一種靈芝孢子油、靈芝孢子粉及其製劑的質量控制方法
2023-05-02 21:36:31
專利名稱：一種靈芝孢子油、靈芝孢子粉及其製劑的質量控制方法
技術領域：
本發明涉及一種藥品或保健品質量分析方法，具體是涉及一種測定靈芝孢子油、靈芝孢子粉及其製劑中麥角甾醇含量的方法。
背景技術：
靈芝是擔子菌綱多孔菌科(Polyproraceae)靈芝屬(Ganoderma)真菌赤芝[Ganoderma lucidium(Leyss.ex Fr.)Karst.]和紫芝[Ganodermajaponicum(Fr.)Lloyd.]的總稱，具有扶正固本等功效，被《本經》稱為上品。靈芝孢子(Ganoderma lucidiumspore)是靈芝生長成熟期從菌蓋彈射出來極其細小的孢子，為靈芝的生殖細胞，具有靈芝的全部遺傳活性物質，其藥用價值也正日益受到重視。靈芝孢子的藥理作用主要有抗腫瘤、免疫調節、調節血脂以及對神經、心血管和呼吸系統有調節改善作用。關於靈芝孢子的產品也越來越多，如靈芝孢子油、靈芝孢子粉及其它們的製劑有靈芝孢子油軟膠囊、靈芝孢子油脂肪乳注射劑、靈芝孢子油脂肪乳口服劑、靈芝孢子粉膠囊、靈芝孢子粉片、靈芝孢子粉散劑等，但真假難分，質量優劣難分，沒有一種好的控制質量的方法。
靈芝孢子的化學成分複雜，文獻報導有以下幾類甾醇類、三萜類、生物鹼類、脂肪酸類、內酯、蛋白質和胺基酸類、糖肽類、維生素類、胡蘿蔔素、和無機離子類等。現有報導控制靈芝孢子質量的文獻主要集中在水溶性成分靈芝多糖的含量測定，而對脂溶性成分的含量測定主要是用紫外光譜法測定靈芝孢子油中的總三萜含量，但在靈芝孢子粉中三萜的含量很少，且測定時專屬性不強，在其它植物油用同樣的方法中也能測到總三萜類成分；用高效液相色譜法幾乎測不到總三萜中單一成分，用來評價孢子粉及孢子油的質量有一定的局限性。現仍未有用麥角甾醇的含量來評價靈芝孢子粉、孢子油及其製劑質量的文獻報導。
麥角甾醇是菌類植物特有成分，不僅存在於靈芝孢子粉中，在靈芝孢子油中亦有麥角甾醇。作為脂肪油是靈芝孢子油為目前文獻所報導的唯一的菌類植物油，因此，麥角甾醇亦是靈芝孢子油區別於其它植物油的特徵成分。靈芝孢子中含有較高含量的脂肪油，約20％～30％，可通過提取直接製成靈芝孢子油。靈芝孢子油主含脂肪酸，也含甾醇類，具有與靈芝孢子粉相同的功效。所以建立靈芝孢子粉、靈芝孢子油及其製劑中麥角甾醇的測定含量方法是控制其質量的一種有效方法。
發明內容
本發明的目的在於提供一種新的既能控制靈芝孢子粉又能控制靈芝孢子油及其製劑的質量的測定方法，具體是測定靈芝孢子油、靈芝孢子粉及其製劑中麥角甾醇含量的方法。
本發明的目的通過以下技術方案來實現的一種靈芝孢子油或靈芝孢子粉或其製劑的質量控制方法是a.用高效液相色譜法測定其產品中麥角甾醇的含量或b、用薄層掃描色譜法測定其產品中麥角甾醇的含量，具體操作方法按中國藥典附錄規定的常規技術進行。
所說的a、用採高效液相色譜法測定靈芝孢子油或靈芝孢子粉或其製劑產品中麥角甾醇的含量的具體色譜條件、操作方法經試驗摸索，可以按下述步驟進行一、供試品溶液的製備(1)靈芝孢子油及製劑供試品的製備取0.5～5g靈芝孢子油或含靈芝孢子油0.5～5g的製劑，以油的10倍量的石油醚溶解，加於50～300目，5～25g，內徑10～20mm的矽膠柱上，用石油醚∶乙酸乙酯為99∶1～85∶15的溶液60～150ml洗脫，棄去洗脫液，再用石油醚∶乙酸乙酯為50∶50～85∶15的溶液60～150ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，用10倍量甲醇溶解並定容，搖勻，即得；(2)靈芝孢子粉及其製劑供試品的製備取靈芝孢子粉1～10g或含靈芝孢子粉1～10g的製劑，採用有機溶劑提取，回收溶劑得靈芝孢子粉提