原兒茶醛在製備防治支氣管哮喘的藥物中的用途

2023-07-19 17:37:41

原兒茶醛在製備防治支氣管哮喘的藥物中的用途
【專利摘要】本發明公開了原兒茶醛在製備預防和/或治療支氣管哮喘的藥物中的用途。具體地，當在哮喘早期應用原兒茶醛時，不但可明顯控制哮喘氣道炎症，還能夠通過改善哮喘肺部血液循環、降低血液粘滯度以改善哮喘缺氧狀態，保護肺部血管內皮細胞，抑制肥大細胞脫顆粒，抑制成纖維細胞分泌膠原蛋白和促進其凋亡以及鎮靜等作用，從多方面、多環節緩解或者抑制氣道重構的發生，在抑制氣道重構形態學改變上，效果優於醋酸潑尼松，且無副作用。
【專利說明】原兒茶醛在製備防治支氣管哮喘的藥物中的用途

【技術領域】
[0001] 本發明涉及醫藥【技術領域】，尤其涉及原兒茶醛在製備防治支氣管哮喘的藥物中的 用途。

【背景技術】
[0002] 支氣管哮喘（以下簡稱哮喘）是世界範圍內嚴重威脅公眾健康的一種主要慢性呼 吸道炎症性疾病。按照目前的國際醫學理論，哮喘的發病機制是T輔助細胞THl、TH2失衡 所致，呼吸道的應變性炎症是基礎，氣道高反應性是呼吸道炎性介質浸潤所引起。目前，用 於治療哮喘的西藥有很多種，包括糖皮質激素類、β 2受體激動劑、茶鹼類和部分抗過敏藥 物。近20年來哮喘的治療重心放在了包括吸入糖皮質激素（ICS)在內的慢性抗炎治療上， 並取得了巨大成功。但是近20年來的流行病學調查並沒有發現哮喘發病率和死亡率有所 降低。此外，雖然激素控制哮喘相當有效，但長期應用有可能引發諸如腎上腺皮質抑制、骨 質疏鬆和生長受抑、口腔念珠菌感染、皮膚菲薄等意想不到的副作用。而且，一小部分患者 對於激素抵抗，即不敏感。因此，尋找有效而低毒的中藥治療將會是哮喘治療的新途徑。
[0003] 如美國專利申請號為09/800, 815、名稱為"草藥治療過敏和哮喘"，公開了以中藥 經驗處方"加味三子湯"為基礎的技術方案，該技術方案是提取紫蘇子、葶藶子、杏仁、黃芩、 苦參、當歸、白芍、葛根、桔梗、甘草、大棗、生薑和珍珠母十三味中草藥的有效成分，用現代 醫學研究體系評價組方各成分解除氣道炎症、降低高反應性的作用機理，進一步研究其毒 性反應。研究結果表明，該組分具有抗氣道高應答、抗氣道炎症和調節T輔助細胞（ΤΗ1、 ΤΗ2)應答類型的作用，可用於過敏性哮喘的治療；但由於該組分中有十三味中草藥，中草 藥的種類太多，究竟是哪幾種中草藥在其中承擔了主要作用，尚不得知，因此，藥品質量難 於保證，不便於產業化生產該藥物。
[0004] 原兒茶醛化學名3, 4-二羥基苯甲醛，為冬青科植物四季青和鼠尾草植物丹參等 中藥中分離得到的活性成分。藥理實驗顯示，原兒茶醛具有抑制血小板聚集和增加冠脈流 量的作用，對金色葡萄球菌有一定的抑制作用，能減輕冠心病患者胸悶及心絞痛症狀。然 而，還沒有報導原兒茶醛在治療哮喘中的用途。


【發明內容】

[0005] 本發明的目的在於提出原兒茶醛在製備預防和/或治療支氣管哮喘的藥物中的 應用；所述藥物活性成分單一（即原兒茶醛），便於控制藥品質量和產業化生產藥物。
[0006] 為達此目的，本發明採用以下技術方案：
[0007] 本發明提供了原兒茶醛在製備預防和/或治療支氣管哮喘的藥物中的用途。
[0008] 上述用途中，作為優選，所述原兒茶醛是從純中藥丹參製備而得。
[0009] 優選地，所述藥物包括原兒茶醛和藥學上可接受的輔料。
[0010] 優選地，所述藥物為口服製劑。
[0011] 進一步優選地，所述口服製劑為片劑、膠囊、軟膠囊、顆粒劑、口服液、滴丸或口腔 速崩片。
[0012] 在優選的實施方案中，所述口服製劑為片劑或膠囊，由如下重量份的原料製成：
[0013] 原兒茶醛 100份 填充劑 60-90份 崩解劑 20-30份
