一種反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離裝置及分離方法
2023-05-03 04:54:56
一種反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離裝置及分離方法
【專利摘要】本發明公開了一種反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離裝置及分離方法，該分離裝置包括：培養皿、四耳防鏽金屬圈、紗布網；所述四耳防鏽金屬圈設置在所述培養皿上，所述紗布固定在所述四耳防鏽金屬圈上。該分離方法包括以下步驟：備檢材料的採取及處理；線蟲寄生階段幼蟲的分離；顯微鏡下檢查線蟲幼蟲的種類及數量。本發明利用線蟲寄生期幼蟲的趨水性和趨熱性原理，提供一種程序簡便、檢出效率高、適用範圍廣、穩定性好、靈敏度高、成本低、清潔度高的反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離裝置及其檢查方法。
【專利說明】一種反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離裝置及分離方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於線蟲寄生階段幼蟲研究【技術領域】，尤其涉及一種反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離裝置及分離方法。
【背景技術】
[0002]線蟲病是反芻動物的常見病之一，尤其放牧家畜和野生草食動物最為常見多發，其病原種類多，分布廣，感染率高，感染強度大，危害嚴重，直接影響家畜成活率和生產性能，使增重減慢，產肉、產毛量降低，常在春季出現成蟲寄生高潮而引起蟲性下痢、瘦弱死亡，給草原畜牧業經濟造成了巨大的損失。
[0003]線蟲的絕大部分為土源性線蟲，其完成一個發育世代需要經過成蟲、蟲卵、自由生活階段幼蟲(包括第一、二、三期幼蟲)、寄生階段幼蟲(包括第四、五期幼蟲)等幾個發育期。迄今，對成蟲、蟲卵的檢查方法較為成熟，多採用寄生蟲學完全剖檢法檢查成蟲和糞便蟲卵檢查法檢查蟲卵及糞便中的第一期幼蟲；但對處於寄生階段的第四、五期幼蟲的分離方法及鑑定技術研究不夠深入，致使對線蟲病病原生物學特性、流行病學研究，防治藥物效果評價與防制技術研究等長期停滯在成蟲、蟲卵水平上，而不能對線蟲寄生階段幼蟲進行有效的研究。對線蟲寄生階段幼蟲的分離方法在國內研究者中尚存在多種不同意見，而線蟲寄生階段幼蟲的數量統計對研究以上問題佔有決定性的意義，並且評價抗蠕蟲藥的驅蟲效果，也要檢查藥物對親組織期幼蟲的作用。因此，試驗選擇出一種較好的線蟲寄生階段幼蟲分離裝置和分離方法，在科研、生產上有著重要的價值。
[0004]線蟲寄生階段幼蟲的分離培養涉及多種因子，包括培養分離液的濃度、溫度的選擇、培養時間及分離裝置等，以下幾方面是直接影響分離成本、幼蟲檢出率、幼蟲清潔度和方法的穩定性及適用性的主要因素。(I)培養分離液的濃度直接影響寄生蟲的形態的完整性、穩定性和保存時間。在分離、保存過程中，對線蟲寄生階段幼蟲的表皮而言，培養分離液是一種新的外部環境，其濃度過高，則對寄生蟲的表皮形成一種高滲環境，導致蟲體表皮的驟然脫水皺縮，使蟲體內壓力迅速升高，引起崩解；其濃度過低，則導致蟲體膨脹、裂解。常規用於培養、保存線蟲成蟲的氯化鈉溶液濃度為0.9%的生理鹽水或更高，而對線蟲幼蟲使用該濃度的氯化鈉溶液存在蟲體變形、崩解等問題。(2)培養溫度也是影響線蟲寄生階段幼蟲分離培養的一個重要因素，溫度過低，則幼蟲活動性不強，導致幼蟲分離率降低，分離時間變長，溫度過高，易使幼蟲死亡崩解。(3)培養時間也是影響線蟲寄生階段幼蟲分離培養的一個重要因素，時間過短，易使幼蟲分離率降低、分離幼蟲總量變少；分離時間過長，易使幼蟲腐爛變質，亦使分離幼蟲成本增加。(4)分離裝置是影響線蟲寄生階段幼蟲分離培養的一個關鍵因素，其直接影響幼蟲檢出率、幼蟲清潔度和分離成本等。
[0005]通常線蟲寄生階段幼蟲的分離方法有與其配套的分離裝置，常用的分離方法主要有貝爾曼氏法、胃酶消化向熱法和瓊脂向熱法等，在應用貝爾曼氏法檢查時，必須使用貝爾曼氏裝置，其主要由普通玻璃漏鬥、膠皮管、小試管等連接而成；胃酶消化向熱法的裝置主要由漏鬥、粗紗網、細玻璃珠、玻璃棉等組成的類似貝爾曼氏法裝置構成；瓊脂向熱法的裝置主要由培養皿、瓊脂紗布網、濾紙條等構成，這些方法及其裝置在實際應用中各有利弊，如貝爾曼氏法由於普通玻璃漏鬥(直徑1cm)和小試管(長2cm)小，所盛裝的水和糞便樣品量少，進而所收集的線蟲寄生階段幼蟲數量也就少，導致幼蟲檢出率低，靈敏性較差，僅能檢查糞便中的肺線蟲I期幼蟲；胃酶消化向熱法及其裝置不能用於對胃腸內容物材料的檢查，其檢出效率低，鏡檢不夠方便；瓊脂向熱法及其裝置對幼蟲的檢出效率較低，其分離裝置複雜，檢查時間長。
【發明內容】
