一種酒石酸泰樂菌素微球的製備方法
2023-05-03 03:16:46 3
專利名稱：一種酒石酸泰樂菌素微球的製備方法
技術領域：
本發明涉及一種酒石酸泰樂菌素微球的製備方法，屬於獸藥技術領域。
背景技術：
近年來，隨著規模化、集約化養豬業的發展，不同地區、國家間頻繁的引種，使得豬 呼吸道疾病增多，已經成為養豬業的一大難題。其中豬氣喘病、豬繁殖與呼吸障礙綜合症、 豬圓環病毒2型、豬流感病毒等在國內普遍存在，造成了養殖戶的經濟損失。人們對於治療 豬呼吸道疾病已進行了很多的報導，提出了很多對該病的治療方案，但由於該病病因的復 雜性及該病的多發性，給治療帶來了困難，治療效果不佳，且預後多不良。目前臨床上常用 泰樂菌素進行防治。泰樂菌素是一種大環內醋類抗生素，對革蘭氏陽性菌、部分革蘭氏陰性菌具有很 高的殺滅作用。敏感菌有金黃葡萄球菌、化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、化膿棒狀桿菌等，同時， 對支原體感染的疾病治療有特效，臨床常用劑型有口服劑型及常規注射劑型。但該藥常規 劑型消除半衰期較短，用藥頻繁，且在體內分布廣泛。
發明內容
本發明的目的是提供一種載藥量大、包封率高、消除半衰期較長的酒石酸泰樂菌 素微球的製備方法。為了實現以上目的，本發明所採用的技術方案是一種酒石酸泰樂菌素微球的制 備方法，每Ig酒石酸泰樂菌素按照如下步驟製成酒石酸泰樂菌素微球
1)取明膠0.l-2g，加入二次水製成5mL明膠溶液，在50°C溫水浴中溶脹，然後加入Ig 酒石酸泰樂菌素，攪拌均勻，得到水相；
2)取液體石蠟和1.0-2. 0%的司盤-80按照4-6 1的體積比混合，得到油相；
3)將步驟1)得到的水相以1:5-7的體積比加入到步驟2)得到的油相中，並在500-800 r/min的轉速下攪拌均勻，冷卻至5°C以下，加入戊二醛交聯劑進行交聯固化；
4)用異丙醇洗去多餘的交聯劑，然後再用石油醚洗去微球表面的液體石蠟，真空乾燥， 得到酒石酸泰樂菌素微球。所述戊二醛的加入量為l_5mL，固化時間為20_50分鐘。本發明的酒石酸泰樂菌素微球，採用明膠作載體材料，無不良反應，無免疫原性， 具生物可降解性，應用廣泛，可口服亦可注射。採用液體石蠟和司盤80為油相，能夠提高微 球的載藥量和包封率，而且有助於戊二醛的交聯固化，從而延長微球藥物的消除半衰期，在 動物體內起到藥物緩釋的作用。另外，本發明的製備方法操作簡單，所採用的試劑平常無 奇，製備的成本較底，易於推廣應用。
具體實施例方式實施例1本實施例的酒石酸泰樂菌素微球的製備方法，每Ig酒石酸泰樂菌素按照如下步驟制 成酒石酸泰樂菌素微球
1)取Ig明膠，加入二次水製成5mL明膠溶液，在50°C溫水浴中完全溶脹，然後加入Ig 酒石酸泰樂菌素，攪拌均勻，得到水相；
2)取液體石蠟24mL和1.0-2. 0%的司盤-80 6mL將其混合，得到30mL的油相；
3)將步驟1)得到的水相加入到步驟2)得到的油相中，並在500r/min的轉速下攪拌 均勻，冷卻至5°C，加入2mL戊二醛交聯劑進行交聯固化，固化時間為20分鐘；
4)用異丙醇洗去多餘的交聯劑，然後再用石油醚洗去微球表面的液體石蠟，真空乾燥， 得到酒石酸泰樂菌素微球。經測定，該GMS粉末圓整度好，在水溶液中分散性好，平均載藥量為43. 75%，包封 率為 87. 52%。實施例2
本實施例的酒石酸泰樂菌素微球的製備方法，每Ig酒石酸泰樂菌素按照如下步驟制 成酒石酸泰樂菌素微球