取物，以提取物的10倍量石油醚溶解，加於50～300目，5～25g，內徑10～20mm的矽膠柱上，用石油醚∶乙酸乙酯為99∶1～85∶15的溶液60～150ml洗脫，棄去洗脫液，再用石油醚∶乙酸乙酯為50∶50～85∶15的溶液60～150ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，用10倍量甲醇溶解並定容，搖勻，即得；二、對照品溶液的製備取麥角甾醇對照品，加甲醇溶解並定容，搖勻配成每1ml含0.2mg或0.08mg麥角甾醇的溶液為對照品溶液；三、色譜條件用十八烷基鍵合矽膠為填充劑；以甲醇、乙醇、乙腈、甲醇水溶液、乙醇水溶液、乙腈水溶液或甲醇、乙醇、乙腈與水的三元或四元組成混合液或四氫呋喃∶水為75∶25的溶液為流動相；檢測波長為280±2nm；理論板數按麥角甾醇峰計算，應不低於2000；四、測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測定，計算，即得，每1g靈芝孢子粉、靈芝孢子油或相當於1g靈芝孢子粉、1g靈芝孢子油的製劑中含麥角甾醇的量分別應為0.1mg～0.5mg、0.4mg～2.0mg。
優選的色譜條件、操作方法是在步驟一、供試品溶液的製備(1)靈芝孢子油及製劑的供試品溶液的製備精密取靈芝孢子油1g或含靈芝孢子油1g的製劑，以石油醚10ml使溶解，加於100～200目，10g，內徑15mm的矽膠柱上，用石油醚∶乙酸乙酯為9∶1的溶液120ml洗脫，棄去洗脫液，再用石油醚∶乙酸乙酯為8∶2的溶液120ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，用10倍量甲醇溶解、定容，搖勻，即得供試品溶液；所述的步驟三、色譜條件中優選用甲醇為流動相。
所說的b、薄層掃描色譜法測定靈芝孢子油或靈芝孢子粉或其製劑產品中麥角甾醇的含量的具體色譜條件、操作方法經試驗摸索，可以按下述步驟進行一、供試品溶液的製備(1)靈芝孢子油及製劑供試品的製備取0.5～5g靈芝孢子油或含靈芝孢子油0.5～5g的製劑，以油的10倍量石油醚溶解，加於50～300目，5～25g，內徑10～20mm的矽膠柱上，用石油醚∶乙酸乙酯為99∶1～85∶15的溶液60～150ml洗脫，棄去洗脫液，再用石油醚∶乙酸乙酯為50∶50～85∶15的溶液60～150ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，用5倍量甲醇溶解並定容，搖勻，即得。(2)靈芝孢子粉及其製劑供試品的製備取靈芝孢子粉1～10g或含靈芝孢子粉1～10g的製劑，採用氯仿、乙醚、乙酸乙酯、石油醚提取，回收溶劑得靈芝孢子粉提取物，以提取物的10倍量的石油醚溶解，加於50～300目，5～25g，內徑10～20mm的矽膠柱上，用石油醚∶乙酸乙酯為99∶1～85∶15的溶液60～150ml洗脫，棄去洗脫液，再用石油醚∶乙酸乙酯為50∶50～85∶15的溶液60～150ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，用5倍量甲醇溶解並定容，搖勻，即得；二、對照品溶液的製備取麥角甾醇對照品，加甲醇溶解並定容，搖勻配成每1ml含0.2mg或0.08mg麥角甾醇的溶液為對照品溶液；三、色譜條件與波長用矽膠薄層板、；展開系統60～90℃的石油醚∶醋酸乙酯為7.5∶2.5或甲苯∶醋酸乙酯∶冰醋酸為7.5∶2.2∶0.3或60～90℃的石油醚∶氯仿∶甲醇為4.5∶4.5∶1或苯∶氯仿∶醋酸乙酯為3∶5∶2；測定波長為280±2nm；矽膠薄層板可用矽膠G、矽膠GF254、矽膠H等薄層板；四、測定分別精密吸取對照品溶液4μl和8μ和供試品溶液各6μl，交叉點樣於薄層板上，展開系統展開，取出，涼幹，外標法掃描測定，計算，即得；每1g靈芝孢子粉、靈芝孢子油或相當於1g靈芝孢子粉、1g靈芝孢子油的製劑中含麥角甾醇的量分別應為0.1mg～0.5mg、0.4mg～2.0mg。
