一種快速進行早期抑鬱症預警的蛋白質晶片的製作方法

2023-08-06 15:53:06 2

一種快速進行早期抑鬱症預警的蛋白質晶片的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種快速進行早期抑鬱症預警的蛋白質晶片，屬於生物【技術領域】。本發明的蛋白質晶片為包被有TNF-α、IL-1、IL-4的抗體的固相微孔板。與該蛋白質晶片匹配的試劑包括生物素標記的TNF-α、IL-1、IL-4的檢測抗體，親和素標記的HRP，HRP作用的底物。通過ELISA方法檢測受試個體與正常人群血清中TNF-α、IL-1、IL-4的表達情況，若受試個體血清中TNF-α、IL-1、IL-4的表達量明顯高於正常人群則可以判斷受試個體具有早期抑鬱症傾向。本發明從蛋白質水平對早期抑鬱症進行預警，靈敏度、特異性高，操作簡單快速，穩定性好，成本低廉，廣泛適用於早期抑鬱症預警。
【專利說明】一種快速進行早期抑鬱症預警的蛋白質晶片
【技術領域】
[0001]本發明屬於生物【技術領域】，涉及一種快速進行早期抑鬱症預警的蛋白質晶片。
【背景技術】
[0002]抑鬱症(Depression, DEP)是一種嚴重影響人們身心健康的精神疾病。抑鬱症屬於情感性的精神障礙，其發病機制十分複雜，是由多種原因引起的以心境障礙為主要病症的症候群。近代醫學研究表明精神健康生理狀況密切相關。據文獻報導，一些免疫細胞如單核細胞、肥大細胞、T淋巴細胞等細胞核細胞因子的抑鬱症發病進程中起重要調節作用。
[0003]隨著社會發展，生活節奏加快，競爭壓力加大，人口和家庭結構變化加劇等因素導致嚴重精神病的患病率上升，精神衛生已經成為一個突出的公共衛生和社會問題。據報導，世界衛生組織統計結果顯示:抑鬱症發病率逐漸上升，且已成為世界第4大疾病；預計到2020年時，抑鬱症有可能成為世界第二大疾病，僅次於發病率最高的冠心病的。
[0004]抑鬱症患者及其家庭為抑鬱症會付出嚴重的感情、社會和經濟代價。抑鬱症的高自殺率，使其成為21世紀人類健康最主要的「殺手」之一。主要危害包括:抑鬱症患者心理備受煎熬，他們根據自己的悲觀看法解釋每天的人和事，反覆的焦慮和自責極大地降低了患者的生活質量；患者還會出現一系列軀體不適症狀，如睡眠障礙、疼痛、乏力、胃部不適、食慾欠佳、心慌氣急，以及各個系統的症狀；患者家屬和親友也被痛苦折磨，抑鬱症患者不僅折磨自己，也會影響周圍的人。據世界衛生組織的數據，臨床抑鬱症患者的自殺率為10%。我國精神醫學專家調查認為，抑鬱症患者有一半以上有自殺想法，其中有20%最終以自殺結束生命。因此，抑鬱症的問題已成為一個非常重要的公共衛生問題，越來越受到世界各國的聞度關注。
[0005]目前，早期抑鬱症傾向的判斷主要基於對精神症狀的識別與病程。依照國際疾病分類第十版的標準，抑鬱症傾向的診斷需要符合:(I)抑鬱心境、喪失興趣；(2)愉快感、精力不足；(3)過度疲勞；三條核心症狀中至少兩條，或加上自信心喪失和自卑、自責或自罪、自殺想法或行為、思維或注意能力降低、激越或遲滯、睡眠障礙、食慾和體重改變附加症狀達到4條，即可認為符合早期抑鬱症傾向的症狀學標準。以此種方法來進行早期抑鬱症傾向的診斷多採用醫患之間的問答形式進行，患者的回答以及醫生對症狀的把握判斷時常會帶有一定的主觀意向，導致診斷不準確，重複性差等情況的出現，缺乏客觀的定量數據的支持，所以，對早期抑鬱症傾向的診斷迫切的需要有客觀生物學定量指標的支持。
[0006]生物晶片是近年來發展出的一種在固體載體表面構建的微分析技術，具有高通量，信息含量大，工作效率高的特點(MacBeath and Schreiber, 2000，Science)。蛋白質晶片是一種重要的生物晶片，在固相載體表面固定大量蛋白探針，形成高密度排列的蛋白質點陣，利用這種晶片和含有未知蛋白質的液體進行孵育反應，反應後用相應的檢測系統進行檢測，最後分析相應蛋白質的表達情況(Zhu et al, 2001，Science)。利用蛋白質晶片技術進行早期抑鬱症預警檢測有很大的應用前景。