[0006]本發明的目的在於提供一種反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離裝置及分離方法，旨在解決現有線蟲幼蟲分離方法易使幼蟲崩解、檢出率低、清潔度不高等問題，解決現有的貝爾曼氏法由於普通玻璃漏鬥和小試管小，所盛裝的水和糞便樣品量少，進而所收集的線蟲寄生階段幼蟲數量也就少，導致幼蟲檢出率低，靈敏性較差，僅能檢查肺線蟲I期幼蟲；胃酶消化向熱法及其裝置不能用於對胃腸內容物材料的檢查，其檢出效率低，鏡檢不夠方便；瓊脂向熱法及其裝置對幼蟲的檢出效率較低，其分離裝置複雜，檢查時間長的問題。
[0007]本發明是這樣實現的，一種反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離裝置，所述反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離裝置包括:培養皿、四耳防鏽金屬圈、紗布網；
[0008]所述四耳防鏽金屬圈設置在所述培養皿上，所述紗布固定在所述四耳防鏽金屬圈上。
[0009]進一步，所述紗布通過棉線縫製固定在四耳防鏽金屬圈上。
[0010]進一步，所述四耳防鏽金屬圈通過四耳託架於培養皿上。
[0011]本發明的目的在於提供一種反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離方法，所述反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離方法包括以下步驟:
[0012]備檢材料的採取及處理；
[0013]線蟲寄生階段幼蟲的分離；
[0014]顯微鏡下檢查線蟲幼蟲的種類及數量。
[0015]本發明實施例的反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離方法具體步驟為:
[0016]進一步，備檢材料的採取及處理包括以下步驟:
[0017]器官組織:分別採取反芻動物真胃、十二直腸、迴腸、盲腸、結腸，剪開衝洗乾淨，刮取黏膜；採取腸繫膜淋巴結、縱隔淋巴結、氣管，撕碎，充分混勻待用；
[0018]胃腸內容物:分別收集真胃、小腸前段、小腸後段、盲腸、結腸內容物，用400C 0.5%氯化鈉溶液反覆沉澱，每次靜置1-1.5小時，直至上清液清亮為止，棄取上清液，挑出沉渣中的全部成蟲，然後將沉渣充分攪勻待用。
[0019]進一步，線蟲寄生階段幼蟲的分離具體步驟為:
[0020]器官組織:將處理好的器官組織材料平攤在一塊脫脂紗布中央，厚度不超過3-4毫米，折起紗布四邊覆蓋材料表面，平整的將紗布放到分離裝置的紗布網上，
[0021]胃腸內容物:先在分離裝置的紗布網上鋪一塊紗布，再將處理好的胃腸內容物均勻傾布在紗布表面，厚度不超過5毫米，折起紗布四邊覆蓋材料表面；
[0022]進一步，沿培養皿壁加入42°C 0.5%氯化鈉溶液至淹沒材料表面；
[0023]進一步，將整個分離裝置移入42°C水浴箱內，培養5小時，然後慢慢取出紗布網和被檢材料，收集分離液。
[0024]進一步，對收集液反覆沉澱或離心後，顯微鏡下檢查線蟲幼蟲，分類、計數幼蟲。
[0025]本發明與現有方法比較具有以下優點:
[0026]1.本發明以0.5%的氯化鈉溶液分離幼蟲，蟲體崩解極少，蟲體形態無變化。反覆試驗證明:在0.9%的生理鹽水或更高濃度的氯化鈉溶液中，線蟲幼蟲形態變形嚴重、崩解多；在0.6% -0.75%的氯化鈉溶液中，蟲體的崩解較少，形態無明顯變化；而在分離器官組織中的寄生階段幼蟲時，使用0.5%的氯化鈉溶液效果好。
[0027]2.本發明以42 °C的0.5%氯化鈉溶液作為培養液，在42 °C水浴箱內培養分離5小時。本發明的線蟲幼蟲培養分離時間經反覆試驗證明:為使線蟲寄生階段幼蟲從反芻動物的真胃、十二直腸、迴腸、盲腸、結腸黏膜、繫膜淋巴結、縱隔淋巴結、氣管等器官組織和胃腸內容物中分離出來，以加熱至42°C的0.5%氯化鈉溶液作為培養液，在42°C水浴箱內培養分尚，培養3小時,少量幼蟲進入分尚液，培養5小時,絕大部分幼蟲進入分尚液，培養5-7小時極少數幼蟲進入分離液，因此培養時間以5小時最佳。該方法穩定性好、靈敏度高、成本低，而且幼蟲的檢出率比已有的分離方法檢出率有顯著的提高。
[0028]3.本發明提供的反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離裝置，其結構簡單、成本低、操作方便，具有檢出效率高、適用範圍廣、穩定性好、靈敏度高、幼蟲清潔度高等優點。
[0029]4.本發明的反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離裝置及分離方法，利用線蟲寄生期幼蟲的趨水性和趨熱性原理，提供一種程序簡便、檢出效率高、適用範圍廣、穩定性好、靈敏度高、成本低、清潔度高的反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離裝置及其檢查方法。