薄層掃描色譜法的測定方法中優選的色譜條件、操作方法是所說的步驟中一、(1)靈芝孢子油或其製劑的供試品溶液製備精密稱取靈芝孢子油1g或含靈芝孢子油1g的製劑，以石油醚10ml使溶解，加於100～200目，10g，內徑15mm的矽膠柱上，用石油醚∶乙酸乙酯為9∶1的溶液100ml洗脫，棄去洗脫液，再用石油醚∶乙酸乙酯為8∶2的溶液120ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣用5倍量的甲醇溶解並定容，搖勻，即得供試品溶液；二、對照品溶液的製備取麥角甾醇對照品加甲醇製成每1ml含0.2mg的溶液；三、色譜條件與波長用矽膠GF254薄層板，展開系統是苯∶氯仿∶醋酸乙酯為3∶5∶2的溶液；本發明的有益效果該含量測定方法能準確的測定靈芝孢子油和靈芝孢子粉及其製劑中的麥角甾醇的含量，可作為這些產品質量控制的方法和依據，該方法可操作性強，重現性高，特異性強，麥角甾醇是控制靈芝孢子油和靈芝孢子粉及製劑質量的有效成分指標之一。
下面通過實施例進一步說明本發明的技術方案。
具體實施例方式
實施例1、高效液相色譜法測定靈芝孢子油中麥角甾醇含量的方法的研究(1)儀器與樣品儀器Agilent 1100高效液相色譜儀，DAD檢測器，四元梯度泵，G2170AA數據處理軟體系統(美國)。甲醇為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。
樣品對照品麥角甾醇由sigma公司提供；靈芝孢子油由廣州漢方現代中藥研究開發有限公司提供。
供試品溶液的製備精密稱取1g靈芝孢子油，加石油醚10ml使溶解，加於(100～200目，10g，內徑15mm)的矽膠柱上，用石油醚∶乙酸乙酯為90∶10的溶液100ml洗脫，棄去洗脫液，再用石油醚∶乙酸乙酯為80∶20的溶液120ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣用甲醇溶解，即得供試品溶液；對照品溶液的製備取麥角甾醇對照品加甲醇製成每1ml含0.2mg的溶液。
(2)色譜條件色譜柱Kromasil C18，4.6mm×250mm，5um柱；柱溫30℃；流動相甲醇；檢測波長280nm；流速0.8ml/min。
(3)洗脫溶劑的選擇分別依次用石油醚→石油醚∶乙酸乙酯(9∶1)、石油醚→石油醚∶乙酸乙酯(8∶2)、石油醚∶乙酸乙酯(9∶1)→石油醚∶乙酸乙酯(8∶2)、石油醚∶乙酸乙酯(9∶1)→石油醚∶乙酸乙酯(8∶2)→石油醚∶乙酸乙酯(7∶3)的順序進行洗脫，收集最後的洗脫液，進行含量測定分析，顯示了麥角甾醇的最佳洗脫順序為石油醚∶乙酸乙酯(9∶1)→石油醚∶乙酸乙酯(8∶2)。
(4)洗脫溶劑用量的選擇分別依次用石油醚∶乙酸乙酯(9∶1)120ml→石油醚∶乙酸乙酯(8∶2)120ml→石油醚∶乙酸乙酯(7∶3)120ml洗脫，收集各部分洗脫液，分別蒸乾，並定容到10ml。然後分別進樣10ul進行含量測定，結果說明洗脫溶劑的用量為120ml最佳。
(5)高效液相色譜流動相考察麥角甾醇在Kromasil C18柱，不同流動相中的各參數，結果以甲醇、甲醇∶水(95∶5)、乙腈、乙腈∶水(95∶5)、四氫呋喃∶水(75∶25)條件下麥角甾醇的峰形良好，分離度大於1.5，均可作為流動相。