[0014] 3%聚乙烯吡咯烷_水溶液 20-30份 _滑劑 i-4份。
[0015] 上述實施方案中，作為優選，所述填充劑為糖粉和/或乳糖；
[0016] 優選地，所述崩解劑為羧甲基澱粉鈉；
[0017] 優選地，所述潤滑劑為硬脂酸鎂。
[0018] 在進一步優選的實施方案中，所述口服製劑為片劑或膠囊，由如下重量份的原料 製成：
[0019] 原兒茶酸 100# 糖粉 30-40份 乳糖 30-50份 羧Φ堪澱粉鈉 20-25份 3%聚乙烯吡咯烷AM水溶液 20-25份 潤相'劑 1.5-3.5
[0020] 在進一步優選的實施方案中，所述口服製劑為片劑或膠囊，由如下重量份的原料 製成：
[0021] 原兒茶Il 100份 麵 32-38份 乳糖 35-45份 羧Φ基澱粉鈉 22-24份 3%聚乙烯吡咯烷酬水溶液 22-24份 潤滑劑 2-3 #<?
[0022] 在進一步優選的實施方案中，所述口服製劑為片劑或膠囊，由如下重量份的原料 製成：
[0023] 原兒茶酸 _份 糖粉 35份 乳糖 40份 羧Φ基澱粉_ 23份 3%聚乙烯吡咯烷_水溶液 23份 潤滑劑 2份。
[0024] 本發明的發明人發現，原兒茶醛或者以原兒茶醛為活性成分製備的藥物，當在哮 喘早期應用時，不但可明顯控制哮喘氣道炎症，還能夠通過改善哮喘肺部血液循環、降低血 液粘滯度以改善哮喘缺氧狀態，保護肺部血管內皮細胞，抑制肥大細胞脫顆粒，抑制成纖維 細胞分泌膠原蛋白和促進其凋亡以及鎮靜等作用，從多方面、多環節緩解或者抑制氣道重 構的發生，在抑制氣道重構形態學改變上，效果優於醋酸潑尼松，且無副作用。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0025] 圖1是實施例4中建模及給藥時間流程圖。
[0026] 圖2顯示OVA及藥物對BALF中嗜酸性粒細胞計數的影響。
[0027] 圖3顯示OVA及藥物對BALF中IL-4水平的影響。
[0028] 圖4顯示OVA及藥物對BALF中IFN- γ水平的影響。
[0029] 圖5顯示OVA及藥物對BALF中IL-13水平的影響。
[0030] 圖6顯示OVA及藥物對氣道平滑肌層和上皮層厚度的影響。
[0031] 圖7顯示OVA及藥物對支氣管和血管旁膠原蛋白沉積的影響。
[0032] 圖8-1為空白對照組的BABL/c小鼠目標氣道HE染色結果（X 100倍），可見氣道 周圍未見或少見炎症細胞浸潤；
[0033] 圖8-2為模型組的BABL/c小鼠目標氣道HE染色結果（X 100倍），可見目標氣道 和周圍三支大血管周圍炎症細胞浸潤，成片或成團分布，目標氣道上皮層和平滑基層較對 照組增厚明顯，肺間隔明顯增寬；
[0034] 圖8-3是醋酸潑尼松給藥組的BABL/c小鼠目標氣道HE染色結果（X 100倍），與 模型組相比，氣道和血管周圍炎症細胞浸潤明顯減輕，無成團分布，肺泡間隔增寬不明顯；
[0035] 圖8-4是原兒茶醛高劑量給藥組的BABL/c小鼠目標氣道HE染色結果（X100倍）， 可見氣道上皮層和平滑基層無明顯增厚，肺泡間隔增寬也不明顯，但氣道和血管周圍炎症 細胞浸潤與對照組相比仍有明顯增加，偶見少量成團分布；
[0036] 圖8-5是原兒茶醛低劑量給藥組的BABL/c小鼠目標氣道HE染色結果（X100倍）， 可見目標氣道和血管周圍炎症細胞浸潤成團分布，肺泡間隔仍有增寬，氣道上皮層和平滑 肌層厚度較模型組減少不明顯。
[0037] 圖9-1為對照組的BABL/c小鼠目標氣道AB-PAS染色結果（X 100倍），其為目標 氣道AB-PAS染色低倍鏡觀，未見陽染的杯狀細胞或酸性粘液物質；