[0030]5.本發明提供的反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離裝置及分離方法，國內目前沒有相關報導，本發明的分離裝置及分離方法可克服現有分離方法和裝置的缺點，能夠有效的檢出器官組織及胃腸內容物內的幼蟲及數量統計，適用範圍廣，可用於動物線蟲生物學特性、生態學及流行規律研究，抗寄生蟲藥物對線蟲寄生階段幼蟲的效力評價，防治技術實施效果考核等，具有較高的學術意義和重要的經濟價值。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0031]圖1是本發明實施例提供的反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離裝置的結構示意圖；
[0032]圖2是本發明實施例提供的反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離裝置的剖視圖；
[0033]圖3是本發明實施例提供的四耳防鏽金屬圈的俯視圖；
[0034]圖中:1、培養皿；2、四耳防鏽金屬圈；2_1、四耳；2_2、金屬圈；2_2_1、針孔；3、紗布網；4、備檢材料；
[0035]圖4是本發明實施例提供的反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離方法的流程圖。
【具體實施方式】
[0036]為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合實施例，對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，並不用於限定本發明。
[0037]圖1示出了本發明提供的反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離裝置結構。為了便於說明，僅僅不出了與本發明相關的部分。
[0038]本發明的反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離裝置，該反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離裝置包括:培養皿、四耳防鏽金屬圈、紗布網；
[0039]四耳防鏽金屬圈設置在培養皿上，紗布固定在四耳防鏽金屬圈上。
[0040]作為本發明實施例的一優化方案，紗布通過棉線縫製固定在四耳防鏽金屬圈上。
[0041]作為本發明實施例的一優化方案，四耳防鏽金屬圈通過四耳託架固定於培養皿上。
[0042]下面結合附圖及具體實施例對本發明的應用原理作進一步描述。
[0043]如圖1、2、3所示，本發明實施例的反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離裝置主要由培養皿1、四耳防鏽金屬圈2、紗布網3組成；四耳防鏽金屬圈是由金屬圈2-2和四耳2-1組成的一個整體結構，金屬圈2-2外圈直徑小於培養皿I直徑，四耳2-1高度低於培養皿I的深度，可架在培養皿I上，金屬圈2-2上有針孔2-2-1，紗布網3通過針孔2-2-1用棉線縫製在金屬圈2-2上；使用時，先將紗布網3通過針孔2-2-1用棉線縫製在金屬圈2-2上，再將縫好紗布網3的四耳防鏽金屬圈2通過四耳2-1託架在培養皿I上；
[0044]本發明的操作方法:將備檢材料4用脫脂紗布包好，平整移入分離裝置的紗布網3上，沿培養皿壁加入42°C 0.5%氯化鈉溶液至淹沒材料表面，移入42°C水浴箱內3-7小時，由於重力作用和線蟲幼蟲有趨水性及趨熱性，線蟲幼蟲遊走於水中，並沉於平皿底部，然後慢慢取出紗布網和被檢材料，收集分離液，反覆沉澱和離心，鏡檢分類、計數幼蟲。
[0045]如圖4所示，本發明的實施例的反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離方法包括以下步驟:
[0046]S201:備檢材料的採取及處理；
[0047]S202:線蟲寄生階段幼蟲的分離；
[0048]S203:顯微鏡下檢查線蟲幼蟲的種類及數量。
[0049]本發明實施例的反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離方法具體步驟為:
[0050]第一步，備檢材料的採取及處理
[0051]器官組織:分別採取反芻動物真胃、十二直腸(4米)、迴腸(4米)盲腸、結腸，剪開衝洗乾淨，刮取黏膜；採取腸繫膜淋巴結、縱隔淋巴結、氣管，撕碎，充分混勻待用；
[0052]胃腸內容物:分別收集真胃、小腸前段、小腸後段、盲腸、結腸內容物，用400C 0.5%氯化鈉溶液反覆沉澱，每次靜置1-1.5小時，直至上清液清亮為止，虹吸棄取上清液，挑出沉渣中的全部成蟲，然後將沉渣充分攪勻待用。
[0053]第二步，線蟲寄生階段幼蟲的分離
[0054]將備檢材料移入分離裝置