(6)線性關係考察精密量取麥角甾醇對照品溶液(0.158mg/ml)適量，用甲醇稀釋成濃度分別為0.0316，0.0632，0.0948，0.1264，0.158mg/ml的溶液，分別取以上各濃度的標準品溶液10ul，注入液相色譜儀，以進樣量(ng)為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪製標準曲線。結果見表1。
表1 線性關係實驗數據(n＝5)
Y＝1.08581X+1.58888，R＝0.99999。
以上結果表明在316ng～1580ng範圍內，呈良好的線性關係。
(7)精密度試驗取麥角甾醇對照品溶液(0.158mg/m1)適量，用甲醇稀釋成濃度分別為0.079mg/ml的溶液，精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl重複進樣6次，麥角甾醇峰面積值的RSD＜2％，結果見表2。
表2 精密度試驗數據(n＝6)
試驗證明，精密度良好。
(8)穩定性試驗取樣品供試液分別於0小時，1小時，2小時，3小時，4小時，24小時，分別進樣10μl，測得樣品中麥角甾醇峰面積的RSD＜2％，結果見表3。
表3 穩定性試驗數據
試驗結果表明，樣品供試液在24小時內穩定性良好。
(9)重現性試驗照含量測定項下操作，對同一批樣品6份進行測定，求得相對標準偏差RSD為1.57％。表4表4 重現性試驗數據
(10)回收率試驗用加樣回收，精密稱取已知含量為0.0585％的樣品0.5g，分別精密加入麥角甾醇對照品溶液(0.079mg/ml)4ml，照含量測定項下操作，結果見表5表5 回收率試驗結果
試驗結果表明回收率在99.37-103.80％之間，加樣回收良好。
實施例2、靈芝孢子油中麥角甾醇含量測定照上述實施例1含量測定的方法操作，測定了10個樣品靈芝孢子油中麥角甾醇的含量，結果見表6。
表6 樣品中麥角甾醇的含量測定結果(n＝2)
測得每1g靈芝孢子油中麥角甾醇的含量在0.423～1.920mg之間。
實施例3、靈芝孢子油乳劑中麥角甾醇的含量測定用高效液相色譜法測定色譜條件與波長選擇用十八烷基鍵合矽膠為填充劑；甲醇為流動相；檢測波長為280nm。理論板數按麥角甾醇峰計算，應不低於2000；對照品溶液的製備取麥角甾醇對照品適量，加甲醇製成每1ml含0.08mg的溶液，即得對照品溶液；供試品溶液的製備精密稱取含靈芝孢子油乳劑10g，加入2g無水硫酸鈉，於水浴上加熱使乳劑破裂，轉移至分液漏鬥中，以乙醚萃取3次，每次20ml，合乙醚液，蒸乾，以石油醚10ml溶解，加於已處理好的矽膠柱(100～200目，10g，內徑15mm)上，用石油醚∶乙酸乙酯(9∶1)120ml洗脫，棄去洗脫液，再用石油醚∶乙酸乙酯(8∶2)120ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣用甲醇溶解並轉移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液；測定結果分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測定，計算，即得。每1g乳劑中含麥角甾醇0.08mg。
實施例4、薄層掃描色譜法測定靈芝孢子油中麥角甾醇含量方法的研究1.儀器試劑 瑞士CAMAGIII型薄層掃描儀，GF254矽膠板，試劑均為AR級，靈芝孢子油由廣州漢方現代中藥研究開發有限公司通過，麥角甾醇對照品由sigma公司提供。
2.含量測定對照品溶液的製備精密稱取麥角甾醇2.0125mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，即得每1ml含0.20125mg的對照品溶液。