[0038] 圖9-2為模型組的BABL/c小鼠目標氣道AB-PAS染色結果（X 100倍），其為目標 氣道AB-PAS染色低倍鏡觀，可見氣道上皮層陽染（紫紅色）的杯狀細胞明顯增多；
[0039] 圖9-3為醋酸潑尼松給藥組的BABL/c小鼠目標氣道AB-PAS染色結果（X 100倍）， 其為目標氣道AB-PAS染色低倍鏡觀，可見目標氣道陽染的杯狀細胞較模型組明顯減少，但 與對照組相比仍明顯增多；
[0040] 圖9-4為原兒茶醛高劑量給藥組的BABL/c小鼠目標氣道AB-PAS染色結果（X 100 倍），其為目標氣道AB-PAS染色低倍鏡觀，目標氣道僅見少量陽染的杯狀細胞；
[0041] 圖9-5為原兒茶醛低劑量給藥組的BABL/c小鼠目標氣道AB-PAS染色結果（X 100 倍），其為目標氣道AB-PAS染色低倍鏡觀，可見氣道上皮層陽染的杯狀細胞與模型組相比 無明顯減少。
[0042] 圖10-1為對照組的BABL/c小鼠目標氣道Masson染色結果（X100倍），其為目標 氣道和血管周圍膠原纖維Masson染色低倍鏡下觀，可見目標氣道和血管周圍少量膠原纖 維沉積，染成藍色；
[0043] 圖10-2為模型組的BABL/c小鼠目標氣道Masson染色結果（X100倍），其為目標 氣道和血管周圍膠原纖維Masson染色低倍鏡下觀，可見目標氣道基底膜下網狀層、平滑肌 周圍和血管周圍大量膠原纖維沉積，周邊肺間質區也可見明顯藍染的膠原纖維沉積；
[0044] 圖10-3為醋酸潑尼松給藥組的BABL/c小鼠目標氣道Masson染色結果（X100 倍），其為目標氣道膠原纖維染色低倍鏡觀，可見目標氣道基底膜下網狀層和平滑肌周圍膠 原纖維沉積明顯減少，但血管尤其是動脈周圍仍有大量膠原纖維沉積；
[0045] 圖10-4為原兒茶醛高劑量給藥組的BABL/c小鼠目標氣道Masson染色結果 (X100倍），其為目標氣道和血管周圍膠原纖維染色低倍鏡下觀，可見目標氣道基底膜下 網狀層、平滑肌和血管周圍膠原纖維沉積明顯減少，接近或達到對照組水平；
[0046] 圖10-5為原兒茶醛低劑量組的BABL/c小鼠目標氣道Masson染色結果（X100 倍），其為目標氣道和血管周圍膠原纖維染色低倍鏡下觀，可見目標氣道周圍膠原纖維沉積 較少，但血管周圍膠原纖維仍較對照組明顯增多。

【具體實施方式】
[0047] 下面結合附圖並通過【具體實施方式】來進一步說明本發明的技術方案。
[0048] 實施例1原兒茶醛的製備
[0049] 取丹參藥材50kg，去除雜質，切成長3cm_5cm的段狀，先後用飲用水及蒸餾水衝洗 乾淨。浙幹晾乾，粉碎為10-18目粉末。將丹參粉末放入提取罐中，加入10倍量的蒸餾水， 煎煮2小時，過濾，保留第一次煎液；藥渣再加8倍量蒸餾水煎煮1. 5小時，過濾，保留第二 次煎液；藥渣再加8倍量蒸餾水煎煮1. 5小時，過濾，保留第三次煎液。去除藥渣，然後合 並三次煎液。煎液用鹽酸調至中性，用填充了弱鹼性大孔吸附樹脂D301M的吸附柱進行吸 附，待吸附劑飽和後，用50%乙醇溶液洗脫，用0. 4%的氫氧化鈉水溶液洗脫，收集洗脫液， 濃縮至約1L，用鹽酸調至PH值為2,用填充了弱極性吸附劑AB-8的吸附柱進行酸性條件吸 附，用純水40L洗脫，再改用5 %乙醇液洗脫，收集洗脫液，真空泵抽濾，最後將濾液濃縮至 100ml。靜止，得到原兒茶醛結晶體約61. 5g。經HPLC檢測，純度達到95%。
[0050] 實施例2原兒茶醛片劑的製備
[0051] 稱取實施例1製備的原兒茶醛100. 〇g，糖粉35. 0g，乳糖40. 0g，羧甲基澱粉鈉 23. Og充分混合均勻，過100目篩，加入適量3% PVP水溶液制軟材，20目篩制粒。60°C乾燥 3小時，18目篩整粒，加入2. Og硬脂酸鎂，混合均勻後淺凹衝壓片，調節片重約200mg (其中 原兒茶醛IOOmg)，即得。
