乳酸細菌的組合及其用於預防和/或治療感染和炎症的用途的製作方法

2023-08-06 08:07:16

專利名稱：：乳酸細菌的組合及其用於預防和/或治療感染和炎症的用途的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種乳酸細菌組合及其用於製造用於預防和/或治療由細菌、病毒或真菌引起的，特別是在口、陰道、尿道、鼻、眼和耳中的感染和炎症的食物增補劑(food)supplement)、衛生產品或藥物製劑。乳酸細菌是通過葡萄糖發酵產生乳酸的革蘭氏陽性細菌。依據慣例，嗜熱鏈球菌(Streptococcusthermophilus)也被包括在此定義中。眾所周知，產H2O2的乳酸細菌的菌株可以充當身體管口和黏膜中細菌群落的調節者。已經證明產H2O2的乳酸細菌可以拮抗大腸埃希氏菌(E.coli)、N.gonorrhoea、G.vaginalis、C.terchomatis、U.urealyticun和B.brevis。然而，當用於醫學實踐時，這些細菌僅僅具有有限的益處。這可以從基於乳酸細菌的旨在治療上述微生物(例如陰道炎)的製劑(例如陰道栓劑)沒有被偏愛用抗生素或化學治療藥物治療其患者的醫生們十分尊重的事實看到。就發明者所知，沒有在機體管口和黏膜上的抗細菌或調節菌群的作用被歸因於利用精氨酸的乳酸細菌。令人驚訝的是現在已經發現通過加入一個或多個能夠利用精氨酸的乳酸細菌菌株，產H2O2的乳酸細菌的活性被明顯地加強。精氨酸形成在體液中發現的各種小肽的一部分，並也以游離精氨酸存在。許多細菌屬利用它供自身的營養和生長。因此，利用精氨酸的乳酸細菌能夠剝奪其它致病或潛在致病細菌一定量的精氨酸，這雖然不足以終止它們的生長，但是使得它們對乳酸細菌產生的H2O2的作用更加敏感。因此，本發明提供一種包括(a)由至少一個產H2O2的乳酸細菌菌株構成的第一種成分，和(b)由至少一個利用精氨酸的乳酸細菌菌株構成的第二種成分的乳酸細菌組合。在成分(a)中的乳酸細菌菌株優先地選自捲曲乳桿菌(Lactobacilluscrispatus)、唾液乳桿菌(Lactobacillussalivarius)、乾酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)的種的菌株，而在成分(b)中的乳酸細菌的菌株選自短乳桿菌(Lactobacillusbrevis)、加氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)和發酵乳桿菌(Lactobacillusfermentum)的種的菌株。更加特別地，在成分(b)中的乳酸細菌是根據布達佩斯條約於1998年2月6日在德意志微生物細胞培養物保藏中心(DSM-DeutscheSammlungvonMikrooganismenundZellkulturenGmbH)以保藏號DSm11988保藏的短乳桿菌CD2(LactobacillusbrevisCD2)菌株或者其突變體或衍生物。成分(a)中細菌數目與成分(b)中細菌數目的比例優選地是1∶100到100∶1，並且更加特別地是1∶5到5∶1，最優選的比例是1∶1。本組合能夠以包括1×102到5×1011的成分(a)細菌和1×102到5×1011的成分(b)細菌，優選地1×109的成分(a)細菌和3×109的成分(b)細菌的單位劑型給藥。本組合還能夠以片劑、口含片劑(suckingtablet)、糖果、口香糖、明膠膠囊、陰道栓劑、栓劑、微灌腸劑、以及丸劑、牙膏和凝膠、假牙粉、漱口藥、牙粉、噴霧劑、懸浮劑和軟膏劑。