供試品溶液的製備精密稱取靈芝孢子油1g，以石油醚10ml使溶解，加於已處理好的矽膠柱(100～200目，10g，內徑15mm)上，用石油醚∶乙酸乙酯(9∶1)100ml洗脫，棄去洗脫液，再用石油醚∶乙酸乙酯(8∶2)120ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣用甲醇溶解並轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液；2.1標準曲線製備精密吸取對照品溶液4、6、8、10、12μl點樣於同一薄層板上，以石油醚∶氯仿∶甲醇為4.5∶4.5∶1的溶液上行展開，取出晾乾，於254nm紫外光下定位。以含量為縱坐標，積分面積為橫坐標進行回歸計算，結果表明樣品測定量在0.8050～2.4150μg之間成良好的線性關係。回歸方程Y＝-4538.2+13476.9X；γ＝0.9991。
2.2樣品含量測定點樣供試品溶液6μl於GF254矽膠板上，同時點樣標準液4μl，8μl於同一塊板，按標準曲線製備項下進行掃描測定，以兩點法計算含量，換算成樣品的百分含量。測得靈芝孢子油中麥角甾醇含量0.0825(％)，RSD為1.83％(n＝5)。
2.3加樣回收率實驗用加樣回收，精密稱取已知含量為0.083％的樣品0.5g，分別精密加入麥角甾醇對照品溶液(0.079mg/ml)5ml，照樣品含量測定項下操作，計算回收率，結果測得靈芝孢子油中麥角甾醇平均回收率為102.0％，RSD為2.13％(n＝5)。
2.4精密度實驗用標準液點樣5份，每個點樣5μl於同一塊板，同法進行測定，結果平均峰面積值為8325.4，RSD為2.07％(n＝5)。
2.5穩定性實驗將供試品液點樣6μl，展開，取出晾乾後，立即進行掃描，並每隔1h測定1次，結果證明在8h內穩定，測得平均峰面積積分值為15973.2，RSD為2.54％。
2.6重現性實驗用同一批樣品，取5份，照樣品含量測定項下操作，計算含量，結果測得靈芝孢子油中麥角甾醇平均含量為0.084％，RSD為2.13％(n＝5)。
實施例5、靈芝孢子粉的含量測定用高效液相色譜法測定色譜條件與波長選擇用十八烷基鍵合矽膠為填充劑；甲醇為流動相；檢測波長為280nm。理論板數按麥角甾醇峰計算，應不低於2000；對照品溶液的製備取麥角甾醇對照品適量，加甲醇製成每1ml含0.08mg的溶液，即得對照品溶液；供試品溶液的製備取靈芝孢子粉3.5g，精密稱定，置索氏提取器中，加入乙醚30ml，冷浸過夜，再加入乙醚50ml，於水浴加熱提取8小時，提取液回收乙醚至盡，殘渣以10ml石油醚溶解，加於已處理好的矽膠柱(100～200目，10g，內徑15mm)上，用石油醚∶乙酸乙酯(90∶10)120ml洗脫，棄去洗脫液，再用石油醚∶乙酸乙酯(80∶20)120ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣用甲醇溶解並轉移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液；測定結果分別精密吸取對照品溶液與靈芝孢子油供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測定，計算，即得。每1g靈芝孢子粉中含麥角甾醇0.28mg。
實施例6、靈芝孢子粉片的含量測定用高效液相色譜法測定色譜條件與波長選擇用十八烷基鍵合矽膠為填充劑；甲醇為流動相；檢測波長為280nm。