[0052] 實施例3原兒茶醛膠囊的製備
[0053] 稱取實施例1製備的原兒茶醛100. 0g，糖粉35. 0g，乳糖40. 0g，羧甲基澱粉鈉 23. Og充分混合均勻，過100目篩，加入適量3% PVP水溶液制軟材，20目篩制粒。60°C乾燥 3小時，18目篩整粒，加入2. Og硬脂酸鎂，灌膠囊，每粒約200mg (其中原兒茶醛IOOmg)，即 得。
[0054] 實施例4原兒茶醛對哮喘的治療功效
[0055] 1材料與方法
[0056] I. 1實驗動物
[0057] SPF級6周?8周齡BALB/c小鼠32隻，雌性（由廣東醫學院實驗動物中心提供，動 物合格證號：SCXK (粵）2004-20082007A034)，體重20g±2g。分籠飼養於室溫24°C?28°C、 溼度在50%?60%的清潔環境中，隔日更換墊料，自由攝水、攝食（廣東醫學院動物中心提 供的標準飼料），每周稱體重一次。
[0058] 1. 2主要試劑和儀器
[0059] 1.2.1主要藥品
[0060] 醋酸潑尼松片（5mg/片）廣東邦民製藥廠有限公司國藥準字H44021838
[0061] 原兒茶醛 廣東醫學院藥學院提供（製備方法同實施例1)
[0062] 氫氧化鋁凝膠 廣西南寧百會藥業集團有限公司國藥準字H45020626
[0063] 1. 2. 2主要試劑
[0064] 試劑 廠家
[0065] 吐溫80 汕頭市西隴化學廠
[0066] 1.3主要溶液的配製
[0067] ⑴醋酸潑尼松混懸液的配置：取醋酸潑尼松片8片於研缽中，加入Ig吐溫80 -起 研磨，然後加入蒸餾水稀釋至100ml，得0. 4mg/ml混懸液。小鼠灌胃給藥用量為0. lml/10g， 即 4mg · kg-1 · cf1。
[0068] ⑵原兒茶醛水溶液的製備：取實施例1製備的原兒茶醛200mg，加入蒸餾水稀釋至 100ml，得2mg/ml混懸液，小鼠灌胃給藥用量為0. lml/10g，即20mg .kg-1 .(Γ1，設為高劑量。 取實施例1製備的原兒茶醛lOOmg，加入蒸餾水稀釋至100ml，得lmg/ml混懸液，小鼠灌胃 給藥用量為〇· lml/10g，即IOmg · kg< · cf1，設為低劑量。
[0069] 1.4實驗方法和步驟
[0070] 1. 4. 1實驗動物與分組
[0071] 6周?8周齡雌性BALB/c小鼠50隻，隨機分為5組，每組10隻。
[0072] 對照組（CON):第0、7、14天給予0. 5ml含2. 5mg氫氧化鋁凝膠的生理鹽水腹腔注 射+多點皮下注射致敏，第21天開始霧化吸入生理鹽水，每天一次，每次30min。第28天開 始每天灌胃給予蒸餾水〇. ImVlOg體重，隔日灌胃給予蒸餾水30分鐘後再霧化生理鹽水激 發，每周3次，連續8周；
[0073] 模型組（OVA):第0、7、14天給予致敏液0.5ml腹腔注射加多點皮下注射致敏，第 21天開始以1% OVA霧化激發，每天一次，每次30min。第28天開始隔日霧化1% OVA激發， 連續8周（見圖1);
[0074] 醋酸潑尼松（Prednisone acetate)預防組（0VA+PA):致敏和激發同模型組，第28 天開始每天灌胃給予醋酸潑尼松混懸液〇. ImVlOg體重，隔日灌胃給藥30分鐘後再霧化激 發，霧化方法及時間同模型組；
[0075] 原兒茶醛高劑量組（0VA+PCAH):致敏和激發同模型組，第28天開始每天灌胃給予 原兒茶醛高劑量0. ImVlOg體重，隔日灌胃給藥30分鐘後再霧化激發，霧化方法及時間同 模型組。