根據本發明的又一個實施方案，本組合還包括至少一個選自嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)、布赫內氏乳桿菌(Lactobacillusbuchneri)、乾酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)、鏈狀乳桿菌(Lactobacilluscatenaforme)、纖維二糖乳桿菌(Lactobacilluscellobiosus)、捲曲乳桿菌(Lactobacilluscrispatus)、彎曲乳桿菌(Lactobacilluscurvatus)、戴爾布呂克氏乳桿菌(Lactobacillusdelbrueckii)、詹氏乳桿菌(Lactobacillusjensenii)、萊希曼氏乳桿菌(Lactobacillusleichmannii)、小乳桿菌(Lactobacillusminutus)、植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)、唾液乳桿菌(Lactobacillussalivarius)、短乳桿菌(Lactobacillusbrevis)、加氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)、發酵乳桿菌(Lactobacillusfermentum)、青春雙歧桿菌(Bifidobacteriumadolescentis)、角雙歧桿菌(Bifidobacteriumangulatum)、雙歧雙歧桿菌(Bifidobacteriumbifidum)、短雙歧桿菌(Bifidobacteriumbreve)、鏈狀雙歧桿菌(Bifidobacteriumcatenulatum)、齒雙歧桿菌(Bifidobacteriumdentium)、埃氏雙歧桿菌(Bifidobacteriumeriksonii)、嬰兒雙歧桿菌(Bifidobacteriuminfantis)、長雙歧桿菌(Bifidobacteriumlongum)、植物雙歧桿菌(Bifidobacteriumplantarum)和嗜熱鏈球菌(Streptococcusthermophilus)的其它乳酸細菌菌株。本組合還可以包括維生素、季銨鹼、無機鹽、抗氧化劑和抗斑劑(anti-plaqueagents)。本發明還涉及包括(a)由至少一個產H2O2的乳酸細菌菌株構成的第一種成分，和(b)由至少一個利用精氨酸的乳酸細菌菌株構成的第二種成分的乳酸細菌的組合用於製造預防和/或治療由細菌、病毒或真菌引起的，特別是在口、陰道、尿道、鼻、眼和耳中的感染和炎症的食物增補劑、衛生產品或藥物製劑的用途。這些感染和炎症包括由藥物和/或物理因素(physicalagent)引起的齦炎、牙周炎、黏膜炎和口炎、貝赫切特綜合症(Buhcet’ssyndrome)、口腔的橫向角化症(diakeratosis)、舌炎、咽喉炎、涎腺炎、涎石病、天皰瘡、扁平苔蘚(Lichenplanus)、斯耶格倫綜合症(Sjogren’ssyndrome)、陰道病、陰道炎、尿道炎、前列腺炎、直腸炎、耳炎、結膜炎、鼻炎、竇炎、黏膜白斑病、口瘡、皰疹和口腔內幽門螺桿菌(Helicobacterpilori)感染。本組合還能夠有利地用作口腔除臭劑、抗炎、抗齲和/或抗斑劑治療口腔。以下實施例用於更加詳細地說明本發明的各個方面，但是不應該被以任何方式解釋為限制本發明。實施例1評價了產H2O2的乳酸細菌(成分A)；利用精氨酸的乳酸細菌(成分B)；和這兩個菌株組合，特別是以1∶1的比例(組合AB)對潛在致病細菌的抑制作用。簡要地，要被測試的乳酸細菌的培養物首先被調整到中性pH，因為酸性pH自身抑制細菌生長。對懸浮液進行了過濾除菌，而此濾出液被用來浸漬許多圓盤吸水紙(每個圓盤30μl濾出液)。將這些圓盤和一塊僅用30μl蒸餾水浸漬過的對照圓盤，放置在一塊已經接種了0.1ml的陰道加德納氏菌(Gardnerellavaginalis)(一個引起陰道病的、從實驗室分離的菌株)的選擇性培養基的平板上。在37℃溫育24小時之後，通過測量圓盤周圍的暈輪的直徑的毫米數評價了病原菌生長的抑制作用。第二個系列的測試是用變異鏈球菌(Streptococcusmutans)作為靶病原體進行的，這個種(species)是牙斑和齲齒的病原體。鑑定細菌作為H2O2生產者通過經典的聯苯胺過氧化物酶反應進行，這個反應通過藍色顯色顯示產H2O2的細菌菌落。