理論板數按麥角甾醇峰計算，應不低於2000；對照品溶液的製備取麥角甾醇對照品適量，加甲醇製成每1ml含0.02mg的溶液，即得對照品溶液；供試品溶液的製備取靈芝孢子粉片20片，研細，精密稱取5g，置索氏提取器中，加入乙醚30ml，冷浸過夜，再加入乙醚50ml，於水浴加熱提取8小時，提取液回收乙醚至盡，殘渣以10ml石油醚溶解，加於已處理好的矽膠柱(100～200目，10g，內徑15mm)上，用石油醚∶乙酸乙酯(90∶10)120ml洗脫，棄去洗脫液，再用石油醚∶乙酸乙酯(80∶20)120ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣用甲醇溶解並轉移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液；測定結果分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測定，計算，即得。每片靈芝孢子粉片中含麥角甾醇0.05mg。
實施例7、靈芝孢子粉膠囊的含量測定同實施例6測定方法，供試品溶液的製備時取靈芝孢子粉膠囊15粒，去除膠囊皮，取內入物後精密稱取5g，其他同實施例6操作。測得每粒靈芝孢子粉膠囊中含麥角甾醇0.08mg。
權利要求
1.一種靈芝孢子油或靈芝孢子粉或其製劑的質量控制方法，其特徵在於，a、用高效液相色譜法測定產品中麥角甾醇的含量或b、用薄層掃描色譜法測定產品中麥角甾醇的含量。
2.根據權利要求1所述的質量控制方法，其特徵在於，所說的a、高效液相色譜法測定產品中麥角甾醇含量的方法是按下述步驟進行一、供試品溶液的製備(1)靈芝孢子油及製劑的供試品溶液的製備取0.5～5g靈芝孢子油或含靈芝孢子油0.5～5g的製劑，以油的10倍量的石油醚溶解，加於50～300目，5～25g，內徑10～20mm的矽膠柱上，用石油醚∶乙酸乙酯為99∶1～85∶15的溶液60～150ml洗脫，棄去洗脫液，再用石油醚∶乙酸乙酯為50∶50～85∶15的溶液60～150ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，用10倍量的甲醇溶解並定容，搖勻，即得；(2)靈芝孢子粉及其製劑供試品的製備取靈芝孢子粉1～10g或含靈芝孢子粉1～10g的製劑，採用有機溶劑提取，回收溶劑得靈芝孢子粉提取物，以提取物的10倍量的石油醚溶解，加於50～300目，5～25g，內徑10～20mm的矽膠柱上，用石油醚∶乙酸乙酯為99∶1～85∶15的溶液60～150ml洗脫，棄去洗脫液，再用石油醚∶乙酸乙酯為50∶50～85∶15的溶液60～150ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，用10倍量的甲醇溶解並定容，搖勻，即得；二、對照品溶液的製備取麥角甾醇對照品，加甲醇溶解並定容，搖勻，配成每1ml含0.2mg或0.08mg麥角甾醇的溶液為對照品溶液；三、色譜條件用十八烷基鍵合矽膠為填充劑；以甲醇、乙醇、乙腈、甲醇水溶液、乙醇水溶液、乙腈水溶液或甲醇、乙醇、乙腈與水的三元或四元組成混合液或四氫呋喃∶水為75∶25的溶液為流動相；檢測波長為280±2nm；理論板數按麥角甾醇峰計算，應不低於2000；四、測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測定，計算，即得，每1g靈芝孢子粉、靈芝孢子油或相當於1g靈芝孢子粉、1g靈芝孢子油的製劑中含麥角甾醇的量分別為0.1mg～0.5mg、0.4mg～2.0mg。
3.根據權利要求1所述的質量控制方法，其特徵在於，所說的b、薄層掃描色譜法的測定方法是按下述步驟進行一、供試品溶液的製備(1)靈芝孢子油及製劑的供試品溶液的製備取0.5～5g靈芝孢子油或含靈芝孢子油0.5～5g的製劑，以油的10倍量石油醚溶解，加於50～300目，5～25g，內徑10～20mm的矽膠柱上，用石油醚∶乙酸乙酯為99∶1～85∶15的溶液60～150ml洗脫，棄去洗脫液，再用石油醚∶乙酸乙酯為50∶50～85∶15的溶液60～150ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