏈球菌YS48，該菌株以保藏號I-1669保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
32.權利要求28的用途，其中所說的細菌菌株是屎鏈球菌SF3，該菌株以保藏號I-1671保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-Institut Pasteur。
33.權利要求28的用途，其中所說的細菌菌株是保加利亞乳桿菌LB1，該菌株以保藏號I-1664保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
34.權利要求28的用途，其中所說的細菌菌株是保加利亞乳桿菌LB3，該菌株以保藏號I-1665保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
35.權利要求28的用途，其中所說的細菌菌株是保加利亞乳桿菌LB7，該菌株以保藏號I-1666保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-InstitutPasteur。
36.權利要求28的用途，其中所說的細菌菌株是保加利亞乳桿菌LB77，該菌株以保藏號I-1667保藏在CNCM-國立微生物保藏中心-Institut Pasteur。
全文摘要
本發明提供了具有下列特性的細菌菌株(a)低於50％的7α-脫羥基酶活性，和(b)低於50％的膽汁酸去綴合活性；也提供了保持活性(a)和(b)的所述菌株的後代、突變體和衍生物；還提供了包含一種或多種這樣的菌株的藥物組合物和所述菌株在預防和治療與膽汁酸改變的代謝有關的或由膽汁酸改變的代謝引起的疾病上的用途。
文檔編號C12N1/21GK1165857SQ9710344
公開日1997年11月26日 申請日期1997年3月10日 優先權日1996年3月11日
發明者R·M·A·卡維裡爾偉斯麗, C·德斯墨尼 申請人:R·M·A·卡維裡爾偉斯麗, C·德斯墨尼