確定了精氨酸脫水酶(dehydrolase)的活性，從而評價乳酸細菌利用精氨酸的能力(M.C.MancadeNadra，Milchwissenschaft，37(1982)pp.669-670)。從美國典型培養物保藏中心(TheAmericanTypeCultureCollection(ATCC)，Rockville，USA)獲得這些乳酸細菌。細菌菌株抑制作用的暈輪(抗G.vaginalis活性，mm)H2O2生產者(成分A)捲曲乳桿菌(ATCC39197)75唾液乳桿菌(ATCC11741)60捲曲乳桿菌+唾液乳桿菌63精氨酸利用者(成分B)短乳桿菌(ATCC14869)0發酵乳桿菌(ATCC14931)2短乳桿菌+發酵乳桿菌0組合AB(A對B的比例為1∶1)捲曲乳桿菌+短乳桿菌112捲曲乳桿菌+發酵乳桿菌100唾液乳桿菌+短乳桿菌117唾液乳桿菌+發酵乳桿菌104細菌菌株抑制作用的暈輪(抗S.mutans活性，mm)H2O2生產者(成分A)捲曲乳桿菌(ATCC39197)98唾液乳桿菌(ATCC11741)102捲曲乳桿菌+唾液乳桿菌99精氨酸利用者(成分B)短乳桿菌(ATCC14869)0發酵乳桿菌(ATCC14931)1短乳桿菌+發酵乳桿菌1組合AB(A對B的比例為1∶1)捲曲乳桿菌+短乳桿菌118捲曲乳桿菌+發酵乳桿菌126唾液乳桿菌+短乳桿菌121唾液乳桿菌+發酵乳桿菌120實施例2製備具有以下單位成分之口含片劑將這些片劑給藥給四位已被告知在前一周期間清潔其牙齒或使用口香糖的志願者。這些受檢者每日三片飯後服用一周，允許片劑在口內溶解。對牙斑指數和齦斑指數都進行了臨床評價。對於牙斑在六顆牙齒上使用了以下的評分系統(右側的第一顆上臼齒；左側的上中切牙；左側的上前臼齒；左側的第一顆下臼齒；右側的下中切牙；右側的第一顆下前臼齒)0-完全無斑1-沒有可見斑2-可見斑3-非常明顯的斑用以上提到的六顆牙齒的緣，採用以下的評分系統評價齒齦斑0-無炎症1-輕微的炎症2-中度的炎症，接觸有流血3-顯著的炎症，有自發流血的趨勢。對這四位志願者的六顆牙齒獲得的組合數據如下受試者牙斑指數齦斑指數07大07天No.18271No.293103No.315562No.415783實施例3用每日六片口含片治療四位有臨床和組織學診斷的復發性口瘡性潰瘍的受檢者十天，其成分在實施例2中給出。在十天療程後全部受到治療的患者顯示了此潰瘍完全治癒，並且其中沒有人在隨後的一個月中患新潰瘍。正如常規的和本領域中的熟練人員所非常公知的，為了改善此細菌組合AB的味道與外觀，可以加入適合的著色劑和甜味劑諸如糖精、薄荷油和木糖醇。此組合AB可以丸劑、糖果、口香糖、明膠膠囊、牙膏和凝膠、假牙粉、淑口水、牙粉、片劑、陰道栓劑、栓劑、噴霧劑、懸浮液和微灌腸劑形式給藥。實施例4一種牙膏的製備牙膏基料百分組成二水磷酸鈣37.5％甘油(85％溶於水中)30.0％調味劑(薄荷油)1.0％羧甲基纖維素鈉1.0％純水20.8％糖精鈉(1％水溶液)2.5％十二烷基硫酸鈉2.0％純水＿5.2％100.0％重量組成二水磷酸鈣337.5g甘油(85％溶於水中)270.0g調味劑(薄荷油)9.0g羧甲基纖維素鈉9.0g純水187.2g糖精鈉(1％水溶液)22.5g十二烷基硫酸鈉18.0g純水48.8g900.0g將已經被擠壓通過一個50目濾網的甘油加入二水合磷酸鈣。允許此混合物進行水化作用，產生一種稠密均質的軟膏。在這裡加入調味劑(1％的薄荷油)。將羧甲基纖維素鈉在水中水化過夜(在純水中4.6％的濃度)。將糖精鈉的溶液加入所產生的稠密凝膠中。將聚合體凝膠傾注到一個已經含有已用甘油水化的磷酸鈣的研缽中，並劇烈地混合這些成分。單獨製備十二烷基硫酸鈉在純水中大約28％的溶液。此後，將此十二烷基硫酸鈉溶液加入稠密的磷酸二鈣軟膏。所產生的稠密均質的軟膏，具有良好的流變學性質，將其混合數分鐘，此後通過將其通過一個具有輥子的精製機而精製。這產生一種雪白的均質的具有宜人的薄荷芳香的軟膏。