，用5倍量甲醇溶解並定容，搖勻，即得；(2)靈芝孢子粉及其製劑的供試品溶液的製備取靈芝孢子粉1～10g或含靈芝孢子粉1～10g的製劑，採用氯仿、乙醚、乙酸乙酯、石油醚提取，回收溶劑得靈芝孢子粉提取物，以提取物的10倍量的石油醚溶解，加於50～300目，5～25g，內徑10～20mm的矽膠柱上，用石油醚∶乙酸乙酯為99∶1～85∶15的溶液60～150ml洗脫，棄去洗脫液，再用石油醚∶乙酸乙酯為50∶50～85∶15的溶液60～150ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，用5倍量甲醇溶解並定定容，搖勻，即得；二、對照品溶液的製備取麥角甾醇對照品，加甲醇溶解並定容，搖勻配成每1ml含0.2mg或0.08mg麥角甾醇的溶液為對照品溶液；三、色譜條件與波長用矽膠薄層板；展開系統60～90℃的石油醚∶醋酸乙酯為7.5∶2.5或甲苯∶醋酸乙酯∶冰醋酸為7.5∶2.2∶0.3或60～90℃的石油醚∶氯仿∶甲醇為4.5∶4.5∶1或苯∶氯仿∶醋酸乙酯為3∶5∶2；測定波長為280±2nm；四、測定分別精密吸取對照品溶液4μl和8μ和供試品溶液各6μl，交叉點樣於薄層板上，展開系統展開，取出，晾乾，外標法掃描測定，計算，即得；每1g靈芝孢子粉、靈芝孢子油或相當於1g靈芝孢子粉、1g靈芝孢子油的製劑中含麥角甾醇的量分別為0.1mg～0.5mg、0.4mg～2.0mg。
4.根據權利要求2所述的質量控制方法，其特徵在於，所述的步驟一、中(1)靈芝孢子油或其製劑的供試品溶液製備精密稱取靈芝孢子油1g或含靈芝孢油1g的製劑，以石油醚10ml使溶解，加於100～200目，10g，內徑15mm的矽膠柱上，用石油醚∶乙酸乙酯為9∶1的溶液120ml洗脫，棄去洗脫液，再用石油醚∶乙酸乙酯為8∶2的溶液120ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣用10倍量的甲醇溶解、定容、搖勻，即得供試品溶液；所述的步驟三、色譜條件中以甲醇為流動相。
5.根據權利要求3所述的質量控制方法，其特徵在於，所說的薄層掃描色譜法的測定方法的步驟一、(1)靈芝孢子油或其製劑的供試品溶液製備精密稱取靈芝孢子油1g或含靈芝孢子油1g的製劑，以石油醚10ml使溶解，加於100～200目，10g，內徑15mm的矽膠柱上，用石油醚∶乙酸乙酯為9∶1的溶液100ml洗脫，棄去洗脫液，再用石油醚∶乙酸乙酯為8∶2的溶液120ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣用5倍量甲醇溶解並定容，搖勻，即得供試品溶液；二、對照品溶液的製備取麥角甾醇對照品加甲醇製成每1ml含0.2mg的溶液；三、色譜條件與波長用矽膠GF254薄層板，展開系統是苯∶氯仿∶醋酸乙酯為3∶5∶2的溶液。
全文摘要
一種靈芝孢子油、靈芝孢子粉及其製劑的質量控制方法，涉及一種藥品或保健品質量分析方法，具體是涉及一種測定靈芝孢子油、靈芝孢子粉及其製劑中麥角甾醇含量的方法，即是a.用高效液相色譜法測定其產品中麥角甾醇的含量或b.用薄層掃描色譜法測定其產品中麥角甾醇的含量。每1g靈芝孢子粉、靈芝孢子油或相當於1g靈芝孢子粉、1g靈芝孢子油的製劑中含麥角甾醇的量分別應有0.1mg～0.5mg、0.4mg～2.0mg。該含量測定方法可準確控制產品的質量，可操作性強，重現性高，特異性強。
文檔編號G01N30/02GK1872097SQ20051003482
公開日2006年12月6日 申請日期2005年5月30日 優先權日2005年5月30日
發明者李吉來, 寧德山, 劉菊妍, 陳路林, 龐勝鳳, 吳德玄 申請人:廣州漢方現代中藥研究開發有限公司