[0076] 原兒茶醛低劑量組（0VA+PCAL):致敏和激發同模型組，第28天開始每天灌胃給予 原兒茶醛低劑量0. ImVlOg體重，隔日灌胃給藥30分鐘後再霧化激發，霧化方法及時間同 模型組。
[0077] 1. 4. 2觀察指標
[0078] 最後一次激發48h後處死小鼠，檢測支氣管肺泡灌洗液（BALF)中嗜酸性粒細胞 (EOS)計數、IL-4、IL-13和IFN- γ水平，病理切片結合HE染色、AB-PAS染色和Masson染 色，以Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟體測量上皮層厚度、平滑肌層厚度、杯狀細胞計數、 杯狀細胞面積百分比、氣道旁和血管旁膠原蛋白沉積情況。
[0079] 2 MM
[0080] 2. I BALF 中 EOS 計數情況
[0081] 結果見表1，圖2,結果顯示：模型組小鼠 BALF中EOS計數顯著增加，與對照組相 t匕，有顯著性差異（P〈〇. 001);醋酸潑尼松預防給藥組BALF中EOS計數與對照組相比差異 沒有統計學意義（P>〇. 05)，與模型組相比EOS計數顯著降低（P〈0. 001);原兒茶醛高劑量組 BALF中EOS計數較模型組顯著降低（P〈0. 001)，但仍較對照組高（P〈0. 01);原兒茶醛低劑 量組BALF中EOS計數較對照組亦顯著降低，差異有顯著性（P〈0. 001)，與對照組相比仍然有 顯著性差異（P〈〇.〇〇l)。
[0082] 表1、小鼠 BALF中嗜酸性粒細胞（EOS)計數（Χ±? η = 10) f

【權利要求】
1. 原兒茶醛在製備預防和/或治療支氣管哮喘的藥物中的用途。
2. 如權利要求1所述的用途，其特徵在於，所述原兒茶醛是從純中藥丹參製備而得； 優選地，所述藥物包括原兒茶醛和藥學上可接受的輔料。
3.如權利要求2所述的用途，其特徵在於，所述藥物為口服製劑。
4.如權利要求3所述的用途，其特徵在於，所述口服製劑為片劑、膠囊、軟膠囊、顆粒 齊U、口服液、滴丸或口腔速崩片。
5.如權利要求4所述的用途，其特徵在於，所述口服製劑為片劑或膠囊，由如下重量份 的原料製成： 原兒茶K 100份 填充劑 60-90份 崩解劑 20-30份 3%聚乙烯吡咯烷酮水溶液 20-30份 潤滑劑 1-4份。
6.如權利要求5所述的用途，其特徵在於，所述填充劑為糖粉和/或乳糖； 優選地，所述崩解劑為羧甲基澱粉鈉； 優選地，所述潤滑劑為硬脂酸鎂。
7.如權利要求6所述的用途，其特徵在於，所述口服製劑為片劑或膠囊，由如下重量份 的原料製成： 原兒茶醛 100份 糖粉 30-40份 乳糖 30-50份 羧甲裉澱粉鈉 20-25份 3%聚乙烯吡咯烷fi水溶液 20-25份 潤滑劑 1.5-3.5份^
8. 如權利要求6所述的用途，其特徵在於，所述口服製劑為片劑或膠囊，由如下重量份 的原料製成： 原兒茶醛 100份 糖粉 32-38份 乳糖 35-45份 羧中牆澱粉鈉 22-24份 3%聚乙烯吡咯烷《水溶液 22-24份 潤滑劑 2-3份。
9.如權利要求6所述的用途，其特徵在於，所述口服製劑為片劑或膠囊，由如下重量份 的原料製成： 原兒茶隱 100份 糖粉 35份 乳糖 40份 羧甲基澱粉鈉 23份 3%聚乙烯吡嗒烷if水溶液 23份 潤滑劑 2份1)
【文檔編號】A61K31/11GK104274431SQ201410512840
【公開日】2015年1月14日 申請日期:2014年9月29日 優先權日:2014年9月29日
【發明者】覃冬雲, 張劍凱, 鄔永富, 彭錦, 趙智麗, 許衛銘 申請人:廣東醫學院