將38.5g的凍幹的乳酸細菌(唾液乳桿菌(L.salivarius)+短乳桿菌(L.brevis)，1∶1；1010CFU/g)通過一個50目的濾膜，此後將其以小份地加入上述牙膏基料的剩餘部分(770g)。所產生的均質軟膏具有輕微地淺褐色顏色和薄荷味。實施例5通過溼式制粒法製備了用泡騰層包裹的陰道片劑。這些片劑每一粒重2100mg，並含有100mg的作為活性物質的乳酸細菌的組合。每一片陰道片劑具有如下成分凍幹並篩選的乳酸細菌(每克30×109的短乳桿菌(L.brevis)，30×109的唾液乳桿菌(L.salivarius)和90×109的植物乳桿菌(L.plantarum))100.0mg乳糖1368.0mg玉米澱粉246.0mg己二酸192.0mg碳酸氫鈉150.0mg硬脂酸鎂30.0mg硬脂酸9.0mg膠體二氧化矽5.0mg2100.0mg權利要求1.乳酸細菌的組合，包括(a)由至少一個產H2O2的乳酸細菌的菌株構成的第一種成分；和(b)由至少一個利用精氨酸的乳酸桿菌的菌株構成的第二種成分。2.根據權利要求1的組合，其中在成分(a)中的乳酸細菌菌株選自捲曲乳桿菌，唾液乳桿菌和乾酪乳桿菌的種的菌株，而在成分(b)中的乳酸細菌的菌株選自短乳桿菌，加氏乳桿菌和發酵乳桿菌的種的菌株。3.根據權利要求2的組合，其中在成分(b)中的乳酸細菌菌株是根據布達佩斯條約於1998年2月6日在德國BraunschweigDSM-德意志微生物和細胞培養物保藏中心以保藏號DSM11988保藏的短乳桿菌CD2菌株或者其突變體或衍生物。4.根據權利要求1-3之任何一項的組合，其中成分(a)中的細菌的數目對成分(b)中的細菌的數目的比例是從1∶100到100∶1。5.根據權利要求4的組合，其中所說的比例是1∶5到5∶1。6.根據權利要求5的組合，其中所說的比例是1∶1。7.根據在先權利要求之任何一項的組合，在單位劑量單位中包括從1×102到5×1011的成分(a)細菌和從1×102到5×1011的成分(b)細菌。8.根據權利要求7的組合，包括從1×109的成分(a)細菌和從3×109的成分(b)細菌。9.根據權利要求7或8的組合，呈片劑、口含片、糖果、口香糖、明膠膠囊、陰道栓劑、栓劑和微灌腸劑。10.根據權利要求1-6之任何一項的組合，呈丸劑、牙膏和凝膠、假牙粉、漱口劑、牙粉、噴霧劑、懸浮液和軟膏劑。11.根據在先權利要求之任何一項的組合，還包括至少一個選自嗜酸乳桿菌、布赫內氏乳桿菌、乾酪乳桿菌、鏈狀乳桿菌、纖維二糖乳桿菌、捲曲乳桿菌、彎曲乳桿菌、戴爾布呂克氏乳桿菌、詹氏乳桿菌、萊希曼氏乳桿菌、小乳桿菌、植物乳桿菌、唾液乳桿菌、短乳桿菌、加氏乳桿菌、發酵乳桿菌、青春雙歧桿菌、角雙歧桿菌、雙歧雙歧桿菌、短雙歧桿菌、鏈狀雙歧桿菌、齒雙歧桿菌、埃氏雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、長雙歧桿菌、植物雙歧桿菌和嗜熱鏈球菌的其它乳酸細菌菌株。12.根據在先權利要求之任何一項的組合，還包括維生素、季胺鹼、無機鹽、抗氧化劑和抗斑劑。13.一種包括(a)由至少一個產H2O2的乳酸細菌的菌株構成的第一種成分；和(b)由至少一個利用精氨酸的乳酸桿菌的菌株構成的第二種成分的乳酸細菌組合用於製造用於預防和/或治療由細菌、病毒或真菌引起的，特別是在口、陰道、尿道、鼻、眼和耳中的感染和炎症的一種食物增補劑、一種衛生產品或一種藥物製劑的用途。14.根據權利要求13的用途，其中感染和炎症包括由藥物和/或物理因素引起的齦炎、牙周炎、黏膜炎和口炎、貝赫切特綜合症、口腔的橫向角化症、舌炎、咽喉炎、涎腺炎、涎石病、天皰瘡、扁平苔蘚、斯耶格倫綜合症、陰道病、陰道炎、尿道炎、前列腺炎、直腸炎、耳炎、結膜炎、鼻炎、竇炎、黏膜白斑病、口瘡、皰疹和口腔內幽門螺桿菌感染。15.根據權利要求13或14的用途，作為除臭劑、抗炎劑、抗齲劑和/或抗斑劑用於治療口腔。全文摘要本公開是關於一種包括(a)由至少一個產H文檔編號A61P31/00GK1357038SQ00809309公開日2002年7月3日申請日期2000年6月16日優先權日1999年6月21日發明者C·德西蒙申請人:Vsl製藥有限公司