1)取0.Sg明膠，加入二次水製成5mL明膠溶液，在50°C溫水浴中完全溶脹，然後加入 Ig酒石酸泰樂菌素，攪拌均勻，得到水相；
2)取液體石蠟25mL和1.0-2. 0%的司盤-80 5mL將其混合，得到30mL的油相；
3)將步驟1)得到的水相加入到步驟2)得到的油相中，並在600r/min的轉速下攪拌 均勻，冷卻至4°C，加入3mL戊二醛交聯劑進行交聯固化，固化時間為30分鐘；
4)用異丙醇洗去多餘的交聯劑，然後再用石油醚洗去微球表面的液體石蠟，真空乾燥， 得到酒石酸泰樂菌素微球。製得圓整度好的微球粉末，平均載藥量為45. 68%，包封率為89. 52%。實施例3
本實施例的酒石酸泰樂菌素微球的製備方法，每Ig酒石酸泰樂菌素按照如下步驟制 成酒石酸泰樂菌素微球
1)取1.5g明膠，加入二次水製成5mL明膠溶液，在50°C溫水浴中完全溶脹，然後加入 Ig酒石酸泰樂菌素，攪拌均勻，得到水相；
2)取液體石蠟30mL和1.0-2. 0%的司盤-80 5mL將其混合，得到35mL的油相；
3)將步驟1)得到的水相加入到步驟2)得到的油相中，並在800r/min的轉速下攪拌 均勻，冷卻至3°C，加入4mL戊二醛交聯劑進行交聯固化，固化時間為40分鐘；
4)用異丙醇洗去多餘的交聯劑，然後再用石油醚洗去微球表面的液體石蠟，真空乾燥， 得到酒石酸泰樂菌素微球。對該GMS微球粉末進行測試，其圓整度良好，分散性好，平均載藥量為39. 68%，包 封率為86. 52%。實施例4
本實施例的酒石酸泰樂菌素微球的製備方法，每Ig酒石酸泰樂菌素按照如下步驟制 成酒石酸泰樂菌素微球
1)取2g明膠，加入二次水製成5mL明膠溶液，在50°C溫水浴中完全溶脹，然後加入Ig 酒石酸泰樂菌素，攪拌均勻，得到水相；
42)取液體石蠟25mL和1.0-2. 0%的司盤-80 5mL將其混合，得到30mL的油相；
3)將步驟1)得到的水相加入到步驟2)得到的油相中，並在800r/min的轉速下攪拌 均勻，冷卻至2°C，加入5mL戊二醛交聯劑進行交聯固化，固化時間為50分鐘；
4)用異丙醇洗去多餘的交聯劑，然後再用石油醚洗去微球表面的液體石蠟，真空乾燥， 得到酒石酸泰樂菌素微球。經測定，該微球粉末，在水溶液中分散性好，圓整度好，平均載藥量為41. 02%，包封 率為 79. 03%。實施例5
本實施例的酒石酸泰樂菌素微球的製備方法，每Ig酒石酸泰樂菌素按照如下步驟制 成酒石酸泰樂菌素微球
1)取Ig明膠，加入二次水製成5mL明膠溶液，在50°C溫水浴中完全溶脹，然後加入Ig 酒石酸泰樂菌素，攪拌均勻，得到水相；
2)取液體石蠟20mL和1.0-2. 0%的司盤-80 5mL將其混合，得到25mL的油相；
3)將步驟1)得到的水相加入到步驟2)得到的油相中，並在700r/min的轉速下攪拌 均勻，冷卻至1°C，加入3mL戊二醛交聯劑進行交聯固化，固化時間為40分鐘；
4)用異丙醇洗去多餘的交聯劑，然後再用石油醚洗去微球表面的液體石蠟，真空乾燥， 得到酒石酸泰樂菌素微球。製得圓整度好的微球粉末，平均載藥量為39. 71%，包封率為62. 39%。實施例6
本實施例的酒石酸泰樂菌素微球的製備方法，每Ig酒石酸泰樂菌素按照如下步驟制 成酒石酸泰樂菌素微球
1)取0.Ig明膠，加入二次水製成5mL明膠溶液，在50°C溫水浴中完全溶脹，然後加入 Ig酒石酸泰樂菌素，攪拌均勻，得到水相；
2)取液體石蠟25mL和1.0-2. 0%的司盤-80 5mL將其混合，得到30mL的油相；
3)將步驟1)得到的水相加入到步驟2)得到的油相中，並在700r/min的轉速下攪拌 均勻，冷卻至0°C，加入ImL戊二醛交聯劑進行交聯固化，固化時間為20分鐘；