[0007]但是，傳統蛋白質晶片技術操作複雜，需要貴重儀器，價格昂貴，很難做到早期抑鬱症預警檢測的普及，特別是在基層醫療單位以及科研機構。而傳統的ELISA檢測試劑盒一次性只能對樣本中的單一物質進行檢測，一次檢測所獲得的信息量低，對於一次性需要多個檢測值的檢測樣本，難以實現高通量，工作效率低。因此，需要建立一種通用、操作簡便、快速，易於重複，可信度較高和穩定好的檢測方法，對早期抑鬱症傾向進行預警，從而對抑鬱症進行有效的預防。

【發明內容】

[0008]本發明的首要目的在於克服現有技術的缺點與不足，提供一種快速進行早期抑鬱症預警的蛋白質晶片，其用於抑鬱症的預防。
[0009]本發明的另一目的在於提供與上述蛋白質晶片匹配的試劑。
[0010]本發明的再一目的在於提供上述蛋白質晶片的使用方法。
[0011]本發明的目的通過下述技術方案實現:
[0012]一種快速進行早期抑鬱症預警的蛋白質晶片，通過對比受試個體與正常人群血清中TNF-a、IL-1、IL-4的表達情況，從而判斷受試個體是否具有早期抑鬱症傾向，若受試個體血清中TNF-a、IL-U IL-4的表達量明顯高於正常人群，則可以判斷受試個體其具有早期抑鬱症傾向，該個體即可作為抑鬱症篩查重點對象，對其進行抑鬱症預防。
[0013]所述的快速進行早期抑鬱症預警的蛋白質晶片為包被有TNF- a、IL-U IL-4的抗體(免疫吸附劑)的固相微孔板。優選的，TNF-α、IL-l、IL-4的抗體的包被量均為0.05 μ g每孔；所述的固相微孔板為384孔微孔板。
[0014]與上述快速進行早期抑鬱症預警的蛋白質晶片匹配的試劑，包括ELISA檢測所需試劑中的一種或多種。
[0015]優選的，所述的ELISA檢測所需試劑包括:生物素標記的TNF-a、IL-1、IL_4的檢測抗體(二抗)，親和素標記的辣根過氧化物酶(HRP)，HRP作用的底物(顯色劑)。
[0016]上述快速進行早期抑鬱症預警的蛋白質晶片的使用方法，包括如下步驟:
[0017](I)將待檢血清分別加入到包被有TNF-a、IL_1、IL_4的抗體的孔中，使血清中的TNF- a、IL-1、IL-4與對應的抗體結合；
[0018](2)棄去孔內液體，用PBST清洗；
[0019](3)對應的加入生物素標記的TNF- a、IL-U IL-4的抗體，使其與樣品中TNF- a、IL-1、IL-4 結合；
[0020](4)棄去孔內液體，用PBST清洗；
[0021](5)加入親和素標記的HRP ；
[0022](6)棄去孔內液體，用PBST清洗；
[0023](7)加入HRP作用的底物顯色；
[0024](8)再加入終止液終止顯色，使用多功能酶標儀在450nm波長下檢測OD值；根據標準曲線分別計算TNF-a、IL-U IL-4的含量。
[0025]本發明相對於現有技術具有如下優點和效果:
[0026]準確性高:本蛋白質晶片所檢測的指標，通過Meta分析、流行病學調查研究、以及實際血液樣本ELISA檢測驗證，和早期抑鬱症有強烈的相關性，對於早期抑鬱症預警來說準確性高。[0027]靈敏度、特異性高:本蛋白質晶片檢測指標所採用的為相關蛋白質的特異性抗體，採用微孔板蛋白質晶片技術，檢測靈敏度、特異性高。
[0028]簡單快速:速度快、高通量(96個體的288個檢測值/單晶片)，可在短時間內完成多個樣本的檢測。
[0029]成本低廉:採用384孔微孔板製備蛋白質晶片，無需使用價格昂貴的蛋白質晶片加樣及檢測系統(通常為幾百萬元)，只需配備多功能酶標檢測系統即可(通常為十幾萬元)，操作簡單，更適合推廣使用。
[0030]本發明的蛋白質晶片以客觀的檢測指標幫助醫務工作者和心理健康輔導者，對具有早期抑鬱症傾向的患者進行抑鬱症預防。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0031]圖1是ELISA檢測抑鬱症病例和健康人群血液中TNF- a、IL-U IL-4的含量結果圖。
[0032]圖2是早期抑鬱症預警的蛋白質晶片示意圖；A:TNF-α檢測區，B =IL-1檢測區，C:IL-4檢測區；檢測區a可以完成一個血液樣本3種物質的檢測，檢測區b可以完成16個血液樣本48個檢測值的檢測，整個晶片可以完成96個血液樣本288個檢測值的檢測。