[0055](I)器官組織:將處理好的器官組織材料平攤在一塊脫脂紗布中央，厚度不超過3-4毫米，折起紗布四邊覆蓋材料表面，平整的將紗布放到分離裝置的紗布網上；
[0056](2)胃腸內容物:先在分離裝置的紗布網上鋪一塊紗布，再將處理好的胃腸內容物均勻傾布在紗布表面，厚度不超過5毫米，折起紗布四邊覆蓋材料表面；
[0057]沿培養皿壁加入42°C 0.5%氯化鈉溶液至淹沒材料表面；
[0058]將整個分離裝置移入42°C水浴箱內培養5小時，然後慢慢取出紗布網和被檢材料，收集分離液；
[0059]第三步，對收集液反覆沉澱或離心，鏡檢分類、計數幼蟲。
[0060]用本發明的這種裝置及方法從反芻動物的器官組織材料或胃腸內容物材料中分離幼蟲，方法簡便，檢出效率高，適用範圍廣。
[0061]以上所述僅為本發明的較佳實施例而已，並不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護範圍之內。
【權利要求】
1.一種反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離裝置，其特徵在於，所述反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離裝置包括:培養皿、四耳防鏽金屬圈、紗布網； 所述四耳防鏽金屬圈設置在所述培養皿上，所述紗布固定在所述四耳防鏽金屬圈上。
2.如權利要求1所述的反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離裝置，其特徵在於，四耳防鏽金屬圈由金屬圈和四耳組成，金屬圈上有針孔，金屬圈的外圈直徑小於培養皿直徑，四耳的末端為鈍頭，四耳的高度低於培養皿的深度。
3.如權利要求1所述的反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離裝置，其特徵在於，所述紗布通過針孔用棉線縫製固定在四耳防鏽金屬圈上。
4.如權利要求1所述的反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離裝置，其特徵在於，所述四耳防鏽金屬圈通過四耳託架於培養皿上。
5.一種反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離方法，其特徵在於，所述反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離方法包括以下步驟: 備檢材料的採取及處理； 線蟲寄生階段幼蟲的分離； 顯微鏡下檢查線蟲幼蟲的種類及數量。
6.如權利要求5所述的反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離方法，其特徵在於，備檢材料的採取及處理包括以下步驟: 器官組織:分別採取反芻動物真胃、十二直腸、迴腸、盲腸、結腸，剪開衝洗乾淨，刮取黏膜；採取腸繫膜淋巴結、縱隔淋巴結、氣管，撕碎，充分混勻待用； 胃腸內容物:分別收集真胃、小腸前段、小腸後段、盲腸、結腸內容物，用40°C 0.5%氯化鈉溶液反覆沉澱，每次靜置1-1.5小時，直至上清液清亮為止，棄取上清液，挑出沉渣中的全部成蟲，然後將沉渣充分攪勻待用。
7.如權利要求5所述的反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離方法，其特徵在於，線蟲寄生階段幼蟲的分離具體步驟為: 器官組織:將處理好的器官組織材料平攤在一塊脫脂紗布中央，厚度不超過3-4毫米，折起紗布四邊覆蓋材料表面，平整的將紗布放到分離裝置的紗布網上； 胃腸內容物:先在分離裝置的紗布網上鋪一塊紗布，再將處理好的胃腸內容物均勻傾布在紗布表面，厚度不超過5毫米，折起紗布四邊覆蓋材料表面； 沿培養皿壁加入氯化鈉溶液至淹沒材料表面，將整個分離裝置移入水浴箱內放置一段時間，然後慢慢取出紗布網和被檢材料，收集分離液。
8.如權利要求7所述的反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離方法，其特徵在於，沿培養皿壁加入的氯化鈉溶液為42°C 0.5%的氯化鈉溶液。
9.如權利要求7所述的反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離方法，其特徵在於，分離裝置移入42°C水浴箱內培養5小時。
10.如權利要求5所述的反芻動物線蟲寄生階段幼蟲的分離方法，其特徵在於，對收集液反覆沉澱或離心後，顯微鏡下檢查線蟲幼蟲，分類、計數幼蟲。
【文檔編號】A01K67/033GK104285889SQ201310296226
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2013年7月15日 優先權日:2013年7月15日
【發明者】蔡進忠, 雷萌桐, 李春花, 彭毛 申請人:青海省畜牧獸醫科學院