4)用異丙醇洗去多餘的交聯劑，然後再用石油醚洗去微球表面的液體石蠟，真空乾燥， 得到酒石酸泰樂菌素微球。經測定，該GMS粉末圓整度好，在水溶液中分散性好，平均載藥量為42. 45%，包封 率為 85. 24%ο實驗例酒石酸泰樂菌素明膠微球在兔體內藥物動力學試驗 1樣品的配製
1. 1藥品配製
取酒石酸泰樂菌素明膠微球，臨用前加入注射用生理鹽水，充分振搖，使微球均勻分 散，配製成濃度為0. 335mg/mL的TT-GMS (酒石酸泰樂菌素明膠微球)混懸液；另取酒石酸 泰樂菌素原料藥，臨用前加入注射用生理鹽水，充分振搖，配製成濃度為0. 335mg/mL的TT 溶液，無菌過濾，作為對照藥物。1.2泰樂菌素標準儲備液的配製
精密稱取泰樂菌素標準品10mg，置於IOOmL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配製成0. lmg/mL的泰樂菌素標準儲備液，取ImL稀釋成0. 01mg/mL泰樂菌素標準儲備液，置冰箱
4°C保存。2試驗動物的分組與給藥
兔預飼一周臨床檢查健康後引入試驗，給藥前禁食12h，隨機分為A、B兩組，每組6隻，A 組為酒石酸泰樂菌素注射劑對照組，B組為TT-GMS混懸劑試驗組。A組分別以9mg/Kg · b. w.劑量(以TT計)於耳外緣靜脈注射酒石酸泰樂菌素注射液。B組分別以9mg/Kg · b. w.劑量(以TT計)於耳外緣靜脈注射TT-GMS注射混懸液。3血漿樣品採集及前處理
試驗組和對照組的家兔分別於給藥前和給藥後的下列不同時間點於對側耳外緣靜脈 採血，0. 083h、0. 167h、0. 333h、0. 5h、lh、2h、4h、sh、12h、24h、36h、48h、72h，採取的血液放入 經肝素處理過的小離心管中，3000r/min離心lOmin，取血漿0. 5mL，加入1. OmL甲醇渦旋振 動2min，充分混勻，12000r/min離心lOmin，取上清液1. OmL，50°C氮氣吹乾，殘留物用流動 相100 μ L溶解後，再次12000r/min離心lOmin，取上清液用0. 45 μ m濾膜過濾，取200 μ L 進樣，進行HPLC分析。4反相高效液相色譜法的色譜條件
色譜柱Hypersil ODS C18 柱(250mmX 4. 6mm，5 μ m)
流動相:2mol/L高氯酸鈉(lmol/L鹽酸調PH值至2. 5 士 0. 1)乙睛(60:40，V/V) 流速1. OmL/min
檢測器紫外檢測器，檢測波長為290nm 柱溫室溫 進樣量20yL 5標準曲線的繪製
取兔血0. 5mL,置於5mL帶塞離心管中，依次加入泰樂菌素標準儲備液，配製成濃度為 0. 05,0. 1,1. 0,5. 0、100μ g/mL系列樣品，然後將上述樣品按照3項「血漿樣品採集及前處 理」方法進行離心、過濾等操作，取處理後樣品放入反相高效液相色譜儀中進行血液色譜分 析。以泰樂菌素峰面積值為縱坐標，藥物濃度(C)為橫坐標，繪製標準曲線。得到線性回歸 方程y=3339. 4x+3092. 4，r=0. 9969，得到的標準曲線可以用於待測樣品的定量分析。6回收率和精密度測定