【具體實施方式】
[0033]下面結合實施例及附圖對本發明做進一步詳細的描述，但本發明的實施方式不限於此。若未特別指明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手段。
[0034]實施例1Meta分析找出與人群抑鬱症的發病密切相關的促炎症細胞因子
[0035]Meta 分析 SP 「碁萃分析」，定義是「The statistical analysis of largecollection of analysis results from individual studies for the purpose ofintegrating the findings.」中文定義為:對具備特定條件的、同課題的諸多研究結果進行綜合的一類統計方法。其步驟如下:
[0036]①提出需要解決的問題:「過敏性炎症/促炎症細胞因子能否介導抑鬱症」;
[0037]②基於PubMed網絡全面收集過敏和抑鬱相關性流行病學研究文獻；
[0038]③藉助制定的納入和排除標準對收集的文獻進行選擇和提取(包括結果數據、圖表等)；
[0039]以 depression, allergy, cytokines, asthma, mental disorder 為主題詞在MEDLINE上檢索，剔除掉動物實驗、綜述、評論以及不能提取統計學數據的文章後，得到1995年至2012年間以人群為研究對象的文獻。所有文獻均為抑鬱症或過敏症流行病學研究內容，包括問卷調查、臨床診斷和血清蛋白ELISA檢測等
[0040]④對收集的文獻進行Meat分析；
[0041 ] 通過對表I中的6項研究和表2中的10項研究進行Meta分析，發現抑鬱症患者中的過敏症發病率從7.6%高達50.6%，而過敏症患者中的抑鬱症發病率從2.24%到24.1%。
[0042]表1.抑鬱症患者中過敏症患病率數據
[0043]
【權利要求】
1.一種快速進行早期抑鬱症預警的蛋白質晶片，其特徵在於:通過對比受試個體與正常人群血清中TNF-a、IL-U IL_4的表達情況，判斷受試個體是否具有早期抑鬱症傾向。
2.根據權利要求1所述的快速進行早期抑鬱症預警的蛋白質晶片，其特徵在於:所述的蛋白質晶片為包被有TNF-a、IL-U IL_4的抗體的固相微孔板。
3.根據權利要求2所述的快速進行早期抑鬱症預警的蛋白質晶片，其特徵在於:TNF- a、IL-1、IL-4的抗體的包被量均為0.05 μ g。
4.根據權利要求2所述的快速進行早期抑鬱症預警的蛋白質晶片，其特徵在於:所述的固相微孔板384孔微孔板。
5.與權利要求1-4任一項所述的快速進行早期抑鬱症預警的蛋白質晶片匹配的試劑，其特徵在於:包括ELISA檢測所需試劑中的一種或多種。
6.根據權利要求5所述的試劑，其特徵在於:所述的ELISA檢測所需試劑包括生物素標記的TNF-a、IL-1、IL_4的檢測抗體，親和素標記的辣根過氧化物酶，辣根過氧化物酶作用的底物。
7.權利要求1-4任一項所述的快速進行早期抑鬱症預警的蛋白質晶片的使用方法，其特徵在於包括如下步驟: Cl)將待檢血清分別加入到包被有TNF-a、IL-U IL_4的抗體的孔中，使血清中的TNF- a、IL-1、IL-4與對應的抗體結合； (2)棄去孔內液體，用PBST清洗； (3)對應的加入生物素標記的TNF-a、IL-UIL-4的檢測抗體，使其與TNF-a、IL-UIL-4結合； (4)棄去孔內液體，用PBST清洗； (5)加入親和素標記的辣根過氧化物酶； (6)棄去孔內液體，用PBST清洗； (7)加入辣根過氧化物酶作用的底物顯色； (8)再加入終止液終止顯色，使用多功能酶標儀在450nm波長下檢測OD值；根據標準曲線分別計算TNF-a、IL-U IL-4的含量。
【文檔編號】G01N33/96GK103513043SQ201310481331
【公開日】2014年1月15日 申請日期:2013年10月15日 優先權日:2013年10月15日
【發明者】劉旭東, 劉英帥, 江明頔, 張玉超, 覃萍, 楊旭 申請人:華中師範大學