取兔血0. 5mL，加入泰樂菌素標準儲備液，配製0. 1、1. 0,5. O μ g/mL的低、中、高三個不 同濃度樣品，按照3項「血漿樣品採集及前處理」方法進行離心、過濾等操作，再將處理後樣 品放入反相高效液相色譜儀中進行血液色譜分析，測得的泰樂菌素的面積與相應濃度未經 處理的泰樂菌素標準溶液直接進樣所得的面積之比，作為提取回收率。結果表明，回收率大 於 90%ο取兔血0. 5mL，加入泰樂菌素標準儲備液，配製0. 1、1. 0、5. O μ g/mL的低、中、高三 個不同濃度，按上述方法於一日內做5次測定，連續測定5日，測定方法的日內與日間精密 度。結果表明日內平均相對標準偏差為5. 03%，日間平均相對標準偏差為5. 32%，表明精密 度好。7數據處理
本試驗測得的血漿的藥物濃度一時間數據採用MCPKP藥物動力學參數計算程序在計
6算機上進行藥動學計算和統計處理，通過實測值與方程預測值之間的平方差之和(F)和相 關係數(r2)來判定，並計算出藥動學參數。
8試驗結果
血漿的藥物濃度一時間數據採用MCPKP即藥物動力學參數計算程序在計算機上進行 藥動學計算和統計處理，由程序自動擬合最佳模型，泰樂菌素的血漿一藥時數據符合二室 開放式模型，理論方程C1=Q. 8456e_4_489t +0. 5670e_°_1828t。計算的藥動學參數結果表明，靜注 酒石酸泰樂菌素(9mg/kg · b. w.)後，分布半衰期為0. 1558h，消除半衰期為3. 7915h，曲線 下面積為5. 3152m mg/L · h，體內藥物濃度維持時間為22. 0910h。實施例1的泰樂菌素明 膠微球的血菜一藥時數據符合三室開放式模型，理論方程C1=L 4572e-3'9950t +0. 4621e_°_2629 t+0. 1526e_°_°4°7t。計算的藥動學參數結果表明，靜注TT-GMS混懸注射液(9g/Kg)後，分布半 衰期為2. 4307h,消除半衰期為15. 7201h,曲線下面積為19. 8090 mg/L -h,體內藥物濃度維 持時間為96. 9400h。 9、採用上述相同的方法對實施例2-6進行試驗，最終得到的結果見表1。
權利要求
一種酒石酸泰樂菌素微球的製備方法，其特徵在於每1g酒石酸泰樂菌素按照如下步驟製成酒石酸泰樂菌素微球1)取明膠0.1 2g，加入二次水製成5mL明膠溶液，在50℃溫水浴中溶脹，然後加入1g酒石酸泰樂菌素，攪拌均勻，得到水相；2)取液體石蠟和1.0 2.0%的司盤 80按照4 61的體積比混合，得到油相；3)將步驟1)得到的水相以15 7的體積比加入到步驟2)得到的油相中，並在500 800 r/min的轉速下攪拌均勻，冷卻至5℃以下，加入戊二醛交聯劑進行交聯固化；4)用異丙醇洗去多餘的交聯劑，然後再用石油醚洗去微球表面的液體石蠟，真空乾燥，得到酒石酸泰樂菌素微球。
2.根據權利要求1所述的酒石酸泰樂菌素微球的製備方法，其特徵在於所述戊二醛 的加入量為l_5mL，固化時間為20-50分鐘。
全文摘要
本發明公開了一種酒石酸泰樂菌素微球的製備方法，採用明膠為載體，以液體石蠟和司盤80為油相，採用戊二醛為交聯劑製備酒石酸泰樂菌素微球。本發明的酒石酸泰樂菌素微球，採用明膠作載體材料，無不良反應，無免疫原性，具生物可降解性，應用廣泛，可口服亦可注射。採用液體石蠟和司盤80為油相，能夠提高微球的載藥量和包封率，而且有助於戊二醛的交聯固化，從而延長微球藥物的消除半衰期，在動物體內起到藥物緩釋的作用。另外，本發明的製備方法操作簡單，所採用的試劑平常無奇，製備的成本較底，易於推廣應用。
文檔編號A61K47/22GK101947207SQ20101050925
公開日2011年1月19日 申請日期2010年10月15日 優先權日2010年10月15日
發明者吳紅雲, 李建正, 班曼曼 申請人:鄭州后羿製藥有限公司